CN103613574B

CN103613574B - 含有哌嗪结构的2,2-二甲基色满酮类化合物及其类似物的医药用途

Info

Publication number: CN103613574B
Application number: CN201310667356.6A
Authority: CN
Inventors: 胡春; 刘晓平; 邱志远; 黄二芳; 金辄
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2013-12-10
Filing date: 2013-12-10
Publication date: 2016-08-17
Anticipated expiration: 2033-12-10
Also published as: CN103613574A

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及含有哌嗪结构的2,2‑二甲基色满酮类化合物及其类似物的医药用途。其结构通式如下所示：其中，X独立地选自CH₂或者C=O；当Y选自CH₂时；Ar独立地选自甲基、羟基、甲氧基、乙氧基、硝基、氟、氯、溴取代或未取代的苯基；n限定为0至3的整数；和X独立地选自CH₂或者C=O；当Y选自C=O时，Ar独立地选自甲基、羟基、甲氧基、乙氧基、硝基、氟、氯、溴取代或未取代的苯基；n限定为1至3的整数。本发明的化合物作为有效的抗血小板药物，尤其是应用于制备预防或治疗因血小板聚集而引起的冠状动脉综合症，心肌梗塞，心肌缺血，心脑血管病症的药物在临床上使用。

Description

含有哌嗪结构的2,2-二甲基色满酮类化合物及其类似物的医药用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及含有哌嗪结构的2,2-二甲基色满酮类化合物及其类似物的医药用途，该类化合物是一类抗血小板聚集的化合物。

背景技术

血栓形成可导致急性心肌梗塞，中风，肺栓塞等心，脑，肺循环疾病，也是外科手术中常见的并发症以及介入性血管成形术后再闭塞的因素。由于血小板聚集在血栓形成方面起重要作用，抗血小板药物已成为防治这些疾病的主要药物。抗血小板药又称血小板功能抑制剂(platelet function inhibitors)，这类药物可以抑制血小板的粘附，聚集和释放功能，阻抑血栓形成，并可延长血栓性疾病患者缩短了的血小板生存期。作为抗血小板药，应要求在临床应用剂量下对机体出血凝血过程无明显影响，即不引起出血等不良反应。

目前发现色酮，色满酮及色满类化合物在抗血小板聚集方面具有一定的活性，如2-氨基-4-色酮，3-二甲氨基甲基-4-色酮，3-氨基甲基-4-色满酮等。

基于分子模拟和对接,我们设计合成了一系列含有哌嗪结构的2,2-二甲基色满酮类化合物，并发现这些化合物具有显著的抗血小板聚集活性。与专利申请号为200910010323.8的中国专利相比，含有哌嗪结构的2,2-二甲基色满酮类化合物对血小板聚集的抑制率有了明显的提高，具有良好的应用价值和开发应用前景。

发明内容

本发明的一个目的是提供2,2-二甲基色满酮类化合物，其前体药物和药物活性代谢物，以及上述化合物的立体异构体及其药学上可接受的盐：所述化合物具有显著的抗血小板聚集作用。

本发明涉及以下通式的化合物：

其中X独立地选自CH₂或者C＝O；当Y选自CH₂时；Ar独立地选自由C₁-C₄烷基、羟基、C₁-C₄烷氧基、硝基、卤素取代或未取代的苯基，n限定为0至3的整数,选自0，1，2，3；

或X独立地选自CH₂或者C＝O；当Y选自C＝O时，Ar独立地选自由C₁-C₄烷基、羟基、C₁-C₄烷氧基、硝基、卤素取代或未取代的苯基；n限定为1至3的整数，选自1，2，3。

优选地，X独立地选自CH₂或者C＝O；当Y选自CH₂时；Ar独立地选自由甲基、羟基、甲氧基、乙氧基、硝基、氟、氯、溴取代或未取代的苯基；n限定为0至3的整数,选自0，1，2，3；

或X独立地选自CH₂或者C＝O；当Y选自C＝O时，Ar独立地选自由甲基、羟基、甲氧基、乙氧基、硝基、氟、氯、溴取代或未取代的苯基；n限定为1至3的整数，选自1，2，3。

本发明的这类化合物的合成方法简单,适应工业化生产,相对于天然的类似物更加稳定,生物活性测试显示此类化合物具有抗高血压活性,可以作为一种抗高血压药物应用于临床。

本发明包括一种组合物，用于抑制哺乳动物血小板的损失，抑制血小板聚集物的形成，抑制纤维蛋白的形成，抑制血栓形成，和抑制栓塞物形成，该组合物包括本发明的化合物和在药学上可接受的载体。这些组合物可选的可以包括抗凝剂，抗血小板剂和溶栓剂。该组合物可以加入到血液，血液制品或哺乳动物器官中，以达到所需的抑制作用。

本发明也提供了抑制或治疗异常蛋白水解的方法，和用于治疗下述的方法：心肌梗塞；不稳定的绞痛；中风；再狭窄；深静脉血栓；由创伤，脓毒症或肿瘤转移导致的播散性血管内凝血；血液透析；心肺旁路术；成人呼吸窘迫症；内毒素性休克；类风湿性关节炎；溃疡性结肠炎；硬结；转移；化疗过程中的凝固性过高；阿森海默氏症；道恩氏综合症；眼内纤维蛋白形成；和伤口愈合。本发明化合物的其他用途是作为抗凝剂，包埋在或者物理连接于用于装置制造的材料中，该装置用于血液采集，血液循环和血液贮存，例如导管，血液透析器，血液采集注射器与试管，血线与斯腾特氏印模。

本发明也包括用于减少哺乳动物表面血栓形成的方法，是将本发明化合物以共价或非共价方式结合在该表面上。

另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的组合物，该组合物包括能够在体外被检测的本发明化合物。优选的组合物包含本发明化合物和一种可检测的标记，例如放射性或顺磁性原子。

另一方面，本发明提供可用于哺乳动物体内血栓成像的诊断组合物，该组合物包含药学上可接受的载体和诊断学上有效量的本发明化合物或组合物。

另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的方法。

本发明包括立体异构体以及旋光异构体，例如对映体混合物以及各对映体和非对映体，其产生的原因是所选择的该系列化合物中的结构不对称性。本发明化合物也可以具有多晶型，所有多晶型也都包括在本发明内。

本发明化合物也可以是溶剂化物的形式，尤其是水合物。水合可以发生在化合物或包含化合物的组合物的生产过程中，或者由于化合物的吸湿性，经过一定时间可发生水合。

本发明化合物的某些化合物是被称之为药物前体的衍生物。

本发明化合物的药学上可接受的盐(以水溶性或油溶性产物或可分散的产物的形式)包括常规的非毒性盐或季铵盐,它们例如是从无机或有机酸或碱生成的。酸加成盐的实例包括醋酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢氯酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，草酸盐，扑酸盐，果胶酯酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐和十一酸盐。碱盐包括铵盐，碱金属盐，例如钠和钾盐，碱土金属盐，例如钙和镁盐，有机碱的盐，例如二环己胺盐，N-甲基-D-葡糖胺盐，和氨基酸的盐，例如精氨酸，赖氨酸等，而且，碱性含氮基团可以用这样的试剂季铵化，例如低级烷基卤化物，如甲基，乙基，丙基和丁基的氯，溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯，二乙酯，二丁酯和二戊酯；长链卤化物，如癸基，月桂基，肉豆蔻基和硬脂酰基的氯，溴和碘化物；芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基的溴化物等。优选用于生成酸加成盐的酸包括盐酸和醋酸。

对它们的应用来说，本发明化合物的酶抑制特性的效力和其他生化参数是按照本领域熟知的标准生化工艺加以确定的。应用的实际剂量范围取决于所治疗的患者或动物疾病状态的性质和严重性，这些是由随访的诊断医师加以决定的。预期有用的剂量范围将是约0.01-10mg/kg每天，即可达到有效的治疗效果。

本发明化合物可以用于多种治疗目的。本发明化合物可以用于以异常静脉或动脉血栓形成为特征状态的治疗或预防，这些状态涉及凝血酶的产生或作用，包括但不限于深静脉血栓；发生在脓毒性休克，病毒感染和癌症过程中的播散性血管内凝血；心肌梗塞；中风；冠状动脉旁路；眼内纤维蛋白形成；髋部复位；由溶栓疗法或经皮经腔冠状血管成形术导致的血栓形成。其他用途包括作为抗凝剂的用途，包埋在或者物理连接于用于装置制造的材料中，该装置用于血液采集，血液循环和血液贮存，例如导管，血液透析仪，血液采集注射器与试管和血线。本发明化合物也可以在体外血液循环中用作抗凝剂。

金属斯腾特氏印模显示出减少再狭窄的作用，但是也有形成血栓的作用。减少斯腾特氏印模形成血栓的一个策略是在斯腾特氏印模表面上涂覆，包埋，吸附或共价凝血酶抑制剂。本发明化合物可用于该目的。本发明化合物可以结合或包埋在可溶性和/或可生物降解的聚合物内，然后涂在斯腾特氏印模材料上。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，聚羟基-丙基异丁烯酰胺-苯酚，聚羟乙基-天冬氨酰胺-苯酚，被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸，聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物，聚ε己内酯，聚羟基丁酸，聚原酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯，和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。

凭藉血小板对平滑肌细胞，内皮细胞和嗜中性白细胞等宿主细胞类型的作用，发现了本发明化合物的另外用途，用于成人呼吸窘迫综合症；炎性反应；伤口愈合；再灌注损伤；动脉粥样硬化；和气囊血管成形术，旋切术和动脉斯腾特氏印模放置等损伤后继发的再狭窄的治疗或预防。

当用作血小板聚集抑制剂时，本发明化合物给药的有效量可以在约0.1-500mg/kg体重的剂量范围内，优选为0.1-10mg/kg体重范围，给药方案为每日一次或2-4次。

当用作血小板聚集抑制剂时，本发明化合物可以与溶栓剂联合使用，例如组织纤溶酶原激活物，链激酶和尿激酶。另外，本发明化合物可以与其他抗血栓形成药或抗凝药联合使用，例如但不限于纤维蛋白原拮抗剂和凝血恶烷受体拮抗剂。

血小板聚集抑制剂可以与可溶性聚合物偶合，后者作为可定向的药物载体。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，聚羟基-丙基异丁烯酰胺-苯酚，聚羟乙基-天冬氨酰胺-苯酚，或被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。而且，凝血酶抑制剂可以与一类可生物降解的聚合物偶合，后者可用于实现药物的控制释放，例如聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚ε己内酯，聚羟基丁酸，聚原酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯，和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。

本发明的药物组合物能够通过任意方式给药。例如，给药可以通过肠胃外，皮下，静脉内，肌内，腹膜内，透皮，颊部或眼部途径。或者，可以通过口服途径并行给药。给药剂量将取决于受治疗者的年龄，健康状况和体重，并行治疗的种类(若有的话)，治疗频率，和所需效果的性质。

除了药学上的活性化合物以外，该药物制剂还可含有适合的药学上可接受的载体，包括有利于将活性化合物加工成能够药用的制剂的赋形剂和助剂。

本发明的药物制剂是通过常规的混合，造粒，成丸，溶解，或冻干过程。因此，通过将活性化合物与固体赋形剂混合可以得到口服药物制剂，可加入适合的助剂，然后研磨所得混合物，将颗粒混合物加工成片剂或锭剂芯。

适合的赋形剂特别是填充剂，例如糖类，如乳糖或蔗糖，甘露糖醇或山梨糖醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，如磷酸三钙或磷酸氢钙，以及粘合剂，例如淀粉糊，如玉米淀粉，小麦淀粉，稻米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄芪胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯吡咯烷酮。还可以加入崩解剂，例如上述的淀粉和羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂，海藻酸或其盐，例如藻酸钠。助剂尤其是助流剂和润滑剂，例如硅石，滑石，硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。可以选的含有阿拉伯胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，漆用溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了形成耐受胃酸的包衣，使用适合的纤维素制剂的溶液，例如邻苯二甲酸乙酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素。可以向片剂或糖衣丸剂的包衣中加入染料或颜料，例如，用于鉴别或为了描绘各剂活性化合物的组合。

其他可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊，以及由明胶和甘油或山梨糖醇等增塑剂制成的软密封胶囊。推入配合式胶囊可以含有颗粒形式的活性化合物，它们可以与乳糖等填充剂，淀粉等粘合剂和/或滑石或硬脂酸镁等润滑剂以及可选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物优选溶解或悬浮在适宜的液体中，例如脂肪油或液体石蜡。另外，也可以加入稳定剂。

适合于肠胃外给药的制剂包括水溶性活性化合物的水溶液，例如水溶性盐，碱性溶液和环糊精包合的络合物。尤其是优选的碱式盐是铵盐，例如是用Tris，氢氧化胆碱，Bis-Tris丙烷，N-甲基葡糖胺或精氨酸制备的。可以使用一种或多种改性或未改性的环糊精来稳定和增加本发明化合物的水溶性。

另外，活性化合物可以作为适当的油性注射用悬浮液给药。适合的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油，如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(化合物可溶于PEG-400)。水性注射用悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠，山梨糖醇和/或葡聚糖。可选的，悬浮液也可以含有稳定剂。

利用交换反应，本发明化合物可以用放射性碘进行标记。如本领域熟知的用热碘交换冷碘。

本发明也包括可用于体内血栓成像的组合物，其中该组合物是由与放射性原子络合的本发明化合物组成的，或者是由与顺磁性原子络合的本发明化合物组成的。使用本领域熟知的络合技术得到。

本发明也包括可用于体内血栓成像的诊断组合物，该组合物包含药学上可接受的载体和诊断学上有效量的本发明化合物的组合物。

每剂所需的“诊断学上有效量”的组合物将取决于给药途径，所治疗的类型和所考虑的具体的体格特征。这些因素及其与确定剂量之间的关系是医学诊断领域技术人员所熟知的。而且可以调整诊断学上的有效量和给药方法，使其达到最佳疗效，不过也取决于诸多因素，例如体重，饮食，并行的药物治疗和医学领域技术人员将要考虑的其他因素。在任何方面，用于成像的剂量应当足以检测所针对血栓部位中的成像剂的存在。通常，放射成像要求本发明药物组合物所提供的剂量为约5-20μCi，优选为约10μCi。磁共振成像要求所提供的剂量为约0.001-5mmol/kg，优选为约0.005-0.5mmol/kg与顺磁原子络合的本发明化合物。在两种情况下，本领域已知实际剂量将取决于血栓的位置。

用于体内的“药学上可接受的载体”是药学领域所熟知的。本发明的药物组合物可以用药学上可接受的载体配制成用于注射给药的无菌溶液或悬浮液，适合于在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式，或是乳液。适合的赋形剂例如水，盐水，葡萄糖，甘露糖醇，乳糖，卵磷脂，白蛋白，谷氨酸钠，盐酸半胱氨酸等。另外，可注射的药物组合物可以含有少量无毒的辅助物质，例如润湿剂，pH缓冲剂等。如果需要的话，可以使用促进吸收的制剂(例如脂质体)。

本发明也涵盖为贮存或给药而制备的诊断组合物，它们另外含有防腐剂，稳定剂和染剂。例如，作为防腐剂可以加入苯甲酸钠，山梨酸和对羟基苯甲酸的酯。另外，可以使用抗氧化剂和悬浮剂。

本发明的体内成像方法也提供了若干优于以前的成像工艺的优点，这些成像工艺用于检测或监测血栓的存在，大小，消退或增加。特别是本发明所提供的化合物，组合物和诊断组合物已经被设计成与凝血酶极为紧密的结合，凝血酶是与血栓相关联的，从而减少由未结合的成像剂产生的循环放射性或顺磁性“背景”。而且，通过冠脉内注射本发明化合物，组合物或诊断组合物而进行的体内成像预期几乎是瞬时的，这是由于这些成像剂会立即饱和与血栓结合的凝血酶。

因此，本发明也包括用于体内血栓成像的方法，该方法包括下列步骤：1，将诊断学上可接受的量的本发明化合物，组合物或诊断组合物给药，和2，检测血管内的血栓。用于监测血栓大小，位置和数量以及血栓溶解或生长的方法。该方法在体内使用化合物，组合物或诊断组合物时，“给药”是通过胃肠外途径实现的，以全身或局部定向的方式均可。实现全身给药的方法是将本发明化合物，组合物或诊断组合物注射到适宜和可用的静脉或动脉内。实现局部定向给药的方法是将本发明化合物，组合物或诊断组合物以接近血流的速度注射到被怀疑在远离注射部位含有血栓的静脉或动脉内。这包括但不限于直接注射到冠状动脉脉管系统内，使冠脉血栓成像，直接注射到颈动脉内，使脑脉管系统中的血栓成像，或者直接注射到足静脉内，使腿部深静脉血栓成像。

本发明组合物向血栓部位的释放方式也在术语“给药”所考虑的范围内。例如，可以将连接有螯合单元的化合物注射到体内，稍后注入放射性原子，从而在血栓部位体内形成包含与放射性原子络合的化合物的组合物。或者，可以将包含与放射性原子络合的化合物的组合物注射到体内。

如前所述，用在本发明方法中的化合物，组合物或诊断组合物的“诊断学上有效的量”将取决于给药途径，所治疗的类型和所治疗的具体体格特征。这些因素及其与确定剂量之间的关系是医学诊断领域技术人员所熟知的。在任何方面，用于体内成像的剂量应当足以检测所针对血栓部位中的成像剂量的存在。通常，放射成像要求本发明药物组合物所提供的剂量为约5-20μCi，优选为约10μCi。磁共振成像要求所提供的剂量为约0.001-5mmol/kg，优选为约0.005-0.5mmol/kg与顺磁原子络合的本发明化合物。在两种情况下，本领域已知实际剂量将取决于血栓的位置。

本发明的化合物作为有效的抗血小板药物方面的应用，尤其是应用于制备预防或治疗因血小板聚集而引起的冠状动脉综合症，心肌梗塞，心肌缺血，心脑血管病症药物，和治疗血栓形成，局部缺血，中风，再狭窄或炎症的方法，也就是将有效量的本发明化合物给药。

具体实施方式

下列实施例阐述而非限制本发明的方法和组合物。不同条件和参数的其他适当修改和调整也是正常的，对本领域技术人员来说，显然也在本发明的范围之内。

本发明的化合物能根据以下的一般方案使用适宜的物质来制备，并且通过随后的具体实施例进一步的举例说明。然而，实施例中例举的化合物并不被解释为形成了本发明唯一认可的一类物质。以下制备步骤的条件和方法的各种已知变化也能用于制备这些化合物。所有的温度均为摄氏度，除非另有指明。

实施例1：7-{3-[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮的制备

将6.87g(0.0625mol)间苯二酚、6.25g(0.0625mol)3-甲基-2-丁烯酸、100mL甲磺酸加入1000mL圆底烧瓶中,通入N2保护,控制反应温度在70～80℃之间,在磁力搅拌下回流反应1h,用TLC监测反应情况。反应完毕后,冷却至室温。将反应液倒入500g冰水混合物中,静置至室温,逐渐析出大量固体,抽滤得淡粉色固体11.61g,收率为96.8％。重结晶得白色结晶。

将10g(0.0521mol)色满酮,用100mL乙醇溶解,加入新制的锌汞齐于500mL的圆底烧瓶中,加热回流反应,每小时补加浓盐酸3mL,保持溶液pH＝1～2。反应4d,停止反应,旋蒸除去乙醇,用二氯甲烷(3×50mL)萃取,合并有机相,用无水硫酸镁干燥,柱层析法分离得白色油状物,环己烷洗涤,得白色晶体4.88g,收率52.7％。mp 169-172℃。

将2,2-二甲基-7-羟基色满酮23.04g(0.12mol)、3-溴-1-氯丙烷22.68g(0.14mol)、碘化钾6.00g(0.04mol)、碳酸钾49.63g(0.36mol)加入反应烧瓶,适量丙酮作溶剂,加热回流3.5h。抽滤,旋蒸除去丙酮,加入适量石油醚溶解,5％NaOH水溶液萃取一次,收集有机层无水硫酸镁干燥。过滤,旋蒸除去石油醚,得淡黄色油状物,加入少量石油醚冷冻有白色固体析出。过滤,晾干即得白色固体23.28g,收率72.4％。

取2,2-二甲基-7-(3-氯丙氧烷基)-4-色满酮2.68g(10mmol)，4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪2.29g(10mmol)，碘化钾1.66g(10mmol)，无水碳酸钾13.80g(100mmol)，干燥丙酮100mL安装回流装置，加热回流12h，冷却，过滤，蒸除丙酮，硅胶柱层析分离得到7-{3-[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮,收率39.08％。Mp：160-162℃。MS：42,70,96,145,172,200,243,269,462。¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):1.44(6H,s),2.52(2H,s),3.30(6H,s),4.68(2H,s),6.34(1H,d,J＝2.5Hz),6.53(1H,d,J＝8.3Hz),7.67(1H,d,J＝8.3Hz)。IR(cm^-1):3433.5,2978.2,2460.2,1681.4,1609.6,1444.9,1167.2,1122.8,1024.5,1076.9,945.8,832.3,692.7,578.7。

实施例2：7-{3-[4-(3-氯-4-氟苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮的制备

按照实施例1方法,由2,2-二甲基-7-(3-氯丙氧烷基)-4-色满酮和4-(3-氯-4-氟苯基)哌嗪反应,得到7-{3-[4-(3-氯-4-氟苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮,收率39.51％。Mp：196-197℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):1.43(12H,s),2.14(2H,s),2.52(2H,s),2.66(2H,s),3.17(6H,s),4.10(2H,s),6.33(1H,s),6.48(1H,d,J＝2.5Hz),7.26(1H,s),7.77(1H,d,J＝8.3Hz)。IR(cm^-1):3427.9,2978.8,2591.7,1681.1,1608.9,1440.5,1269.9,1166.0,1123.8,1058.3,994.8,838.0,733.5,576.9,531.8。

实施例3：7-{3-[4-(3-氯-4-甲基苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮的制备

按照实施例1方法,由2,2-二甲基-7-(3-氯丙氧烷基)-4-色满酮和4-(3-氯-4-甲基苯基)哌嗪反应,得到7-{3-[4-(3-氯-4-甲基苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮,收率36.95％。Mp：175-177℃。ESI-MS m/z(M)490.8([M⁺H]⁺)。¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):1.44(6H,s),2.36(6H,s),2.66(3H,s),4.68(2H,s),6.34(1H,s),7.56(1H,s),7.77(1H,d,J＝8.3Hz)。IR(cm^-1):3454.3,2975.7,2440.6,1662.1,1613.7,1444.3,1269.2,1167.1,1124.6,1058.7,996.6,820.7,759.1,577.7。

实施例4：7-{3-[4-(2-甲基-3-氯苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮的制备

按照实施例1方法,由2,2-二甲基-7-(3-氯丙氧烷基)-4-色满酮和4-(2-甲基-3-氯苯基)哌嗪反应,得到7-{3-[4-(2-甲基-3-氯苯基)哌嗪]丙基}-2,2-二甲基-4-色满酮,收率36.38％。Mp：205-207℃。ESI-MS m/z(M)512.2([M⁺Na]⁺)。¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):1.44(6H,s),2.31(3H,s),2.53(2H,s),2.65(2H,s),3.09(4H,d),3.27(2H,s),3.36(4H,t),4.12(2H,s),6.33(1H,d),7.01～7.18(3H,m),7.77(1H,d,J＝8.3Hz)。IR(cm^-1):3431.6,2946.1,2440.5,1683.4,1610.0,1442.6,1266.9,1167.7,1122.5,1060.7,986.9,823.1,783.5,575.2。

实施例5：7-{3-[4-(3-氟苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮的制备

按照实施例1方法,由2,2-二甲基-7-(3-氯丙氧烷基)-4-色满酮和4-(3-氟苯基)哌嗪反应,得到7-{3-[4-(3-氟苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮,收率44.51％。Mp：205-207℃。¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm):1.44(6H,s),1.96(2H,p),2.54(6H,m),3.19(4H,t),4.04(2H,t),6.38(1H,d),6.52(1H,d),6.61(1H,t),6.67(1H,dd,J₁＝2.5Hz,J₂＝8.4Hz),7.14(1H,dd,J₁＝2.5Hz,J₂＝8.4Hz)。IR(cm^-1):3437.5,2938.8,2831.9,1675.8,1609.3,1575.8,1495.6,1269.4,1167.2,1071.5,1057.5,995.4,835.2,680.8,583.4。

实施例6

下述实验说明本发明化合物对二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集的抑制作用。

动物：家兔，3-5kg，雌雄兼用；

仪器：SHANDA PA-196型血小板聚集仪；

药品配置方法：取40mL甲醇，60Ml0.9％生理盐水混合配成标准溶液，精确秤取1mg样品(精确至0.01mg)，用标准溶液稀释至浓度为1mg/mL左右的溶液备用。ADP溶解在生理盐水(250uM)。

实验方法：在50mL塑料试管中加入4mL3.8％枸橼酸钠水溶液，用酒精仔细擦洗兔耳，再用二甲苯擦洗兔耳，待血管膨胀后在耳缘处涂抹凡士林，割开血管，用预备试管收集36mL血，使血混合均匀，以900转/min离心8-10min，分离出上清血浆PRP(富含血小板血浆)，继而以3500转/min离心8-10min，分离出上清血浆PPP(贫含血小板血浆)。精密吸取250uLPRP加入聚集管中，向聚集管中加入含有药品的40％甲醇水溶液20uL，将分别注有250uL的PPP和PRP血浆的聚集管在37±0.01℃预热5min，以PPP250uL调零，再向比色杯中加入10uL二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集，于37℃搅拌条件下，绘制曲线，测定血小板最大聚集率，并以空白溶剂做对照，计算血小板聚集抑制率。聚集抑制率＝(空白对照聚集抑制率—样品聚集抑制率)/空白对照聚集抑制率×100％。

本发明的化合物进行该实验时，表明有抑制ADP诱导血小板聚集的作用。部分样品抑制率列表如下：

实施例7

下述实验说明本发明化合物对胶原诱导血小板聚集的抑制作用。

动物：家兔，3-5kg，雌雄兼用。

药品配置方法：取90mL甲醇、10mLDMSO混合配成标准溶液Ⅰ。取80mL甲醇、20mLDMSO混合配成标准溶液。精确秤取样品(精确至0.001g)，用标准溶液Ⅰ溶解，分别配成浓度为30umol/mL、10umol/mL、3umol/mL、1umol/mL的溶液备用，对于在标准溶液Ⅰ中难溶的样品用标准溶液Ⅱ溶解，配成浓度为10umol/mL、3umol/mL、1umol/mL的溶液备用。阳性对照：阿司匹林也用标准溶液Ⅰ和标准溶液Ⅱ分别配成如上浓度。

实验方法：在10mL塑料试管中加入1mL3.8％枸橼酸钠水溶液，用酒精仔细擦洗兔耳，再用二甲苯擦洗兔耳，待血管膨胀后在耳缘处涂抹凡士林，割开血管，用预备试管收集9mL血，使血混合均匀，以900转/min离心8-10min，分离出上清血浆PRP(富含血小板血浆)，继而以3500转/min离心8-10min，分离出上清血浆PPP(贫含血小板血浆)。以PPP调零，精密吸取200uLPRP加入比色杯中，向比色杯中加入样品溶液20uL，在37±0.01℃孵育2min后，再向比色杯中加入20uL胶原诱导血小板聚集，于37℃搅拌条件下，绘制曲线，测定血小板最大聚集率，并以空白溶剂做对照，以阿司匹林为阳性对照，计算样品抗血小板聚集活性的IC₅₀值。

本发明的化合物进行该实验时，表明有抑制胶原诱导血小板聚集的作用。

实施例8：生物活性实验——纯化酶的体外抑制作用

试剂：所有缓冲盐从Sigma公司获得，为最高纯度。酶解物是N苯甲酰-Phe-Val-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma B7632)，盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma B2291)，N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺(Sigma T6140)，N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基N-酰苯胺(Sigma S7388)和N-CBZ-Val-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma C7271)，购自Sigma。N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺(BACHEM L-1720)和N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-对硝基N-酰苯胺(BACHEM L-1770)购自BACHEM。

人α-凝血酶，人Xa因子和人纤溶酶购自Enzyme Research Laboratories(SouthBend,Indiana)。

Ki测定：全部测定都是以供试化合物抑制酶催化的肽对硝基N-酰苯胺酶解物的水解作用的能力为基础的。在典型的Ki测定中，酶解物是在DMSO中制备的，并稀释在测定缓冲液中，后者由50mM HEPES,200mM NaCl组成，pH7.5。每种酶解物的最终浓度列在下面。一般说来，酶解物的浓度低于用实验方法测定的Km值。将供试化合物制成1.0mg/ml的DMSO溶液。制备3种最终浓度的DMSO稀释液，浓度跨度达200倍。在测定缓冲液中制备酶溶液，浓度如下。

在典型的Ki测定中，向96孔板的每孔中吸移280mL酶解物溶液，10mL供试化合物溶液，将板在37度分子装置板读数器中热平衡超过15分钟。加入10mL等分试样的酶引发反应，在405nm下记录15分钟内的吸光度增加值。对应于不到10％总酶解物水解的数据用于计算。不含供试化合物的样本速度比率(吸光度的变化速率，为时间的函数)除以含有供试化合物的样本速度，以供试化合物尝试的函数作图。对数据进行线性回归处理，计算直线的斜率值。斜率的倒数是用实验方法测定的Ki值。

凝血酶：评价凝血酶活性的标准是水解酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为32Mm(32mM远小于Km 180mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的人α-凝血酶在测定缓冲液中稀释至浓度为15nM。最终的试剂浓度是：(凝血酶)＝0.5nM，(酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺)＝32mM。

X因子(FXa)：评价FXa活性的标准是水解酶解物盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为51Mm(远小于Km＝1.3mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的活化的X因子在测定缓冲液中稀释至浓度为300nM。最终的试剂浓度是：(FXa)＝10nM，(盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺)＝51nM。

纤溶酶：评价纤溶酶活性的标准是水解N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为37mM(远小于Km＝243mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的人纤溶酶在测定缓冲液中稀释至浓度为240nM。最终的试剂浓度是：(纤溶酶)＝8nM，(N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺)＝37mM。

结果表明，本发明化合物是凝血酶的有效抑制剂。部分样品抑制率列表如下：

实施例9：大鼠体内血小板聚集抑制作用

药品及制剂：本发明化合物，以0.5％CMC配成混悬液供动物给药用；二磷酸腺苷(ADP)(Sigma)。

仪器：PK121R型离心机，SPA-3型PPP血小板聚集仪。

试验方法：雄性Wistar大鼠，体重300克左右，经口灌胃给予硫酸氯吡格雷及本发明化合物，剂量均为10mg/kg，给药体积为10mL/kg，2小时后，乙醚麻醉，腹主动脉采血，3.8％枸橼酸钠抗凝，全血与抗凝剂之比为9：1，1000rpm离心7分钟，制备富血小板血浆(PPP)。以PPP调PRP，使其血小板计数保持在2X106个/mL。取PRP加入测试杯，37度温孵10分钟。以PRP调零，PPP调100％，以ADP(终浓度为5μM)为诱导剂，按Borns比浊法用SPA-3型PPP血小板聚集仪测定血小板聚集百分数，以t-检验进行统计学比较。

体外ADP，胶原和凝血酶诱导的血小板聚集的抑制实验

血小板分离：从接到通知的健康志愿者获得人血。在1/6体积的ACD中收集血液(2.5g柠檬酸钠，1.5g柠檬酸和2.5g葡萄糖的100mL dH2O)。室温下800xg离心15分钟，去除富含血小板的血浆，在1mM乙酰水杨酸存在下37度保温60分钟，并在室温下1000xg离心10分钟。将血小板沉淀以2X108细胞/mL的密度用HEPES-缓冲的Tyrodes溶液(137mM NaCl，2.7mMKCl，1mM MgCl2，3mM NaH2PO4，5mM葡萄糖，10mM HEPES Ph7.4，0.2％牛血清清蛋白和0.05U/mL三磷酸腺苷双磷酸酶)重悬浮。

聚集研究：通过测量37度下光集合度计中0.5mL搅拌的(900rpm)阿司匹林处理的洗涤血小板，测定ADP诱导的血小板聚集。用0.5mL Hepes缓冲的Tyrode缓冲液设定仪器基线。在聚集测定前，用2mM CaCl2和1mg/mL纤维蛋白原补充血小板悬浮液。加入指定浓度的ADP或其它激动剂，引发血小板聚集，连续记录至少8分钟的光透射。当测试血小板聚集的抑制剂时，在指定浓度的抑制剂中保温血小板3-6分钟，然后加入ADP或其它激动剂，连续记录至少8分钟的反应。将数据拟合到四参数对数等式，从两种聚集速率和各测定的最大聚集程度计算血小板聚集的激动剂和抑制剂的能力。

结果可知，本发明的化合物能显著抑制ADP，胶原或凝血酶诱导的血小板聚集。因此，它们可以用来预防或治疗因血小板聚集而引起的冠状动脉综合症，心肌梗塞，心肌缺血等心脑血管疾病。部分样品抑制IC₅₀列表如下:

实施例10：对血小板粘附性的影响(胶原粘附法)

将25只家兔随机均分为5组，设空白对照组，本发明化合物的3个剂量组及盐酸噻氯匹定104mg/kg组。受试动物按上述剂量ig给药每天1次，连续3天，于末次给药后1.5小时，常规在耳缘静脉取血，制备PRP，PPP及酸溶性胶原，在血小板聚集仪测定硅化比浊管内加入胶原前(胶原终浓度为0.05mg/mL)后血小板数(以PPP调节PRP使血小板数为100,000-500,000/μL)，以血小板粘附率为观察指标，各给药组与对照组进行组间比较，t检验。

试验结果表明，本发明化合物在所选择剂量范围内对家兔体外血小板粘附性有明显抑制作用。部分样品抑制率列表如下:

Claims

1.如下含有哌嗪结构的2,2-二甲基色满酮类化合物以及可接受的盐：

7-{3-[4-(3-三氟甲基苯基)哌嗪基]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮；

7-{3-[4-(3-氯-4-氟苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮；

7-{3-[4-(3-氯-4-甲基苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮；

7-{3-[4-(2-甲基-3-氯苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮；

7-{3-[4-(3-氟苯基)哌嗪]丙氧基}-2,2-二甲基-4-色满酮。

2.一种药用组合物，其特征在于：该组合物含有效量权利要求1的化合物或药学上可接受的盐，及药学上可接受的载体。

3.权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药用组合物在制备防治与血小板聚集有关的疾病的药物中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述与血小板聚集有关的疾病包括动脉硬化疾病的原发性动脉血栓并发症，动脉粥样硬化疾病干预的血栓并发症，手术或机械损伤的血栓并发症，机械性诱导的血小板活化，分流堵塞，血管损伤和炎症继发性的血栓，静脉血栓，冠状动脉血栓，动脉粥样硬化和动脉硬化，动脉或静脉在溶纤维蛋白治疗后的重新阻塞，与体外循环有关的血小板粘附，与溶栓治疗有关的血栓并发症，与冠状和其它血管成形术有关的血栓并发症，或与冠状动脉分流术有关的血栓并发症。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述动脉硬化的原发性动脉血栓并发症是指血栓性中风、周围血管疾病和没有血栓溶解的心肌梗塞所引起；所述动脉粥样硬化疾病干预的血栓并发症是指血管成形术、动脉内膜切除术、支架旋转、冠状和其它血管移植手术所引起；所述手术或机械损伤的血栓并发症是指手术或偶然创伤后的组织补救，重建性手术，和“还原性”手术所引起；所述机械性诱导的血小板活化是指导致微血栓的心肺分流术和血制品储藏所引起；所述分流堵塞是因肾透析和血浆置换所引起；所述血管损伤和炎症继发性的血栓是因血管炎、动脉炎、肾小球肾炎和器官移植排斥所引起；所述静脉血栓形成是因深静脉血栓，静脉栓塞疾病，血小板增多症、红细胞增多症以及偏头痛所引起；所述冠状动脉血栓因不稳定性心绞痛、冠状动脉血管成形术和急性心肌梗塞所引起；所述动脉粥样硬化和动脉硬化是指动脉粥样硬化、短暂性局部缺血发作和中风、周围血管疾病、动脉血栓、栓塞、以及血管成形术、颈动脉内膜切除术和血管移植吻合术后的再狭窄或突然闭合所引起。