CN103348846B - 一种云贵水韭的繁殖方法 - Google Patents
一种云贵水韭的繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103348846B CN103348846B CN201310253709.8A CN201310253709A CN103348846B CN 103348846 B CN103348846 B CN 103348846B CN 201310253709 A CN201310253709 A CN 201310253709A CN 103348846 B CN103348846 B CN 103348846B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- guizhou
- quillwort
- yunnan
- megaspore
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- Y02P60/216—
Landscapes
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
本发明公开了一种云贵水韭的繁殖方法，是将云贵水韭的孢子消毒后接种在培养盒中进行培养，再经移栽和人工培养池定植管理，最终获得成熟孢子体。本发明方法用少量的孢子材料即可较快繁育出大量孢子体，70天即可获得幼孢子体苗，210天即可获得成熟孢子体，定植成活率可达50％。本发明实现了云贵水韭的规模化繁殖，弥补了以往只能从野生环境中获取云贵水韭资源的不足，从而满足了科研活动对云贵水韭资源的需求，使云贵水韭的迁地保护成为可能，同时可减少对其野生资源和环境的破坏，具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的繁殖方法，尤其是涉及一种云贵水韭的繁殖方法。
背景技术
水韭属(Isoetes)是水韭科(Isoetaceae)的孑遗属，是一类古老的水生或半水生蕨类植物，起源于泥盆纪晚期和石炭纪早期之间，在植物学研究中具有重要价值。水韭属植物茎短粗，叶狭长，叶基部生有孢子囊，产生大孢子和小孢子，两种孢子分别形成雌、雄配子体，相互配合完成有性生殖过程。全世界水韭属植物仅有200种左右，主要产于北半球。我国所产水韭属植物仅有5种，均为国家一级保护植物、极度濒危，主要分布于长江流域以南的亚热带或热带地区。近年来，随着人类活动对其生存环境的破坏，中国水韭属植物的分布范围和野外数量锐减。
云贵水韭为国家一级保护植物，极度濒危级(CR)，仅分布于贵州省平坝县和红枫湖两地，野外数量不足50株。耕种、放牧和污染等人类活动因素所导致的生存环境破坏，将使云贵水韭野外资源进一步减少。目前科研活动对云贵水韭资源的需求较大，野外保护和种群恢复也亟需大量云贵水韭植株，但至今尚无云贵水韭规模化繁殖技术问世，这导致野生云贵水韭资源无法得到有效保护。
目前我国产5种水韭中，只有中华水韭(Isoetes sinensis)有性生殖阶段的培养过程得以实现，而且不能完成整个生活史，也不能应用于大规模繁殖生产。云贵水韭的小规模培育和大规模生产均未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种云贵水韭的繁殖方法，实现了云贵水韭的规模化繁殖，弥补了以往只能从野生环境中获取云贵水韭资源的不足，从而满足了科研活动对云贵水韭资源的需求，使云贵水韭的迁地保护成为可能，同时可减少对其野生资源和环境的破坏，具有广泛的应用前景。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种云贵水韭的繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、在培养盒中培养云贵水韭大孢子和小孢子，得到幼孢子体苗，大孢子密度10-30个/cm2，小孢子密度1000-5000个/cm2，先接种大孢子，10天后接种小孢子；
S2、将步骤S1得到的幼孢子体苗移栽到培养基质，并在培养基质中培养所述幼孢子体苗，所述培养基质为暗棕壤与细砂混合而成；
S3、定植步骤S2得到的幼孢子体苗，所述定植过程是在人工培养池中培养云贵水韭的幼孢子体苗，得到成熟孢子体。
进一步的，步骤S1中所述的培养盒为密封良好的透明塑料盒，培养盒底部铺有脱脂棉和滤纸，脱脂棉厚度1.0-2.0cm，脱脂棉和滤纸用pH为5.5-6.5的MS培养基润湿，滤纸铺于脱脂棉上，所述培养盒在使用之前做适当灭菌处理。
进一步的，步骤S1中的所述云贵水韭孢子在培养之前，对其进行消毒处理，所述移栽过程为将上述幼孢子体苗移入暗棕壤与细砂混合而成的培养基质中，暗棕壤与细沙比例范围为3∶1至5∶1，并将温度控制为15-25℃，光照强度为2500-3500Lux(白色光)，光照时间为8-12h/d，空气相对湿度约为75-95％。
进一步的，所述人工培养池主要由无色玻璃箱、照明系统、供水系统和空调组成，所述定植过程为在人工培养池中盛装厚度为25-30cm的土质培养基，所述土质培养基为细砂、田土和暗棕壤混合而成，细沙占20％，暗棕壤和田土比例为1∶1至3∶1，并将云贵水韭幼孢子体苗种植于土质培养基上，调节照明系统、供水系统和空调，使人工培养池内环境条件为：水温20-25℃，水位高度40-50cm，光照强度3000-4000Lux(白色光)，光照时间为8-12h/d，空气相对湿度约为70-85％。
采用了上述技术方案，本发明的有益效果为：本发明以孢子为材料，利用孢子培养技术，再结合对水生蕨类植物的专有栽培管理措施，建立了云贵水韭的孢子繁殖方法。利用本发明的方法，用少量的孢子材料，即可较快繁育出大量孢子体。70天即可获得幼孢子体苗，210天即可得到成熟孢子体植株。本发明弥补了以往只能从野生环境中获取云贵水韭资源的不足，实现了云贵水韭的规模化繁殖，从而满足市场和科研对云贵水韭的需求，同时可减少对其野生资源和环境的破坏。此外，本发明还为开展该物种遗传育种和保护生物学等方面的研究提供了良好的试验体系，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1是本发明实施例培养盒的结构示意图，图中箭头表示光照方向；
图2是本发明实施例人工培养池的结构示意图，图中上盖表示为开启状态；
图中：1.脱脂棉，2.培养盒，3.盒盖，4.空气，5.滤纸，6.微电脑照明时间控制器，7.电源输入端，8.入水管，9.阀门，10.水管，11.上盖，12.电源线，13.荧光灯组，14.培养池，15.空气层，16.水层，17.土层，18.出水管，19.出水管支撑物。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
一种云贵水韭的繁殖方法；具体步骤如下：
(1)培养盒的制作和灭菌
将厚度为1cm的脱脂棉均匀铺于长30cm、宽20cm、高12cm密封良好的透明塑料盒中；然后将一层滤纸铺于脱脂棉上；用MS培养基将脱脂棉和滤纸润湿，用量恰好使脱脂棉和滤纸饱和；得到的即为培养盒(如图1所示)；将培养盒置于灭菌锅中，121℃高压蒸汽灭菌20min。
(2)云贵水韭大孢子的消毒
取云贵水韭大孢子600个置于1.5ml离心管内，滴入无菌水，充分振荡，3000r/min离心3min，弃上清；然后向离心管内滴入约1.0ml含有5g/100mlNaClO的消毒液，对大孢子进行消毒，5min后，3000r/min离心3min，弃上清；最后用无菌水冲洗4次，获得无菌的大孢子。
(3)云贵水韭小孢子的消毒
取云贵水韭小孢子60000个置于1.5ml离心管内，滴入无菌水，充分振荡使成悬浊液，静置1h后，3000r/min离心5min，弃上清；然后向离心管内滴入约1.0ml含5g/100mlNaClO消毒液，对小孢子进行消毒，5min后，3000r/min离心3min，弃上清；最后用无菌水冲洗4次，获得无菌的小孢子悬浊液。
(4)无菌大孢子的接种及培养
将步骤二获得的大孢子均匀接种于步骤一获得的培养盒中，接种密度10-30个/cm2。接种后，置于25℃下，先暗培养10d，然后转至光照条件下继续培养，光照强度为3000Lux(白色光)，光照时间为12h/d，培养盒中空气相对湿度约为95％。
(5)无菌小孢子的接种及培养
从上述大孢子接种当天算起，第10、13、16、19、21、24、27、30、33、36、39天，分别用滴管在无菌条件下将步骤三获得的小孢子悬浊液均匀播种于步骤四获得的、接种过大孢子的培养盒中，接种密度为1000-5000个/cm2，接种后，置于25℃下培养，光照强度为3000Lux(白色光)，光照时间为12h/d，培养盒中空气相对湿度为95％。
(6)云贵水韭幼孢子体苗的移栽及管理
从上述大孢子接种当天算起，第10天大孢子开始萌发，第13天小孢子开始萌发，第25天开始形成雄配子体，第30天开始形成雌配子体，第30-40天发生受精作用，并形成幼孢子体苗；第70天，幼孢子体苗高约1cm，叶数为2个，用镊子轻轻夹出幼孢子体苗，除去脱脂棉纤维，并用无菌水冲洗2次，接种于厚度为5cm的土质培养基中(成分及混合比例为：细砂∶暗棕壤＝1∶4)，并置于25℃下培养，光照强度为3000Lux(白色光)，光照时间为12h/d，空气相对湿度约为95％。
(7)人工培养池的装配
如图2所示，图2中箭头表示水流方向；为表示方便，将上盖表示为开启状态。取长60cm，宽40cm，高70cm的无色玻璃箱(无上盖)三个，标记为A箱、B箱、C箱，并以20cm间隔由左至右摆放于实验台上；在每个玻璃箱左右壁距箱底36cm处，各钻一个直径为2cm的孔；A箱左壁的孔为进水口，与进水管和供水阀门相连；各箱之间的孔以塑料软管相连；C箱右壁的孔为出水口，与长50cm的塑料出水管相连。
在各玻璃箱顶部安装可开合的木质上盖，每个上盖向下的面安装10只小型荧光灯管，所有荧光灯管均为并联，接于微电脑时控开关的输出端；微电脑时控开关的输入端与电源串联。
在每个玻璃箱底盛装土质培养基(成分及混合比例为：细砂∶田土∶暗棕壤＝1∶2∶3，)，厚度30cm。
接通电源，将微电脑时控开关的开启时间设为8∶00至20∶00。
打开供水阀门使水缓慢流入人工培养池，并将出水塑料软管的管口高度调节为40cm(以池底高度为0cm计)；水先由进水口流入A箱，水位达到35cm后，又通过玻璃箱间的水管依次流入B箱、C箱；90min后水位达到40cm，并从出水管处流出。
培养池一侧放置空调，将温度设定为25℃。
(8)云贵水韭幼孢子体苗的定植及管理
从上述大孢子接种当天算起，第130天，幼孢子体苗高4-5cm，叶数；分株定植于步骤七获得的人工培养池中；培养箱内水温为20℃，光照强度为4000Lux(白色光)，光照时间为12h/d，空气相对湿度约为85％；210天后得到成熟孢子体植株，苗高35-45cm叶数为55-65个；平均定植成活率50％。
结果表明，利用本发明所提供的方法繁殖云贵水韭，70天即可获得幼孢子体苗，210天即可获得成熟孢子体植株。
本发明不局限于上述具体的实施方式，本领域的普通技术人员从上述构思出发，不经过创造性的劳动，所作出的种种变换，均落在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种云贵水韭的繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、分别对云贵水韭大孢子和小孢子消毒，获得无菌大孢子和无菌小孢子；
取云贵水韭大孢子600个置于1.5ml离心管内，滴入无菌水，充分振荡，3000r/min离心3min，弃上清；然后向离心管内滴入1.0ml含有5g/100mlNaClO的消毒液，对大孢子进行消毒灭菌，5min后，3000r/min离心3min，弃上清；最后用无菌水冲洗4次，获得无菌的大孢子；
取云贵水韭小孢子60000个置于1.5ml离心管内，滴入无菌水，充分振荡使成悬浊液，静置1h后，3000r/min离心5min，弃上清；然后向离心管内滴入1.0ml含5g/100mlNaClO消毒液，对小孢子进行消毒灭菌，5min后，3000r/min离心3min，弃上清；最后用无菌水冲洗4次，获得无菌的小孢子悬浊液
S2、在培养盒中培养云贵水韭的无菌大孢子和无菌小孢子，先接种大孢子，10天后接种小孢子；大孢子播种后第10至第39天，每三天将小孢子播种于培养大孢子的培养盒上，共11次，得到幼孢子体苗，其中大孢子接种密度10-30个/cm2，小孢子接种密度1000-5000个/cm2；所述培养盒包括用MS培养基润湿饱和的，厚度为1cm的脱脂棉以及覆盖在脱脂棉上的滤纸；
S3、移栽步骤，用镊子轻轻夹出步骤S2得到的幼孢子体苗，除去脱脂棉纤维，并用无菌水冲洗2次，接种于厚度为5cm的土质培养基中，并在培养基质中培养所述幼孢子体苗，所述培养基质为暗棕壤与细砂混合而成；
S4、定植步骤S3得到的幼孢子体苗，所述定植过程是在人工培养池中培养云贵水韭的幼孢子体苗；所述人工培养池包括：长60cm，宽40cm，高70cm的无色玻璃箱三个，标记为A箱、B箱、C箱，并以20cm间隔由左至右摆放于实验台上，在每个玻璃箱左右壁距箱底36cm处，各钻一个直径为2cm的孔；A箱左壁的孔为进水口，与进水管和供水阀门相连；各箱之间的孔以塑料软管相连；C箱右壁的孔为出水口，与长50cm的塑料出水管相连；在各玻璃箱顶部安装可开合的木质上盖，每个上盖向下的面安装10只小型荧光灯管，所有荧光灯管均为并联，接于微电脑时控开关的输出端；微电脑时控开关的输入端与电源串联；在每个玻璃箱底盛装土质培养基，所述土质培养基的成分及混合比例为：细砂∶田土∶暗棕壤＝1∶2∶3，厚度30cm；
S5、定植后环境控制：
接通电源，将微电脑时控开关的开启时间设为8:00至20:00；
打开供水阀门使水缓慢流入人工培养池，并将出水塑料软管的管口高度调节为40cm；水先由进水口流入A箱，水位达到35cm后，又通过玻璃箱间的水管依次流入B箱、C箱；90min后水位达到40cm，并从出水管处流出；培养池一侧放置空调，将温度设定为25℃；
从上述大孢子接种当天算起，第130天，幼孢子体苗高4-5cm，叶数；分株定植于所述人工培养池中；培养箱内水温为20℃，白色光光照强度为4000Lux，光照时间为12h/d，空气相对湿度为85％；210天后得到成熟孢子体植株。
2.如权利要求1所述的一种云贵水韭的繁殖方法，其特征在于，步骤S2中所述的培养盒为密封良好的透明塑料盒，培养盒底部铺有脱脂棉和滤纸，滤纸铺于脱脂棉上，所述培养盒在使用之前适当做灭菌处理。
3.如权利要求1所述的一种云贵水韭的繁殖方法，其特征在于，步骤S3中的所述云贵水韭孢子在培养之前，对其进行消毒处理，所述移栽过程为将上述幼孢子体苗移入暗棕壤与细砂混合而成的培养基质中，所述暗棕壤与细沙比例范围为3∶1至5∶1，并将温度控制为15-25℃，光照强度为2500-3500Lux的白色光，光照时间为8-12h/d，空气相对湿度为75-95％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310253709.8A CN103348846B (zh) | 2013-06-10 | 2013-06-10 | 一种云贵水韭的繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310253709.8A CN103348846B (zh) | 2013-06-10 | 2013-06-10 | 一种云贵水韭的繁殖方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103348846A CN103348846A (zh) | 2013-10-16 |
| CN103348846B true CN103348846B (zh) | 2015-06-17 |
Family
ID=49305352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310253709.8A Expired - Fee Related CN103348846B (zh) | 2013-06-10 | 2013-06-10 | 一种云贵水韭的繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103348846B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104904585B (zh) * | 2015-06-18 | 2018-09-07 | 深圳市都市田园科技有限公司 | 一种室外培植箱及其室外培植系统 |
| CN105993441A (zh) * | 2016-05-14 | 2016-10-12 | 骆强 | 一种湿地极危植物云贵水韭孢子繁殖方法 |
| CN109006211B (zh) * | 2018-06-25 | 2021-10-19 | 江汉大学 | 一种云贵水韭的迁地保护栽培方法 |
| CN111837775A (zh) * | 2019-08-31 | 2020-10-30 | 哈尔滨师范大学 | 一种培养基质及使用其繁殖中华桫椤方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4138802A (en) * | 1977-11-21 | 1979-02-13 | Weisner Hassel L | Method of growing plants in the roots of a live osmunda fern |
| CN102138431A (zh) * | 2011-04-26 | 2011-08-03 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 盆栽观赏乌蕨的孢子繁殖及养护方法 |
| CN102144490A (zh) * | 2011-01-21 | 2011-08-10 | 李红 | 一种乌蕨孢子繁殖方法 |
| CN102283090A (zh) * | 2011-06-27 | 2011-12-21 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 红盖鳞毛蕨孢子繁殖方法 |
| CN102613075A (zh) * | 2012-03-21 | 2012-08-01 | 江汉大学 | 濒危蕨类植物水蕨的繁育方法 |
| CN102934550A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-02-20 | 雷学军 | 一种桫椤的繁殖与移栽方法 |
-
2013
- 2013-06-10 CN CN201310253709.8A patent/CN103348846B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4138802A (en) * | 1977-11-21 | 1979-02-13 | Weisner Hassel L | Method of growing plants in the roots of a live osmunda fern |
| CN102144490A (zh) * | 2011-01-21 | 2011-08-10 | 李红 | 一种乌蕨孢子繁殖方法 |
| CN102138431A (zh) * | 2011-04-26 | 2011-08-03 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 盆栽观赏乌蕨的孢子繁殖及养护方法 |
| CN102283090A (zh) * | 2011-06-27 | 2011-12-21 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 红盖鳞毛蕨孢子繁殖方法 |
| CN102613075A (zh) * | 2012-03-21 | 2012-08-01 | 江汉大学 | 濒危蕨类植物水蕨的繁育方法 |
| CN102934550A (zh) * | 2012-11-13 | 2013-02-20 | 雷学军 | 一种桫椤的繁殖与移栽方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 珍稀濒危植物—— 中华水韭孢子的无菌培养;刘虹等;《植物生理学通讯》;20031231;第39卷(第5期);第466页第1栏 * |
| 蕨的人工有性繁殖及复壮技术;刘保东等;《哈尔滨师范大学自然科学学报》;19961231;第12卷(第3期);第72－76页 * |
| 鹿角蕨有性世代发育及繁殖技术研究;郭捡等;《中国农学通报》;20121231;第28卷(第28期);第217页第1.3.3节 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103348846A (zh) | 2013-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102119655B (zh) | 铁皮石斛自然光快繁育苗方法 | |
| CN102391980B (zh) | 一种简便、高效诱导辣椒疫霉菌产生游动孢子的方法 | |
| CN103348846B (zh) | 一种云贵水韭的繁殖方法 | |
| CN101116424B (zh) | 高效诱导培养百合小鳞茎的方法 | |
| CN109275557A (zh) | 一种自动化烟草立体漂浮育苗装置和方法 | |
| CN103382443A (zh) | 一种培养微藻的新方法 | |
| CN104273038B (zh) | 一种黄山栾树的组培方法 | |
| CN102823483B (zh) | 利用自然能的重楼种苗快速培育装置及其优化培育方法 | |
| CN204518682U (zh) | 一种智能化乌天麻培养箱 | |
| CN204540053U (zh) | 一种促进植物生长led紫外线光照装置 | |
| CN104137792B (zh) | 珍珠工厂化室内养殖系统 | |
| CN102524058A (zh) | 一种粤紫萁组织培养的方法 | |
| CN104026082B (zh) | 一种造礁石珊瑚的有性人工繁殖方法 | |
| CN107232112A (zh) | 一种种植与水产养殖协同工作系统 | |
| CN103609452B (zh) | 一种垂花蕙兰的组培快繁方法 | |
| CN103535285B (zh) | 金银花种苗的快速繁殖和离体保存方法 | |
| CN105830918A (zh) | 一种提高千层塔芽孢移栽成活率的方法 | |
| CN107711514A (zh) | 一种旱地木槿紫色花系优良单株组培快繁方法 | |
| CN111837775A (zh) | 一种培养基质及使用其繁殖中华桫椤方法 | |
| CN203424100U (zh) | 一种管道式水培花卉系统 | |
| CN102349446A (zh) | 一种植物微繁殖无糖组织培养方法 | |
| CN113265369B (zh) | 一种快速提高短叶对齿藓原丝体生物量的液体培养方法 | |
| CN205694831U (zh) | 一种苎麻喷雾育苗装置 | |
| CN101606468A (zh) | 一种地木耳的简易培养方法及培养装置 | |
| CN102550422A (zh) | 一种研究黄芩组织培养快速繁殖的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150617 Termination date: 20160610 |