CN103462967A - Incarviatone A在抗疱疹病毒的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Incarviatone A在制备抗疱疹病毒的药物中的应用。经实验证明，Incarviatone A对抗单纯疱疹病毒1型（Herpessimplexvirus，HSV-1）和单纯疱疹病毒2型（Herpessimplexvirus，HSV-2）有显著的抑制作用，这提示Incarviatone A在治疗疱疹病毒感染性疾病领域存在潜在的应用价值，本发明为Incarviatone A临床用于治疗疱疹病毒感染性疾病提供实验依据，对研制抗HSV-1和HSV-2病毒的药物提供了一定的指导意义，具有重要的参考价值。

Description

Incarviatone A在抗疱疹病毒的药物中的应用

技术领域

本发明涉及Incarviatone A在制备抗单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus，HSV-1）和单纯疱疹病毒2型（Herpes simplex virus，HSV-2）药物中的应用。

背景技术

HSV-1、HSV-2属于疱疹科病毒，HSV-1和HSV-2不仅引起口唇或生殖粘膜疱疹，同时也是引起脑炎、肝炎、全身严重感染甚至宫内感染的重要病原；

本发明涉及的化合物Incarviatone A是一个2012年发表（Shen, Y.H. et al., 2012. Incarviatone A, a structurally unique natural product hybrid with a new carbon skeleton from Incarvillea delavayi, and its absolute configuration via calculated electronic circular dichroic spectra. RSC Advances 2, 4175–4180.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前没有关于该化合物活性方面的报道，对于本发明涉及的Incarviatone A在制备治疗疱疹病毒感染药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于疱疹病毒抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于疱疹病毒感染的防治显然具有显著的进步。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了Incarviatone A在制药中的新用途：

Incarviatone A在制备抗HSV-1的药物中的应用。

Incarviatone A在制备抗HSV-2的药物中的应用。

经实验证明，Incarviatone A对HSV-1、HSV-2有显著的抑制作用：抑制HSV-1、HSV-2在HEK293细胞出现CPE效应（Cytopathic Effect，CPE），IC₅₀分别为2^-11.23、2^-11.19，TI分别为1031.1、1002.9。

所述化合物Incarviatone A结构如式（Ⅰ）所示：

本发明为Incarviatone A临床用于治疗疱疹病毒感染性疾病提供实验依据，对研制抗HSV-1、HSV-2病毒的药物提供了一定的指导意义，具有重要的参考价值。

本发明涉及的Incarviatone A在制备治疗疱疹病毒感染药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于疱疹病毒抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于黄疱疹病毒感染的防治显然具有显著的进步。

为了更好地理解本发明的实质，下面将结合实施例对本发明作进一步的说明。

具体实施方式

本发明所涉及化合物Incarviatone A的制备方法参见文献（Shen,Y. H. et al., 2012. Incarviatone A, a structurallyunique natural product hybrid with a new carbon skeleton from Incarvillea delavayi, and its absolute configuration via calculated electronic circular dichroicspectra. RSC Advances 2, 4175–4180.）。

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：本发明所涉及化合物Incarviatone A片剂的制备：

取20克化合物Incarviatone A，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

实施例2：本发明所涉及化合物Incarviatone A胶囊剂的制备：

取20克化合物Incarviatone A，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

实验例：Incarviatone A对疱疹病毒的作用研究：

（1）细胞株与病毒株：

人胚肾细胞（HEK293，为HSV-1、HSV-2病毒敏感细胞）购自美国Clontech公司；单纯疱疹病毒1型（HSV-1）Sm44株、单纯疱症病毒2型（HSV-2）333株引自中国CDC病毒病研究所。

（2）细胞毒性测定：

参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24（1）：25~27）的方法，将各样品以2倍比做系列稀释（2^0~-5），然后按稀释顺序横向接种于96板孔中的HEK293上，每孔100uL，每稀释度纵向重复3孔（A、B、C行），平行设微孔板D的1~6孔为细胞对照，7~12孔不接种细胞为空白对照，显微镜下每日观察CPE，连续观察7d，中性红染色，在540nm波长测定OD值，将实验组与细胞对照组OD值相比计算细胞存活率，用Reed-Muench方法计算药物半数细胞中毒浓度（TD₅₀）。

（4）抑毒试验：

参照文献（汪受传，王霖，陈超等，清肺口服液含药血清对病毒抑制作用的实验研究，南京中医药大学学报，2008；24（1）：25~27）的方法，将样品按稀释顺序（2^-3~-14）横向接种于96板孔中的单层细胞上，每孔100 uL，每稀释度纵向重复4孔，微孔板的A、B、C行加含100个TCID₅₀的病毒100 uL作为试验组，D行补充等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设F行作为病毒对照，E行的1~12作为细胞对照。37℃、5%CO₂培养，每日观察CPE，连续观察4d。病毒对照出现90%以上CPE时，加1%中性红染色，用酶标仪在波长540nm波长读取A值，各组A值去除病毒对照组A值，将各试验组与细胞对照组A值相比，获得细胞存活率，用Reed-Muench方法计算半数抑毒浓度（IC₅₀），最终将TD₅₀和IC₅₀相比获得抑毒指数（TI）。

（5）结果：

①样品TD₅₀的测定：对照组细胞显微镜下观察贴壁生长致密、形态良好。Incarviatone A的TD₅₀在HEK293分别为2^-1.22。

②抑毒实验：对照组细胞贴壁致密、形态良好。镜下观察发现，HSV-1、HSV-2病毒对照组分别在第3d、3d出现90%以上的CPE，HSV 1和HSV 2在HEK293CPE则以肿胀、多细胞融合（HSV 1致多个细胞融和成大泡，而HSV 2致融合为小泡）、变圆、脱落为主要特征。

而抑毒试验各组细胞，按照Incarviatone A样品稀释梯度，梯度规律出现CPE：HSV 1-HEK293在第10稀释度之前、HSV 2-HEK293组在第9稀释度之前细胞完全被保护，之后出现CPE，CPE随样品浓度减少逐渐加重。

将上述实验板用1%中性红染色、用酶标仪测450nmA值，各组A值减掉病毒对照组A值后，各实验组A值与细胞对照组A值相比获得IC₅₀，IC₅₀与TD₅₀相比获得Incarviatone A的TI：抑制HSV-1、HSV-2在HEK293细胞发生CPE，IC₅₀分别为2^-11.23、2^-11.19，TI分别为1031.1、1002.9。

结论：Incarviatone A具有显著的抗疱疹科病毒（包括HSV-1、HEV-2）的作用，而且安全性高，因此Incarviatone A在治疗疱疹病毒感染疾病中具有广泛的应用背景。

Claims (1)

1.Incarviatone A在抗疱疹病毒的药物中的应用，所述化合物Incarviatone A结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）。