CN103411943B - 基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag+、Hg2+和Fe3+的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法。它使用荧光光谱仪记录在波长为500～520nm的激发光源的激发之下的含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在539～559nm波长处的荧光光谱强度，由其得藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；或者使用紫外可见光谱吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在555～575nm和516～536nm波长处的吸收光谱强度，由其得藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；或者由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类，或为其它金属离子。本方法简单快捷、成本低，绿色环保、检测灵敏度高，可广泛应用于受污染的环境水样品以及医学等领域含重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺的样品在线实时检测。

Description

基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag+、Hg2+和Fe3+的方法

技术领域

本发明涉及一种荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，尤其是一种基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法。

背景技术

Ag⁺可以与多种人体代谢物结合而导致疏基失活，从而影响人类健康；Hg²⁺则通常以无机汞或甲基汞的形式存在，严重危害水生生物健康，并且Hg²⁺沿着生物链具有生物累积性，随着生物链的延长浓度不断放大，最终影响人类健康；Fe³⁺虽然是人体所必需的化学元素，对人体代谢发挥着重要作用，然而，Fe³⁺过量或者不足都会导致生物体混乱，严重影响人体的健康。因此，水溶液中Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的痕量探测至关重要。目前，人们为了检测重金属离子，作了各种尝试和努力：一是如中国发明专利申请公布说明书CN101231242A于2008年7月30日公开的一种基于ODOPB-DBC的荧光猝灭法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，该方法包括先将检测试剂与含有金属离子的水溶液混合并振荡均匀后，使用分子荧光光谱法对其进行测定，得到测定值a，再取检测试剂与纯净水混合并振荡均匀后，使用分子荧光光谱法对其进行测定，得到测定值b，之后，通过将测定值a/b的值与各响应金属离子标准响应曲线值进行对照，获得水溶液中金属离子的信息，响应离子包括铁、银、汞等金属离子；这种荧光光谱法的欠缺之处是检测的过程过于繁琐，尤为难以对待测样品进行实时的在线检测。二是如“银-四氯四溴荧光素体系共振散射法测定痕量银”（《化学试剂》2010年第32卷第8期第715～716页）公开的一种采用银-四氯四溴荧光素体系测定痕量银的方法，它包括在比色管中依次加入适量银标准溶液、十二烷基苯磺酸钠溶液、四氯四溴荧光素钠盐溶液和硫酸溶液，取适量试液于比色皿中，置于荧光分光光度计上于最大散射峰波长313nm处测定试液和试剂空白的散射强度；其不仅存在着检测的过程较繁杂之欠缺，也同时存在着显色剂的针对性太强，致使显色的通用性差，以及显色剂中含有硫酸而易对环境造成污染之欠缺。

发明内容

本发明要解决的技术问题为克服现有技术中的欠缺之处，提供一种简便快捷、成本低、绿色环保的基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法。

为解决本发明的技术问题，所采用的技术方案为：基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法由荧光淬灭法或比色法组成，特别是完成步骤如下：

使用荧光光谱仪记录在波长为500～520nm的激发光源的激发之下的含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在539～559nm波长处的荧光光谱强度，由该荧光光谱强度得出藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；

或者，

使用紫外可见光谱（UV-vis）吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在555～575nm和516～536nm波长处的吸收光谱强度，由该吸收光谱强度得出藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；

或者，由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类，或为含有其它金属离子。

作为基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法的进一步改进：

优选地，当[Ag⁺]（Ag⁺浓度）为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Ag⁺]呈线性反比关系。

优选地，当[Hg²⁺]（Hg²⁺浓度）为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Hg²⁺]呈线性反比关系。

优选地，当[Fe³⁺]（Fe³⁺浓度）为（1～24）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Fe³⁺]呈线性反比关系。

优选地，当[Ag⁺]为（1～15）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在555～575nm和516～536nm波长处的吸收光谱强度的比值与[Ag⁺]呈线性正比关系。

优选地，当[Hg²⁺]为（1～22）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在516～536nm 波长处的吸收光谱强度与[Hg²⁺]呈线性反比关系。

优选地，当[Fe³⁺]为（1～21）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在516～536nm波长处的吸收光谱强度与[Fe³⁺]呈线性反比关系。

较好的是，当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜色为紫红色。

较好的是，当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色。

较好的是，当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。

相对于现有技术的有益效果是：

其一，本发明采用含有藻红B（四碘荧光素）的水溶液来分别使用荧光淬灭法或比色法检测重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺，利用摸索出的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在549nm波长处的荧光强度随重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺浓度的增大而减弱（激发波长为510nm）的规律，实现了对重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺的荧光淬灭法检测；利用摸索出的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在526nm波长处的吸收强度随重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺浓度的增大而减弱的规律，实现了对重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺的比色法检测。同时，也摸索出了将Ag⁺滴加到藻红B水溶液中时，藻红B水溶液的颜色改变为紫红色，并在565nm波长处出现一新的吸收峰且随着Ag⁺浓度的增大而增强；将Hg²⁺滴加到藻红B水溶液中时，藻红B水溶液的颜色改变为淡红色；将Fe³⁺滴加到藻红B水溶液中时，藻红B水溶液的颜色改变为橘红色，并在450nm波长处出现新的荧光峰，对应于藻红B多聚体的发光的规律；利用以上规律可有效地区分Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺，实现对这三种重金属离子的识别和选择性光谱检测。这种利用藻红B水溶液的荧光淬灭法或比色法检测重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺的方法简便快捷、不需要繁杂的化学合成工艺和复杂的仪器设备，成本低廉、绿色环保、选择性强、检测灵敏度高（0.5μmol/L），可广泛地应用于受污染的环境水样品以及医学等领域含重金属离子Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺的样品的在线实时检测。

其二，本发明中，基于藻红B的荧光淬灭法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的实现机理为，利用荧光光谱仪分别测量了浓度为10^-5mol/L的藻红B水溶液在滴加相同化学计量比的Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺前后的荧光衰减曲线，并计算了荧光寿命；由结果（参见图4）可知，在允许的实验误差范围（10%）内，加入重金 属离子后，藻红B水溶液荧光寿命基本保持不变。由此可得出结论：Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺三种重金属离子对藻红B的荧光淬灭属于单一的静态淬灭，即三种重金属离子与基态的藻红B水溶液的荧光分子形成了不发光的络合物，导致了藻红B水溶液的荧光淬灭现象。为了确定藻红B分子与三种重金属离子发生配位络合的比例，分别保持溶液中藻红B与重金属离子（Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺）的总浓度不变（2×10^-5mol/L），改变重金属离子所占的摩尔百分比，记录溶液的荧光强度变化量与金属离子摩尔浓度百分比之间的关系，即得到了其（如图5所示）的Job曲线，该曲线最大值所对应的藻红B与重金属离子摩尔浓度比即为二者的配位络合比。实验结果表明，在藻红B与Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺形成的络合物中，荧光分子与三种重金属离子的比值均为1：4。

其三，本发明中，基于藻红B的比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的实现机理为，分别对藻红B、以及藻红B与Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的配位络合物进行了X光电子能谱（XPS）分析，得到了其的I3d、O1s（如图6所示）和C1s（如图7所示）的谱图。藻红B在与重金属离子络合后，I3d峰（620.6eV和632.1eV）分别移向低能侧（如图6a～d所示），表明I原子与重金属离子之间存在着相互作用；O1s峰（533.7eV，对应于C～O）移向低能侧（如图6e～h所示），表明单键O与重金属离子之间存在着相互作用；而藻红B在与Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺络合后，对应于C=O的C1s峰（288eV）移向高能侧（如图7所示），证明C=O双键与重金属离子之间也存在着相互作用。

附图说明

下面结合附图对本发明的优选方式作进一步详细的描述。

图1a、图1c、图1e分别为向浓度为10^-6mol/L的藻红B水溶液中不断滴加Ag⁺溶液、Hg²⁺溶液、Fe³⁺溶液的荧光光谱图；图1b、图1d、图1f为分别与图1a、图1c、图1e相对应的滴定曲线以及荧光强度与金属离子之间的线性关系。

图2为向藻红B水溶液中滴加常见金属离子溶液的荧光光谱图；图中左侧插图为向藻红B水溶液中分别滴加Ag⁺溶液、Hg²⁺溶液和Fe³⁺溶液的荧光照片。

图3a为向藻红B水溶液中滴加不同金属离子溶液的显色照片，由其可看 出，当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜色为紫红色，当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色，当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。图3b、图3d、图3f分别为向藻红B水溶液中不断滴加Ag⁺溶液、Hg²⁺溶液、Fe³⁺溶液的紫外可见光谱的吸收光谱图，图3c、图3e、图3g为分别与图3b、图3d、图3f相对应的滴定曲线和线性关系图。

图4为向藻红B水溶液中分别滴加Ag⁺溶液、Hg²⁺溶液和Fe³⁺溶液前后的荧光衰减曲线。

图5为荧光光谱法得到的藻红B水溶液分别与Ag⁺溶液（图5a）、Hg²⁺溶液（图5b）和Fe³⁺溶液（图5c）的Job曲线图。

图6为藻红B以及藻红B分别与Ag⁺、Hg²⁺、Fe³⁺形成的络合物的I3d谱（图6a～d）；O1s谱（图6e～h）。

图7为藻红B（图7a）以及藻红B分别与Ag⁺（图7b）、Hg²⁺（图7c）、Fe³⁺（图7d）形成的络合物的C1s谱。

具体实施方式

首先从市场购得：

藻红B，并将其配制成浓度10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液。

接着，

实施例1

检测的具体步骤为：

使用荧光光谱仪记录在波长为500nm的激发光源的激发之下的含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-4mol/L的藻红B水溶液在539nm波长处的荧光光谱强度，由该荧光光谱强度得出如图1a或图1c或图1e所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Ag⁺]呈如图1b所示的线性反比关系，当[Hg²⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Hg²⁺]呈如图1d所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～24）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Fe³⁺]呈如图1f所示的线性反比关系。

或者，

使用紫外可见光谱吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为 10^-4mol/L的藻红B水溶液在555nm和516nm波长处的吸收光谱强度，由该吸收光谱强度得出如图3b或图3d或图3f所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～15）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在555nm和516nm波长处的吸收光谱强度的比值与[Ag⁺]呈如图3c所示的线性正比关系，当[Hg²⁺]为（1～22）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在516nm波长处的吸收光谱强度与[Hg²⁺]呈如图3e所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～21）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在516nm波长处的吸收光谱强度与[Fe³⁺]呈如图3g所示的线性反比关系。

或者，由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类，或为含有其它金属离子；其中，当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜色为紫红色，当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色，当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。

实施例2

检测的具体步骤为：

使用荧光光谱仪记录在波长为505nm的激发光源的激发之下的含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为5×10^-5mol/L的藻红B水溶液在545nm波长处的荧光光谱强度，由该荧光光谱强度得出如图1a或图1c或图1e所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Ag⁺]呈如图1b所示的线性反比关系，当[Hg²⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Hg²⁺]呈如图1d所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～24）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Fe³⁺]呈如图1f所示的线性反比关系。

或者，

使用紫外可见光谱吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为5×10^-5mol/L的藻红B水溶液在560nm和521nm波长处的吸收光谱强度，由该吸收光谱强度得出如图3b或图3d或图3f所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～15）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在560nm和521nm波长处的吸收光谱强度的比值与[Ag⁺]呈如图3c所示的线性正比关系，当[Hg²⁺]为（1～22）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在521nm波长处的吸 收光谱强度与[Hg²⁺]呈如图3e所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～21）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在521nm波长处的吸收光谱强度与[Fe³⁺]呈如图3g所示的线性反比关系。

或者，由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类，或为含有其它金属离子；其中，当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜色为紫红色，当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色，当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。

实施例3

检测的具体步骤为：

使用荧光光谱仪记录在波长为510nm的激发光源的激发之下的含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-5mol/L的藻红B水溶液在549nm波长处的荧光光谱强度，由该荧光光谱强度得出如图1a或图1c或图1e所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Ag⁺]呈如图1b所示的线性反比关系，当[Hg²⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Hg²⁺]呈如图1d所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～24）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Fe³⁺]呈如图1f所示的线性反比关系。。

或者，

使用紫外可见光谱吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-5mol/L的藻红B水溶液在565nm和526nm波长处的吸收光谱强度，由该吸收光谱强度得出如图3b或图3d或图3f所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～15）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在565nm和526nm波长处的吸收光谱强度的比值与[Ag⁺]呈如图3c所示的线性正比关系，当[Hg²⁺]为（1～22）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在526nm波长处的吸收光谱强度与[Hg²⁺]呈如图3e所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～21）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在526nm波长处的吸收光谱强度与[Fe³⁺]呈如图3g所示的线性反比关系。

或者，由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类，或为含有其它金属离子；其中，当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜 色为紫红色，当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色，当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。

实施例4

检测的具体步骤为：

使用荧光光谱仪记录在波长为515nm的激发光源的激发之下的含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为5×10^-6mol/L的藻红B水溶液在554nm波长处的荧光光谱强度，由该荧光光谱强度得出如图1a或图1c或图1e所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Ag⁺]呈如图1b所示的线性反比关系，当[Hg²⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Hg²⁺]呈如图1d所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～24）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Fe³⁺]呈如图1f所示的线性反比关系。

或者，

使用紫外可见光谱吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为5×10^-6mol/L的藻红B水溶液在570nm和531nm波长处的吸收光谱强度，由该吸收光谱强度得出如图3b或图3d或图3f所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～15）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在570nm和531nm波长处的吸收光谱强度的比值与[Ag⁺]呈如图3c所示的线性正比关系，当[Hg²⁺]为（1～22）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在531nm波长处的吸收光谱强度与[Hg²⁺]呈如图3e所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～21）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在531nm波长处的吸收光谱强度与[Fe³⁺]呈如图3g所示的线性反比关系。

或者，由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类，或为含有其它金属离子；其中，当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜色为紫红色，当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色，当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。

实施例5

检测的具体步骤为：

使用荧光光谱仪记录在波长为520nm的激发光源的激发之下的含有Ag⁺ 或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-6mol/L的藻红B水溶液在559nm波长处的荧光光谱强度，由该荧光光谱强度得出如图1a或图1c或图1e所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Ag⁺]呈如图1b所示的线性反比关系，当[Hg²⁺]为（1～27）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Hg²⁺]呈如图1d所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～24）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Fe³⁺]呈如图1f所示的线性反比关系。

或者，

使用紫外可见光谱吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-6mol/L的藻红B水溶液在575nm和536nm波长处的吸收光谱强度，由该吸收光谱强度得出如图3b或图3d或图3f所示的藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量；其中，当[Ag⁺]为（1～15）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在575nm和536nm波长处的吸收光谱强度的比值与[Ag⁺]呈如图3c所示的线性正比关系，当[Hg²⁺]为（1～22）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在536nm波长处的吸收光谱强度与[Hg²⁺]呈如图3e所示的线性反比关系，当[Fe³⁺]为（1～21）×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在536nm波长处的吸收光谱强度与[Fe³⁺]呈如图3g所示的线性反比关系。

或者，由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类，或为含有其它金属离子；其中，当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜色为紫红色，当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色，当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。

显然，本领域的技术人员可以对本发明的基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若对本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.一种基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，由荧光淬灭法或比色法组成，其特征在于完成步骤如下：

使用荧光光谱仪记录在波长为500～520nm的激发光源的激发之下的含有Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在539～559nm波长处的荧光光谱强度，由该荧光光谱强度得出藻红B水溶液中Hg²⁺或Fe³⁺的含量；

或者，

使用紫外可见光谱吸光光度计记录含有Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的浓度为10^-4～10^-6mol/L的藻红B水溶液在555～575nm和516～536nm波长处的吸收光谱强度，由该吸收光谱强度得出藻红B水溶液中Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的含量，其中，当[Ag⁺]为(1～15)×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在555～575nm和516～536nm波长处的吸收光谱强度的比值与[Ag⁺]呈线性正比关系，当[Hg²⁺]为(1～22)×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在516～536nm波长处的吸收光谱强度与[Hg²⁺]呈线性反比关系，当[Fe³⁺]为(1～21)×10^-6mol/L时，藻红B水溶液在516～536nm波长处的吸收光谱强度与[Fe³⁺]呈线性反比关系；

或者，由藻红B水溶液的颜色变化，判断其中含有的Ag⁺或Hg²⁺或Fe³⁺的种类。

2.根据权利要求1所述的基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，其特征是当[Hg²⁺]为(1～27)×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Hg²⁺]呈线性反比关系。

3.根据权利要求1所述的基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，其特征是当[Fe³⁺]为(1～24)×10^-6mol/L时，藻红B水溶液的荧光光谱强度与[Fe³⁺]呈线性反比关系。

4.根据权利要求1所述的基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，其特征是当藻红B水溶液中含有Ag⁺时，其颜色为紫红色。

5.根据权利要求1所述的基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，其特征是当藻红B水溶液中含有Hg²⁺时，其颜色为淡红色。

6.根据权利要求1所述的基于藻红B的荧光淬灭法或比色法检测Ag⁺、Hg²⁺和Fe³⁺的方法，其特征是当藻红B水溶液中含有Fe³⁺时，其颜色为橘红色。