CN103613503A - 咖啡酸苯乙酯类似物及其制备和应用 - Google Patents

咖啡酸苯乙酯类似物及其制备和应用 Download PDF

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CN103613503A CN201310642332.5A CN201310642332A CN103613503A CN 103613503 A CN103613503 A CN 103613503A CN 201310642332 A CN201310642332 A CN 201310642332A CN 103613503 A CN103613503 A CN 103613503A
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Abstract

一种医药技术领域的咖啡酸苯乙酯类似物及其制备和应用，其化学结构为：
Figure DDA0000428943620000011
本方法简单易行，且收率较高，适合大规模工业化生产；所得咖啡酸苯乙酯类似物具有更强的生物活性和更低的有效浓度，尤其是化合物咖啡酸氯苯乙醇酯，具有开发成为预防和治疗神经退行性疾病类药物的前景。

Description

咖啡酸苯乙酯类似物及其制备和应用
技术领域
本发明涉及的是一种医药技术领域的方法及化合物，具体是一种咖啡酸苯乙酯类似物及其制备和应用。
背景技术
神经退行性疾病是一种渐进性地影响神经系统（尤其是脑部）功能的疾病。该疾病是由神经元或其髓鞘的退行及丧失所致，随着时间的推移而恶化，导致功能障碍，且经常是不可逆的。受该疾病影响，患者会出现不同程度的记忆力、感知能力、语言能力、判断力和运动能力等受损症状。常见的神经退行性疾病包括帕金森病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏舞蹈病等。随着全世界人口老龄化的到来，神经退行性疾病的发病率逐年增高，已经成为威胁老年人健康的严重疾病。
近年来，人们对神经退行性疾病的发病机理和治疗方法都有了新的认识。研究表明，自由基和氧化应激反应造成的神经元损伤是神经退行性疾病的重要发病机制之一（赵保路，自由基、天然抗氧化剂与神经退行性疾病，《生物物理学报》，2010，第26卷，第4期，263-274）。因此，从抗氧化活性成分中筛选潜在的治疗神经退行性疾病药物具有广阔的开发前景。此外，研究证明神经生长因子（NGF）可有效阻止或减少神经元的退变，这使得NGF一度成为最具治疗前景的退行性疾病药物（李义召等，神经生长因子与神经系统疾病，《国外医学神经病学神经外科学分册》，1993，第20卷，第6期，297-300）。但是NGF由于分子量大和极性强的原因无法通过血脑屏障，并且难以大规模制备，极大地限制了它的临床应用。因此，寻找具有类似NGF活性且能透过血脑屏障的小分子化合物成为寻找治疗神经退行性疾病的新热点。
目前，神经退行性疾病的治疗仍以化学药物为主，如他克林、酒石酸卡巴拉汀、石杉碱甲、左旋多巴和苯海索等，然而，尚未有任何药物对神经退行性疾病的防治有效，且不良反应明显。近年来，从天然界中分离得到一些小分子化合物显示出良好的促进神经细胞生长的活性，极具开发潜力。
咖啡酸苯乙酯（CAPE）是蜂胶中的一种活性成分，具有多种生物活性，如：抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节等。研究表明咖啡酸苯乙酯对丙烯醛所致HT22小鼠海马细胞的氧化应激损伤具有保护作用（Huang,Y.J.等，Protective effects of caffeic acid and caffeic acidphenethyl ester against acrolein-induced neurotoxicity in HT22mouse hippocampal cells.Neuroscience Letters2013,535,146-151），对6-羟基多巴胺所致的大鼠多巴胺能神经细胞损伤也具有保护作用（Silva,R.B.等，Caffeic acid phenethyl ester protects against the dopaminergicneuronal loss induced by6-hydroxydopamine in rats.Neuroscience2013,233,86-94）。中国专利文献号CN101993376A中也公开了咖啡酸对硝基苯乙酯化合物及其对白细胞减少有治疗作用，但咖啡酸对硝基苯乙酯本身对于神经退行性疾病未见报道。
因此，以咖啡酸苯乙酯作为先导化合物，设计并合成一系列咖啡酸苯乙酯类似物，并从中寻找具有潜在的更强活性、更低毒性的化合物，并应用于预防和治疗神经退行性疾病，将具有重要的现实意义。
发明内容
[0001]本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种咖啡酸苯乙酯类似物及其制备和应用，制备方法简单易行，且收率较高，适合大规模工业化生产；所得咖啡酸苯乙酯类似物具有更强的生物活性和更低的有效浓度，尤其是化合物咖啡酸氯苯乙醇酯，具有开发成为预防和治疗神经退行性疾病类药物的前景。
[0002]本发明是通过以下技术方案实现的：
[0003]本发明涉及一种咖啡酸苯乙醇酯类化合物，其化学结构如下：
[0004]
Figure BDA0000428943600000021
[0005]其中：R1、R2、R3中任意两个为氢，另外一个为氯、溴或胺基中的一种。
[0006]本发明涉及上述化合物的制备方法，其中：R1、R2、R3中任意两个为氢，另外一个为氟、氯或溴，该方法通过将咖啡酸、缩合剂、缩合活化剂以及有机溶剂混合后加入相应的苯乙醇原料，在氮气氛下充分反应后，将产物中性洗涤提纯即得。
所述的缩合剂采用N,N′-二环己基碳二亚胺、N,N′-二异丙基碳二亚胺或1-（3-二甲胺基丙基）-3乙基碳二亚胺。
所述的缩合活化剂采用4-N,N-二甲基吡啶或1-羟基苯并三氮唑。
所述的有机溶剂采用1,2-二氯乙烷、三氯甲烷、苯或甲苯。
所述的中性洗涤是指：将反应液依次经过稀盐酸、水、碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗。
所述的提纯是指：依次采用无水硫酸钠干燥、浓缩得到粗品，然后将粗品经柱层析、重结晶。
本发明涉及一种咖啡酸胺基苯乙醇酯，其化学结构如下：
Figure BDA0000428943600000031
其中：R1、R2、R3中任意两个为氢，另外一个为胺基。
本发明涉及一种咖啡酸胺基苯乙醇酯的制备方法，通过将咖啡酸硝基苯乙醇酯和氯化亚锡溶于乙醇中充分反应后冷却至室温，并进一步加入饱和Na2CO3溶液并以乙酸乙酯萃取浓缩得到粗品，最后经柱层析即得。
所述的咖啡酸胺基苯乙醇酯是指：咖啡酸2-胺基苯乙醇酯、咖啡酸3-胺基苯乙醇酯以及咖啡酸4-胺基苯乙醇酯。
本发明涉及上述的咖啡酸苯乙醇酯类化合物的应用，将其用于制备预防和治疗神经退行性疾病的单体药物或组合药物。
本发明的有益之处在于：提供了一类咖啡酸苯乙醇酯衍生物，并用生物活性实验揭示了该类化合物具有强效保护神经细胞免受氧化应激损伤，促进神经元细胞轴突生长的活性，从而可预期其发展成为新型预防和治疗神经退行性疾病药物的制药用途，具有潜在的巨大社会效益和经济效益。
附图说明
图1为实施例1-7中的咖啡酸苯乙醇酯类化合物对PC12细胞存活率的影响示意图。
图2为加入咖啡酸苯乙醇酯类化合物经72小时培养后PC12细胞神经突触平均长度比较示意图。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
咖啡酸2-溴苯乙醇酯的制备
本实施例具体包括以下步骤：向25mL两颈瓶中分别加入咖啡酸200mg（MW=180）、N,N′-二环己基碳二亚胺458mg、4-N,N-二甲基吡啶407mg以及无水1,2-二氯乙烷10mL。搅拌10分钟后加入2-溴苯乙醇223mg，在氮气氛下继续搅拌15小时。反应液依次经过稀盐酸、水、碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗、无水硫酸钠干燥、浓缩得到粗品。粗品经柱层析、重结晶后得目标产物14mg，收率3.5%。
本实施例制备得到的产物结构式为：
Figure BDA0000428943600000041
检测数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(1H,s),9.14(1H,s),7.61(1H,dd,J=7.6,0.8Hz,H-3′),7.46(1H,d,J=16.0Hz,H-β),7.41(1H,dd,J=7.6,1.6Hz,H-6′),7.34(1H,dt,J=7.6,0.8Hz,H-5′),7.11(1H,dt,J=7.6,1.6Hz,H-4′),7.04(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.98(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6),6.76(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.22(1H,d,J=16.0Hz,H-α),4.34(2H,t,J=6.8Hz,H-α′),3.09(2H,t,J=6.8Hz,H-β′);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.4,148.5,145.6,145.3,137.2,132.6,131.4,128.8,127.9,125.4,124.0,121.4,115.7,114.8,113.7,62.7,34.7;HRESIMS[M-H]-m/z361.0073(Calcd.for C17H14O4Br,361.0075)。
实施例2
咖啡酸3-溴苯乙醇酯的制备
本实施例制备方法同实施例1，得目标产物22mg，收率5.5%。
本实施例制备得到的产物结构式为：
Figure BDA0000428943600000042
检测数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.50(1H,s),9.09(1H,s),7.52(1H,m,H-2′),7.44(1H,d,J=16.0Hz,H-β),7.42(1H,m,H-6′),7.28(2H,m,H-4′,5′),7.03(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.98(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6),6.75(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.22(1H,d,J=16.0Hz,H-α),4.32(2H,t,J=6.8Hz,H-α′),2.95(2H,t,J=6.8Hz,H-β′);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.4,148.5,145.6,145.3,141.1,131.7,130.5,129.3,128.1,125.4,121.6,121.4,115.7,114.8,113.7,63.9,34.0;HRESIMS[M-H]-m/z361.0079(Calcd.for C17H14O4Br,361.0075)。
实施例3
咖啡酸4-溴苯乙醇酯的制备
本实施例制备方法同实施例1，得目标产物40mg，收率9.9%。
本实施例制备得到的产物结构式为：
Figure BDA0000428943600000051
检测数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.55(1H,s),9.12(1H,s),7.70(2H,d,J=8.4Hz,H-3′,5′),7.48(2H,d,J=8.4Hz,H-2′,6′),7.44(1H,d,J=16.0Hz,H-β),7.05(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.96(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6),6.76(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.22(1H,d,J=16.0Hz,H-α),4.30(2H,t,J=6.8Hz,H-α′),2.85(2H,t,J=6.8Hz,H-β′);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.4,148.6,145.6,145.4,137.8,131.8,130.9,125.5,121.4,120.5,115.8,114.8,113.7,63.7,34.2;HRESIMS[M-H]-m/z361.0079(Calcd.for C17H14O4Br,361.0075)。
实施例4
咖啡酸4-氟苯乙醇酯的制备
本实施例制备方法同实施例1，得目标产物72mg，收率21.5%。
本实施例制备得到的产物结构式为：
检测数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.58(1H,s),9.11(1H,s),7.44(1H,d,J=16.0Hz,H-β),7.40(2H,d,J=8.4Hz,H-3′,5′),7.06(2H,d,J=8.4Hz,H-2′,6′),7.03(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.98(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6),6.75(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.22(1H,d,J=16.0Hz,H-α),4.30(2H,t,J=6.8Hz,H-α′),2.85(2H,t,J=6.8Hz,H-β′);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.4,163.3,161.0,148.5,145.6,145.3,134.2,134.1,130.5,130.4,125.4,121.4,115.7,115.5,115.3,114.8,63.9,34.5;HRESIMS[M-H]-m/z301.0872(Calcd.for C17H14O4F,301.0876)。
实施例5
咖啡酸4-氯苯乙醇酯的制备
本实施例制备方法同实施例1，得目标产物65mg，收率18.4%。
本实施例制备得到的产物结构式为：
检测数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.56(1H,s),9.10(1H,s),7.44(1H,d,J=16.0Hz,H-β),7.30(2H,d,J=8.4Hz,H-3′,5′),7.20(2H,d,J=8.4Hz,H-2′,6′),7.02(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.95(1H,dd,J=8.0,2.0Hz,H-6),6.74(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.22(1H,d,J=16.0Hz,H-α),4.30(2H,t,J=6.8Hz,H-α′),2.85(2H,t,J=6.8Hz,H-β′);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.5,148.5,145.7,145.3,137.5,132.2,130.6,128.7,125.3,121.4,115.7,114.8,113.7,63.8,34.5;HRESIMS[M-H]-m/z317.0575(Calcd.for C17H14O4Cl,317.0581)。
实施例6
咖啡酸硝基苯乙醇酯的制备
本实施例具体包括以下步骤：
1）将4-硝基苯乙酸6.7g溶于80mL无水甲醇中，搅拌下缓慢滴加二氯亚砜5mL。反应混合物升温至回流，并继续搅拌2小时。减压去除溶剂及过剩的二氯亚砜得粗品，粗品经柱层析得4-硝基苯乙酸甲酯6.4g，收率88.2%。冰浴下，将4-硝基苯乙酸甲酯6.3g溶于250mL无水四氢呋喃中，分批加入四氢铝锂6.6g，反应混合物升温至回流并继续搅拌3小时。反应液冰浴冷却，缓慢加入5%盐酸150mL，并以乙酸乙酯萃取。萃取液经干燥、浓缩后得粗品，粗品经柱层析后得4-硝基苯乙醇4.8g，收率90%。
2）将4-硝基苯乙醇4.6g溶于100mL1,4-二氧六环，加入米氏酸5.7g，反应混合物升温至回流并继续搅拌6小时。减压去除溶剂得粗品，粗品经柱层析后得丙二酸单酯中间体5.1g，收率71.1%。
3）将丙二酸单酯中间体1.2g溶于5mL吡啶，分别加入3,4-二羟基苯甲醛1g，哌啶0.5mL，反应混合物室温下搅拌15小时。减压蒸馏，将残留物溶于50mL乙酸乙酯，分别以5%稀盐酸、水、饱和食盐水洗，浓缩得粗品，粗品经柱层析、重结晶后得目标产物648mg，收率41%。
本实施例制备得到的产物结构式为：
Figure BDA0000428943600000071
检测数据如下：
δ9.55(1H,s),9.11(1H,s),8.17(2H,d,J=8.8Hz,H-3′,5′),7.58(2H,d,J=8.8Hz,H-2′,6′),7.44(1H,d,J=16.0Hz,H-β),7.03(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.98(1H,dd,J=2.0,8.0Hz,H-6),6.76(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.21(1H,d,J=16.0Hz,H-α),4.39(2H,t,J=6.4Hz,H-α′),3.11(2H,t,J=6.4Hz,H-β′);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ166.4,148.5,146.7,146.3,145.6,145.4,130.2,125.4,123.4,121.4,115.7,114.9,113.6,63.5,34.2;HRESIMS[M-H]-m/z328.0823(Calcd.forC17H14NO6,328.0821)。
所述的4-硝基苯乙醇如替换为2-硝基苯乙醇或3-硝基苯乙醇，采用相同的方式能够得到相应的咖啡酸2-硝基苯乙醇酯和咖啡酸3-硝基苯乙醇酯。
实施例7
咖啡酸胺基苯乙醇酯的制备
本实施例具体包括以下步骤：将咖啡酸4-硝基苯乙醇酯60mg、氯化亚锡123mg，溶于5mL乙醇中，加热回流反应10小时。反应液冷却至室温后，加入10mL饱和Na2CO3溶液，再以乙酸乙酯萃取，浓缩得到粗品，粗品经柱层析得目标产物34mg，收率62.4%。
本实施例制备得到的产物结构式为：
Figure BDA0000428943600000072
检测数据如下：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(1H,s),9.12(1H,s),7.45(1H,d,J=16.0Hz,H-β),7.04(1H,d,J=2.0Hz,H-2),6.99(1H,dd,J=2.0,8.0Hz,H-6),6.91(2H,d,J=8.4Hz,H-3′,5′),6.76(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.50(2H,d,J=8.4Hz,H-2′,6′),6.23(1H,d,J=16.0Hz,H-α),4.20(2H,t,J=7.2Hz,H-α′),2.75(2H,t,J=7.2Hz,H-β′);13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ167.0,148.9,147.5,146.0,145.5,129.7,126.0,125.1,121.8,116.2,115.3,114.5,65.4,34.3;HRESIMS[M-H]-m/z298.1075(Calcd.for C17H16NO4,298.1079)。
所述的咖啡酸4-硝基苯乙醇酯如替换为咖啡酸2-硝基苯乙醇酯或咖啡酸3-硝基苯乙醇酯，采用相同的方式能够得到相应的咖啡酸2-胺基苯乙醇酯和咖啡酸3-胺基苯乙醇酯。
上述的7个实施例得到的化合物结构稳定，其制备方法简单易行，且收率较高，适合大规模工业化生产，为了进一步验证这些化合物与现有技术相比取得的有益效果，我们进行了以下的药理试验，详述如下：
测试例1
化合物对双氧水H2O2所致PC12细胞损伤的保护作用活性实验
1.实验材料与样品
1）双氧水（hydrogen peroxide,H2O2）购自国药集团，噻唑蓝（(3-(4,5-dimethylthiazol),2,5-diphenyltetrazolium bromide)，MTT）购自Sigma公司，胎牛血清购自Gibco公司，DMEM培养基和PBS溶液购自Hyclone公司，DMSO购自Applichem公司；
2）化合物由上述实施例1-7的方法一一合成，经HPLC检测纯度均大于98%，使用前均配成适宜浓度备用。
2.细胞株：大鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞，由中科院上海细胞所提供。
3.细胞培养：
PC12细胞用含有10%胎牛血清，1%谷氨酰胺DMEM培养基培养，于37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育，常规方法传代培养。
4.实验方法：
细胞以每孔5×104的密度接种到96孔板中，置于5%CO2培养箱于37℃培养24小时，更换培养基，分别将各化合物溶液（终浓度均为4nM）加入到各孔中。作用6小时后加入新配制的H2O2（终浓度为200μM）作用48小时，弃去培养液，每孔加入20μL MTT溶液（终浓度为5mg/mL），4小时后，加入150μL DMSO溶解甲瓒，于570nm处读数。对检测数据进行统计分析，以确定样品对双氧水H2O2所致PC12细胞损伤的保护作用以及和CAPE（咖啡酸苯乙酯）的比较结果。
5.实验结果
如图1所示，为咖啡酸苯乙醇酯类化合物对PC12细胞存活率的影响。其中：数据皆以均数±标准差表示（n=3）；（*）代表p<0.05，即与H2O2组相比具有显著性差异；（**）代表p<0.01，即与H2O2组相比具有极显著性差异；（#）代表p<0.05，即与CAPE组相比具有显著性差异；（##）代表p<0.01，即与CAPE组相比具有极显著性差异。
由图1可见，实施例1，2，3，4，5和7制备得到的化合物具有很强的对抗自由基引起的PC12细胞损伤作用，即对PC12细胞具有很强的保护作用，其活性显著强于CAPE；实施例6制备得到的化合物具有较强的对抗自由基引起的PC12细胞损伤作用，即对PC12细胞具有较强的保护作用，其活性与CAPE相当，表明本发明中的化合物具有明显的神经细胞保护活性。
测试例2
化合物促进PC12细胞神经突触生长的活性实验
1.实验材料与样品
1）神经生长因子（NGF）购自Sigma公司，胎牛血清和马血清购自Gibco公司，DMEM培养基和PBS溶液购自Hyclone公司，DMSO购自Applichem公司；
2）化合物由上述实施例1-7的方法一一合成，经HPLC检测纯度均大于98%，使用前均配成适宜浓度备用。
2.细胞株：大鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞，由中科院上海细胞所提供。
3.细胞培养：
PC12细胞用含有10%马血清，5%胎牛血清，1%谷氨酰胺DMEM培养基培养，于37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育，常规方法传代培养。
4.实验方法：
细胞以每孔5×104的密度接种到多聚酪氨酸包被的12孔板中，置于5%CO2培养箱于37℃培养。将各化合物均用DMSO溶解，并用不含血清的培养基溶液稀释到合适浓度；NGF用无菌水溶解后用不含血清的培养基溶液稀释到50ng/mL。将样品和NGF分别加入到各孔中，培养72小时后倒置显微镜下观察细胞形态变化，用J-image软件测量PC12细胞神经突触生长的平均长度。随机选取5个视野区域，至少100个细胞以上，对测量数据进行统计分析，以确定样品促进PC12细胞神经突触生长的活性以及和CAPE的比较结果。
5.实验结果
如图2所示，为加入咖啡酸苯乙醇酯类化合物经72小时培养后PC12细胞神经突触平均长度比较示意。其中：NGF组浓度（50ng/mL），CAPE组浓度（10nM），实施例1-5制备得到的化合物浓度（0.5nM），实施例6、7制备得到的化合物浓度（10nM）；数据皆以均数±标准差表示（n=3）；（**）代表p<0.01，即与空白组相比具有极显著性差异；（##）代表p<0.01，即与CAPE组相比具有极显著性差异。
由图2可见，实施例5制备得到的化合物具有极显著促进PC12细胞神经突触生长的活性，即对PC12细胞具有很强的神经营养作用，其活性显著强于CAPE；实施例1-4、6、7制备得到的化合物具有显著促进PC12细胞神经突触生长的活性，即对PC12细胞具有较强的神经营养作用，其活性与CAPE相当，表明本发明中的化合物具有明显的促进神经细胞突触生长的活性。因此，可以用于制备新的神经退行性疾病类药物。
综上所述，本发明所提供的咖啡酸苯乙酯类似物与最接机的现有技术比较，显示出生物活性更强、有效浓度更低的优势，尤其是化合物咖啡酸氯苯乙醇酯，具有开发成为预防和治疗神经退行性疾病类药物的前景。

Claims (9)

1.一种咖啡酸苯乙醇酯类化合物，其特征在于，其化学结构如下：
Figure FDA0000428943590000011
其中：R1、R2、R3中任意两个为氢，另外一个为氯、溴或胺基中的一种。
2.一种根据权利要求1所述化合物的制备方法，其中：R1、R2、R3中任意两个为氢，另外一个为氟、氯或溴，其特征在于，该方法通过将咖啡酸、缩合剂、缩合活化剂以及有机溶剂混合后加入相应的苯乙醇原料，在氮气氛下充分反应后，将产物中性洗涤提纯即得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的缩合剂采用N,N′-二环己基碳二亚胺、N,N′-二异丙基碳二亚胺或1-（3-二甲胺基丙基）-3乙基碳二亚胺。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的缩合活化剂采用4-N,N-二甲基吡啶或1-羟基苯并三氮唑。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的有机溶剂采用1,2-二氯乙烷、三氯甲烷、苯或甲苯。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的中性洗涤是指：将反应液依次经过稀盐酸、水、碳酸氢钠溶液、饱和食盐水洗。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的提纯是指：依次采用无水硫酸钠干燥、浓缩得到粗品，然后将粗品经柱层析、重结晶。
8.一种咖啡酸胺基苯乙醇酯的制备方法，其特征在于，通过将咖啡酸硝基苯乙醇酯和氯化亚锡溶于乙醇中充分反应后冷却至室温，并进一步加入饱和Na2CO3溶液并以乙酸乙酯萃取浓缩得到粗品，最后经柱层析即得。
9.一种咖啡酸苯乙醇酯类化合物的应用，其特征在于，所述咖啡酸苯乙醇酯类化合物的化学结构如下：
Figure FDA0000428943590000021
其中：R1、R2、R3中任意两个为氢，另外一个为氟、氯、溴、硝基或胺基中的一种；
所述应用是指：将其用于制备预防和治疗神经退行性疾病的单体药物或组合药物。
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