CN103371143A - 一种防治蔬菜细菌性病害的杀菌剂的使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于防治蔬菜细菌性病害的药剂的使用方法，属植物化学保护领域，其特征在于活性成分为2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇，通过植株整体喷施有效浓度1000μg/ml的药剂，可以有效防治蔬菜细菌性病害。本发明的药剂对由假单胞菌属(Pseudomonas)、噬酸菌属(Acidovorax)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、欧文氏菌属(Erwinia)、棍状杆菌属(Clavibacter)引起的蔬菜细菌性病害具有明显的预防和治疗效果，为生产中控制蔬菜细菌性病害的发生和发展提供了新的技术支持。
Description
技术领域
本发明属于植物化学保护领域，特别是涉及防治蔬菜细菌性病害。
背景技术
蔬菜细菌性病害是蔬菜的三大病害之一，迄今已知由细菌引起的病害超过500种，我国有70种以上，其中青枯病、软腐病、马铃薯环腐病以及水稻自叶枯病等都是世界性重要病害(王金生，2000；刘学敏，2009)。由于栽培品种的增多和栽培制度的多样化，近几年细菌病害的种类和为害程度一直呈上升趋势，造成了巨大的经济损失。我国每年茄果类蔬菜青枯病、番茄溃疡病等严重的病害在高温多雨季节引起茄科植物的发病率高达60％～100％，损失惨重(廖咏梅，2007)。2000年内蒙古巴彦淖尔盟厚皮甜瓜细菌性果斑病大发生，平均减产46％，商品瓜率仅有1/3，果农损失惨重。细菌性病害具有侵染途径多样，传播速度快、防治困难等特点，严重制约着蔬菜产业的健康有序发展。
目前，蔬菜细菌性病害的防治，主要商品药剂为抗生素、铜制剂及噻枯唑等少量化学药剂，但他们都存在长期使用，具有一定抗药性风险等问题，且部分药剂具有很高的药害风险等，因此迫切需要一种新型广谱性且环境友好型杀细菌剂。
溴硝醇是一种高效广谱性杀菌剂，早期用于化妆品防腐、牛奶保鲜防腐及医用外伤处理剂。近些年来被广泛应用到水处理、医药、化妆品、洗涤剂、农药等行业。目前使用溴硝醇处理水稻种子能有效预防水稻恶苗病的发生和发展，取得了良好的防治效果，据国外报道使用溴硝醇处理棉花种子，可以防治棉花角斑病菌引起的棉花黑臂病、细菌性凋枯病(司乃国，1989)。然而针对该杀菌剂在蔬菜细菌性病害上的使用方法，现有技术没有报道。
针对目前市场上缺乏对蔬菜细菌性病害的防治药剂，本发明提供一种广谱的防治蔬菜细菌性病害的药剂及其使用方法，适当时期对植株进行整体喷雾施药，可以有效降低蔬菜细菌性病害的发生和发展，防治效果超过85％，明显优于常用的杀细菌剂，且降解产物在环境中残留时间短，对环境和人畜无毒，是良好的环境友好型药剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型的杀细菌剂，在1000μg/ml的浓度下植株整体喷施，对蔬菜细菌性病害具有广谱的防治效果。
本发明药剂的有效成分为溴硝醇，2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇(2-Bromo-2-nitro-1，3-propanediol)，其化学结构式为：
本发明应用1000μg/ml的处理浓度，在平板试验中可以完全抑制病原细菌的生长，盆栽试验中溴硝醇在1000μg/ml浓度下防治效果可以高达85％以上。病原细菌包括5个属：假单胞菌属(Pseudomonas)、食酸菌属(Acidovorax)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、欧文氏菌属(Erwinia)、棍状杆菌属(Clavibacter)。
本发明对蔬菜细菌性病害5个属均具有明显的预防和治疗作用，这可能与溴硝醇的抗菌机理有关，溴硝醇对革兰氏阴性和阳性细菌均有效果，其活性因子溴原子可以氧化细菌细胞膜表面的硫醇基，使之成为二硫化合物，在细胞壁产生特大突起破裂，内溶物外流杀死细菌。另一可能的途径是释放出的活化溴素，与细胞膜蛋白质结合，形成氮-溴化合物，引起细菌死亡。此外，溴硝醇分解时释放出的甲醇也可使细菌蛋白凝固，从而起到杀菌作用(郭丽君，2007)。
需要特别指出的是，本发明尽管在实施中详尽的描述溴硝醇对部分蔬菜细菌性病害种类的防治，然而并不意味本发明仅限于实例中所例举的病害，同属内其他细菌性病害的防治应用，均包括在本发明之内。
1培养基的制备
NA培养基：蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，NaCl 5.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000ml，pH＝7.2
2菌株的准备
假单胞菌属(Pseudomonas)：番茄细菌性斑点病(Pseudomonas syringae pv.Tomota)、番茄假单胞果腐病(Pseudomonas fluorescers biovar II)、番茄髓部坏死病(Pseudomonas corrugataRoberts et Scarlett)、茄子青枯病(Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith)、茄子细菌性褐斑病(Pseudomonas cichorii(Swingle)Stapp)、辣椒细菌性叶斑病(Pseudomonas syringae pv.aptata)、辣椒果实细菌性黑斑病(P.viridiflava(Burkholder))、黄瓜细菌性角斑病(Pseudomonassyringae pv.lachrymans(Smith et Bryan))、黄瓜细菌性缘枯病(Pseudomonas marginalis pv.marginalis(Brown)Stevens)、菜豆细菌性晕疫病(Pseudomonas syringae pv.Phaseolicola)、蚕豆假单胞叶烧病(Pseudomonas viciae Uyede)、豌豆细菌性叶斑病(Pseudomonas syringae pv.pisi(Sackett))、菜用大豆细菌性疫病(P.glycinea var.japonica(T)Savulescu)、菜豆细菌叶斑病(Pseudomonas syringae pv.syringae van Hall)；食酸菌属(Acidovorax)：西瓜细菌性果斑病(Acidovorax avenae subsp.citrulli)；黄单胞菌属(Xanthomonas)：番茄疮痂病(Xanthomonasvesicetoria Vauterin et al.)、甘蓝黑腐病(Xanthomonas campestris pv.campestris)、黄瓜细菌性圆斑病(X.cucurbitae(Bryan)Dowson)、菜豆细菌性疫病(Xanthomonas axonopodis pv.phaseohiVauterin et al.)、菜用大豆细菌叶烧病(Xanthomonas axonopodis pv.glycines Vauterin et al.)、黄秋葵细菌性角斑病(X.malvacearum(Smith)Dowson)；欧文氏菌属(Erwinia)：番茄软腐病(Erwinia carotovara subsp.carotovara(Jones)Bergey et al.)、甘蓝黑胫病(Erwinia carotovarasubsp.atroseptica)，西瓜细菌枯萎病(Erwinia tracheiphila(Smith)Bergey et al.)和棍状杆菌属(Clavibacter)：马铃薯软腐病(Clavibacter michiganense subsp.sepedonicum)、番茄溃疡病(Clavibacter michiganense subsp.michiganensis(Smith)Davis et al.)。
3病原菌的准备
将菌株活化、转接到NA斜面培养基中，培养24h后，制备菌悬液，菌悬液浓度为3×108cfu/ml
4病原菌平板抑制测定
在无菌条件下，将供试药剂分别配制成浓度为500μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml处理细菌，并选取不同的处理时间，取各浓度处理液100μl在培养基中均匀涂布，每个处理5个皿，每个浓度3次重复，28℃恒温培养48h后，记录结果。
病原菌抑制率分级标准：
++++：细菌完全生长，无灭杀作用；
+++：有3/4以内的细菌生长，杀菌作用为25％；
++：有1/2以内的细菌生长，杀菌作用为50％；
+：有1/4以内的细菌生长，杀菌作用为75％；
-：细菌不生长，杀菌作用为100％
5活体盆栽防治效果测定
将试验菌株接种到寄主植物上，接种浓度为3×108cfu/ml，2h后喷施不同浓度的溴硝醇溶液(500μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml)保湿48h，置于25-30℃温室中，接种后10天调查叶片发病情况，计算防治效果。2011年7月20日接种，2011年7月30调查。
本发明明确了该药剂针对蔬菜常见的几种细菌性病害的特殊效果，明确其作用浓度和给药方式。应用溴硝醇1000μg/ml对植株进行整体施药，该技术可以应用于蔬菜细菌性病害的防治，其防治效果明显优于3％中生菌素可湿性粉剂和77％氢氧化铜可湿性粉剂，防治效果高达85％以上，可为蔬菜细菌性病害的防控提供技术性保障，具有实际应用价值，且成本较低，具有广阔的市场前景。
具体实施方式：
以下叙述本发明的实施例，应该说明的是，本发明的实施对于本发明只有说明作用，而没有限制作用。
实施例1
根据不同浓度的溴硝醇在平板试验中对病原菌的抑菌活性的结果判定，该药剂对细菌具有明显的抑制效果，溴硝醇的浓度在500μg/ml或800μg/ml的浓度下并不能完全抑制试验中所有菌株的生长，但当溴硝醇浓度达到1000μg/ml时，试验中所有菌株受到完全抑制，这表明溴硝醇在1000μg/ml的浓度下对蔬菜病原细菌均有明显的抑制效果，而对照药剂3％中生菌素可湿性粉剂和77％氢氧化铜可湿性粉剂在推荐的使用剂量下均不能达到完全抑制的效果。
表1溴硝醇不同浓度对病原菌的抑制效果
实施例2
根据溴硝醇不同浓度活体试验中的结果判定(表2)其防治效果，当溴硝醇浓度超过1000μg/ml时，试验中对各种病害的防治效果均超过85％，且与1500μg/ml浓度下防治效果差异不显著，表明在1000μg/ml浓度下，溴硝醇对蔬菜细菌性病害具有广谱的杀菌效果，且防治效果明显高于对照药剂3％中生菌素可湿性粉剂和77％氢氧化铜可湿性粉剂。
表2溴硝醇不同浓度下对细菌性病害的活体盆栽试验结果调查
实施例3
田间药效试验中，溴硝醇用药量为30-45g/亩，对照药剂77％氢氧化铜WP按照推荐用药量为30g/亩，发病初期植株整体喷施，试验菌株包括：假单胞菌属(Pseudomonas)中由青枯假单胞杆菌(Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith)引起的茄子青枯病，食酸菌属(Acidovorax)中由燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli)引起的西瓜细菌性果斑病，黄单胞菌属(Xanthomonas)中由油菜黄单胞菌黄瓜致病变种(X.cucurbitae(Bryan)Dowson)引起的黄瓜细菌性圆斑病，欧文氏菌属(Erwinia)中由胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐致病型(Erwinia carotovara subsp.carotovara(Jones)Bergey et al.)引起的番茄软腐病，棍状杆菌属(Clavibacter)中由密执安棒杆菌(Clavibacter michiganense subsp.michiganensis(Smith)Davis et al.)引起的番茄溃疡病。在茄子青枯病、西瓜细菌性果斑病、黄瓜细菌性圆斑病、番茄软腐病和番茄溃疡病五种病害的大田试验中，当溴硝醇用药量为45g/亩下防治效果分别为80.34％、92.05％、78.67％、88.61％、85.34％，对照药剂77％氢氧化铜WP用药量为30g/亩下防效分别为35.26％、26.35％、39.61％、46.21％和27.68％。
大田试验结果表明，溴硝醇使用量为30-45g/亩，对蔬菜细菌性病害具有广谱的灭杀效果，可以有效的降低病害的发生和发展。
Claims (5)
1.一种防治蔬菜病害的广谱杀细菌剂，其活性成分为2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇，采用植株整体喷施的方法，防治蔬菜多个属的细菌性病害。
2.根据权利要求1所述防治蔬菜细菌性病害的使用方法，其特征在于：溴硝醇有效浓度为1000μg/ml，整株施药。
3.根据权利要求2所述防治蔬菜细菌性病害的方法，其特征在于：所述蔬菜细菌性病害包括：假单胞菌属(Pseudomonas)的丁香假单胞菌番茄变种(Pseudomonas syringae pv.Tomota)，如：番茄细菌性斑点病；假单胞菌属荧光假单胞菌生物型II(Pseudomonas fluorescersbiovar II)如：番茄假单胞果腐病；皱纹假单胞菌(Pseudomonas corrugata Roberts et Scarlett)，如：番茄髓部坏死病；青枯假单胞杆菌(Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith)，如：茄子青枯病等；菊苣假单胞菌(Pseudomonas cichorii(Swingle)Stapp)如：茄子细菌性褐斑病；丁香假单胞菌适合致病变种(Pseudomonas syringae pv.aptata)，如：辣椒细菌性叶斑病；绿黄假单胞菌(P.viridiflava(Burkholder))，如：辣椒果实细菌性黑斑病等；丁香假单胞菌流泪致病变种(Pseudomonas syringae pv.lachrymans(Smith et Bryan))，如：黄瓜细菌性角斑病、菜瓜细菌性角斑病等；边缘假单胞菌边缘假单胞致病型(Pseudomonas marginalis pv.marginalis(Brown)Stevens)，如：黄瓜细菌性缘枯病；丁香假单胞菌菜豆致病变种(Pseudomonas syringaepv.Phaseolicola)，如：菜豆细菌性晕疫病；蚕豆叶烧假单胞菌(Pseudomonas viciae Uyede)，如：蚕豆假单胞叶烧病；丁香假单胞菌豌豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.pisi(Sackett))，如：豌豆细菌性叶斑病；丁香假单胞菌大豆致病变种(P.glycinea var.japonica(T)Savulescu)，如：菜用大豆细菌性疫病；丁香假单胞丁香致病变种(Pseudomonas syringae pv.syringae vanHall)，如：菜豆细菌叶斑病；食酸菌属(Acidovorax)燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenaesubsp.citrulli)，如：西瓜细菌性果斑病；黄单胞菌属(Xanthomonas)疱斑黄单胞菌(Xanthomonas vesicetoria Vauterin et al.)如：番茄疮痂病；野油菜黄单胞菌野油菜黑腐致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris)，如：甘蓝黑腐病；油菜黄单胞菌黄瓜致病变种(X.cucurbitae(Bryan)Dowson)，如：黄瓜细菌性圆斑病；地毯黄单胞杆菌菜豆致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.phaseohi Vauterin et al.)，如：菜豆细菌性疫病；地毯黄单胞菌大豆致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.glycines Vauterin et al.)，如：菜用大豆细菌性叶烧病；油菜黄单胞菌锦葵致病变种(X.malvacearum(Smith)Dowson)，如：黄秋葵细菌性角斑病；欧文氏菌属(Erwinia)，胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜软腐致病型(Erwinia carotovara subsp.carotovara(Jones)Bergey et al.)，如：番茄软腐病、甜瓜细菌性软腐病；瓜萎蔫病欧文氏菌(Erwinia tracheiphila(Smith)Bergey et al.)，如：西瓜细菌枯萎病；胡萝卜软腐欧文氏菌黑胫亚种(Erwinia carotovara subsp.atroseptica)，如：甘蓝黑胫病；棍状杆菌属(Clavibacter)密执安棒杆菌马铃薯环腐致病型(Clavibacter michiganense subsp.sepedonicum)，如，马铃薯软腐病；密执安棒杆菌(Clavibacter michiganense subsp.michiganensis(Smith)Davis et al.)，如：番茄溃疡病。
4.根据权利要求2或3所述用于防治蔬菜细菌性病害的方法，其特征在于：其使用量为30-45g/亩。
5.根据权利要求4所述用于防治蔬菜细菌性病害的方法，其特征在于：用于防治蔬菜细菌性病害，在发病前期或发病初期使用。
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