CN103405309A

CN103405309A - 肛门和肛周术后创面生物敷料及制备方法

Info

Publication number: CN103405309A
Application number: CN2013103216075A
Authority: CN
Inventors: 庞希宁; 施萍; 王竟
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-07-29
Filing date: 2013-07-29
Publication date: 2013-11-27

Abstract

本发明涉及一种肛门和肛周术后创面生物敷料及制备方法，包括下述步骤：（1）制备人羊膜组织膜片，（2）人羊膜片表面修饰固定，（3）制备带有上皮面和基质面标记人羊膜片敷料，（4）人羊膜敷料成品的储存，（5）人羊膜敷料的表面修饰和使用。本发明适合于骶尾部藏毛窦及肛周疾病常规手术切除病灶后形成不规则形深度U型、V型和坛型创面的治疗，其优点创面愈合快、创面瘢痕小，创面不用包扎、身体活动不受限、减少换药次数、止痛。

Description

肛门和肛周术后创面生物敷料及制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物敷料的制备方法，尤其涉及一种肛门和肛周术后创面生物敷料及制备方法，该生物敷料适合于骶尾部藏毛窦和肛门及肛周疾病手术后创面以及其它深且不规则创面的治疗。

背景技术

藏毛窦和肛门及肛周疾病术后创面多为深且呈V型、U型和坛型等不规则、凸凹不平的创面，采用创面敞开包扎方法时，多用纱布填塞，创面包扎困难，患者身体活动受限，换药时患者又疼痛难忍，创面愈合需要时间长，属于临床难愈合创面，而且创面愈合后又遗留大的瘢痕。

人羊膜作为一种生物敷料在临床已有多年应用的历史。由于其薄仅0.02mm-0.5mm，富有弹性、免疫源性低、易与创面敷贴，止痛，加快创面愈合，缩短愈合时间及减少瘢痕形成等特点，自1995年起，羊膜作为敷料临床用于眼科手术后创面报道逐年较多。临床均收到较好的治疗效果。随着人羊膜研究的逐步深入和实验技术水平的提高，人们对人羊膜的认识也逐步提高。人羊膜神奇的功效也越来越获得公认。临床应用时，人羊膜基底面与创面紧密贴敷方可发挥其最佳作用。但在临床应用中，人羊膜的上皮面和基底面很难区分开，成为临床推广应用的瓶颈。因此，解决这个技术问题，是人羊膜在临床推广应用的前提条件。

发明内容

本发明针对上述藏毛窦和肛门及肛周疾病术后创面敷料治疗技术存在的问题，而提供一种肛门和肛周术后创面生物敷料及制备方法，包括与藏毛窦和肛门及肛周疾病术后V型、U型和“坛子”型等不规则、凸凹不平的创面相适应、利用专用刀具切割人羊膜敷料以及与人皮肤组成相近的藏毛窦和肛门及肛周疾病术后创面人羊膜敷料的制作方法。

本发明的技术方案如下：

一种肛门和肛周术后创面生物敷料，其特征在于：人羊膜敷料为带有上皮面和基质面标记的直角梯形。

一种肛门和肛周术后创面生物敷料的制备方法，包括下述步骤：

（1）制备人羊膜组织膜片

人羊膜的选材严格遵循供体符合医学标准并建立资料档案；取供体符合医学标准剖腹产或正常分娩的胎膜，在胎膜娩出5～10分钟内，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水反复漂洗后，将羊膜剪成膜片并用无菌缝合线对基底膜面层进行标记；用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水浸泡30～40分钟；置入一盛有含4%～100%甘油的磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水混合液75ml～150ml无菌细胞培养瓶或塑料袋中，置于-20℃～-80℃冰箱中冷冻保存；

（2）人羊膜片表面修饰固定

对人羊膜片中的胶原进行固定处理，固定处理是用京尼平对膜片中的胶原进行固定，京尼平的分子式为：C₁₁H ₁₄O₅ ，采用0.5%-0.625% 京尼平溶液，在37℃，交联羊膜24h-48h，将羊膜均匀浸入0.5%-0.625%，pH值7.4京尼平溶液中，37℃ 交联羊膜24h -48h，整个交联过程在恒温振荡器中进行, 以便交联液与羊膜组织更加充分和均匀地接触，用磷酸盐缓冲液漂洗交联后的羊膜，室温条件下浸泡于磷酸盐缓冲液中备用；

（3）制备带有上皮面和基质面标记人羊膜片敷料

采用可标记人羊膜面专用刀具，将上述固定处理后的人羊膜组织膜片切割成直角梯形，制备出带有上皮面和基底面标记人羊膜敷料成品；

（4）人羊膜敷料成品的储存

将（3）获得的人羊膜辅料成品，置入一盛有含4%～100%甘油的磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水混合液75ml～150ml无菌细胞培养瓶或双层塑料袋包装，用钴60 辐照灭菌，辐照剂量为25kGy～35kGy处理后，置于-20℃～-80℃深低温冰箱冷冻储存，备用；

（5）人羊膜敷料的表面修饰和使用

人羊膜敷料使用前室温解冻后，用0.9%生理盐水冲洗后应用；使用时通过直角梯形斜边在右手边很容易的分辨出人羊膜辅料的上皮面，将羊膜敷料紧密敷贴在创面上，二者之间避免有气泡，人羊膜敷料大于创面外缘1cm，自然晾干或吹干，当创面渗出较多、创面上的羊膜敷料出现漂浮或自行脱落时，更换羊膜敷料，当羊膜敷料与创面紧密贴敷后，不再更换羊膜敷料，直至创面完全愈合时羊膜敷料已全部脱落。

本发明的有益效果是：

本发明通过采用人羊膜专用刀具，将人羊膜组织膜片切割成直角梯形，使切割后的人羊膜不仅有直角梯形规则的形状，同时，还使切割后的人羊膜具有方向性，直角梯形的斜边处于右手边，这就很容易的区分出人羊膜的上皮面和基底面，解决了人羊膜不好区分正反面的问题，为人羊膜的开发利用奠定了基础。本发明制备的人羊膜敷料尤其适合于藏毛窦及肛周疾病手术后创面治疗和其它深且不规则、凸凹不平创面以及难包扎的治疗。人羊膜敷料可塑型与藏毛窦及肛周疾病手术后各种创面形状相似的膜面，能紧贴创面，低免疫源性，组织相容性好，可参与手术后创面的愈合过程，有利于创面愈合，同时具有良好的透气性和细菌滤除性，止痛效果好，对藏毛窦及肛周疾病手术后创面起良好的保护和治疗作用，具有较好的韧度和强度，使用方便即可贴敷使用，也可手术缝合使用。

附图说明

图1 为本发明人羊膜生物敷料的结构示意图。

图2为本发明专用刀具的结构示意图。

图3为图2的俯视图。

图中，1、人羊膜生物敷料，2、筒体，3、刀刃。

具体实施方式

下面结合附图和实施例详细描述本发明。

实施例1

如图1所示，本发明人羊膜生物敷料1为带有上皮面和基质面标记的直角梯形。

如图2-3所示，本发明人羊膜专用刀具是由不锈钢薄板围成的直角梯形筒体2，即筒体2的横截面为直角梯形，筒体2的一端设置有刀刃3。

本发明肛门和肛周术后创面生物敷料的制备方法，包括下述步骤：

（1）制备人羊膜组织膜片

人羊膜的选材严格遵循供体符合医学标准并建立资料档案；取供体符合医学标准剖腹产或正常分娩的胎膜，在胎膜娩出5～10分钟内，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水反复漂洗后，将羊膜剪成膜片并用无菌缝合线对基底膜面层进行标记；用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水浸泡30～40分钟；置入一盛有含4%～100%甘油的磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水混合液75～150ml无菌细胞培养瓶或塑料袋中，置于-20℃～-80℃冰箱中冷冻保存；

（2）人羊膜片表面修饰固定

对人羊膜片中的胶原进行固定处理，固定处理是用京尼平对膜片中的胶原进行固定，以提高其厚度和机械强度，京尼平的分子式为：C₁₁H ₁₄O₅ ，采用0.5%-0.625% 京尼平溶液，在37℃，交联羊膜24-48h，将羊膜均匀浸入0.5%-0.625%，pH值7.4京尼平溶液中，37℃ 交联羊膜24-48h，整个交联过程在恒温振荡器中进行, 以便交联液与羊膜组织更加充分和均匀地接触，用磷酸盐缓冲液（PBS）漂洗交联后的羊膜，室温条件下浸泡于磷酸盐缓冲液（PBS）中备用；

（3）制备带有上皮面和基质面标记人羊膜片敷料

采用可标记人羊膜面专用刀具，将上述人羊膜组织膜片切割成直角梯形，制备出带有上皮面和基底面标记人羊膜敷料成品；

（4）人羊膜敷料成品的储存

将（3）获得的人羊膜辅料成品，置入一盛有含4%～100%甘油的磷酸盐缓冲液（PBS）或0.9%生理盐水混合液75～150ml无菌细胞培养瓶或双层塑料袋包装，用钴60 辐照灭菌，辐照剂量为25～35kGy处理后，置于-20℃～-80℃深低温冰箱冷冻储存，备用；

（5）人羊膜敷料的表面修饰和使用

人羊膜敷料使用前室温解冻后，用0.9%生理盐水冲洗后应用；使用时通过直角梯形斜边在右手边很容易的分辨出人羊膜辅料的上皮面，将羊膜敷料紧密敷贴在创面上，二者之间避免有气泡，创面不另行包扎，人羊膜敷料要大于创面外缘1cm，自然晾干或吹干，以避免人羊膜敷料的自然滑脱而影响人羊膜的治疗效果，当创面渗出较多、创面上的羊膜敷料出现漂浮或自行脱落时，更换羊膜敷料，当羊膜敷料与创面紧密贴敷后，不再更换羊膜敷料，直至创面完全愈合时羊膜敷料已全部脱落。

实施例2

本发明人羊膜生物敷料临床试验1

藏毛窦（Pilonidal sinus）是皮肤内含有毛发的一种慢性窦道。最常见于肛门后骶尾骨处背侧。大多发病于青壮年。尤其好发在20～30岁肥胖和毛发浓密的男性。临床表现为骶尾部一个急性脓肿，穿破后形成慢性窦道，或暂时愈合，终又穿破，如此反复发作。由于其容易反复发作。因此常常需要进行手术治疗。手术后遗留较大深且不规则创面，创面愈合时间长，平均需要50天左右，尤其是敞开不易缝合创面换药时疼痛难忍，临床疼痛评分8-9分，给患者造成极大的痛苦。其手术后创面的治疗问题一直困扰着医生和患者。因此，临床亟需藏毛窦手术后创面治疗新技术。

临床试验：因骶尾部皮下存在感染，腰椎穿刺可能将感染带入椎管内，患者采用局麻。1.手术治疗: 本组患者采用改良式病灶切除和创面敞开引流，先探查病变范围大小( 可予0.9%氯化钠注射液+亚甲蓝注射液2∶ 1稀释液自瘘口加压注入，将瘘道和病变组织染色) ，设计手术切口，切除窦道、瘢痕组织和皮肤，然后电刀电凝彻底破坏染色组织，靠近椎骨时，避免电刀烫伤骶筋膜，仔细止血。2.换药治疗:（1）取供体符合医学标准剖腹产分娩的胎膜，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液（PBS）水反复漂洗后，用人羊膜专用刀具，将上述人羊膜组织膜片切割成直角梯形对羊膜面进行标记；用京尼平对膜片中的胶原进行固定。以提高其厚度和机械强度。用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡30分钟；置入含100 %甘油的磷酸盐缓冲液（PBS）混合液150ml双层塑料袋包装，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；将上述方法制得的人羊膜组织膜片，用钴60辐照灭菌处理后，辐照剂量25kGy，获得医用人羊膜组织膜片，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；即制备出人羊膜组织膜片备用。

（2）将上述库储存羊膜室温解冻后备用。将肛肠外科藏毛窦术后创面4×4×3 cm³用消毒纱布浸沾干创面后，开始贴敷膜片，取大于创面外缘1cm的膜片即梯形上底边大于5cm，下底边大于6.5cm膜片，直角梯形标记将膜片斜边于手术者右手边即可使基底膜面贴敷与创面，并使羊膜组织膜片与创面紧密贴敷之间无气泡，观察至创面晾干或湿润无大量渗出物即可。膜片外不需要用其他任何敷料再行对创面进行包扎，患者膜片贴敷后，疼痛明显减轻，临床疼痛评分1-2分或无疼痛。身体活动不受限。急性创面经局部消毒处理后使用该膜片仅需贴敷一次或二次即可直至创面愈合，无须反复换药。

实施例3

本发明人羊膜生物敷料临床试验2

肛裂是肛管皮肤全层裂开，继发感染的慢性溃疡。85％发生在肛门后正中位置。手术治疗：1.麻醉：骶麻或局麻；2.扩肛：用手指扩，扩到2～4指或用扩肛器扩，扩4～5分钟解除痉挛；3.肛裂切除：切除肛裂、前哨痔、肥大肛乳头、有疤痕的外括约肌；4.内括约肌切断术：侧方或后正中切除，内括约肌0.5cm，止血。

手术后创面换药治疗:（1）取供体符合医学标准剖腹产分娩的胎膜，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液（PBS）水反复漂洗后，用人羊膜专用刀具，将上述人羊膜组织膜片切割成直角梯形对羊膜面进行标记；用京尼平对膜片中的胶原进行固定。以提高其厚度和机械强度。用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡30分钟；置入含100 %甘油的磷酸盐缓冲液（PBS）混合液150ml塑料袋中，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；将上述方法制得的人羊膜组织膜片，用钴60辐照灭菌处理后，辐照剂量25kGy，获得医用人羊膜组织膜片，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；即制备出人羊膜组织膜片备用。

（2）将上述库储存羊膜室温解冻后备用。将肛肠外科肛裂术后1×1×2.5 cm³创面用消毒纱布浸沾干创面后，开始贴敷膜片，取大于创面外缘1cm的膜片即梯形上底大于3cm，下底大于4.5cm的膜片，直角梯形标记将膜片斜边于手术者右手边即可使基底膜面贴敷与创面，并使羊膜组织膜片与创面紧密贴敷之间无气泡，观察至创面晾干或湿润无大量渗出物即可。膜片外不需要用其他任何敷料再行对创面进行包扎，患者膜片贴敷后，疼痛明显减轻，临床疼痛评分1-2分或无疼痛。身体活动不受限。急性创面经局部消毒处理后使用该膜片仅需贴敷一次或二次即可直至创面愈合，无须反复换药。

实施例4

本发明人羊膜生物敷料临床试验3

痔是直肠粘膜下或肛管皮肤下的痔静脉丛淤血、扩张和屈曲形成的柔软静脉团。痔分类为内痔；外痔和混合痔。手术切除适应用于混合痔及Ⅲ期内痔。局麻或鞍麻；痔外缘“V” 字切口，剥离到痔根部，结扎切除痔，粘膜用肠线缝合，皮肤不缝，止血；痔环切除术：适用于环状痔仔细止血。

换药治疗:（1）取供体符合医学标准剖腹产分娩的胎膜，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液（PBS）水反复漂洗后，用人羊膜专用刀具，将上述人羊膜组织膜片切割成直角梯形对羊膜面进行标记；用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡30分钟；用京尼平对膜片中的胶原进行固定。以提高其厚度和机械强度。置入含100 %甘油的磷酸盐缓冲液（PBS）混合液150ml塑料袋中，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；将上述方法制得的人羊膜组织膜片，用钴60辐照灭菌处理后，辐照剂量25kGy，获得医用人羊膜组织膜片，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；即制备出人羊膜组织膜片备用。

（2）将上述库储存羊膜室温解冻后备用。将肛肠外科痔术后创面1.5×3×0.5 cm³用消毒纱布浸沾干创面后，开始贴敷膜片，取大于创面外缘1cm的膜片即梯形上底边大于2.5cm，下底边大于4.5cm的膜片，直角梯形标记将膜片斜边于手术者右手边即可使基底膜面贴敷与创面，并使羊膜组织膜片与创面紧密贴敷之间无气泡，观察至创面晾干或湿润无大量渗出物即可。膜片外不需要用其他任何敷料再行对创面进行包扎，患者膜片贴敷后，疼痛明显减轻，临床疼痛评分1-2分或无疼痛。身体活动不受限。急性创面经局部消毒处理后使用该膜片仅需贴敷1次或2次即可直至创面愈合，无须反复换药。

实施例5

本发明人羊膜生物敷料临床试验4

肛瘘是肛管或直肠下端与肛门周围皮肤相通的瘘管。瘘管切开术适应症用于低位肛瘘。手术方法：局麻或骶麻，切开瘘管，剪去少许皮肤，刮尽瘘管的肉芽组织，仔细止血。

换药治疗:（1）取供体符合医学标准剖腹产分娩的胎膜，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液（PBS）水反复漂洗后用人羊膜专用刀具，将上述人羊膜组织膜片切割成直角梯形对羊膜面进行标记；用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡30分钟；对人羊膜片表面修饰固定，对膜片中的胶原进行固定。所述固定处理是用京尼平对膜片中的胶原进行固定。以提高其厚度和机械强度。将获得膜片置入含100 %甘油的磷酸盐缓冲液（PBS）混合液150ml塑料袋中，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；将上述方法制得的人羊膜组织膜片，用钴60辐照灭菌处理后，辐照剂量25kGy，获得医用人羊膜组织膜片，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；即制备出人羊膜组织膜片备用。

（2）将上述库储存羊膜室温解冻后备用。将肛肠外科肛瘘术后1.5×5×3 cm³用消毒纱布浸沾干创面后，开始贴敷膜片，取大于创面外缘1cm的膜片即梯形上底边大于2.5cm，下底边大于6.5cm的膜片，直角梯形标记将膜片斜边于手术者右手边即可使基底膜面贴敷与创面，并使羊膜组织膜片与创面紧密贴敷之间无气泡，观察至创面晾干或湿润无大量渗出物即可。膜片外不需要用其他任何敷料再行对创面进行包扎，患者膜片贴敷后，疼痛明显减轻，临床疼痛评分1-2分或无疼痛。身体活动不受限。急性创面经局部消毒处理后使用该膜片仅需贴敷3次或4次即可直至创面愈合，无须反复换药。

实施例6

本发明生人羊膜物敷料临床试验5

外科手术后切口不愈合创面，不愈合渗出液多创面进行常规清创，剔除坏死的表皮和脓性分泌物。

换药治疗:（1）取供体符合医学标准剖腹产分娩的胎膜，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液（PBS）水反复漂洗后用人羊膜专用刀具，将上述人羊膜组织膜片切割成直角梯形对羊膜面进行标记；用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡30分钟；置入含100 %甘油的磷酸盐缓冲液（PBS）混合液150ml塑料袋中，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；将上述方法制得的人羊膜组织膜片，用钴60辐照灭菌处理后，辐照剂量25kGy，获得医用人羊膜组织膜片，置于-80℃深低温冰箱中冷冻保存；即制备出人羊膜组织膜片备用。

（2）将上述库储存羊膜室温解冻后备用。将外科术后不愈合渗出液多创面进行常规清创，剔除坏死的表皮和脓性分泌物，清创后创面1×1×2 cm³用消毒纱布浸沾干创面后，开始贴敷膜片，取大于创面外缘1cm的膜片，即梯形上底边大于2.5cm，下底边大于6.5cm的膜片，直角梯形标记将膜片斜边于手术者右手边即可使基底膜面贴敷与创面，并使羊膜组织膜片与创面紧密贴敷之间无气泡，观察至创面晾干或湿润无大量渗出物即可。膜片外不需要用其他任何敷料再行对创面进行包扎，患者膜片贴敷后，疼痛明显减轻，临床疼痛评分1-2分或无疼痛。身体活动不受限。急性创面经局部消毒处理后使用该膜片仅需贴敷3次或4次即可直至创面愈合，无须反复换药。

Claims

1.一种肛门和肛周术后创面生物敷料，其特征在于：人羊膜敷料为带有上皮面和基质面标记的直角梯形。

2.一种肛门和肛周术后创面生物敷料的制备方法，包括下述步骤：

（1）制备人羊膜组织膜片

人羊膜的选材严格遵循供体符合医学标准并建立资料档案；取供体符合医学标准剖腹产或正常分娩的胎膜，在胎膜娩出5～10分钟内，从胎膜上钝性分离羊膜；用磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水反复漂洗后，将人羊膜剪成膜片并用无菌缝合线对基底膜面层进行标记；用含1000U/ml庆大霉素和2.5μg/ml二性霉素B的磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水浸泡30～40分钟；置入一盛有含4%～100%甘油的磷酸盐缓冲液或0.9%生理盐水混合液75ml～150ml无菌细胞培养瓶或塑料袋中，置于-20℃～-80℃冰箱中冷冻保存；

（2）人羊膜片表面修饰固定

对人羊膜片中的胶原进行固定处理，固定处理是用京尼平对膜片中的胶原进行固定，以提高其厚度和机械强度，京尼平的分子式为：C₁₁H ₁₄O₅ ，采用0.5%-0.625% 京尼平溶液，在37℃，交联羊膜24-48h，将羊膜均匀浸入0.5%-0.625%，pH值7.4京尼平溶液中，37℃ 交联羊膜24-48h，整个交联过程在恒温振荡器中进行, 以便交联液与羊膜组织更加充分和均匀地接触，用磷酸盐缓冲液漂洗交联后的羊膜，室温条件下浸泡于磷酸盐缓冲液中备用；

（3）制备带有上皮面和基质面标记人羊膜片敷料

（4）人羊膜敷料成品的储存

（5）人羊膜敷料的表面修饰和使用

人羊膜敷料使用前室温解冻后，用0.9%生理盐水冲洗后应用；使用时通过直角梯形斜边在右手边很容易的分辨出人羊膜辅料的上皮面，将人羊膜敷料紧密敷贴在创面上，二者之间避免有气泡，人羊膜敷料大于创面外缘1cm，自然晾干或吹干，当创面渗出较多、创面上的羊膜敷料出现漂浮或自行脱落时，更换羊膜敷料，当羊膜敷料与创面紧密贴敷后，不再更换羊膜敷料，直至创面完全愈合时羊膜敷料已全部脱落。