CN103416393A - 一种植物线虫临时玻片的制作方法 - Google Patents
一种植物线虫临时玻片的制作方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103416393A CN103416393A CN2013103231516A CN201310323151A CN103416393A CN 103416393 A CN103416393 A CN 103416393A CN 2013103231516 A CN2013103231516 A CN 2013103231516A CN 201310323151 A CN201310323151 A CN 201310323151A CN 103416393 A CN103416393 A CN 103416393A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nematode
- slide
- glass slide
- fixer
- plant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种植物线虫临时玻片的制作方法，通过线虫固定液热杀死并固定线虫，然后用线虫固定液为载玻片上的浮载剂，再用线虫固定液对角的石蜡热融形成均匀的蜡环，冷却后就成为致密的密闭环境，得到植物线虫临时玻片，这样石蜡既作为支撑物，又作为封片剂，就不需另外放置玻璃丝或薄纸等支撑物，也不用涂上指甲油、树脂或凡士林等封片剂，操作简单，载玻片加热时气体逸出，基本上不会产生气泡，线虫临时玻片可保存标本3个月以上，保存期也延长。
Description
技术领域
本发明涉及线虫玻片的制作方法，具体涉及一种植物线虫临时玻片的制作方法。
背景技术
植物线虫属于无脊椎动物中的线虫门，能寄生于植物根、茎、叶、果实、种子等部位，其种类繁多、危害严重。近年来，随着国际间贸易往来的日益频繁，进出境种苗及其植物繁殖材料增多，各种植物病害尤其是线虫病害传播的机会大大增加，使得植物线虫成为世界各国广泛关注的对象。我国2007年公布的对外植物检疫性有害生物名录中，有20种（属）的线虫为检疫性线虫。
对植物线虫分类鉴定和形态研究，一般首先要制作线虫玻片，线虫玻片可以分为临时玻片和永久玻片，目前线虫临时玻片制作一般直接用水做浮载剂，将线虫热杀死后加盖玻片直接观察，但线虫临时玻片只能保存数十分钟。也有人用线虫固定液（如4%甲醛溶液或FG溶液等）做浮载剂，为了防止线虫被压扁，浮载剂中放置了玻璃丝或薄纸等支撑物，盖上盖玻片后，盖玻片周围涂上透明的指甲油、树脂或凡士林等封片固定，这种线虫临时玻片可保存标本数天至数周，但其制片过程较为复杂，易产生气泡，影响观察。永久玻片如公开号为CN102640742的发明专利申请，公开了用线虫固定液将线虫热杀死并固定，然后用脱水液脱水，再用石蜡和甘油作为浮载剂，薄纸作为支撑物，指甲油作为封片剂，制成永久性玻片，可长期保存，但制作复杂，周期长，需要2-3周才制作完毕。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物线虫临时玻片的制作方法，该制作方法可有效避免气泡，制作简单，不需要支撑物，保存期较长。
本发明所要解决的技术问题是一种植物线虫临时玻片的制作方法，步骤如下：
a、用移液器从培养皿中吸取水中培养的植物线虫，转移到500μL塑料管中， 2000 r/min离心3 min，再用移液器吸出塑料管中的水（可以留下线虫液约10μL），然后向塑料管中加入95 ℃的线虫固定液200～400μL，静置至植物线虫死亡，得到已杀死固定的植物线虫，所述线虫固定液为体积百分浓度40％的甲醛：甘油：蒸馏水按体积比10:2:88配制；
b、在载玻片中央滴加上述线虫固定液2μL，挑取上述已杀死固定的植物线虫，置于载玻片上的线虫固定液内，整理植物线虫形态；整理后植物线虫沉底且均匀排列；
c、在载玻片上线虫固定液旁的左上角和右下角各放置一块体积为2～3 mm3的石蜡，在石蜡和线虫固定液上盖上盖玻片，载玻片置于64 ℃的加热板上加热，待石蜡融化后自然冷却，得到植物线虫临时玻片。
与现有技术相比本发明的优点在于该方法通过线虫固定液热杀死并固定线虫，然后用线虫固定液为载玻片上的浮载剂，再用线虫固定液对角的石蜡热融形成均匀的蜡环，冷却后就成为致密的密闭环境，得到植物线虫临时玻片，这样石蜡既作为支撑物，又作为封片剂，就不需另外放置玻璃丝或薄纸等支撑物，也不用涂上指甲油、树脂或凡士林等封片剂，操作简单，载玻片加热时气体逸出，基本上不会产生气泡，线虫临时玻片可保存标本3个月以上，保存期也延长。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例
在解剖镜下，用移液器反复从培养皿中吸取水中培养的植物线虫，转移到500μL塑料管中，2000 r/min离心3 min，使植物线虫沉降到塑料管底部，用移液器慢慢将塑料管中水吸出，为防止吸出线虫，塑料管中可留少量的线虫液（约10μL），然后向塑料管中加入95 ℃的线虫固定液200～400μL（体积40％的甲醛：甘油：蒸馏水体积比为10:2:88配制），使植物线虫杀死和固定；在干净载玻片上用移液器滴加线虫固定液2μL，用线虫挑针挑取一条或数条已杀死固定的植物线虫至载玻片上的线虫固定液内，在解剖镜下整理植物线虫形态，使植物线虫沉底且均匀排列；在载玻片上的线虫固定液旁的左上角和右下角对称放置两块体积为2～3 mm3的石蜡，在石蜡和线虫固定液上盖上盖玻片，载玻片置于64 ℃的加热板上加热，待石蜡融化后自然冷却（加热时间一般为30 s），加热时石蜡融化并在盖玻片下形成均匀的蜡环，蜡液和线虫固定液中气体随温度上升逸出，冷却后石蜡就成为致密的密闭环境，得到植物线虫临时玻片；加贴标签，制作完成，可保存数月。
Claims (1)
1.一种植物线虫临时玻片的制作方法，其特征在于步骤如下：
a、用移液器从培养皿中吸取水中培养的植物线虫，转移到500μL塑料管中， 2000 r/min离心3 min，再用移液器吸出塑料管中的水，然后向塑料管中加入95 ℃的线虫固定液200～400μL，得到已杀死固定的植物线虫。所述线虫固定液为体积百分浓度40％的甲醛：甘油：蒸馏水按体积比10:2:88配制；
b、在载玻片中央滴加上述线虫固定液2μL，挑取上述已杀死固定的植物线虫数条，置于载玻片上的线虫固定液内，整理植物线虫形态；
c、在载玻片上线虫固定液旁的左上角和右下角各放置一块体积为2～3 mm3的石蜡，在石蜡和线虫固定液上盖上盖玻片，载玻片置于64 ℃的加热板上加热，待石蜡融化后自然冷却，得到植物线虫临时玻片。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310323151.6A CN103416393B (zh) | 2013-07-30 | 2013-07-30 | 一种植物线虫临时玻片的制作方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310323151.6A CN103416393B (zh) | 2013-07-30 | 2013-07-30 | 一种植物线虫临时玻片的制作方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103416393A true CN103416393A (zh) | 2013-12-04 |
| CN103416393B CN103416393B (zh) | 2015-08-19 |
Family
ID=49642200
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310323151.6A Active CN103416393B (zh) | 2013-07-30 | 2013-07-30 | 一种植物线虫临时玻片的制作方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103416393B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104374616A (zh) * | 2014-10-09 | 2015-02-25 | 宁波检验检疫科学技术研究院 | 一种植物病原真菌密封载玻片标本的制作方法 |
| CN104483338A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-01 | 山东省第四地质矿产勘查院 | 一种滤纸片法制样-x荧光光谱法测定卤水中溴的方法 |
| CN106614520A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-05-10 | 宁波检验检疫科学技术研究院 | 一种植物线虫永久玻片的制作方法 |
| CN109855940A (zh) * | 2019-02-15 | 2019-06-07 | 四川农业大学 | 一种土壤线虫的玻片制备方法 |
| CN112120010A (zh) * | 2020-10-15 | 2020-12-25 | 宁波检验检疫科学技术研究院 | 一种植物线虫侧线标本制备和观察方法 |
| CN115152738A (zh) * | 2022-08-04 | 2022-10-11 | 宁波海关技术中心 | 一种植物线虫快速封片支撑剂 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102640742A (zh) * | 2012-04-20 | 2012-08-22 | 杭州市农业科学研究院 | 一种改进的植物线虫永久玻片制作方法 |
-
2013
- 2013-07-30 CN CN201310323151.6A patent/CN103416393B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102640742A (zh) * | 2012-04-20 | 2012-08-22 | 杭州市农业科学研究院 | 一种改进的植物线虫永久玻片制作方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 武扬等: "一种改进的植物线虫快速固定和脱水方法", 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》, vol. 32, no. 2, 31 December 2006 (2006-12-31), pages 123 - 126 * |
| 段玉玺等: "植物寄生线虫标本制作方法简介", 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》, vol. 24, 31 December 2006 (2006-12-31), pages 65 - 68 * |
| 程杰等: "松材线虫的玻片标本制作", 《安徽林业科技》, no. 4, 31 December 2000 (2000-12-31), pages 26 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104374616A (zh) * | 2014-10-09 | 2015-02-25 | 宁波检验检疫科学技术研究院 | 一种植物病原真菌密封载玻片标本的制作方法 |
| CN104483338A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-01 | 山东省第四地质矿产勘查院 | 一种滤纸片法制样-x荧光光谱法测定卤水中溴的方法 |
| CN106614520A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-05-10 | 宁波检验检疫科学技术研究院 | 一种植物线虫永久玻片的制作方法 |
| CN109855940A (zh) * | 2019-02-15 | 2019-06-07 | 四川农业大学 | 一种土壤线虫的玻片制备方法 |
| CN112120010A (zh) * | 2020-10-15 | 2020-12-25 | 宁波检验检疫科学技术研究院 | 一种植物线虫侧线标本制备和观察方法 |
| CN115152738A (zh) * | 2022-08-04 | 2022-10-11 | 宁波海关技术中心 | 一种植物线虫快速封片支撑剂 |
| CN115152738B (zh) * | 2022-08-04 | 2023-11-17 | 宁波海关技术中心 | 一种植物线虫快速封片支撑剂 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103416393B (zh) | 2015-08-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103416393B (zh) | 一种植物线虫临时玻片的制作方法 | |
| CN103630421B (zh) | 一种芍药成熟种胚的石蜡切片制作方法 | |
| CN105705626B (zh) | 细胞或组织的玻璃化冷冻保存用工具 | |
| CN102967493A (zh) | 植物组织快速石蜡制片的方法 | |
| BR112014012216B1 (pt) | Método de intensificar o crescimento de uma planta | |
| Faisal et al. | Molecular and biochemical characterization in Rauvolfia tetraphylla plantlets grown from synthetic seeds following in vitro cold storage | |
| CN108094405A (zh) | 细胞冻存组合物及其应用 | |
| CN102640742A (zh) | 一种改进的植物线虫永久玻片制作方法 | |
| CN104297034A (zh) | 利用幼嫩子房对烟草单个植株进行染色体制片的方法 | |
| CN106501053A (zh) | 岩黄连叶片的石蜡切片方法 | |
| CN105432598A (zh) | 一种液基细胞保存液及其制备方法 | |
| Georgiev et al. | Temporary immersion systems for Amaryllidaceae alkaloids biosynthesis by Pancratium maritimum L. shoot culture | |
| CN103983496B (zh) | 被子植物花部器官的线粒体荧光标记方法 | |
| CN106614520A (zh) | 一种植物线虫永久玻片的制作方法 | |
| Shimelis et al. | Interaction effects of 6-benzylaminopurine and kinetin on in vitro shoot multiplication of two sugarcane (Saccharum officinarum L.) genotypes | |
| CN102172218B (zh) | 一种恢复失活石蒜属种子活力的方法 | |
| CN103436524B (zh) | 一种批量提取水稻胚乳dna的方法 | |
| CN105706923A (zh) | 一种筛选甘蔗耐旱变异株的方法 | |
| CN105594689A (zh) | 香菇浸制标本制作与保存方法 | |
| CN105210997B (zh) | 一种大量收集西花蓟马卵的方法 | |
| Peterson et al. | Cryopreservation of Duckweed Genetic Diversity as Model for Long-Term Preservation of Aquatic Flowering Plants | |
| CN104082275B (zh) | 一种水产动物胚胎显微玻片标本制作技术 | |
| CN105176912A (zh) | 一种培养基及其应用、制备方法 | |
| CN112120010A (zh) | 一种植物线虫侧线标本制备和观察方法 | |
| Kacprzyk et al. | A root hair assay to expedite cell death research |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20181211 Address after: 315000 228, room 043, 66 Qingyi Road, hi tech Zone, Ningbo, Zhejiang. Co-patentee after: Ningbo Institute of Inspection and Quarantine Science Technology Patentee after: NINGBO JOYSUN TESTING SERVICE CO., LTD. Address before: 315012 Ma Yuan Road, Haishu District, Ningbo, Zhejiang Province, No. 9 Patentee before: Ningbo Institute of Inspection and Quarantine Science Technology |