CN103417527A - 3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素的药物用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于化工领域及医药领域，涉及3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素的药物应用。本发明提供了3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素在制备抗肿瘤药物中的应用，以及相应的抗肿瘤药物组合物。本发明还提供了一种抑制体外肿瘤细胞增殖的方法，即将3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素加入肿瘤细胞的培养液，所述的肿瘤细胞包括肝癌细胞、胃癌细胞或者白血病细胞。3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素属于天然产物，毒副作用小、生物利用度高、性质稳定,具有临床使用价值。本发明的小分子化合物作为新的抗肿瘤药物或者其辅助成分进行开发，抑瘤效果明显，绿色环保。

Description

3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素的药物用途

技术领域

本发明属于化工领域及医药领域，涉及3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素，英文名称为methyl(E)-3-[2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-hydroxymethyl-7-methoxy-2,3-dihydro-1-benzofuran-5-yl]-prop-2-enoate。本申请中，简称为H4。其结构式如下：

1986年，Fukuyama等从枣树的叶子中提取到与H4类似的木脂内酯（A new neo-lignan,a prostaglandin I2 inducer from the leaves of Zizyphus jujuba.，Planta Medica，(6),501-2.，1986）。

Rakotondramanana等详细报道了H4的结构、特性参数及其制备过程（即文中的化合物5，Synthesis of ferulic ester dimers,functionalization and biological evaluation aspotential antiatherogenic and antiplasmodial agents.，Bioorganic & MedicinalChemistry，15(18),6018-6026，2007）。实验表明，H4有一定的抗氧化作用和较好的杀伤疟原虫等细胞毒性的作用。

但是，关于3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素(H4)的报道总体较少见。

发明内容

本发明的目的是提供3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素的新的药物用途。

本发明提供了H4在制备抗肿瘤药物中的应用。所述的抗肿瘤药物可以是抗肝癌药物、抗胃癌药物或者抗血癌药物。

该抗肿瘤药物可以是针剂或者片剂。

本发明提供了一种抑制体外肿瘤细胞增殖的方法，将H4加入肿瘤细胞的培养液中。所述的肿瘤细胞可以是肝癌细胞、血癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞或者胰腺癌细胞。本发明的一个实施例中采用的肝癌细胞是SK-HEP1、Focus和QGY。一般而言，加入H4的终浓度为1-50μM。例如，1-5μM，1-10μM，1-12μM，1-20μM，1-30μM，2-50μM，2-15μM，2-30μM，14-30μM，14-25μM，20-30μM，14-50μM，等等。

本发明还提供了一种抗肿瘤药物，所述的抗肿瘤药物的活性成分是H4。所述的肿瘤可以是肝癌、胃癌或者血癌。

本发明的小分子化合物可以采用各种常规的制备方法制备。例如，采用人工化学合成的方法。

利用本发明小分子化合物，通过各种常规筛选方法，可筛选出与H4发生相互作用的物质，如受体、抑制剂或拮抗剂等。

本发明及其抑制剂、拮抗剂等，在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括（但并不限于）：肌内、腹膜内、皮下、皮内、或局部给药。

以本发明的H4为例，可以将其与合适的药学上可接受的载体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括（但并不限于）：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的H4可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明的H4还可与其他治疗剂一起使用。

当本发明的H4被用作药物时，可将治疗有效剂量的H4施用于哺乳动物，其中该治疗有效剂量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明提供了H4在制备抗肿瘤药物中的应用。H4是天然产物，能够明显抑制肿瘤细胞的增殖。本发明的小分子化合物作为新的抗肿瘤药物或者其辅助成分进行开发，抑瘤效果明显，绿色环保，将为治疗和治愈肿瘤提供了一种新的途径和手段。

具体实施方式

实验方法：

1.细胞复苏

1)从液氮罐中取出冻存管，直接投入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

2)从37℃水浴中取出冻存管，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并加入10倍以上培养液，混合后低速离心，弃上清，再重复用培养液洗一次。

3)用培养液适当稀释后，接种培养瓶，放在37℃培养箱静置培养，次日更换培养液，继续培养。培养至一定浓度时进行传代。K562细胞培养在含10% Gibico胎牛血清的1640培养基中，SK-HEP1和QGY细胞培养在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中，培养基中含100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素。

2.细胞传代培养

每天观察细胞生长的情况，当细胞在培养瓶中长至约90%汇合时传代，约每隔2-4天传代一次。一瓶传代成三瓶，或一个25cm2传代于一个75cm2的培养瓶中。方法：

1)用1×磷酸缓冲液洗涤细胞一次。

2)加入2-3ml胰酶消化液消化，置于37℃培养箱中数分钟。用手拍打细胞培养瓶，使细胞分离。

3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合适培养基终止胰酶消化。将细胞分装于新的培养瓶中，继续培养。

3.细胞冻存

1)取培养至对数生长期的细胞胰蛋白酶消化，收集于离心管中并计数，离心。

2)弃除胰蛋白酶及旧的培养液，加入配置好的冻存培养液(含10%DMSO，40%DMEM和50%Gibico胎牛血清)，冻存液中细胞的最终浓度为0.5-1×107/ml。用吸管轻轻吹打使细胞均匀，然后分装入无菌冻存管中，每管加1-1.5ml。

3)将冻存管放入冻存盒置-80℃速冻，5小时后移入液氮罐中保存。

4.药物准备：

H4溶于DMSO(二甲基亚砜),配制成100mM或50mM的母液备用。

实施例1MTS法测定H4对肝癌细胞的生长抑制作用

SK-HEP1细胞（购自中国科学院细胞库）3×103/孔接种至96孔板,培养24小时使之贴壁后加入H4（购自中国科学院上海药物研究所），设6个浓度梯度，每个浓度设3个复孔。细胞在37℃，5%CO2条件下培养72小时后，倒掉培养液，用MTS试剂盒（Promega公司）测定细胞存活率。

测试方法为：将细胞用无血清培养基洗一遍，按照100μl/well的量加入预先配制好的MTS显色溶液（10ml无血清培养基中加入2ml溶液1和100μl溶液2，充分混匀）。将一个没有细胞的孔设为本底孔，用以校正溶液的背景光吸收。把细胞放入细胞培养箱中继续培养2～4小时，然后用酶标仪读取光吸收值（参考波长630-700nm，测定波长490nm），计算细胞存活率，以测定孔光吸收值/对照孔光吸收值作为细胞存活率的数值。根据细胞存活率，计算H4对Sk-hep1细胞的IC50值。

IC50是指被抑制一半时抑制剂的浓度。这里即为SK-HEP1细胞数量为对照的一半时H4的浓度。IC50的计算一般需要测定5个以上的剂量效应，再通过曲线拟合得到函数计算而得。

结果：H4对Sk-hep1细胞的IC50值为604.79μM。

用同样的方法测试QGY细胞（购自中科院细胞库），结果H4对QGY细胞的IC50值为约14.50μM；对Focus细胞的IC50值为约22.60μM。

实施例2H4对人白血病细胞的生长抑制作用

利用cck-8试剂盒（日本同仁化学研究所）检测。

步骤：

1)将K562细胞（购自中国科学院细胞库）均匀的种在96孔板里，每孔细胞数为104个。

2)待贴壁，过夜后加药，加药（H4浓度分别为50、16.67、5.56、1.85、0.62μM），每个浓度有3个复孔。

3)培养48小时，将完全培养基替换成无血清培养基与CCK8的混合物(10∶1)，于37℃培养箱孵育2小时。

4)以450nm为测量波长，以650nm为对照波长，于酶标仪上测出读数。

结果：H4对K562细胞的IC50值为1.59μM。

实施例3H4对人胃癌细胞的生长抑制作用

利用cck-8试剂盒（日本同仁化学研究所）检测。

步骤：

1)将HGC细胞（购自中国科学院细胞库）均匀的种在96孔板里，每孔细胞数为3500个。

2)待贴壁，过夜后加药，加药（H4浓度分别为50、16.67、5.56、1.85、0.62μM），每个浓度有3个复孔。

3)培养48小时，将完全培养基替换成无血清培养基与CCK8的混合物(10∶1)，于37℃培养箱孵育2小时。

4)以450nm为测量波长，以650nm为对照波长，于酶标仪上测出读数。

结果：H4对HGC细胞的IC50值为33.02μM。

Claims (10)

1.3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素在制备抗肿瘤药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤是肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、宫颈癌或者白血病。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抗肿瘤药物是抗肝癌药物。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抗肿瘤药物是抗胃癌药物。

5.一种抑制体外肿瘤细胞增殖的方法，其特征在于，将3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素加入肿瘤细胞的培养液中。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的肿瘤细胞是肝癌细胞、乳腺癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞、宫颈癌细胞、肺腺癌细胞或者白血病细胞。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，加入3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素的终浓度为1-50μM。

8.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述的抗肿瘤药物组合物的活性成分含有3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素。

9.如权利要求8所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述的抗肿瘤药物组合物含有药学上有效量的3-羟甲基二氢苯并呋喃二聚阿魏酸单甲酯木质素和药学上有效量的抗肿瘤药物以及药学上可接受的载体。

10.如权利要求8所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述的抗肿瘤药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂或者注射剂。