CN101486700B - 8-乙酰基色满酮类化合物及其类似物和医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，涉及8-乙酰基色满酮类化合物及其类似物的医药用途。8-乙酰基色满酮类化合物及其类似物和药学上适用的酸加成的盐作为血小板聚集抑制剂，其结构通式如(I)所示。在结构式中，其中X可以选自CH2或者C＝O；当X为CH2时，R1R2独立的选自氢，甲基或乙基，或R1R2与它们相连的氮原子一起组成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，吗啉基，或六亚甲基亚胺基环；当X为C＝O时，R1R2独立的选自氢，甲基或乙基，或R1，R2与它们相连的氮原子一起组成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，吗啉基，或六亚甲基亚胺基环；从一至四个碳原子的烷基基团；和取代或未取代的芳香基团。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及8-乙酰基色满酮类化合物及其类似物和医药用途，该化合物为一类新颖的抗血小板聚集的化合物。
背景技术
血栓形成可导致急性心肌梗塞，中风，肺栓塞等心，脑，肺循环疾病，也是外科手术中常见的并发症以及介入性血管成形术后再闭塞的因素。由于血小板聚集在血栓形成方面起重要作用，抗血小板药物已成为防治这些疾病的主要药物。抗血小板药又称血小板功能抑制剂(platelet functioninhibitors)，这类药物可以抑制血小板的粘附，聚集和释放功能，阻抑血栓形成，并可延长血栓性疾病患者缩短了的血小板生存期。作为抗血小板药，应要求在临床应用剂量下对机体出血凝血过程无明显影响，即不引起出血等不良反应。
目前发现色酮，色满酮及色满类化合物在抗血小板聚集方面具有一定的活性，如2-氨基-4-色酮，3-二甲氨基甲基-4-色酮，3-氨基甲基-4-色满酮等。在此基础上，我们得到了本发明化合物，其具有较强的抗血小板聚集活性。
发明内容
本发明的目的是提供一类新颖的取代醚类色满酮衍生物及其制备方法。
本发明包括一种组合物，用于抑制哺乳动物血小板的损失，抑制血小板聚集物的形成，抑制纤维蛋白的形成，抑制血栓形成，和抑制栓塞物形成，该组合物包括本发明的化合物和在药学上可接受的载体。这些组合物可选的可以包括抗凝剂，抗血小板剂和溶栓剂。该组合物可以加入到血液，血液制品或哺乳动物器官中，以达到所需的抑制作用。
本发明也提供了抑制或治疗异常蛋白水解的方法，和用于治疗下述疾病的方法：心肌梗塞；不稳定的绞痛；中风；再狭窄；深静脉血栓；由创伤，脓毒症或肿瘤转移导致的播散性血管内凝血；血液透析；心肺旁路术；成人呼吸窘迫症；内毒素性休克；类风湿性关节炎；溃疡性结肠炎；硬结；转移；化疗过程中的凝固性过高；阿森海默氏症；道恩氏综合症；眼内纤维蛋白形成；和伤口愈合。本发明化合物的其他用途是作为抗凝剂，包埋在或者物理连接于用于装置制造的材料中，该装置用于血液采集，血液循环和血液贮存，例如导管，血液透析器，血液采集注射器与试管，血线与斯腾特氏印模。
本发明也包括用于减少哺乳动物表面血栓形成的方法，是将本发明化合物以共价或非共价方式结合在该表面上。
另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的组合物，该组合物包括能够在体外被检测的本发明化合物。优选的组合物包含本发明化合物和一种可检测的标记，例如放射性或顺磁性原子。
另一方面，本发明提供可用于哺乳动物体内血栓成像的诊断组合物，该组合物包含药学上可接受的载体和诊断学上有效量的本发明化合物或组合物。
另一方面，本发明包括可用于哺乳动物体内血栓成像的方法。
本发明包括立体异构体以及旋光异构体，例如对映体混合物以及各对映体和非对映体，其产生的原因是所选择的该系列化合物中的结构不对称性。本发明化合物也可以具有多晶型，所有多晶型也都包括在本发明内。
本发明化合物也可以是溶剂化物的形式，尤其是水合物。水合可以发生在化合物或包含化合物的组合物的生产过程中，或者由于化合物的吸湿性，经过一定时间可发生水合。
本发明化合物的某些化合物是被称之为药物前体的衍生物。
本发明化合物的药学上可接受的盐(以水溶性或油溶性产物或可分散的产物的形式)包括常规的非毒性盐或季铵盐，它们例如是从无机或有机酸或碱生成的。酸加成盐的实例包括醋酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢氯酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，草酸盐，扑酸盐，果胶酯酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐和十一酸盐。碱盐包括铵盐，碱金属盐，例如钠和钾盐，碱土金属盐，例如钙和镁盐，有机碱的盐，例如二环己胺盐，N-甲基-D-葡糖胺盐，和氨基酸的盐，例如精氨酸，赖氨酸等，而且，碱性含氮基团可以用这样的试剂季铵化，例如低级烷基卤化物，如甲基，乙基，丙基和丁基的氯，溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯，二乙酯，二丁酯和二戊酯；长链卤化物，如癸基，月桂基，肉豆蔻基和硬脂酰基的氯，溴和碘化物；芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基的溴化物等。优选用于生成酸加成盐的酸包括盐酸和醋酸。
对它们的应用来说，本发明化合物的酶抑制特性的效力和其他生化参数是按照本领域熟知的标准生化工艺加以确定的。应用的实际剂量范围取决于所治疗的患者或动物疾病状态的性质和严重性，这些是由随访的诊断医师加以决定的。有效剂量范围约0.01-10mg/kg每天，即可达到有效的治疗效果。
本发明化合物可以用于多种治疗目的。本发明化合物可以用于以异常静脉或动脉血栓形成为特征状态的治疗或预防，这些状态涉及凝血酶的产生或作用，包括但不限于深静脉血栓；发生在脓毒性休克，病毒感染和癌症过程中的播散性血管内凝血；心肌梗塞；中风；冠状动脉旁路；眼内纤维蛋白形成；髋部复位；由溶栓疗法或经皮经腔冠状血管成形术导致的血栓形成。其他用途包括作为抗凝剂的用途，包埋在或者物理连接于用于装置制造的材料中，该装置用于血液采集，血液循环和血液贮存，例如导管，血液透析仪，血液采集注射器与试管和血线。本发明化合物也可以在体外血液循环中用作抗凝剂。
金属斯腾特氏印模显示出减少再狭窄的作用，但是也有形成血栓的作用。减少斯腾特氏印模形成血栓的一个策略是在斯腾特氏印模表面上涂覆，包埋，吸附或共价凝血酶抑制剂。本发明化合物可用于该目的。本发明化合物可以结合或包埋在可溶性和/或可生物降解的聚合物内，然后涂在斯腾特氏印模材料上。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，聚羟基-丙基异丁烯酰胺-苯酚，聚羟乙基-天冬氨酰胺-苯酚，被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸，聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸与聚乙醇酸的共聚物，聚ε己内酯，聚羟基丁酸，聚原酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯，和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
凭藉血小板对平滑肌细胞，内皮细胞和嗜中性白细胞等宿主细胞类型的作用，发现了本发明化合物的另外用途，用于成人呼吸窘迫综合症；炎性反应；伤口愈合；再灌注损伤；动脉粥样硬化；和气囊血管成形术，atherectomy和动脉斯腾特氏印模放置等损伤后继发的再狭窄的治疗或预防。
当用作血小板聚集抑制剂时，本发明化合物给药的有效量可以在约0.1-500mg/kg体重的剂量范围内，优选为0.1-10mg/kg体重范围，给药方案为每日一次或2-4次。
当用作血小板聚集抑制剂时，本发明化合物可以与溶栓剂联合使用，例如组织纤溶酶原激活物，链激酶和尿激酶。另外，本发明化合物可以与其他抗血栓形成药或抗凝药联合使用，例如但不限于纤维蛋白原拮抗剂和凝血恶烷受体拮抗剂。
血小板聚集抑制剂可以与可溶性聚合物偶合，后者作为可定向的药物载体。这样的聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，聚羟基-丙基异丁烯酰胺-苯酚，聚羟乙基-天冬氨酰胺-苯酚，或被棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。而且，凝血酶抑制剂可以与一类可生物降解的聚合物偶合，后者可用于实现药物的控制释放，例如聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚ε己内酯，聚羟基丁酸，聚原酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯，和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
本发明的药物组合物能够通过任意方式给药。例如，给药可以通过肠胃外，皮下，静脉内，肌内，腹膜内，透皮，颊部或眼部途径。或者，可以通过口服途径并行给药。给药剂量将取决于受治疗者的年龄，健康状况和体重，并行治疗的种类(若有的话)，治疗频率，和所需效果的性质。
除了药学上的活性化合物以外，该药物制剂还可含有适合的药学上可接受的载体，包括有利于将活性化合物加工成能够药用的制剂的赋形剂和助剂。
本发明的药物制剂是通过常规的混合，造粒，成丸，溶解，或冻干过程。因此，通过将活性化合物与固体赋形剂混合可以得到口服药物制剂，可加入适合的助剂，然后研磨所得混合物，将颗粒混合物加工成片剂或锭剂芯。
适合的赋形剂特别是填充剂，例如糖类，如乳糖或蔗糖，甘露糖醇或山梨糖醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，如磷酸三钙或磷酸氢钙，以及粘合剂，例如淀粉糊，如玉米淀粉，小麦淀粉，稻米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄芪胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯吡咯烷酮。还可以加入崩解剂，例如上述的淀粉和羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂，海藻酸或其盐，例如藻酸钠。助剂尤其是助流剂和润滑剂，例如硅石，滑石，硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。可以选择含有阿拉伯胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，漆用溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。为了形成耐受胃酸的包衣，使用适合的纤维素制剂的溶液，例如邻苯二甲酸乙酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素。可以向片剂或糖衣丸剂的包衣中加入染料或颜料，例如，用于鉴别或为了描绘各剂活性化合物的组合。
其他可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的胶囊，以及由明胶和甘油或山梨糖醇等增塑剂制成的软胶囊。胶囊可以含有颗粒形式的活性化合物，它们可以与乳糖等填充剂，淀粉等粘合剂和/或滑石或硬脂酸镁等润滑剂以及可选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物优选溶解或悬浮在适宜的液体中，例如脂肪油或液体石蜡。另外，也可以加入稳定剂。
适合于肠胃外给药的制剂包括水溶性活性化合物的水溶液，例如水溶性盐，碱性溶液和环糊精包合的络合物。尤其是优选的碱式盐是铵盐，例如是用Tris，氢氧化胆碱，Bis-Tris丙烷，N-甲基葡糖胺或精氨酸制备的。可以使用一种或多种改性或未改性的环糊精来稳定和增加本发明化合物的水溶性。
另外，活性化合物可以作为适当的油性注射用悬浮液给药。适合的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油，如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(化合物可溶于PEG-400)。水性注射用悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠，山梨糖醇和/或葡聚糖。可选的，悬浮液也可以含有稳定剂。
利用交换反应，本发明化合物可以用放射性碘进行标记。如本领域熟知的用热碘交换冷碘。
本发明也包括可用于体内血栓成像的组合物，其中该组合物是由与放射性原子络合的本发明化合物组成的，或者是由与顺磁性原子络合的本发明发明化合物组成的。使用本领域熟知的络合技术得到。
本发明也包括可用于体内血栓成像的诊断组合物，该组合物包含药学上可接受的载体和诊断学上有效量的本发明化合物的组合物。
每剂所需的“诊断学上有效量”的组合物将取决于给药途径，所治疗的类型和所考虑的具体的体格特征。这些因素及其与确定剂量之间的关系是医学诊断领域技术人员所熟知的。而且可以调整诊断学上的有效量和给药方法，使其达到最佳疗效，不过也取决于诸多因素，例如体重，饮食，并行的药物治疗和医学领域技术人员将要考虑的其他因素。在任何方面，用于成像的剂量应当足以检测所针对血栓部位中的成像剂的存在。通常，放射成像要求本发明药物组合物所提供的剂量为约5-20μCi，优选为约10μCi。磁共振成像要求所提供的剂量为约0.001-5mmol/kg，优选为约0.005-0.5mmol/kg与顺磁原子络合的本发明化合物。在两种情况下，本领域已知实际剂量将取决于血栓的位置。
用于体内的“药学上可接受的载体”是药学领域所熟知的。本发明的药物组合物可以用药学上可接受的载体配制成用于注射给药的无菌溶液或悬浮液，适合于在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式，或是乳液。适合的赋形剂例如水，盐水，葡萄糖，甘露糖醇，乳糖，卵磷脂，白蛋白，谷氨酸钠，盐酸半胱氨酸等。可注射的药物组合物还可以含有少量无毒的辅助物质，例如润湿剂，pH缓冲剂等。如果需要的话，可以使用促进吸收的制剂(例如脂质体)。
本发明也涵盖为贮存或给药而制备的诊断组合物，它们另外含有防腐剂，稳定剂和染剂。例如，作为防腐剂可以加入苯甲酸钠，山梨酸和对羟基苯甲酸的酯。另外，可以使用抗氧化剂和悬浮剂。
本发明的体内成像方法也提供了若干优于以前的成像工艺的优点，这些成像工艺用于检测或监测血栓的存在，大小，消退或增加。特别是本发明所提供的化合物，组合物和诊断组合物已经被设计成与凝血酶极为紧密的结合，凝血酶是与血栓相关联的，从而减少由未结合的成像剂产生的循环放射性或顺磁性“背景”。而且，通过冠脉内注射本发明化合物，组合物或诊断组合物而进行的体内成像预期几乎是瞬时的，这是由于这些成像剂会立即饱和与血栓结合的凝血酶。
因此，本发明也包括用于体内血栓成像的方法，该方法包括下列步骤：1，将诊断学上可接受的量的本发明化合物，组合物或诊断组合物给药，和2，检测血管内的血栓。用于监测血栓大小，位置和数量以及血栓溶解或生长的方法。该方法在体内使用化合物，组合物或诊断组合物时，“给药”是通过胃肠外途径实现的，以全身或局部定向的方式均可。实现全身给药的方法是将本发明化合物，组合物或诊断组合物注射到适宜和可用的静脉或动脉内。实现局部定向给药的方法是将本发明化合物，组合物或诊断组合物以接近血流的速度注射到被怀疑在远离注射部位含有血栓的静脉或动脉内。这包括但不限于直接注射到冠状动脉脉管系统内，使冠脉血栓成像，直接注射到颈动脉内，使脑脉管系统中的血栓成像，或者直接注射到足静脉内，使腿部深静脉血栓成像。
本发明组合物向血栓部位的释放方式也在术语“给药”所考虑的范围内。例如，可以将连接有螯合单元的化合物注射到体内，稍后注入放射性原子，从而在血栓部位体内形成包含与放射性原子络合的化合物的组合物。或者，可以将包含与放射性原子络合的化合物的组合物注射到体内。
如前所述，用在本发明方法中的化合物，组合物或诊断组合物的“诊断学上有效的量”将取决于给药途径，所治疗的类型和所治疗的具体体格特征。这些因素及其与确定剂量之间的关系是医学诊断领域技术人员所熟知的。在任何方面，用于体内成像的剂量应当足以检测所针对血栓部位中的成像剂量的存在。通常，放射成像要求本发明药物组合物所提供的剂量为约5-20μCi，优选为约10μCi。磁共振成像要求所提供的剂量为约0.001-5mmol/kg，优选为约0.005-0.5mmol/kg与顺磁原子络合的本发明化合物。在两种情况下，本领域已知实际剂量将取决于血栓的位置。
本发明的新化合物作为有效的抗血小板药物方面的应用，尤其是应用于制备预防或治疗因血小板聚集而引起的冠状动脉综合症，心肌梗塞，心肌缺血，心脑血管病症药物，和治疗血栓形成，局部缺血，中风，再狭窄或炎症的方法，也就是将有效量的本发明化合物给药。
具体实施方式
下列实施例阐述而非限制本发明的方法和组合物。不同条件和参数的其他适当修改和调整也是正常的，对本领域技术人员来说，显然也在本发明的范围之内。
如下概括了制备本发明化合物的合成步骤。
实施例1：8-乙酰基-7-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色满酮
将3mmol 2-氯乙基二甲胺盐酸盐、3mmol 7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、30mmol碳酸钾、0.3mmol碘化钾、50mL干燥丙酮混合。加热回流12h。冷却后抽滤，浓缩滤液，经柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得8-乙酰基-7-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率53％。MS m/z(M)277.32。1HNMR(CDCl3)：δ2.27(6H，s)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例2：8-乙酰基-7-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、2-氯乙基二乙胺盐酸盐反应，得8-乙酰基-7-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率50％。MS m/z(M)305.37。1HNMR(CDCl3)：δ1.00(6H，t)，2.40(4H，m)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例3：8-乙酰基-7-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)吡咯反应，得8-乙酰基-7-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率54％。MS m/z(M)303.35。1HNMR(CDCl3)：δ1.59(4H，m)，2.25(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例4：8-乙酰基-7-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)哌啶反应，得8-乙酰基-7-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率52％。MSm/z(M)317.38。1HNMR(CDCl3)：δ1.50(6H，m)，2.24(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例5：8-乙酰基-7-[2-(4-吗啉基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)吗啉反应，得8-乙酰基-7-[2-(4-吗啉基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率51％。MSm/z(M)319.35。1HNMR(CDCl3)：δ2.37(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，3.67(4H，t)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例6：8-乙酰基-7-(二甲胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰二甲胺反应，得8-乙酰基-7-(二甲胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率61％。MSm/z(M)291.3。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.90(6H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例7：8-乙酰基-7-(二乙胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰二乙胺反应，得8-乙酰基-7-(二乙胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率60％。MSm/z(M)319.35。1HNMR(CDCl3)：δ1.20(6H，t)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.24(4H，m)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例8：8-乙酰基-7-(1-吡咯基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基吡咯反应，得8-乙酰基-7-(1-吡咯基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率54％。MS m/z(M)317.34。1HNMR(CDCl3)：δ1.97(4H，m)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.46(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例9：8-乙酰基-7-(1-哌啶基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基哌啶反应，得8-乙酰基-7-(1-哌啶基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率58％。MS m/z(M)331.36。1HNMR(CDCl3)：δ1.50(6H，m)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.34(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例10：8-乙酰基-7-(4-吗啉基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基吗啉反应，得8-乙酰基-7-(4-吗啉基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率55％。MS m/z(M)333.34。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.47(4H，t)，3.67(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例11：8-乙酰基-7-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰苯胺反应，得8-乙酰基-7-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率53％。MS m/z(M)339.34。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.88(2H，m)，6.52(1H，d)，7.00(1H，m)，7.24(2H，m)，7.64(2H，m)，7.86(1H，d)。
实施例12：8-乙酰基-7-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰苄胺反应，得8-乙酰基-7-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率57％。MS m/z(M)353.37。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.46(2H，s)，4.88(2H，m)，6.52(1H，d)，7.07(3H，m)，7.14(2H，m)，7.86(1H，d)。
实施例13：8-乙酰基-7-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例1方法，由7-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰-2′-氯苯胺反应，得8-乙酰基-7-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率50％。MS m/z(M)373.79。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.88(2H，m)，6.52(1H，d)，6.94(1H，m)，7.12(1H，m)，7.25(1H，m)，7.58(1H，m)，7.86(1H，d)。
实施例14：8-乙酰基-6-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色满酮
将3mmol 2-氯乙基二甲胺盐酸盐、3mmol 6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、30mmol碳酸钾、0.3mmol碘化钾、50mL干燥丙酮混合。加热回流12h。冷却后抽滤，浓缩滤液，经柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得8-乙酰基-6-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率47％。MS m/z(M)277.32。1HNMR(CDCl3)：δ2.27(6H，s)，2.55(3H，s)，2.78(2H，t)，2.97(2H，m)，4.04(2H，t)，4.13(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例15：8-乙酰基-6-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、2-氯乙基二乙胺盐酸盐反应，得8-乙酰基-6-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率43％。MS m/z(M)305.37。1HNMR(CDCl3)：δ1.00(6H，t)，2.40(4H，m)，2.55(3H，s)，2.78(2H，t)，2.97(2H，m)，4.04(2H，t)，4.13(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例16：8-乙酰基-6-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)吡咯反应，得8-乙酰基-6-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率50％。MS m/z(M)303.35。1HNMR(CDCl3)：δ1.59(4H，m)，2.25(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，t)，2.97(2H，m)，4.04(2H，t)，4.13(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例17：8-乙酰基-6-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)哌啶反应，得8-乙酰基-6-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率52％。MS m/z(M)317.38。1HNMR(CDCl3)：δ1.50(6H，m)，2.25(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，t)，2.97(2H，m)，4.04(2H，t)，4.13(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例18：8-乙酰基-6-[2-(4-吗啉基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)吗啉反应，得8-乙酰基-6-[2-(4-吗啉基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率55％。MS m/z(M)319.35。1HNMR(CDCl3)：δ2.37(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，t)，2.97(2H，m)，3.67(4H，t)，4.04(2H，t)，4.13(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例19：8-乙酰基-6-(二甲胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰二甲胺反应，得8-乙酰基-6-(二甲胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率59％。MS m/z(M)291.3。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.90(6H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例20：8-乙酰基-6-(二乙胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰二乙胺反应，得8-乙酰基-6-(二乙胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率54％。MS m/z(M)319.35。1HNMR(CDCl3)：δ1.20(6H，t)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.24(4H，m)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例21：8-乙酰基-6-(1-吡咯基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基吡咯反应，得8-乙酰基-6-(1-吡咯基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率53％。MS m/z(M)317.34。1HNMR(CDCl3)：δ1.97(4H，m)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.46(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例22：8-乙酰基-6-(1-哌啶基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基哌啶反应，得8-乙酰基-6-(1-哌啶基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率58％。MS m/z(M)331.36。1NMR(CDCl3)：1.50(6H，m)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.34(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例23：8-乙酰基-6-(4-吗啉基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基吗啉反应，得8-乙酰基-6-(4-吗啉基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率62％。MS m/z(M)333.34。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.47(4H，t)，3.67(4H，t)，4.83(2H，s)，4.13(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例24：8-乙酰基-6-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰苯胺反应，得8-乙酰基-6-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率56％。MS m/z(M)339.34。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.88(2H，m)，7.00(1H，m)，7.24(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)7.64(2H，m)。
实施例25：8-乙酰基-6-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰苄胺反应，得8-乙酰基-6-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率66％。MS m/z(M)353.37。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.46(2H，s)，4.88(2H，m)，7.07(3H，m)，7.14(2H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)。
实施例26：8-乙酰基-6-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例14方法，由6-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰-2′-氯苯胺反应，得8-乙酰基-6-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率52％。MS m/z(M)373.79。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.88(2H，m)，6.94(1H，m)，7.12(1H，m)，7.25(1H，m)，7.44(1H，s)，7.48(1H，s)，7.58(1H，m)。
实施例27：8-乙酰基-5-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色满酮
将3mmol 2-氯乙基二甲胺盐酸盐、3mmol 5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、30mmol碳酸钾、0.3mmol碘化钾、50mL干燥丙酮混合。加热回流12h。冷却后抽滤，浓缩滤液，经柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得8-乙酰基-5-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率49％。MS m/z(M)277.32。1HNMR(CDCl3)：δ2.27(6H，s)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.82(1H，d)。
实施例28：8-乙酰基-5-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、2-氯乙基二乙胺盐酸盐反应，得8-乙酰基-5-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率48％。MS m/z(M)305.37。1HNMR(CDCl3)：δ1.00(6H，t)，2.40(4H，m)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例29：8-乙酰基-5-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)吡咯反应，得8-乙酰基-5-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率55％。MS m/z(M)303.35。1HNMR(CDCl3)：δ1.59(4H，m)，2.25(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例30：8-乙酰基-5-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)哌啶反应，得8-乙酰基-5-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率53％。MS m/z(M)317.38。1HNMR(CDCl3)：δ1.50(6H，m)，2.24(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例31：8-乙酰基-5-[2-(4-吗啉基)乙氧基]-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-(2-氯乙基)吗啉反应，得8-乙酰基-5-[2-(4-吗啉基)乙氧基]-4-色满酮白色固体，收率58％。MSm/z(M)319.35。1HNMR(CDCl3)：δ2.37(4H，t)，2.55(3H，s)，2.78(2H，m)，2.97(2H，m)，3.67(4H，t)，4.04(2H，m)，4.13(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例32：8-乙酰基-5-(二甲胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰二甲胺反应，得8-乙酰基-5-(二甲胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率60％。MS m/z(M)291.3。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.90(6H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例33：8-乙酰基-5-(二乙胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰二乙胺反应，得8-乙酰基-5-(二乙胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率62％。MS m/z(M)319.35。1HNMR(CDCl3)：δ1.20(6H，t)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.24(4H，m)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例34：8-乙酰基-5-(1-吡咯基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基吡咯反应，得8-乙酰基-5-(1-吡咯基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率59％。MS m/z(M)317.34。1HNMR(CDCl3)：δ1.97(4H，m)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.46(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例35：8-乙酰基-5-(1-哌啶基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基哌啶反应，得8-乙酰基-5-(1-哌啶基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率63％。MS m/z(M)331.36。1NMR(CDCl3)：1.50(6H，m)，2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.34(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例36：8-乙酰基-5-(4-吗啉基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、N-氯乙酰基吗啉反应，得8-乙酰基-5-(4-吗啉基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率65％。MS m/z(M)333.34。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，3.47(4H，t)，3.67(4H，t)，4.13(2H，s)，4.83(2H，m)，6.52(1H，d)，7.86(1H，d)。
实施例37：8-乙酰基-5-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰苯胺反应，得8-乙酰基-5-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率55％。MS m/z(M)339.34。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.88(2H，m)，6.52(1H，d)，7.00(1H，m)，7.24(2H，m)，7.64(2H，m)，7.86(1H，d)。
实施例38：8-乙酰基-5-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰苄胺反应，得8-乙酰基-5-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率59％。MS m/z(M)353.37。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.46(2H，s)，4.88(2H，m)，6.52(1H，d)，7.07(3H，m)，7.14(2H，m)，7.86(1H，d)。
实施例39：8-乙酰基-5-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮
按照实施例27方法，由5-羟基-8-乙酰基-4-色满酮、氯乙酰-2′-氯苯胺反应，得8-乙酰基-5-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮白色固体，收率57％。MS m/z(M)373.79。1HNMR(CDCl3)：δ2.55(3H，s)，2.97(2H，m)，4.13(2H，s)，4.88(2H，m)，6.52(1H，d)，6.94(1H，m)，7.12(1H，m)，7.25(1H，m)，7.58(1H，m)，7.86(1H，d)。
实施例40：片剂
组分 质量(mg/片)
活性组分 2.5-1000
微晶纤维素 200-650
二氧化硅 10-650
硬脂酸 5-15
将活性组分等量递加地与微晶纤维素混匀，再加入二氧化硅和硬脂酸，混匀，直接压片。
实施例41：片剂
组分 质量(mg/片)
活性组分 25-1000
淀粉 45
微晶纤维素 35
聚乙烯吡咯烷酮(为10％水溶液) 4
羧甲基纤维素钠 4.5
硬脂酸镁 0.5
滑石 1
将活性组分，淀粉和纤维素通过45目U.S.筛并充分混合，将所得粉末与聚乙烯吡咯烷酮混合，然后通过14目U.S.筛，将这样得到的颗粒在50-60℃干燥并通过18目U.S.筛。将羧甲基纤维素钠，硬脂酸镁和滑石，先通过60目U.S.筛，然后加入至上述颗粒中，混合后，在压片机上压制成片剂。
实施例42：悬浮剂
组分 质量(mg/5mL)
活性组分 0.1-1000mg
羧甲基纤维素钠 50mg
糖浆 1.25mg
苯甲酸溶液 0.1mL
矫味剂 适量
着色剂 适量
加纯水至 5mL
将药物通过45目U.S.筛并与羧甲基纤维素钠及糖浆混合以形成均匀糊状物，将苯甲酸溶液，矫味剂，和着色剂用一些水稀释，并边搅拌边加入，然后加入足够量水以达到所需的体积。
实施例43：气溶胶
组分 质量(重量％)
活性组分 0.25
乙醇 25.75
抛射剂22(氯二氟甲烷) 70
将活性成分与乙醇混合，并将所得混合物加入至部分的抛射剂22中，冷却30℃，并转移至容器中。然后将所需量加入至不锈钢容器中并用剩余喷射剂稀释，然后安装阀门装置。
实施例44：栓剂
组分 质量(mg/栓剂)
活性组分 250
饱和脂肪酸甘油酯类 2000
将活性组分通过60目U.S.筛并将其悬浮于预先熔化的饱和脂肪酸甘油酯类化合物中，然后将混合物倾入至标准的2g腔栓剂模中并冷却。
实施例45：可注射制剂
组分 质量
活性成分 50mg
等渗盐溶液 1000mL
将以上溶液静脉内注射给药至患者，速度约1mL每分钟。
实施例46：生物活性实验——纯化酶的体外抑制作用
试剂：所有缓冲盐从Sigma公司获得，为最高纯度。酶解物是N苯甲酰-Phe-Val-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma B7632)，盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺(Sigma B2291)，N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺(Sigma T6140)，N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基N-酰苯胺(Sigma S7388)和N-CBZ-Val-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺(SigmaC7271)，购自Sigma。N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺(BACHEML-1720)和N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-对硝基N-酰苯胺(BACHEM L-1770)购自BACHEM。
人α-凝血酶，人Xa因子和人纤溶酶购自Enzyme ResearchLaboratories(South Bend，Indiana)。
Ki测定：全部测定都是以供试化合物抑制酶催化的肽对硝基N-酰苯胺酶解物的水解作用的能力为基础的。在典型的Ki测定中，酶解物是在DMSO中制备的，并稀释在测定缓冲液中，后者由50mM HEPES，200mM NaCl组成，pH7.5。每种酶解物的最终浓度列在下面。一般说来，酶解物的浓度低于用实验方法测定的Km值。将供试化合物制成1.0mg/ml的DMSO溶液。制备3种最终浓度的DMSO稀释液，浓度跨度达200倍。在测定缓冲液中制备酶溶液，浓度如下。
在典型的Ki测定中，向96孔板的每孔中吸移280mL酶解物溶液，10mL供试化合物溶液，将板在37度分子装置板读数器中热平衡超过15分钟。加入10mL等分试样的酶引发反应，在405nm下记录15分钟内的吸光度增加值。对应于不到10％总酶解物水解的数据用于计算。不含供试化合物的样本速度比率(吸光度的变化速率，为时间的函数)除以含有供试化合物的样本速度，以供试化合物尝试的函数作图。对数据进行线性回归处理，计算直线的斜率值。斜率的倒数是用实验方法测定的Ki值。
凝血酶：评价凝血酶活性的标准是水解酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为32Mm(32mM远小于Km 180mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的人α-凝血酶在测定缓冲液中稀释至浓度为15nM。最终的试剂浓度是：(凝血酶)＝0.5nM，(酶解物N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Arg-对硝基N-酰苯胺)＝32mM。
X因子(FXa)：评价FXa活性的标准是水解酶解物盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为51Mm(远小于Km＝1.3mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的活化的X因子在测定缓冲液中稀释至浓度为300nM。最终的试剂浓度是：(FXa)＝10nM，(盐酸N-苯甲酰-Ile-Glu-Gly-Arg-对硝基N-酰苯胺)＝51nM。
纤溶酶：评价纤溶酶活性的标准是水解N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺的能力。在测定缓冲液中制备酶解物溶液，浓度为37mM(远小于Km＝243mM)。最终的DMSO浓度是4.3％。将纯化的人纤溶酶在测定缓冲液中稀释至浓度为240nM。最终的试剂浓度是：(纤溶酶)＝8nM，(N-对甲苯磺酰-Gly-Pro-Lys-对硝基N-酰苯胺)＝37mM。
结果表明，本发明化合物是凝血酶的有效抑制剂。部分样品抑制率列表如下：
实施例47：大鼠体内血小板聚集抑制作用
药品及制剂：本发明化合物，以0.5％CMC配成混悬液供动物给药用；二磷酸腺苷(ADP)(Sigma)。
仪器：PK121R型离心机，SPA-3型PPP血小板聚集仪。
试验方法：雄性Wistar大鼠，体重300克左右，经口灌胃给予硫酸氯吡格雷及本发明化合物，剂量均为10mg/kg，给药体积为10mL/kg，2小时后，乙醚麻醉，腹主动脉采血，3.8％枸橼酸钠抗凝，全血与抗凝剂之比为9∶1，1000rpm离心7分钟，制备富血小板血浆(PPP)。以PPP调PRP，使其血小板计数保持在2X106个/mL。取PRP加入测试杯，37度温孵10分钟。以PRP调零，PPP调100％，以ADP(终浓度为5μM)为诱导剂，按Borns比浊法用SPA-3型PPP血小板聚集仪测定血小板聚集百分数，以t-检验进行统计学比较。
体外ADP，胶原和凝血酶诱导的血小板聚集的抑制实验
血小板分离：从接到通知的健康志愿者获得人血。在1/6体积的ACD中收集血液(2.5g柠檬酸钠，1.5g柠檬酸和2.5g葡萄糖的100mL dH2O)。室温下800xg离心15分钟，去除富含血小板的血浆，在1mM乙酰水杨酸存在下37度保温60分钟，并在室温下1000xg离心10分钟。将血小板沉淀以2X108细胞/mL的密度用HEPES-缓冲的Tyrodes溶液(137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM MgCl2，3mM NaH2PO4，5mM葡萄糖，10mM HEPESPh7.4，0.2％牛血清清蛋白和0.05U/mL三磷酸腺苷双磷酸酶)重悬浮。
聚集研究：通过测量37度下光集合度计中0.5mL搅拌的(900rpm)阿司匹林处理的洗涤血小板，测定ADP诱导的血小板聚集。用0.5mL Hepes缓冲的Tyrode缓冲液设定仪器基线。在聚集测定前，用2mM CaCl2和1mg/mL纤维蛋白原补充血小板悬浮液。加入指定浓度的ADP或其它激动剂，引发血小板聚集，连续记录至少8分钟的光透射。当测试血小板聚集的抑制剂时，在指定浓度的抑制剂中保温血小板3-6分钟，然后加入ADP或其它激动剂，连续记录至少8分钟的反应。将数据拟合到四参数对数等式，从两种聚集速率和各测定的最大聚集程度计算血小板聚集的激动剂和抑制剂的能力。
结果可知，本发明的化合物能显著抑制ADP，胶原或凝血酶诱导的血小板聚集。因此，它们可以用来预防或治疗因血小板聚集而引起的冠状动脉综合症，心肌梗塞，心肌缺血等心脑血管疾病。部分样品抑制IC50列表如下：
实施例48：对血小板粘附性的影响(胶原粘附法)
将25只家兔随机均分为5组，设空白对照组，本发明化合物的3个剂量组及盐酸噻氯匹定104mg/kg组。受试动物按上述剂量ig给药每天1次，连续3天，于末次给药后1.5小时，常规在耳缘静脉取血，制备PRP，PPP及酸溶性胶原，在血小板聚集仪测定硅化比浊管内加入胶原前(胶原终浓度为0.05mg/mL)后血小板数(以PPP调节PRP使血小板数为100,000-500,000/μL)，以血小板粘附率为观察指标，各给药组与对照组进行组间比较，t检验。
试验结果表明，本发明化合物在所选择剂量范围内对家兔体外血小板粘附性有明显抑制作用。部分样品血小板粘附率列表如下：
实施例49：在血栓性疾病中的应用
应用本发明化合物进行抗血栓作用实验，证实其在血栓性疾病的防治中有良好的作用，与肝素相比，其应用剂量小，效果更为明显。
(1)抑制静脉血栓形成
结扎大鼠下腔静脉诱发静脉血栓形成。模型形成2小时后静脉注射给药。阴性对照组给予生理盐水，阳性对照组给予肝素200-400μg/kg，治疗组给予本发明化合物10-200μg/kg。给药4小时后取出血栓，称重。结果显示本发明化合物可明显抑制静脉血栓的形成，与肝素相比所需剂量更低。
(2)抑制动脉血栓形成
用气囊导管损伤家兔股动脉内皮细胞，并结扎损伤部位的血管，使局部血流阻滞而诱发动脉血栓的形成。阴性对照组给予生理盐水，阳性对照组给予肝素200-1000μg/kg，治疗组给予本发明化合物10-200μg/kg。实验结果表明，本发明化合物可使动脉血栓形成率下降，并呈剂量相关性。
(3)防治弥散性血管内凝血(DIC)
给家兔注射内毒素诱发DIC形成。静脉注射本发明化合物可使血小板计数降低，与对照组(生理盐水)相比，具有显著统计学差异。
(4)冠状动脉成形术(PTCA)后再栓塞的防治
损伤狗的左冠状动脉前降支内皮细胞，诱发阻塞性冠脉血栓形成。应用本发明化合物作为链激酶的附加用药，能促进冠脉再通，抑制再栓塞，减少残余血栓的重量，并呈剂量依赖性。与肝素相比，其再通率高，发生再通的时间较短，再灌注的持续时间较长，且残留的血栓重量较轻。
(5)小鼠肺血栓形成试验
将100只小鼠随机均分5组，设空白对照组，本发明化合物的3个剂量组及盐酸噻氯匹定100mg/kg组。灌胃给药，每天1次，连续3天，于末次给药后1.5小时，将小鼠尾静脉注射胶原和肾上腺素强复合诱导剂5.0mL/kg(胶原2.5mg/kg+肾上腺素2mg/kg)，注射速度为0.1mL/5秒，观察小鼠3分钟内死亡情况，以每组死亡动物数及保护率为观察指标。试验结果经X2检验，表明在选择剂量范围内本发明化合物对胶原和肾上腺素诱导小鼠肺血栓致死呈明显保护作用。
Claims (9)
1.由下列通式表示的芳环上取代8-乙酰基-4-色满酮类化合物或药用盐，
其中X选自CH2或者C=O；
当X为CH2时，R1,R2独立的选自氢，甲基或乙基，或R1，R2与它们相连的氮原子一起组成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，吗啉基；
当X为C=O时，R1,R2独立的选自氢，一至四个碳原子的烷基基团或R1，R2与它们相连的氮原子一起组成吡咯烷基，甲基吡咯烷基，二甲基吡咯烷基，哌啶基，吗啉基。
2.8-乙酰基-4-色满酮类化合物，选自：
8-乙酰基-7-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-7-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-7-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-6-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-6-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-6-[(2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-5-(苯基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-5-(苄基胺基)甲酰甲氧基-4-色满酮
8-乙酰基-5-[ (2-氯)苯基胺基]甲酰甲氧基-4-色满酮。
3.一种药物组合物，其中含有权利要求1或2所述的化合物以及药学可接受载体。
4.权利要求1或2所述的化合物在制备预防或治疗与血小板聚集有关的疾病的药物中的应用。
5.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于：以有效量的该结构式的化合物接触血小板来抑制血小板聚集。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的与血小板聚集有关的疾病包括血栓，动脉硬化。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的血栓包括动脉硬化疾病的原发性动脉血栓并发症，动脉粥样硬化疾病干预的血栓并发症，手术或机械损伤的血栓并发症，血管损伤和炎症继发性的血栓，静脉血栓，冠状动脉血栓，与溶栓治疗有关的血栓并发症，与冠状和其它血管成形术有关的血栓并发症，或与冠状动脉分流术有关的血栓并发症。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的血栓是不稳定性心绞痛、冠状动脉血管成形术或心肌梗塞所引起；所述动脉硬化疾病的原发性动脉血栓并发症是血栓性中风、周围血管疾病或没有血栓溶解的心肌梗塞；所述动脉粥样硬化疾病干预的血栓并发症是血管成形术、动脉内膜切除术、支架旋转、冠状或其它血管移植手术所引起；所述手术或机械损伤的血栓并发症是手术或偶然创伤后的组织补救所引起；所述血管损伤和炎症继发性的血栓是血管炎、动脉炎、肾小球肾炎或器官移植排斥所引起；所述静脉血栓是深静脉血栓、静脉栓塞疾病或偏头痛所引起；所述冠状动脉血栓是由不稳定性心绞痛、冠状动脉血管成形术或急性心肌梗塞所引起。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述动脉硬化是指动脉粥样硬化、不稳定性心绞痛、短暂性局部缺血发作或中风、周围血管疾病、栓塞、或血管成形术、颈动脉内膜切除术或血管移植吻合术后的再狭窄或突然闭合。
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