CN103614341A - 抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒 - Google Patents

Abstract

一种抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒，包括用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.0001，还包括用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.0002，用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株具有不同的结合表位。其目的是提供一种特异性强，灵敏度高，检测范围广，检测结果准确可靠的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒。

Description

抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒

技术领域

本发明涉及一种抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒。

背景技术

甘露(聚)糖结合凝聚素，英文名：mannan-binding lectin，缩写为MBL。甘露(聚)糖结合凝聚素是肝脏产生的一种血清C型凝集素，可以与甘露糖结合的急性期蛋白，可以调理带甘露糖的病原体，激活补体系统，参与固有免疫应答、激活补体、调节炎症、促进调理吞噬和清除凋亡细胞。当适应性免疫系统尚不成熟(幼儿期)或已被抑制(例如器官移植后，或癌症化疗期间)通常MBL的缺乏可能导致感染易感性的增加。MBL不足与自身免疫性疾病有重要的相关，如系统性红斑狼疮，类风湿关节炎，预后较差的囊肿性纤维化等。MBL组成了机体先天免疫的第一道防线，在病原微生物感染早期，特异性抗体形成之前，MBL就已经通过其“糖基识别域”结合病原微生物。因此，检测人血清或血浆中的甘露糖结合凝聚素(MBL)含量，可用于作为与MBL缺失或不足相关疾病的诊断参考指标，并可指导临床个体化治疗。但目前检测人血清或血浆中的甘露糖结合凝聚素(MBL)含量的试剂盒的特异性较差，灵敏度不够高，检测范围较窄，导致检测结果不够可靠。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性强，灵敏度高，检测范围广，检测结果更加准确可靠的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒。

本发明的杂交瘤细胞株，包括用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.7592，还包括用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.7591，用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株具有不同的结合表位。

本发明的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体，包括权利要求1所述的用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括权利要求1所述的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

本发明的甘露糖结合凝集素(MBL)定量检测试剂盒，包括权利要求2所述的用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括权利要求2所述的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

本发明的的甘露糖结合凝集素(MBL)定量检测试剂盒，还包括

MBL抗体包被板  1块96人份

MBL参考品：0ng／ml、1ng／ml、2ng／ml、5ng／ml、10ng／ml、20ng／ml、50ng／ml和100ng／ml各1瓶，每瓶1ml，

所述酶结合物为辣根过氧化物酶；

所述显色剂A采用如下方法制成：

向容器中加入

11毫摩尔(mmol)的柠檬酸，其分子量为192.12

25毫摩尔(mmol)的柠檬酸三钠，其分子量为294.10

0.5毫摩尔(mmol)的过氧化氢脲，其分子量为94.07

再向容器中加去离子水至1000ml，即得显色剂A；

所述显色剂B采用如下方法制成：

向容器中加入

11毫摩尔(mmol)的柠檬酸，其分子量为192.12

11.6毫摩尔(mmol)的盐酸，其分子量为36.5

0.5毫摩尔(mmol)的乙二胺四乙酸(EDTA)，其分子量为292.24

2.1毫摩尔(mmol)的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)，其分子量为240.34

再向容器中加去离子水至1000ml，即得显色剂B；

所述终止液为2mol的硫酸。

本发明的用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，于2013年07月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.7592，建议的分类命名为：产生抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞；本发明的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，于2013年07月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.7591，建议的分类命名为：产生抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞。

本发明的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒，其包括用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，还包括用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，都是通过本领域已知的技术产生的，其中用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株具有不同的结合表位。试验表明，本发明的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒具有特异性强，灵敏度高，检测范围广，检测结果准确可靠的特点，其灵敏度：≤0.20ng／mL，精密性：用本方法检测低、中、高三组样品(n=10)，分析内变异系数CV％＜10.0％，线性：r≥0.9800。因此，本发明的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒具有突出的实质性特点和显著的进步。

下面对本发明的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体及试剂盒作进一步详细说明。

具体实施方式

甘露(聚)糖结合凝集素是由肝脏合成、分泌至血的一种多糖结合蛋白，属C型凝集素超家族成员。MBL组成了机体先天免疫的第一道防线。在病原微生物感染早期、特异性抗体形成之前MBL就已经通过其“糖基识别域”结合病原体表面的甘露糖、N-乙酰葡萄糖、葡萄糖和岩藻糖等碳水化合物继而与丝氨酸蛋白酶结合，形成MBL相关的丝氨酸蛋白酶(MASP)激活补体或直接介导调理吞噬作用杀灭病原。研究表明MBL的缺损与许多自身免疫病的发生以及出现易受感染状态相关。进一步的阐明MBL与疾病的关系，将MBL应用于人类疾病的治疗与预防，是免疫研究的新热点。因此，制备MBL的特异性单克隆抗体并建立检测方法就成为必不可少的基础。

本发明的杂交瘤细胞株，包括用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.7592，还包括用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.7591，用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株具有不同的结合表位。

本发明的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体，包括上述的用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括上述的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

本发明的甘露糖结合凝集素(MBL)定量检测试剂盒，包括上述的用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，以及上述的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括

MBL抗体包被板       1块96人份

MBL参考品：0ng／ml、1ng／ml、2ng／ml、5ng／ml、10ng／ml、20ng／ml、50ng／ml和100ng／ml各1瓶，每瓶1ml，

所述酶结合物为辣根过氧化物酶；

所述显色剂A采用如下方法制成：

向容器中加入

柠檬酸      分子量192.12  质量2.1克   11毫摩尔(mmol)

柠檬酸三钠  分子量294.10  质量7.38克  25毫摩尔(mmol)

过氧化氢脲  分子量94.07   质量0.5克   0.5毫摩尔(mmol)

再向容器中加去离子水至1000ml，即得显色剂A；

所述显色剂B采用如下方法制成：

向容器中加入

柠檬酸              分子量192.12  质量2.1克   11毫摩尔(mmol)

盐酸                分子量36.5                11.6毫摩尔(mmmmol)

乙二胺四乙酸(EDTA)  分子量292.24  质量0.15克  0.5毫摩尔(mmol)

3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)    分子量240.34    质量0.5克   2.1毫摩尔(mmol)

再向容器中加去离子水至1000ml，即得显色剂B；

所述终止液为2mol的硫酸。

在产生本发明的上述2种杂交瘤细胞株的过程中，发明人用甘露糖结合凝聚素(MBL)作为免疫原，免疫小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、山羊或者绵羊等动物，从被MBL免疫动物的脾细胞或淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得了本发明的上述2种杂交瘤细胞株。

上述脾细胞或淋巴细胞的分离，可采用已知的方法进行，对杂交瘤的筛选，可采用已知的方法进行。

本发明的抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体试剂盒，由一抗-MBL单克隆抗体包被微孔板，加入待测标本孵育后，再加入辣根过氧化物酶标记的另一抗-MBL单克隆抗体。如果标本中含有MBL，则能与包被在反应板上的抗-MBL单克隆抗体结合，并与辣根过氧化物酶标记的抗-MBL单克隆抗体形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，吸光度0D值与校准品中的MBL浓度呈正比例关系，通过剂量-反应曲线可得出样品中MBL浓度。

甘露糖结合凝聚素(MBL)是肝脏产生的一种血清C型凝集素，可以与甘露糖结合的急性期蛋白，可以调理带甘露糖的病原体，激活补体系统。参与固有免疫应答、激活补体、调节炎症、促进调理吞噬和清除凋亡细胞。当适应性免疫系统尚不成熟(幼儿期)或已被抑制(例如器官移植后，或癌症化疗期间)通常MBL的缺乏可能导致感染易感性的增加。MBL不足与自身免疫性疾病有重要的相关，如系统性红斑狼疮，类风湿关节炎，预后较差的囊肿性纤维化等。

【试验原理】

本试剂盒由一抗-MBL单克隆抗体包被微孔板，加入待测标本孵育后，再加入辣根过氧化物酶标记的另一抗-MBL单克隆抗体。如果标本中含有MBL，则能与包被在反应板上的抗-MBL单克隆抗体结合，并与辣根过氧化物酶标记的抗-MBL单克隆抗体形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，吸光度OD值与校准品中的MBL浓度呈正比例关系，通过剂量-反应曲线可得出样品中MBL浓度。

【用途】

检测人血清或血浆中的甘露糖结合凝聚素(MBL)含量。用于作为与MBL缺失或不足相关疾病的诊断参考指标，并指导临床个体化治疗。

【适用仪器】

使用有450nm检测波长的酶标仪，并推荐使用有450nm／630nm双波长检测功能的酶标仪。

【样本要求】

血清或血浆(肝素或枸橼酸钠抗凝)

【试验方法】

1.将各种试剂移至室温(18-25℃)平衡半小时，取一瓶30×洗液，加蒸馏水至600ml，混匀后备用。

2.加参考品及质控品：将微孔反应板各孔编号，设参考品孔、质控品及阴性对照孔，每孔加样100微升。设空白对照孔，不加样。

3.加样本：待测样本用样本稀释液按1／100稀释后，每孔加100微升。混匀后37℃水浴60分钟。

4.弃去孔内液体，洗板5次，最后一次拍干。

5.除空白孔外每孔加100μl酶结合物37℃水浴60分钟。

6.弃去孔内液体，洗板5次，最后一次拍干。

7.每孔加入显色剂A50μl，显色剂B50μl，37℃水浴避光显色15分钟。

8.每孔加50μl终止液。

9.选择酶标仪波长450nm，参考波长630nm，测定各孔OD值。

【结果计算】

1.测定要求：参考品5ng／ml测定的OD值应不低于0.150，阴性对照OD值应不大于0.050。

质控品(10ng／ml)测定值应为8.0-12.0ng／ml

质控品(50ng／ml)测定值应为40.0-60.0ng／ml

2.因样本均已作100倍稀释，故样本MBL含量应为OD值对应含量乘以100。

3.可以采用作图法或计算法进行结果计算，推荐采用计算法。

由酶标仪软件结合曲线拟合程序进行。建议用双对数数学模型logY=alogX+b拟合。

【正常参考值】

各实验室应建立自己的正常参考值，下列正常值仅供参考。

正常参考值：100----7000ng／ml.临床研究已使用50ng／ml或100ng／ml来定义MBL严重缺乏的临界值。如果低于这些阀值则可以认为与个体感染史易感性增加相关联。

【对实验结果的解释】

本试剂盒的检测结果不是临床诊断的唯一确认指标，应结合临床症状及其它检测指标综合判定。

【方法的局限性】

1.本试剂盒仅限用于血清样本的测定，对于其它体液样本测定的可靠性尚未得到充分的实验确认。

2.本试剂盒准确的测定范围应不超出校准品曲线的浓度范围，超出曲线范围的样品需要适当稀释后测定结果才能准确。

3.通过其它方法得到的MBL浓度值与本试剂盒的测定结果不具有直接的可比性。

4.加入抗凝剂柠檬酸钠和肝素对临床测值无显著影响，而抗凝剂EDTA二钾会导致测值偏高。

【技术参数】

1.灵敏度：≤0.20ng／mL

2.精密性：用本方法检测低、中、高三组样品(n=10)。

分析内变异系数：CV％＜10.0％。

3.线性：r≥0.9800

【注意事项】

1.全部检测工作必须符合生物安全守则规定，严格防止交叉感染。操作时须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。

2.须严格控制温育反应板的温度和时间。

3.检测结果的判定必须以酶标仪读数为准。

4.样本和酶结合物均应用移液器加注，并经常校对准确性。

5.所有样本，洗涤液和各种废物、弃物都应按传染物处理。

6.各批次试剂不能混用。

本发明的杂交瘤细胞株，是按照以下方法得到：将小鼠，用含有MBL的免疫原，在三脚掌和皮下常规免疫，3至4周后重复免疫，2周后尾静脉加强免疫一次，3至4天后取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞按照常规方法融合，杂交瘤细胞以有限稀释法克隆化；挑选出高滴度杂交瘤细胞。

本发明的单克隆抗体可通过本发明的杂交瘤产生。从本发明的杂交瘤产生本发明的单克隆抗体的方法是本领域常规或已知的方法，例如：可以从培养本发明的杂交瘤的组织培养液中获得，也可以通过接种到小鼠体内繁殖、从收集的腹水或血清中分离获得。所述培养本发明的杂交瘤可以按照本领域常规或已知方法进行。所述接种、收集腹水或血清、从腹水或血清中分离本发明的单克隆抗体的方法可以是本领域常规或已知的方法。

本发明提供的检测MBL的方法是免疫测定法，其使用本发明的单克隆抗体，通过本发明单克隆抗体特异性地狱MBL结合，来检测MBL。

本发明的免疫测定法包括本领域已知的免疫测定方法，例如：酶免疫测定法(EIA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)、荧光免疫测定法(FIA)等。

用于所述免疫酶技术中的酶可以是本领域常规或已知的酶，例如：过氧化物酶、减性硫酸酯酶、β-D-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸肝酶、乙酰胆碱酯酶等。所述酶可与本发明单克隆抗体或MBL结合形成酶标物。在所述免疫酶技术中与酶标物作用并显色的底物可以是本领域常规或已知的底物。所述放免法中的标记放射核素可以是本领域常规或已知的放射核素，例如：¹³¹I、¹²⁴I、¹⁴C、³H等。所述荧光免疫法中的荧光物质是本领域常规或已知的荧光物质。

本发明提供的检测MBL的方法是免疫测定法，使用两株不同的本发明的单克隆抗体，通过本发明单克隆抗体特异性地与MBL结合，来检测MBL。所述两株不同的本发明单克隆抗体具有不同的结合表位，其中的一个用作包被抗体，一个用作酶标记的抗体。

本发明提供的检测MBL的方法是免疫测定法，包括：

(1)包被第一本发明单克隆抗体；

(2)与待测样品反应结合；

(3)加入酶标记的第二本发明单克隆抗体；

(4)显色，测量；

其中所述第一本发明单克隆抗体与第二本发明单克隆抗体具有不同的结合表位。所述酶优选为辣根氧化物酶。

本发明提供一种检测MBL的试剂盒，其含有两种具有不同结合表位的本发明单克隆抗体免疫球蛋白或其活性片段。

所述试剂盒还可含有标记MBL或本发明单克隆抗体的标记物。所述标记物可含有可标记MBL或本发明单克隆抗体的酶、放射核素、荧光物质或其他物质。可以按照本领域的常规或已知方法形成含有MBL或本发明单克隆抗体的标记物。所述含有MBL的标记物可与本发明的免疫球蛋白单克隆抗体特异性地结合。所述含有本发明单克隆抗体的标记物可与MBL特异性地结合。

所述试剂盒还可包括有固定MBL或本发明单克隆抗体的固相。所述固相可以是本领域通常使用的或已知的、适用于本发明的固相，例如：聚合物、如聚苯乙烯，微量滴定板，免疫层析用滤纸等。

所述试剂盒还可包括为实施本发明的免疫测定法所需的其他常规物质和／或器具。

本发明的方法还可有效检测MBL，并有很好的特异性和灵敏度。

实验证明，本发明的单抗ELISA法，与多抗法相比，具有特异性强，灵敏度高等优点。可用于产品的质量控制试验。

本发明采用两株不同的单抗，在检测方法操作时，在加HRP标记抗体后不需要像已有技术那样再加HRP结合的链亲和素来放大反应，而只需加HRP显色底物就可显色读数，减少操作步骤，节省检测时间。已有方法的检测范围是0-40ng/ml，对于许多MBL含量高的样本须二次稀释，本方法检测范围是0-100ng／ml，只一次稀释便可涵盖绝大多数样本的MBL值。一次本发明的方法有检测范围广，操作时间短等显著优点。

实施例

抗MBL杂交瘤细胞的建立

免疫：8-12周龄的雌性BALB／c小鼠，以每只20ugMBL(自健康中国人血浆中纯化)的量，在三脚掌和皮下常规免疫，3-4周后重复免疫，2周后尾静脉加强免疫一次。

融合：从最后一次加强免疫3天后的小鼠取脾细胞，与骨髓瘤细胞(中国药品生物制品检定所细胞室提供)以5：1的比例混合，用50％PEG液融合。在HAT培养液中37℃5％CO₂培养。

杂交瘤细胞的检测与选择性培养：培养3-4天后用HAT培养液半量换液，直到细胞生长至1／3-1／2孔时进行检测，包被抗原MBL，取杂交瘤上清(一抗)与抗原共同孵育，洗涤去除未结合的抗体，加酶标羊抗鼠二抗，显色反应阳性(OD值，即吸光度值，与阴性对照比大于2)为待选克隆。第一次克隆后换HT培养液，第二次克隆后换DMEM培养液培养。

杂交瘤细胞以有限稀释法克隆化：将96孔板中待克隆的杂交瘤细胞用培养液洗下，计数并稀释至20个细胞／ml，每孔0.1ml接种96孔板，经3次对倍稀释即每孔含有0.5个细胞，37℃5％CO₂培养。3-5天后有细胞生长的孔补加培养液继续培养，肉眼可见细胞克隆时，进行抗体检测，此时克隆为100％阳性，可建株。

共挑选出2株高滴度杂交瘤细胞。

单克隆抗体的制备和纯化

接种：取8周龄雄性BALB／c小鼠，腹腔注射无菌蜡油0.5ml／只，5天后分别接种2*10⁷／ml由实施例1所得杂交瘤细胞。出现较多腹水后收集，可多次收集。

正辛酸沉淀法提纯单抗：用4倍体积的醋酸缓冲液(冰醋酸1.8ml+500ml蒸馏水)稀释收集到的腹水，用0.1N NaOH调ph4.5。搅拌下，每ml稀释后的样品缓慢加入25ul正辛酸。放置30分钟后，室温10000rpm离心30分钟。过滤上清，除去细渣。加10倍浓缩的PBS(9份样品+1份10*PBS)，用5N NaOH调ph7.4。上清冷却至4℃，45％饱和硫酸铵沉淀(0.277g／ml)，搅拌30分钟，4℃，5000rpm离心15分钟。用少量PBS溶解沉淀，用50-100倍体积的PBS透析过夜，4℃。透析后样品加0.1％硫柳汞，4℃保存，即分别得到单克隆抗体B3和B10。

蛋白A层析柱法单抗：HiTrap rProtein A FF(Amersham Bioscinces)装柱后用5倍以上柱体积的结合缓冲液(1.5M甘氨酸，3MNaCl，ph8.9)洗柱平衡，经辛酸沉淀提取后的单抗样品用注射器上样，10倍柱体积的结合缓冲液洗柱，流速1ml／min，5倍柱体积的洗脱液(0.1M柠檬酸盐缓冲液，pH5)洗柱，监测收集蛋白峰，得到纯化抗体，SDS-PAGE鉴定纯度。

标记HRP(辣根过氧化酶)：将上述步骤得到的纯化抗体8-10mg装入透析袋，用0.01MpH9.6的碳酸盐缓冲液4℃透析过夜。取HRP4mg，溶于1.0ml的纯水中，缓慢加入0.1MNaIO4，加入量为0.1ml，室温下避光搅拌30分钟，装入透析袋，用0.001M pH4.4的醋酸盐缓冲液4℃透析过夜。向HRP(辣根过氧化酶)中加入0.1M的碳酸钠0.05ml调pH至9.6，然后与抗体混合，避光搅拌2小时。加入4mg/ml的NaBH₄0.1ml，4℃静置2小时，4℃PBS透析过夜。加入等体积的饱和硫酸铵，搅拌30分钟，4℃静置2小时，3000rpm离心20分钟，弃上清。所得沉淀再用50％的硫酸铵重复前述操作一遍。所得沉淀溶于1ml PBS中，4℃PBS透析48小时，得酶标单克隆抗体HRP-B3和HRP-B10.

酶标抗体效价的测定：已包被纯化抗原的反应板，将酶标抗体做系列稀释，37℃反应1小时显色，判定酶标抗体效价，其结果为：HRP-B3为1：8000、HRP-B10为1：2000.

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳：配制5.5％分离胶和5％浓缩胶，灌制凝胶，另配制电泳冲液(25mmol Tris-Cl，250mmol甘氨酸，0.1％SDS)。将样品悬于SDS-PAGE加样缓冲液，煮沸5min，12000rpm离心1min后上样，上样体积为20ul／孔。电泳时，样品位于浓缩胶时电压设为70V，样品进入分离胶后电压设为100V，带溴酚兰到达分离胶底部时停止电泳。将凝胶浸泡于考马斯亮蓝R-250染液中染色2-3小时候，用含20％乙醇和10％冰醋酸的脱色液脱色至背景无色后观察。

根据分子量标准，计算出两株单抗的分子量，通过凝胶成像分析得出单抗的程度，结果表明本发明单克隆抗体的纯度可用于制备体外诊断试剂。

Claims (4)

1.杂交瘤细胞株，其特征在于包括用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.7592，还包括用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.7591，用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株与用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株具有不同的结合表位。

2.抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体，其特征在于包括权利要求1所述的用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括权利要求1所述的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

3.甘露糖结合凝集素定量检测试剂盒，其特征在于包括权利要求2所述的用作包被抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体，还包括权利要求2所述的用作标记抗甘露糖结合凝聚素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的甘露糖结合凝集素定量检测试剂盒，其特征在于还包括

MBL抗体包被板   1块96人份

MBL参考品：0ng／ml、1ng／ml、2ng／ml、5ng／ml、10ng／ml、20ng／ml、50ng／ml和100ng／ml各1瓶，每瓶1ml，

所述酶结合物为辣根过氧化物酶；

所述显色剂A采用如下方法制成：

向容器中加入

11毫摩尔(mmol)的柠檬酸，其分子量为192.12

25毫摩尔(mmol)的柠檬酸三钠，其分子量为294.10

0.5毫摩尔(mmol)的过氧化氢脲，其分子量为94.07

再向容器中加去离子水至1000毫升，即得显色剂A；

所述显色剂B采用如下方法制成：

向容器中加入

11毫摩尔(mmol)的柠檬酸，其分子量为192.12

11.6毫摩尔(mmol)的盐酸，其分子量为36.5

0.5毫摩尔(mmol)的乙二胺四乙酸(EDTA)，其分子量为292.24

2.1毫摩尔(mmol)的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)，其分子量为240.34再向容器中加去离子水至1000毫升，即得显色剂B；所述终止液为2mol的硫酸。