CN103463076A - Lycojaponicumin C在抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了Lycojaponicumin C在制备抗呼吸道合胞病毒药物中的应用。经实验证明，Lycojaponicumin C对呼吸道合胞病毒RSV有显著的抑制作用，本发明为Lycojaponicumin C临床用于治疗呼吸道合胞病毒RSV感染性疾病提供实验依据，对研制抗呼吸道合胞病毒RSV的药物提供了一定的指导意义，具有重要的参考价值。
Description
技术领域
本发明涉及Lycojaponicumin C在制备抗呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）的药物中的应用。
背景技术
RSV主要引起呼吸系统感染，在婴幼儿、老年以及免疫缺陷人群引起严重肺炎，是人类上呼吸道感染的重要病原之一。
本发明涉及的化合物Lycojaponicumin C是一个2012年发表（Wang,X. J. et al., 2012. Lycojaponicumins A-C, Three Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Lycopodiumjaponicum. Organic Letters 14(10), 2614-2617.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，对于本发明涉及的在制备治疗呼吸道合胞病毒（RSV）药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于呼吸道合胞病毒（RSV）抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于呼吸道合胞病毒（RSV）的防治显然具有显著的进步。
发明内容
本发明提供了Lycojaponicumin C在制药中的新用途：
Lycojaponicumin C在制备抗RSV的药物中的应用。
所述化合物Lycojaponicumin C结构如式（Ⅰ）所示：
经实验证明，Lycojaponicumin C对RSV有显著的抑制作用：抑制RSV在HEK293细胞出现CPE效应（Cytopathic Effect，CPE），IC50为2-11.91，TI为1499.2。
本发明涉及的Lycojaponicumin C在制备治疗呼吸道合胞病毒（RSV）药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于呼吸道合胞病毒（RSV）抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于呼吸道合胞病毒（RSV）的防治显然具有显著的进步。
具体实施方式
本发明所涉及化合物Lycojaponicumin C的制备方法参见文献（Wang, X. J. et al., 2012. Lycojaponicumins A-C, ThreeAlkaloids with an Unprecedented Skeleton from Lycopodium japonicum. Organic Letters 14(10), 2614-2617.）。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
实施例1：本发明所涉及化合物Lycojaponicumin C片剂的制备：
取20克化合物Lycojaponicumin C，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例2：本发明所涉及化合物Lycojaponicumin C胶囊剂的制备：
取20克化合物Lycojaponicumin C，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。
下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
实验例：化合物Lycojaponicumin C对呼吸道合胞病毒（RSV）的作用研究
（1）化合物Lycojaponicumin C的配置：将化合物LycojaponicuminC溶于细胞维持液（含2%新生牛血清的MEM，GIBICO公司产品）中备用。
（2）细胞株与病毒株：
人胚肾细胞（HEK293，RSV病毒敏感细胞）购自美国Clontech公司；呼吸道合胞病毒（RSV）Long株引自中国CDC病毒病研究所。
（3）细胞毒性测定：
参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24（1）：25~27）的方法，将样品以2倍比做系列稀释（20~-5），然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀释度纵向重复3孔（A、B、C行），平行设微孔板D的1~6孔为细胞对照，7~12孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540nm波长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度（TD50）。
（4）抑毒试验：
参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24（1）：25~27）的方法，将样品按稀释顺序（2-2~-13）横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100uL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID50的病毒100uL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的1~12作为细胞对照。37℃、5%CO2培养，每日观察CPE，连续观察4d。病毒对照出现90%以上CPE时，加1%中性红染色，用酶标仪在波长540nm波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用Reed-Muench方法计算半数抑毒浓度（IC50），最终将TD50和IC50相比获得抑毒指数（TI）。
（5）结果：
①样品TD50的测定：对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。化合物Lycojaponicumin C对HEK293的TD50为2-1.36。
②抑毒实验：对照组细胞贴壁致密、形态良好。镜下观察发现，RSV病毒对照组在第2d出现90%以上的CPE，RSV在HEK293 CPE以折光性增强、变圆、脱落、破碎为主要特征。
而抑毒试验各组细胞，按照样品稀释梯度，梯度规律出现CPE：
RSV-HEK293试验组细胞在第9稀释度之前，细胞完全被保护，之后出现CPE，CPE随样品浓度减少逐渐加重。
将上述实验板用1%中性红染色、用酶标仪测450nmA值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值与细胞对照组A值相比获得IC50，IC50与TD50相比获得TI：抑制RSV在HEK293细胞发生CPE，IC50为2-11.91，TI为1499.2。
结论：Lycojaponicumin C具有显著的抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV的作用，可以用来制备抗副粘科病毒呼吸道合胞病毒RSV药物。
Claims (1)
1.Lycojaponicumin C在抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用，所述化合物Lycojaponicumin C结构如式（Ⅰ）所示：
式（Ⅰ）。
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