CN103348243A - Lrrk2的分析方法和生物标记物 - Google Patents

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Abstract

本申请披露了用于筛选帕金森病受试者并为使用LRRK2调节剂的疗法提供伴随诊断工具的生物标记物，和用于筛选LRRK2活性调节化合物和组合物的分析方法。

Description

LRRK2的分析方法和生物标记物
相关申请
本申请要求2010年11月30日提交的美国临时申请61/418,208的权益，将其全部引入作为参考。
技术领域
本申请涉及用于寻找调节LRRK2功能的化合物的分析和用于体内评价LRRK2活性的生物标记物。
背景技术
神经变性疾病如帕金森病、路易体痴呆(Lewy body dementia)和亨丁顿舞蹈症影响数百万人。帕金森病是一种慢性、进行性运动系统障碍，大约每1000人中有一例发病，遗传性帕金森病占所有患者的5-10%。帕金森病是由中脑多巴胺能神经元的进行性减少引起的，使得患者支配和控制其运动的能力受损。帕金森病主要症状为震颤、强直、运动迟缓和平衡受损。许多帕金森病患者还经历其他症状如情绪改变、记忆损失、言语问题和睡眠障碍。
编码富亮氨酸重复激酶2蛋白(LRRK2)的基因已被确认与遗传性帕金森病相关(Paisan-Ruiz et al.,Neuron,Vol.44(4),2004,pp595-600、Zimprich et al.,Neuron,Vol.44(4),2004,601-607)。体外研究显示含帕金森病相关突变的LRRK2蛋白相比于野生型蛋白通常具有增加的LRRK2激酶活性和降低的GTP水解率(Guo et al.,Experimental CellResearch,Vol.313(16),2007,pp.3658-3670)。抗LRRK2抗体已被用于标记与帕金森病相关的脑干路易体和与路易体痴呆相关的皮质抗体，提示LRRK2在路易体的形成和与这些疾病相关的发病机理上可能发挥着重要作用(Zhou et al.,Molecular Degeneration,2006,1:17doi:10.1186/1750-1326-1-17)。LRRK2还被确认为与对克罗恩病和麻风病增加的易感性可能相关的基因(Zhang et al.,New England J.Med.Vol.361(2009)pp.2609-2618)。
相应地，在调节LRRK2活性上有效的化合物和组合物可以为神经变性疾病如帕金森病和路易体痴呆以及如麻风病和克罗恩病的疾病提供治疗。具体而言，对能够确认和评价能抑制细胞中LRRK2激酶活性的化合物的分析方法是有需要的。对能够在帕金森病的人类患者和动物模型中评价LRRK2激酶活性抑制剂功效的生物标记物也有急切需求。最后，对可能确认面临患帕金森病(PD)危险或患有帕金森病的受试者的技术和生物标记物有持续的需求，所述帕金森病对LRRK2抑制剂的治疗可能有响应。LRRK2活性的效应器是未知的，这已削弱了研究者对评定化合物在细胞内或体内抑制LRRK2激酶活性能力的能力(N.Dzamko,2010,Biochemical J.)。已知自磷酸化作用在多种激酶的生物学活性中发挥着重要作用，并且先前已经确定LRRK2能在体外多位点发生自磷酸化作用(Gloekner,2010,J.ProteosomeRes.、Kamakikawaji,2009,Biochemistry)。这些研究已发现LRRK2主要作为丝氨酸/苏氨酸激酶发挥功能，且已提示在苏氨酸位点的磷酸化优选。然而重要的是，尽管若干自磷酸化作用位点已随着体外研究而被报道，这些位点中的大多数看来似乎在细胞中不能被磷酸化(参考文献)。此外，尚没有描述在动物中能被确认的自磷酸化作用位点的报道。在细胞和动物中易于监测的真正自磷酸化作用位点，以及在各种条件下使自磷酸化作用程度能被监测的分析方法，会成为靶向LRRK2疗法发展中的重要工具。
发明内容
富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)基因中的突变是家族性帕金森病(PD)的最常见起因。帕金森病相关LRRK2基因的突变调节LRRK2自磷酸化作用。监测LRRK2自磷酸化作用中的变化从而为体外鉴别或评价LRRK2抑制剂提供了工具，并为体内监测LRRK2活性提供了潜在的生物标记物。
本发明提供了能评估脑中LRRK2活性的分析方法/生物标记物。发明者所作的定量研究表明在Ser1292处的LRRK2自磷酸化作用是体外最为丰富的自磷酸化作用活动之一并且是在转染细胞中可检测到的。产生直接对抗pSer1292的磷酸特异性抗体且被用来显示包括R1441G、Y1699C、G2019S和I2020T的LRRK2家族突变都表现出增加的pSer1292。Ser1292自磷酸化作用取决于LRRK2激酶活性和GTP结合，且最可能以顺式发生。Ser1292至丙氨酸的突变(S1292A)消除了在基于细胞的模型中LRRK2PD突变引起的神经元毒性。此外，神经元中LRRK2PD突变蛋白的表达改变了基底的自噬活性(basal autophagy activity)。S1292A突变也部分地改进了这一表型。LRRK2激酶抑制剂的使用显示LRRK2激酶抑制有效地阻断了培养的细胞和LRRK2BAC转基因动物中的S1292自磷酸化作用。相应地，S1292自磷酸化作用代表了体内LRRK2激酶活性的生物标记物并可能促成LRRK2引起帕金森病的机制。术语“磷酸化作用”和“自磷酸化作用”在本文中可替换使用。
在本发明的一个方面中，提供了用来鉴别患有帕金森病或面临发展帕金森病危险的患者或受试者的方法，所述方法包括测定患者中S1292磷酸化作用或自磷酸化作用的水平，其中升高的水平与患有帕金森病或面临发展帕金森病的危险相关。
所述方法还可包括从受试者获得或获取含LRRK2的样本；
所述方法还可包括在受试者样本中测量、监测或检测S1292自磷酸化作用的量或水平。
所述方法还可包括将受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与一个或多个对照样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
本发明的一个方面中，提供了用来预测受试者对LRRK2调节剂的敏感度，或LRRK2调节剂对治疗帕金森病的功效的方法，所述方法包括测定所述患者中S1292磷酸化作用或自磷酸化作用的水平，由此升高的S1292磷酸化作用或自磷酸化作用水平与该抑制剂对治疗该疾病的功效相关。
所述方法还可包括从受试者获得或获取第一份含LRRK2的样本。
所述方法还可包括对所述受试者给予LRRK2调节剂。
所述方法还可包括在对所述受试者给予LRRK2调节剂之后从受试者获得或获取第二份含LRRK2的样本。
所述方法还可包括在第一份受试者样本中测量、监测或检测S1292自磷酸化作用的量或水平。
所述方法还可包括在第二份受试者样本中测量、监测或检测S1292自磷酸化作用的量或水平。
所述方法还可包括将第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
本发明还提供了选择接受LRRK2抑制剂患者的方法，该方法包括测量患者S1292磷酸化作用或自磷酸化作用分布，由此具有升高的S1292自磷酸化作用分布的患者被选中。术语“S1292分布”指相比于一个或多个对照样本中的量，患者样本中S1292自磷酸化作用的量。所述S1292谱可以用比率(例如患者样本或细胞中S1292自磷酸化作用的量除以对照样本或细胞中S1292自磷酸化作用的量)或减法(例如患者样本或细胞中的量减去对照样本或细胞中S1292自磷酸化作用的量)的术语来表示。“增加的S1292分布”指S1292自磷酸化作用分布被确定为与对照样本中的S1292自磷酸化作用水平相比基本上高的患者样本中S1292自磷酸化作用水平。在一个实施例中，S1292自磷酸化作用分布比对照样本中的高约5%至100%。
在本方法中，所述LRRK2调节剂可以是式I或式II的化合物，或一种本文所公开的LRRK2调节剂。
本发明的一个方面中提供了用来鉴别患有帕金森病或面临发展帕金森病危险的受试者的方法，所述方法包括：
从受试者获得或获取含LRRK2的样本；
在受试者样本中测量、监测或检测S1292自磷酸化作用的量或水平；和
将受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与一个或多个对照样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
所述方法还可包括测定受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比于一个或多个对照样本的是否是升高的或以其它方式高于一个或多个对照样本的。如果受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比于一个或多个对照样本的是升高的或高于一个或多个对照样本的，所述受试者可被鉴别为是患有帕金森病或面临发展帕金森病危险的。
以实例来说明且不受其限制，所述从受试者的组织或血清中获得的含LRRK2受试者样本可包括细胞、细胞裂解液(lysate)或其溶液或混悬液。一个实施方案中所述受试者样本可包括单核细胞(白细胞)或其裂解液。所述样本可经注射器或组织提取装置从受试者中获得。由此获得的所述样本可经过细胞分离、缓冲、溶剂提取和/或暴露于一种或多种细胞裂解酶来暴露或以其它方式制得含于其中的、易得的LRRK2蛋白。
在某些实施方案中受试者样本中S1292自磷酸化作用水平的测量可通过使用与S1292相关的抗体(即，抗磷酸S1292-LRRK2抗体)，及检测抗体来实施。所述测量可由此包括：
将来自受试者样本的细胞或细胞裂解液转移、添加或固定至测定板上；
将抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体施加到所述测定板上；
除去或洗掉过量的抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体；和
检测结合到所述测定板上的抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体。
在某些实施方案中所述抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体可以是结合到包含序列PNEMGKLSKIWDLPL、或CPNEMGKLSKIWDLPL、或其片段的抗原肽或蛋白上的单克隆或多克隆抗体。在上述序列中丝氨酸残基“S”为磷酸化的或者可被磷酸化的(phosphorolatable)。所述抗原肽或蛋白由此可以PNEMGKL-pS-KIWDLPL或CPNEMGKL-pS-KIWDLPL来表示，其中"pS"为磷酸化的丝氨酸。
另一个实施方案中所述抗原肽或蛋白长度为12至20个残基、或长度为14至18个残基，包括一个磷酸化的丝氨酸，且与PNEMGKL-pS-KIWDLPL具有90%同源性。再一个实施方案中所述抗原肽或蛋白长度为12至20个残基、或长度为14至18个残基，包括一个磷酸化的丝氨酸，且含有来自PNEMGKL-pS-KIWDLPL中的至少10个连续的残基。所述抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体可以以溶液形式加到测定板上。
在某些实施方案中，所述抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体的检测可以利用ELISA检测、DELFIA检测、荧光检测、电化学发光检测、或能在测定板上进行抗体的定量测量或检测的其他电学、光学或放射性同位素技术。
在某些实施方案中，受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与一个或多个对照样本中S1292自磷酸化作用的量或水平的比较可以存储在计算机可读介质中的计算机软件的逻辑元件来体现。所述比较可由此包括，例如：经计算机用户界面，输入代表受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平的数据；经计算机用户界面，输入代表一个或多个对照样本中S1292自磷酸化作用的量或水平的数据；执行存储在计算机内存中的程序来产生比较数据；和经计算机可视界面，以字母数字和/或图解格式，显示所述对比数据，所述对比数据以表明或测定受试者样本中S1292自磷酸化作用的水平相比于一个或多个对照样本的水平是否是升高的或高于一个或多个对照样本的水平的方式来显示的。
LRRK2S1292的自磷酸化作用水平可能还被用作临床药效学标记物或伴随诊断工具来确定患者受试者是否会对具体LRRK2调节剂疗法的给予有利地产生反应，和/或对受试者而言LRRK2调节剂或抑制剂的何种程度的剂量水平可能是最佳的或希望得到的。在这方面本发明提供了测定受试者对涉及LRRK2调节剂疗法响应的方法，所述方法包括：
从受试者获得或获取第一份含LRRK2的样本；
对所述受试者给予LRRK2调节剂；
在对所述受试者给予LRRK2调节剂之后从受试者获得或获取第二份含LRRK2的样本；
测量、监测或检测第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平；
测量、监测或检测第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平；和
将第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
所述方法还可包括测定第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用量或水平是否低于第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平。第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用相比于第一份受试者样本的降低表明LRRK2调节剂是有效的。S1292自磷酸化作用的降低的量或水平还表示出LRRK2调节剂对所述受试者是何等有效，以及由此何种程度的剂量水平可能适合于所述受试者。
以实例来说明且不受其限制，从受试者的组织或血清中获得的所述第一份和第二份含LRRK2受试者样本可包括细胞、细胞裂解液或其溶液或混悬液。一个实施方案中所述受试者样本可包括单核细胞(白细胞)或其裂解液。所述样本可经注射器或组织提取装置从受试者中获得。由此获得的所述样本可经过细胞分离、缓冲、溶剂提取和/或暴露于一种或多种裂解酶来暴露或以其它方式制得含于其中的、易得的LRRK2蛋白。
在某些实施方案中第一份和第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用水平的测量可以通过采用与S1292相关的抗体(即，抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体)，及检测抗体来进行。所述测量可由此包括
将来自第一份和第二份受试者样本的细胞或细胞裂解液转移、添加或固定至一块或多块测定板上；
将抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体加到所述测定板或多块测定板上；
除去或洗掉过量的抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体；和
检测结合到所述一块或多块测定板上的抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体。
在某些实施方案中所述抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体可以是结合到包含序列PNEMGKL-pS-KIWDLPL(PNEMGKLSKIWDLPL)、或CPNEMGKL-pS-KIWDLPL(CPNEMGKLSKIWDLPL)、或其片段的抗原肽或蛋白上的单克隆或多克隆抗体，其中"pS"如前所述为磷酸化的丝氨酸。另一个实施方案中所述抗原肽或蛋白长度为12至20个残基、或长度为14至18个残基，包括一个磷酸化的丝氨酸，且与PNEMGKL-pS-KIWDLPL具有90%同源性。再一个实施方案中所述抗原肽或蛋白长度为12至20个残基、或长度为14至18个残基，包括一个磷酸化的丝氨酸，且含有来自PNEMGKL-pS-KIWDLPL中的至少10个连续的残基。所述抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体可以以溶液形式加到一块或多块测定板上。
在某些实施方案中，第一份和第二份受试者样本中所述抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体的检测可以利用ELISA检测、DELFIA检测、荧光检测、电化学发光检测、或能在一块测定板或多块测定板上进行抗体的定量测量或检测的其他电学、光学或放射性同位素技术。
在某些实施方案中，第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平的比较可以存储在计算机可读介质中的计算机软件的逻辑元件来体现。所述比较可由此包括，例如：经计算机用户界面，输入代表第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平的数据；经计算机用户界面，输入代表第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平的数据；执行存储在计算机内存中的程序来产生比较数据；和经计算机可视界面，以字母数字和/或图解格式，显示所述对比数据，所述对比数据以表明或测定第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的水平相比于第一份受试者样本的水平是否是升高的或高于第一份受试者样本的水平的方式来显示的。
本发明可以试剂盒来体现，该试剂盒包括：
一个或多个注射器或用来从受试者获取一种或多种组织样本的工具；
一块或多块测定板；和
抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体的溶液。
所述试剂盒还可包含用来稳定来自受试者的一个或多个样本的一种或多种缓冲溶液。
所述试剂盒还可包含细胞裂解试剂的一种或多种溶液。
所述试剂盒还可包含能将来自受试者样本的细胞或细胞裂解液转移、添加或固定至一块或多块测定板上的一种或多种溶液或一种或多种试剂。
所述试剂盒还可包含用来从所述一块或多块测定板冲掉或除去过量的抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体的溶液；和
所述试剂盒还可包含LRRK2调节剂溶液和用来施予LRRK2调节剂溶液的注射器或其它装置。
本发明还提供了一种抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体，其特征在于能结合到包含序列CPNEMGKL-pS-KIWDLPL(CPNEMGKLSKIWDLPL)、或其片段的抗原肽或蛋白，其中"pS"为磷酸化的丝氨酸。另一个实施方案中，所述抗-磷酸-S1292-LRRK2抗体，其特征在于能结合到包含序列PNEMGKL-pS-KIWDLPL(PNEMGKLSKIWDLPL)、或其片段的抗原肽或蛋白，其中"pS"为磷酸化的丝氨酸。另一个实施方案中所述抗原肽或蛋白长度为12至20个残基、或长度为14至18个残基，包括一个磷酸化的丝氨酸，且与PNEMGKL-pS-KIWDLPL具有90%同源性。再一个实施方案中所述抗原肽或蛋白长度为12至20残基、或长度为14至18个残基，包括一个磷酸化的丝氨酸，且含有来自PNEMGKL-pS-KIWDLPL中的至少10个连续的残基。
本发明一方面是用来筛选抑制LRRK2活性的化合物和组合物的分析方法，所述方法包括：将LRRK2或其片段暴露于潜在的抑制剂化合物；及检测与所述LRRK2蛋白上的磷酸化作用位点相关的磷酸化作用的水平或量。
在某些实施方案中，所述LRRK2磷酸化作用位点可以是丝氨酸1292(Ser1292或S1292)。
在某些实施方案中,在所述LRRK2磷酸化作用位点检测磷酸化作用可以通过使用与所述LRRK2自磷酸化作用位点相关的抗体(抗-磷酸-LRRK2抗体)来进行。抗-磷酸抗体的检测可以利用ELISA、DELFIA、荧光、电化学发光、或其他电学、光学或放射性同位素技术。一个实施方案中所用抗体为抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体。
在某些实施方案中，用在分析方法中的LRRK2可以是野生型或或与帕金森病相关的突变形式，如R1441G、R1441C、Y1699C、G2019S、I2020T突变型。在其他一些实施方案中，用在分析方法中的LRRK2蛋白可以帕金森病相关突变型(即R1441G/G2019S或R1441G/Y1699C/G2019S)的组合为特征。在另一些实施方案中，所述分析方法可以以已知的影响LRRK2的激酶或GTPase活性(即D1994A)的突变型为特征。所述LRRK2可以是人类、兔、鼠或其他哺乳动物来源的。用在所述分析方法中的LRRK2蛋白可以通过重组技术用HEK293、CHO或其他适合的细胞系来制备，所述细胞系用编码全部或部分LRRK2的cDNA转染或病毒转导。所述LRRK2可以包括便于亲和纯化、抗体检测、或免疫沉淀的附加表位。
在一个实施方案中，所述方法包括：在细胞中重组产生LRRK2、将所述细胞暴露于一种或多种潜在的LRRK2抑制剂化合物、裂解所述细胞、将所述一种或多种细胞裂解液暴露于抗-磷酸-LRRK2抗体、和检测所述细胞裂解液中结合到LRRK2的抗-磷酸-LRRK2抗体。
在另一个实施方案中，所述方法包括：在细胞中重组产生LRRK2、将所述细胞暴露于一种或多种潜在的LRRK2抑制剂化合物、裂解所述细胞、固定来自所述裂解细胞的LRRK2、将所述一种或多种细胞裂解液暴露于抗-磷酸-LRRK2抗体、和检测所述细胞裂解液中结合到LRRK2的抗-磷酸-LRRK2抗体。
在另一个实施方案中，所述方法包括：在细胞中重组产生LRRK2、将所述细胞固定到第一块测定板的多个孔中、将各个孔中的所述细胞暴露于一种潜在的LRRK2抑制剂化合物、裂解各个孔中的所述细胞、将来自第一块测定板各个孔中的所述裂解细胞的LRRK2固定到第二块测定板相应的孔中、将所述一种或多种细胞裂解液暴露于抗-磷酸-LRRK2抗体、和检测所述细胞裂解液中结合到LRRK2的抗-磷酸-LRRK2抗体。固定来自所述裂解细胞的LRRK2可包括，例如，将其中针对LRRK2的抗体或附加表位接种或固定到第二块测定板的孔中、和将来自第一块测定板孔中的所述细胞裂解液转移到第二块测定板相应的孔中。
本发明的另一方面包括利用LRRK2磷酸化作用位点作为一种用于帕金森病LRRK2突变株体内检测和用于LRRK2抑制剂体内功效评价的生物标记物方法。所述方法可包括：对受试者给予LRRK2抑制剂、从所述受试者获取组织或血清样本、及检测与来自所述样本LRRK2的磷酸化作用位点相关的磷酸化作用的水平或量。
在一个实施方案中，所述生物标记物磷酸化作用位点可以是LRRK2蛋白的丝氨酸1292(Ser1292或S1292)。
在LRRK2磷酸化作用位点监测磷酸化作用可通过与LRRK2自磷酸化作用位点(抗-磷酸-LRRK2抗体)相关的抗体如抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体的检测来进行。抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2可以用标准操作流程如ELISA、DELFIA、荧光、电化学发光、或其他电学、光学或放射性同位素技术与抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体组合来检测。
本发明的另一方面是包含序列CPNEMGKL-pS-KIWDLPL或其片段抗原的抗体，其"pS"为磷酸化的丝氨酸。另一实施方案中所述抗原长度为14至18个残基，包括一个磷酸化的丝氨酸，且与CPNEMGKL-pS-KIWDLPL具有90%同源性。
本发明的另一方面是用于LRRK2抑制剂体外评价的一个或多个试剂盒。这种试剂盒可以包括，例如：含LRRK2蛋白的溶液和含抗-磷酸-LRRK2抗体如抗-磷酸-Ser1292-LRRK2抗体的溶液。所述溶液可以储存在适合的管或容器中，且所述试剂盒还可包括配置用来进行本文所描述的本发明的分析方法和生物标记物方法的容器、多孔测定板、缓冲溶液和工具。
附图简述
参考以下用于说明的附图会更加全面地理解本发明。
图1.体内LRRK2自磷酸化作用位点的鉴别。(A)描述LRRK2结构域结构的示意图。(B,C)收集的明确鉴别pSer1292和pThr1343的经注释的MS/MS图谱。这些图谱与衍生自合成内标的MS/MS的对比提供辅助确证。(D,E)来自0至60分钟时间G2019S-LRRK2反应的pSer1292SFPNEMGKLS#K和pThr1343LMIVGNT#GSGK肽段的提取离子色谱法。pSer1292(13C6 15N1Leu、+7.017Da)和pThr1343(13C5 15N1Val、+6.014Da)的同位素标记的内标显示在各个3D绘图的背面，在前面的信号代表源自酶解样本的轻分析物肽段。(F,G)来自转染的293细胞中免疫沉淀的FLAG-LRRK2的轻和重pSer1292肽段的提取离子色谱。可从G2019S-LRRK2但非激酶死亡D1994A LRRK2检测到轻pSer1292。
图2.LRRK2激酶活性是S1292磷酸化作用所需要的(A)检测HEK293细胞的裂解液中LRRK2自磷酸化作用的蛋白免疫印迹(Western blots)，该细胞短暂表达FLAG标记的LRRK2WT、S1292A和D1994A。(B)检测的BAC转基因小鼠的脑裂解液中LRRK2自磷酸化作用的蛋白质印迹，该细胞过度表达LRRK2WT或激酶死亡突变株。
图3.家族性帕金森病突变型增加S1292自磷酸化作用(A)检测来自HEK293细胞裂解液pS1292和全部LRRK2信号的代表性蛋白质印迹图像，该细胞短暂被WT、R1441G、Y1699C、G2019S、I2020T、G2385R和R1441G/G2019S(RG/GS)LRRK2转染。(B)突变株中相比于野生型LRRK2pS1292信号平均倍数的定量，信号为4次独立实验的平均值。(C)检测来自BAC转基因小鼠不同脑区组织的裂解液pS1292和全部LRRK2的代表性蛋白质印迹图像，该组织表达Flag-标记野生型(WT)和G2019S LRRK2。(D)来自表达Flag-标记的野生型(WT)和G2019S LRRK2的BAC转基因小鼠全脑裂解液中pS1292变化倍数的定量。N=各基因型中5只动物。
图4.在S1292处的LRRK2自磷酸化作用的生化机制(A)S1292自磷酸化作用所需要的GTP结合。检测来自细胞裂解液的pS1292和全部LRRK2的代表性蛋白质印迹图像，该细胞短暂表达Flag-标记的野生型、T1348N、G2019S和T1348N/G2019S LRRK2。(B)LRRK2S1292A蛋白不能磷酸化LRRK2激酶死亡突变株(D1994A)上的S1292残基。在HEK293细胞中共转染的两个构建物的示意图(左侧)。检测来自HEK293细胞裂解液的pS1292的蛋白质印迹代表性图像(右侧)，该细胞短暂表达Flag-标记的LRRK2R1441G/Y1699C/G2019S(3M)、3M/S1292A、D1994A和具有3M/S1292A的D1994A。(C)全长LRRK2不能磷酸化截短的激酶死亡LRRK2(D1994A)上的S1292残基。两种共转染构建物的示意图(左侧)。检测来自HEK293细胞的pS1292和全部LRRK2的蛋白质印迹代表性图像，该细胞表达全长和截短的具有D1994A突变的LRRK2。
图5.S1292对于LRRK2PD突变诱导的神经突生长缺陷是所需的。(A)代表性GFP转染的海马神经元的Neurolucida示踪。GFP信号用于以Neurolucida软件进行神经突示踪。以20μm间隔隔开、以胞体为中心的同心圆叠加图用于Sholl分析。(B)GFP和LRRK2共转染的海马神经元的代表性Neurolucida示踪。在体外第6天(DIV6)将GFP与空载体LRRK2野生型、R1441G G2019S、S1292AR1441G G2019S和R1441G G2019S D1994A等位基因共转染至海马培养物。在DIV17，将神经元固定并用GFP和MAP2染色。用共聚焦显微镜采集转染的神经元的图像而通过观测者用Neurolucida软件示踪树突，所述观测者对所述等位基因鉴别是不知晓的。比例尺：100μm。(C)Sholl分析。计算LRRK2转染细胞中各个环相交的平均数(±SEM)。R1441G G2019S与野生型R1441G G2019S D1994A、S1292AR1441G G2019S间的斯氏t-检验(Student's t test)p值小于0.05(以*标明)。对于每个构建物N=22-30个细胞。(D)如(B)中全部树突长度的定量。三组实验中n=40-85个细胞。各组以中间菱形表示。R1441G G2019S(红色环)与野生型R1441G G2019S D1994A、S1292A R1441G G2019S间的斯氏t-检验p值小于0.001。
图6A-D.S1292A突变部分改善了由LRRK2PD突变诱导的自噬损伤。
图7.在基于细胞的分析方法中LRRK2激酶抑制剂阻断了pS1292自磷酸化作用。(A)采用基于96孔板的pLRRK2电化学发光分析方法，相比于非诱导的LRRK细胞裂解液，在用1ug/mL多西环素诱导16小时的LRRK2细胞裂解液中检测到增加的pLRRK(Ser1292)信号。(B)用索坦(Sutent)(IC500.10uM)和G1023(IC500.0016uM)孵育16小时的多西环素诱导的LRRK2细胞中pS1292信号的剂量依赖性降低。抑制作用以非诱导的细胞裂解液取准为100%抑制。(C)显示出与细胞pLRRK(Ser1292)抑制剂IC50值和生化LRRK2Ki值有强相关的600个化合物数据集。斜率=0.95，R2=0.77。中空符号超出IC50值范围并被排除在回归拟合之外。
图8.LRRK2激酶抑制剂G1023降低了体内pS1292自磷酸化作用。检测来自Flag-标记的G2019S LRRK2BAC转基因动物脾脏(A)和脑(B)组织裂解液的pS1292和全部LRRK2的蛋白质印迹图像。对动物给予单独媒介物(2只动物)、10、30或100mg/kg G01581023(化合物剂量组各3只动物)。(C)(A)和(B)中pS1292/全部LRRK2信号的定量。(D)，(E)。
图9A,9B.LRRK2激酶抑制剂G1023改善了从LRRK2BAC转基因小鼠中培养的G2019S神经元的神经突生长缺陷。
具体实施方式
定义
除非另有说明，本申请(包括说明书和权利要求书)中使用的下列术语，具有下述给定含义。必须提请注意的是，除非上下文以其他方式明确规定，如说明书和所附权利要求中使用的单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“那个(the)”包括复数对象。
用在本说明书中的某些术语的定义提供如下。其他术语的定义可以在美国能源部科学办公室人类基因组计划(U.S.Department of Energy,Office ofScience,Human Genome Project)(http:www.或 nl.gov/sci/techresources/Human_Genome/glossary/)提供的词汇表中找到。在实施本发明过程中，会使用许多分子生物学、微生物学和重组DNA中的常规技术。这些技术是众所周知的并在如Current Protocols in Molecular Biology,Vols.I-III,Ausubel,ed.(1997);Sambrook et al.,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Second Edition(Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,N.Y.,1989);DNA Cloning:A Practical Approach,Vols.I and II,Glover D,ed.(1985);Oligonucleotide Synthesis,Gait,ed.(1984);Nucleic AcidHybridization,Hames&Higgins,eds.(1985);Transcription and Translation,Hames&Higgins,eds.(1984);Animal Cell Culture,Freshney,ed.(1986);Immobilized Cells and Enzymes(IRL Press,1986);Perbal,A Practical Guide toMolecular Cloning;the series,Methods in Enzymol.(Academic Press,Inc.,1984);Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells,Miller&Calos,eds.(ColdSpring Harbor Laboratory,N.Y.,1987);and Methods in Enzymology,Vols.154and155,Wu&Grossman,and Wu,eds.中分别有解释。
正如本文中所用，术语“等位基因”意指在特定染色体位置(位点)的基因或DNA序列的具体形式。
正如本文中所用，术语“抗体”包括，但不限于，多克隆抗体、单克隆抗体、人源化或嵌合抗体和足够用于抗体片段与蛋白结合的生物学功能抗体片段。抗体可用在测定各种蛋白和肽段存在的分析方法中，其中本发明的遗传多态性位于基因的编码区。
正如本文中所用，术语“临床响应”意指以下任一或全部：所述响应的定量测量、无响应和不利响应(即副作用)。
正如本文中所用，术语“临床试验”意指任何设计用来收集对具体治疗方案响应的临床数据的研究，并包括但不限于I期、II期和III期临床试验。标准方法用来限定患者群体及招募受试者。
正如本文中所用，术语“有效量”的化合物为足以达到希望的治疗和/或预防效果的量，例如，导致对正在治疗的疾病的预防或其相关症状减少的量，如，本文中鉴别的与LRRK2突变聚核苷酸和突变多肽相关的疾病(具体为阿尔茨海默氏病和帕金森病)。给予受试者的化合物的量要取决于所述疾病的类型和严重性及个体的特征，如基本健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受。还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些或其他因素能够确定适当的剂量。通常，足以获得希望的治疗或预防效果的、本发明化合物的有效量为约0.000001mg每千克体重每天至约10,000mg每千克体重每天。优选剂量为约0.0001mg每千克体重每天至约100mg每千克体重每天。本发明的化合物还可彼此组合或与一种或多种另外的治疗用化合物组合来给予。
正如本文中所用，“表达”包括但不限于下列一种或多种：所述基因转录为前mRNA、用于产生成熟mRNA的所述前mRNA剪接和其他加工、mRNA稳定性、所述成熟mRNA翻译为蛋白质(包括密码子选择和tRNA可用性)和如果有需要为了适当的表达和功能而对所述翻译产物的糖苷化和/或其他修饰。
正如本文中所用，术语“基因”含有用于RNA产物受调节的生物合成的全部信息的DNA的节段，包括启动子、外显子、内含子和控制表达的其他非翻译区。
正如本文中所用，术语“基因型”意指在个体中一对同源染色体基因座上一个或多个多态位点发现的核苷酸对的非定相的(unphased)5'至3'序列。正如本文中所用，基因型包括全基因型和/或亚基因型。
正如本文中所用，术语“基因座”意指对应于基因、或物理或表型特征的染色体或DNA分子的位置，具体为LRRK2基因。
正如本文中所用，术语“LRRK2调节剂”为相比于在缺少LRRK2调节剂时LRRK2多肽的表达水平或生物活性水平，改变(例如，升高或降低)LRRK2多肽的表达水平或生物活性水平的任何化合物。LRRK2调节剂可以是小分子、多肽、糖类、脂质、核苷酸或其组合。所述LRRK2调节剂可以是有机化合物或无机化合物。
正如本文中所用，术语“突变型”意指作为突变结果的来自野生型的任何可遗传的变异，例如，单核苷酸多态性。所述术语“突变型”与说明书各处的术语“标记”、“生物标记物”和“靶标”互换使用。
正如本文中所用，术语“医学病症”包括，但不限于，作为一种或多种身体和/或心理症状被证明需要治疗的任何状况或疾病，并包括以前和新近鉴别的疾病和其他紊乱。
正如本文中所用，术语“核苷酸对”意指在个体中染色体两个拷贝的多态位点上发现的核苷酸。
正如本文中所用，术语“多态位点”意指种群中发现至少两个可替换序列的基因座中的位置，其中最频繁的具有不高于99%的频度。
正如本文中所用，术语“定相的(phased)”意指当施加于为基因座中两个或更多个多态位点的核苷酸对序列时，基因座单个拷贝上存在于那些多态位点上的核苷酸的组合是已知的。
正如本文中所用，术语“多态”意指种群中以>1%频度存在的任何序列变异体。所述序列变异体可以明显高于1%如5%或10%或更高的频度存在。所述术语还可以用来指个体中在多态位点观察到的序列变异。多态包括核苷酸替代、插入、缺失和微卫星，并可以但不需要，导致基因表达或蛋白功能中可检测到的差异。
正如本文中所用，术语“聚核苷酸”意指可以是未修饰的或修饰的RNA或DNA中的任何RNA或DNA。聚核苷酸包括而不限于单链和双链DNA、为单链和双链区混合物的DNA、单链和双链RNA、群丛变型单链和双链区混合物的RNA、和包含可以是单链或更典型的双链或单链和双链区混合物的DNA和RNA的杂种分子。此外，聚核苷酸指包含RNA或DNA或同时包含RNA和DNA两者的三链区。所述术语聚核苷酸还包括含有一种或多种修饰的碱基的DNA或RNA和具有用于稳定性或其他原因修饰的主链的DNA或RNA。
正如本文中所用，术语“多肽”意指通过肽键或修饰的肽键，即肽电子等排体相连接的包含两种或更多种氨基酸的任何多肽。多肽既指较短链，通常指肽段、糖肽或寡聚物，又指较长链，通常指蛋白质。多肽可以含有区别于20个基因编码的氨基酸的氨基酸。多肽包括或者经自然加工，如翻译后加工，或者经本领域已知的化学修饰技术来修饰的氨基酸。这种修饰在基础的教科书和更为详细的专著及大量的研究文献中有很好的描述。
正如本文中所用，本文中可互换使用的术语“磷酸化作用”和“自磷酸化作用”通常指在其磷酸化作用位点，如丝氨酸1292(Ser1292或S1292)，向LRRK2加成磷酸基团。
正如本文中所用，术语“SNP核酸”意指包括在个体或个体群组间同一核苷酸序列中可变的并由此以等位基因存在的核苷酸的核酸序列。这种SNP核酸优选长度为约15至约500个核苷酸。所述SNP核酸可以是染色体的一部分，或者它们可以是染色体的一部分的精确拷贝，例如，通过经PCR或克隆的这种染色体的一部分的扩增。所述SNP核酸在下文以"SNPs"简化指代。SNP是基因组的单个位置核苷酸变异性的发生，其中两个可替换的碱基在人类种群中以可观的频度(即>1%)发生。SNP可以发生在基因中或基因组的基因间隔区。与本发明相应的SNP探针为与SNP核酸互补的寡核苷酸。
正如本文中所用，对受试者或患者给予药剂或药物包括自我给药和由他人给药。还应当理解所描述的医学病症的治疗和预防的各种模式意在指“基本的”，其中包括全部但还包括小于总体的治疗或预防，并且在其中达到某些生物学或医学有关的结果。
正如本文中所用，“帕金森病”("PD")意指损伤运动技能、言语和/或认知功能的中枢神经系统的变性障碍。帕金森病的症状可包括，例如，肌强直、震颤、身体运动缓慢(运动过慢)和身体运动丧失(运动不能)。
正如本文中所用，“路易体病”也称作“路易体痴呆”、“弥散性路易体病”、“皮质路易体病”，意指一种解剖学上以大脑中路易体存在为特征的神经变性障碍。
正如本文中所用，“受试者”意指哺乳动物或非哺乳动物。哺乳动物意指哺乳纲中的任何成员，包括但不限于，人类、非人类的灵长类如黑猩猩和其他猿和猴种、农场动物如牛、马、绵羊、山羊和猪、家畜如兔、狗和猫、包括啮齿类的实验动物如大鼠、小鼠和豚鼠等。非哺乳动物的实例包括，但不限于，鸟类等。所述术语“受试者”不表示具体的年龄或性别。
正如本文中所用，“治疗有效量”意指当施予受试者以治疗病症时，足以实现这种对病症治疗的化合物的量。所述“治疗有效量”依据化合物、要治疗的病症、所要治疗疾病的严重性、受试者的年龄和相对健康状况、给药途径和形式、主治的医学或兽医从业者的判断和其他因素。
术语“上述定义的那些”和“本文中定义的那些”当指变量时，如果有的话，引入所述变量的宽泛定义以及具体定义作为参考。
“治疗”或病症的“治疗”包括，抑制所述病症，即，阻止所述病症或其临床症状的发展，和/或缓解所述病症，即，引起所述病症或其临床症状的暂时或永久消退，以及其他。
将本文中标识的全部专利和出版物全部引入作为参考。
LRRK2
参考图1，LRRK2蛋白的图解表示，氨基端在左而羧基端在右。所述LRRK2蛋白长度为2527个氨基酸，属于ROCO-蛋白超家族。LRRK2包括ANK(锚蛋白重复)结构域、LRR(富亮氨酸重复)结构域、ROC(复合物蛋白中的Ras)结构域、COR(Roc的羧基端)连接体结构域、激酶结构域和WD40结构域。S1292自磷酸化作用位点通常位于如图1中所示的LRR和ROC结构域之间。R1441G突变发生在ROC结构域，而Y1699C突变是在COR结构域，且G2019S和I2020T发现于激酶结构域。人类LRRK2蛋白和相应的核酸序列是已知的并被公开，例如，SEQ.ID NO:2和SEQ ID NO:1分别在公开的申请US2010/0035251中。
S1292作为体内自磷酸化作用位点的鉴别
体外激酶分析方法用纯化的G2019S和激酶死亡(D1994A)LRRK2来进行。ATP(1mM)和GTPgS(10mM)存在或缺少条件下发生反应，然后经SDS-PAGE分离。考马斯(Coomassie)染色的LRRK2带在凝胶中受胰蛋白酶消化，接着经液相色谱串联质谱仪(LC-MS/MS,Aqua peptides(Sigma-Aldrich))分析。数据库搜索显示一系列确信与LRRKs的磷酸肽匹配的图谱。鉴别的位点当中，没有观察到从与激酶死亡D1994A LRRK2反应而来的。值得注意的是以LRR结构域羧基端部分pSer1292起始并伸展通过ROC结构域的磷酸肽聚簇(图1B,1C)。还在至少一个激酶活化环(pSer2031;数据未显示)中的残基上观察到磷酸化作用。这些结果支持先前表明的至少在自磷酸化作用活性的情况下(context)，比起Ser来LRRK2优先修饰Thr残基。
在鉴别LRRK2自磷酸化作用位点中，注意到在极接近于LRRK2磷酸化作用位点之处Met残基的异常频度，被修饰残基上游一至五个位置9/14的肽段显示为Met。尽管在缺少ATP和GTPgS的反应中没有观察到磷酸肽，单一例外是与对应于pSer1292的序列SFPNEMGKLS#K匹配的图谱(图1B)。
为了评定体外磷酸化作用的相对丰度并有助于证实体内这些修饰作用，合成了一系列内标肽段。这些肽段包括与鉴别的LRRK2磷酸肽相同的序列，但包含稳定同位素富集的单一氨基酸。包括在这些肽段中的是同位素标记的肽段，涉及pSer1292的是SFPNEMGKLS#K(13C6 15N1Leu、+7.017Da)、涉及pThr1343的是LMIVGNT#GSGK(13C5 15N1Val、+6.014Da)、涉及pThr1357的是TTLLQQLMKT#K(13C6 15N1Leu+7.017Da)和涉及pThr1368的是SDLGMQSAT#VGIDVK(13C5 15N1Val+6.014Da)。为了综合评定pSer1357和pSer1368的磷酸化作用情况，由于要处理在这些序列侧面的不规则末端需要另外的肽段。
然后纯化的WT、G2019S和R1441C LRRK2蛋白发生体外激酶反应。在0、5、10、30和60min时间点收集，经SDS-PAGE分离并由考马斯染色。来自G2019S反应的pSer1292和pThr1343肽段的提取离子色谱以相对于其相应内标来表示(图1D,1E)。正如磷酸基因测绘(phosphomapping)研究中所记录的，纯化的G2019S LRRK2中一小部分Ser1292在所述激酶反应一开始就被磷酸化。原始MS数据表明各个磷酸肽大量增加，相比于pThr1343在迅速到达平稳状态前0至10min的增加，在5至60min表现为平稳的增加。在各个监测位点，与WT或R1441C相比，LRRK2G2019S可认为是进行了更多的快速自磷酸化作用(图1E、1F、1G、1H)。有趣的是，个别位点显示出独特的动力学，pThr1343和pThr1357自磷酸化作用迅速到达平稳状态，而在Ser1292和Thr1368处的磷酸化作用即使超出60min时间点仍在持续增强(图1E,1F,1G,1H)。在WT和R1441C LRRK2的活性之间还观察到适度但一致的差异(图1E、1F、1G、1H)。
为了证实活细胞中的LRRK2自磷酸化作用活性，用发明人的定量LC-MS/MS分析方法对HEK293细胞中过度表达的FLAG-LRRK2进行了实验。从体外激酶分析方法中鉴别的大多数自磷酸化作用事件在免疫沉淀的中是不可检测到的，甚至用LRRK2同位素标准物作为监视(sentries)也是不可检测到的。一个例外是pSer1292。重pSer1292的提取离子色谱信号展现出在FLAG-G2019SLRRK2(图1F)而非在FLAG-D1994ALRRK2上低水平的pSer1292。在内标上获取的MS/MS确证了重肽段的同一性，具有对确证293细胞中pSer1292存在所必需的天然肽段的完全共解析。简言之，类似的MS/MS图谱从该肽段的轻型中收集，但已与另一种离子被共同分离出来，混淆了自动鉴别工作。查阅手册和两份图谱的比对使得这一样本中pSer1292的重叠合法和辅助证实成为可能。
既然pSer1292是体外和培养的细胞中最为稳健的自磷酸化作用位点，就产生了专门识别这一磷酸表位(抗-pLRRK2抗体)的兔多克隆抗体。293细胞被野生型、S1292A(磷酸-位点死亡)和D1994A(激酶死亡)LRRK2构建物所转染。发现抗-pLRRK2抗体检测到来自野生型LRRK2、而非那些具有S1292A或D1994A突变体所转染细胞的裂解液的特异性信号(图2A)，证明所述抗-pLRRK2抗体对磷酸化的S1292表位是特异性的。此外，所述抗-pLRRK2抗体检测到来自表达野生型LRRK2、而非那些表达激酶死亡LRRK2的BAC转基因小鼠脑裂解液的特异性信号(图2B)。这些结果证明LRRK2激酶活性是体内S1292残基的磷酸化作用所需的。
帕金森突变增加对Ser1292的LRRK2自磷酸化作用
LRRK2最常见的家族性突变G2019S已在各种体内激酶分析方法中表现出其激酶活性的增加，包括自磷酸化作用、MBP和LRRKtide的磷酸化作用。除G2019S之外，大多数已发表的实验结果表明包括R1441G/C、Y1699C和I2020T的其他PD突变不增加体外LRRK2激酶活性。由于缺少体内底物，PD突变如何影响体内LRRK2激酶活性仍是未知的。
既然对Ser1292的LRRK2自磷酸化作用取决于其激酶活性，不同LRRK2PD突变对LRRK2自磷酸化作用水平的影响是通过用Flag-标记的、含不同帕金森突变的LRRK2构建物转染293细胞来进行测试的。全细胞裂解液中全部LRRK2和pS1292的水平通过蛋白质印迹法来评定。发明人发现包括R1441G、Y1699C、G2019S和I2020T的全部四种确证的LRRK2家族性帕金森突变，相比于野生型LRRK2，在S1292位点表现出增加的LRRK2自磷酸化作用。此外，将两种PD突变R1441G和G2019S组合在同一构建物中甚至能更高地增加LRRK2自磷酸化作用水平(图3A、B)。值得注意的是，在亚洲种群中发现的PD风险因子突变G2385R不增加对Ser1292的自磷酸化作用。
发明人还测试了在转基因动物中PD突变是否增加LRRK2自磷酸化作用。发明人比较了来自表达野生型或G2019S LRRK2蛋白的转基因动物的脑组织中LRRK2自磷酸化作用水平。发明人发现在转基因小鼠的两组细胞系中全部LRRK2蛋白水平是可以相比的，而所有检查的脑区中在来自LRRK2G2019S BAC转基因小鼠的组织中磷酸-LRRK2水平比较高(图3C)。定量而言，在表达G2019S突变型LRRK2的转基因动物全部脑裂解液中对S1292的LRRK2自磷酸化作用比表达野生型LRRK2的高10倍多(图3D)。总而言之，这些数据证明LRRK2的帕金森突变增加了对培养的细胞和动物中的S1292的LRRK2自磷酸化作用。
LRRK2Ser1292自磷酸化作用的生化机制
GTP结合被认为是体外LRRK2激酶活化所需要的。显示LRRK2T1348N突变已消除了体外GTP结合。然而，GTP结合如何影响体内LRRK2激酶活性仍不了解。为了测试GTP结合是否为体内LRRK2自磷酸化作用所需，研究了LRRK2T1348N和LRRK2G2019S/T1348N突变型构建物转染的293细胞中的LRRK2自磷酸化作用水平。LRRK2S1292自磷酸化作用在表达T1348N突变的细胞的裂解液中是不能检测到的。LRRK2G2019S/T1348N转染的细胞中S1292磷酸化作用相比于那些表达LRRK2G2019S的也大大减少(图4A)。这些结果证明体内对S1292的LRRK2自磷酸化作用需要GTP结合。
LRRK2自磷酸化作用的机制可以通过两种可能的途径发生。一种可能是LRRK2分子可以磷酸化另一个LRRK2分子上的S1292，即分子间磷酸化作用。另一种可能是LRRK2分子的激酶结构域可以磷酸化其自身的S1292，即分子内磷酸化作用。为了区别这两种可能，LRRK2S1292A突变型与LRRK2D1994A突变型被转染。S1292A突变消除了所述自磷酸化作用位点，而D1994A突变消除了LRRK2激酶活性。如果LRRK2自磷酸化作用是分子间的，当这两种构建物被共转染时LRRK2S1292A能磷酸化LRRK2D1994A，并能观察到磷酸-LRRK2信号。然而，在S1292A和D1994A突变共转染的293细胞的裂解液中没有观察到LRRK2自磷酸化作用(图4B)。这一数据提示LRRK2自磷酸化作用可能是分子内的。
为了进一步证实分子内自磷酸化作用，通过全长野生型LRRK2测试了氨基末端截短的LRRK2的磷酸化作用。野生型LRRK2和氨基末端截短的LRRK2(907-2527)与D1994A突变被共转染。通过蛋白质印迹在截短的LRRK2D1994A中几乎没有检测到S1292磷酸化作用(图4C)。因此，所述全长野生型LRRK2不能磷酸化截短的LRRK2。总而言之，这些数据证明LRRK2自磷酸化作用极可能是分子内的。
Ser1292是由LRRK2帕金森突变诱导的神经元毒性所需的
Ser1292残基位于LRRK2的LRR结构域和GTPase结构域的接点处。蛋白同源性分析显示S1292从蠕虫到人类都是保守的，而所有氨基酸的同一性是有限的。由此评估出Ser1292自磷酸化作用对LRRK2生物学功能的重要性。
带有PD突变的LRRK2蛋白的表达在培养的初级神经元(primaryneurons)中可引起神经元毒性。此外，所述观察到的神经元毒性需要LRRK2的激酶活性。用带有不同PD突变和经检查的神经突形态的LRRK2cDNA对来自E18大鼠胚胎的培养的初级海马神经元进行转染(图5A)，其显示，相比于只表达野生型LRRK2或GFP的那些，表达LRRK2R1441G/G2019S双重突变的海马神经元表现出强力的神经突生长缺陷。与已发表的实验报告一致，向LRRK2R1441G/G2019S双重突变引入激酶死亡突变D1994A消除了这一表型。此外，在LRRK2R1441G/G2019S双重突变中将Ser1292突变为丙氨酸也消除了所述神经突生长缺陷，提示对于LRRK2R1441G/G2019S诱导的神经突生长表型，Ser1292磷酸化作用是重要的(图5B、D)。
除引起全部神经突长度缩短之外，表达LRRK2R1441G/G2019S双重突变型的蛋白还降低了培养的初级海马神经元中树突树的复杂性，如Sholl分析所示。此外，LRRK2G2019S/R1441G/D1994A突变型蛋白恢复所述神经元的树突复杂性，提示LRRK2激酶活性是需要的。重要的是，LRRK2自磷酸化作用位点丝氨酸1292突变至丙氨酸也可改善这一表型(图5C)。总而言之，这些数据强烈提示LRRK2上Ser1292自磷酸化作用在介导LRRK2PD突变诱导的神经元毒性中发挥着重要作用。
Ser1292自磷酸化作用对于LRRK2PD突变诱导的自噬损伤是重要的
研究了Ser1292自磷酸化作用对由LRRK2PD突变诱导的神经元毒性的影响。发明人首先考察Ser1292自磷酸化作用是否影响LRRK2激酶活性。从短暂转染的293细胞中纯化出Flag-标记的wt和S1292A LRRK2蛋白。体外激酶分析方法中将激酶活性与作为底物的LRRKtide相比。未观察到LRRK2WT和S1292A蛋白之间明显的差异。
接下来研究了LRRK2PD突变型蛋白的亚细胞定位。Flag-标记的LRRK2R1441G/G2019S双重突变型构建物被转染进入培养的初级皮质神经元。免疫荧光细胞化学用来在转染的神经元中检测Flag-标记的LRRK2蛋白。发现WT LRRK2蛋白在神经元中表现出弥散性分布。然而，在超过80%的被LRRK2R1441G/G2019S双重突变型所转染的神经元中，LRRK2蛋白表现出与微管标记物共同定位的LRRK的丝状分布(图6A)。此外，LRRK2突变型蛋白还在部分神经元中形成大的穿孔(large puncta)(图6B)。为了鉴别所述丝状体与穿孔的性质，这些神经元被不同的细胞标记物所共同染色。发现LRRK2丝状体与微管被共同定位，如被微管蛋白共同染色所示。此外，LRRK2丝状体和穿孔与自噬衔接蛋白p62共同定位(图6A,6B)。研究了另外的自噬细胞标记物。LRRK2穿孔对作为自噬体标记物LC3和K63多聚泛素也呈阳性。这些数据提示LRRK2PD突变损伤了神经元中基部的自噬活性。
为了测试LRRK2激酶活性和/或LRRK2S1292自磷酸化作用是否调节LRRK2PD突变对自噬的影响，在培养的皮质神经元中表达LRRK2R1441G/G2019S/D1994A和LRRK2R1441G/G2019S/S1292A突变型蛋白。激酶活性的丧失(通过D1994A)消除了LRRK2对微管和对自噬体的定位(图6C、6D)，表明对于由LRRK2PD突变引起的损伤的自噬活性激酶活性是重要的。有趣的是，S1292A突变基本降低了LRRK2对微管的定位，但对LRRK2阳性自噬体的形成几乎没有影响(图6D)。这些数据提示对S1292的LRRK2自磷酸化作用促成了由LRRK2PD突变引起的损伤的自噬活性。LRRK2激酶抑制剂阻断细胞中S1292自磷酸化作用
为了测试LRRK2激酶抑制剂是否能阻断细胞中LRRK2自磷酸化作用，产生了表达FLAG表位-标记的LRRK2R1441G/Y1699C/G2019S三重突变型蛋白(此处称作LRRK2细胞)的可诱导的HEK293细胞系。然后用这一细胞系来建立基于96孔板的定量细胞裂解液中磷酸-S1292的分析方法。所述分析方法采用电化学发光检测技术(Meso-Scale Discovery,MSD)，其中用固相固定的抗-FLAG单克隆抗体来捕捉LRRK2，接着用抗-pSer1292抗体和钌缀合的抗-兔二次抗体进行检测。由此发明人能检测到用多西环素诱导的细胞裂解液中pS1292信号的显著增加(图7A)。此外，当多西环素诱导的LRRK2细胞用一种已知的LRRK2激酶抑制剂(Ki参照)索坦培养时，发明人观察到pS1292信号的剂量依赖性降低，具有与非诱导的细胞裂解液中检测到的信号相当的最大抑制作用(图7B)。其后，发明人测试了超过600种在LRRK2激酶分析方法中对这些细胞具有各种效能的化合物。对于pS1292信号降低的IC50与对于所述化合物的LRRK2生化Ki具有很强的相关(图7C)。这些数据证明了LRRK2激酶抑制剂在细胞中阻断S1292自磷酸化作用，表明pS1292因此能被用作体内LRRK2激酶抑制作用的标记物。
一种强效的、选择性的且能穿透脑的LRRK2激酶抑制剂阻断LRRK2 G2019S BAC转基因小鼠脑中的磷酸-S1292
通过高通量化学物质筛选和先导化合物优化，发明人鉴别了一种强效的且有选择性的LRRK2小分子抑制剂，[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮(G1023)。G1023的生化Ki约为4nm。在LRRK2基于细胞的分析方法中，G1023以剂量依赖性方式有效地降低pLRRK2水平，实测的细胞IC50在10nM(图7B)。
为了测试G1023是否能抑制体内LRRK2激酶活性，向表达LRRK2G2019S蛋白的BAC转基因小鼠注射10、30和100mg/kg单一剂量的本化合物。注射后6小时采集外周和脑组织来测量化合物的浓度以及磷酸-LRRK2水平。
为了研究注射了G1023的动物中的LRRK2激酶抑制作用，化合物注射后6小时采集脾脏、淋巴结和脑组织来测定磷酸-LRRK2水平。在外周组织中，包括脾脏和淋巴结，G1023以剂量依赖性方式降低磷酸-S1292(图8A、8C)。在脑组织中，虽然降低所需的剂量更高，G1023也有效地降低磷酸-S1292水平(图8B、8C)。计算出的脑中磷酸-S1292降低所需的非结合G1023浓度与本化合物细胞IC50一致。这些数据证明G1023具有高度的脑暴露并能阻断体内LRRK2激酶活性。此外，这些数据还证明对Ser1292的LRRK2自磷酸化作用可用作药效学标记物来测量体内LRRK2激酶抑制剂的功效。
LRRK2激酶抑制剂减弱帕金森突变诱导的神经突生长缺陷
为了测试LRRK2激酶活性的抑制作用是否能改善PD突变诱导的神经元毒性，发明人使用源自LRRK2BAC转基因小鼠的培养的胚胎海马神经元。当与源自同窝出生的非转基因小鼠的海马神经元相比时，这些神经元表现出由更短的全部神经突长度所证明的神经突生长缺陷(图9)。发明人用LRRK2激酶抑制剂G1023处理所述神经元培养物。发明人发现G1023以剂量依赖性方式逆转源自LRRK2BAC转基因小鼠的神经元的神经突生长缺陷这些数据表明LRRK2激酶活性的化学抑制作用能在功能上阻断LRRK2PD突变诱导的神经元毒性。
S1292是体内LRRK2自磷酸化作用位点
从本文中所公开的实验结果，可以看出S1292是体内LRRK2自磷酸化作用位点。若干条证据支持LRRK2激酶活性是S1292磷酸化作用所需的。首先，在体外自磷酸化作用分析方法(图1)、转染的异种细胞(图2A)和来自过度表达LRRK2的BAC转基因小鼠组织(图2B)中所述激酶死亡突变消除了S1292磷酸化作用。其次，高特异性LRRK2抑制剂在LRRK2细胞系(图7B)和LRRK2转基因小鼠(图8)中都阻断了S1292磷酸化作用。最后，多种结构多样性的小分子LRRK2激酶抑制剂在基于细胞的分析方法中阻断了S1292磷酸化作用，这提供了LRRK2激酶活性为细胞中S1292磷酸化作用所需的化学证实。重要的是，pLRRK2降低所需的浓度与所述化合物的LRRK2生化Ki密切相关。总而言之，所有的证据提示S1292是体内LRRK2自磷酸化作用位点。
尽管多种其他LRRK2自磷酸化作用位点先前已被报道过，但在细胞或动物模型中，甚至在过度表达的情况下，是没有被检测到的。S1292自磷酸化作用在来自转染的细胞和转基因动物的裂解液中容易检测到。S1292是迄今经鉴别的在体内以显著量存在的唯一的LRRK2自磷酸化作用位点。所述S1292自磷酸化作用位点的鉴别为在哺乳动物受试者中监测LRRK2激酶活性提供了有力的生物标记物工具。
家族性帕金森突变增加了对S1292的LRRK2自磷酸化作用
所有确证的包括R1441G、Y1699C、G2019S和I2020T的LRRK2家族性帕金森病突变，当在293T细胞中表达时增加了S1292自磷酸化作用。在这些家族性突变中，只有G2019S已实际地表现出体外LRRK2激酶活性的增加。G2019S位于激酶活化环。已提出G2019S突变可能改变激酶活化环的构象从而活化LRRK2激酶。然而，发现也靠近激酶活化环的I2020T不能始终增加体外LRRK2激酶活性。一种可能的解释是用在生化分析方法中的底物不是内源性底物。因此这些蛋白的磷酸化作用可能不能准确地代表体内LRRK2激酶活性。本文中显示两种突变都能增加基于细胞的系统中的S1292磷酸化作用，这就提示LRRK2激酶结构域中的两种PD突变增加了其激酶活性。R1441G和Y1699C突变位于ROC-COR结构域。已显示两种突变都可降低LRRK2GTPase活性。已显示GTP结合是体内LRRK2激酶活性所需的。本公开证明在基于细胞的体系中GTP结合是S1292自磷酸化作用所需的(图5A)。因此，由R1441G和Y1699C突变引起的GTPase活性的降低将导致更多的LRRK2蛋白处于GTP结合状态，从而增加S1292自磷酸化作用。
值得注意的是，没有发现位于WD40结构域的确证的PD风险因子突变G2385R增加S1292自磷酸化作用。一种简单的解释或许是G2385R突变可能不影响LRRK2激酶活性或自磷酸化作用。或者，在293细胞中LRRK2的异种表达可以不为LRRK2自磷酸化作用提供适当的细胞环境。当比较体外、293细胞和动物模型中G2019S突变的S1292自磷酸化作用水平时，增加的水平分别为3、5和10。这就提示体内S1292自磷酸化作用高于体外的。
S1292自磷酸化作用在LRRK2PD突变诱导的神经元毒性中的作用
假定增加的S1292自磷酸化作用对所有的家族性帕金森突变都是同一主题(unifying theme)，可合理地假设S1292自磷酸化作用对LRRK2功能和其在PD发病机理上的作用可能是重要的。在基于细胞的LRRK2模型中，已显示帕金森突变在细胞系和初级神经元中都引起细胞毒性。重要的是，已显示激酶活性是毒性所需的。胚胎海马神经元中LRRK2R1441G/G2019S突变的表达降低了神经突长度和复杂性这一事实确证了已发表的实验结果。还与已发表的数据一致的是，发现激酶死亡突变可改善神经突生长表型。重要的是，S1292A突变还减少了神经突生长表型。S1292自磷酸化作用可能是诱导细胞毒性的LRRK2激酶活性下游机制的部分。值得注意的是，S1292位于LRR结构域和ROC结构域的接点处。这一位点的磷酸化作用可诱导蛋白构象改变并导致蛋白-蛋白相互作用的改变。
LRRK2PD突变诱导神经元毒性的机制仍是未知的。当在神经元中表达时发现带有PD突变的LRRK2蛋白在微管上积聚。这与细胞系和初级神经元中的实验结果是一致的。这些聚集物对选择性自噬底物p62(SQSTM1)呈阳性。p62阳性聚集物的积聚是损伤的自噬功能的特征。既然认为神经元中的自噬负荷(cargos)是按通往溶酶体的路径沿着微管网络来运输，微管上p62的积聚可能提示在表达LRRK2PD突变神经元中的损伤的自噬运输。既然观察到LRRK2在对p62、LC3和Lys-63多聚泛素染色呈阳性的大的穿孔中积聚，自体溶酶体降解途径可能被损伤。在分化的神经元中自噬是重要的“管家”功能，而自噬的丧失则导致神经变性并导致神经系统缺陷。这就提示LRRK2PD突变可能通过自噬损伤引起细胞毒性。有趣的是，既然S1292A突变不能改善LRRK2阳性自体溶酶体的表现，Ser1292磷酸化作用可能在自体溶酶体降解的上游起作用。重要的是，激酶死亡突变(D1994A)消除了LRRK2微管和自体溶酶体积聚，这就提示两者都是激酶活性所需的。LRRK2的底物可能仍有待鉴别。
LRRK2自磷酸化作用作为体内LRRK2激酶活性的标记物
S1292自磷酸化作用可作为体内LRRK2激酶活性强有力的标记物。此外，S1292自磷酸化作用在来自转基因动物LRRK2的组织裂解液能容易地被检测到。这就为监测体内LRRK2激酶活性敲除提供了药效学分析方法。总而言之，S1292自磷酸化作用能用来开发针对LRRK2激酶抑制剂的化合物筛选工具。
LRRK2调节剂
用于本发明的LRRK2调节剂或抑制剂可以包括式I的化合物或式II的化合物。
在一个实施方案中，所述LRRK2调节剂为式I的化合物：
Figure BDA00003588085300261
或其可以药用的盐，
其中：
m为0至3；
X为：-NRa-、-O-、或-S(O)r-，其中r为0至2且Ra为氢或C1-6烷基；
R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基或卤素所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
或R1和Ra与它们所连接的原子可一起形成三到六元环，该环可以任选地地包括选自O、N和S的另外的杂原子，并被氧代、卤素或C1-6烷基所取代；
R2为：卤素、C1-6烷氧基、氰基、C2-6炔基、C2-6烯基、卤代-C1-6烷基、卤代-C1-6烷氧基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、乙酰基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
R3为：-OR4、卤素、氰基、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
R4为：氢、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基或卤素所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基或卤素取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
R5为：氢、或C1-6烷基；
n为0或1；
R6为：氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基、或杂环基-C1-6烷基，其中所述C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基和杂环基-C1-6烷基各自可以任选地被一个、两个、三个或四个独立选自C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基的基团所取代，或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环；
或R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成三元到七元环，该环任选地包括选自O、N和S(O)n的另外的杂原子，并任选地被一个、两个、三个或四个独立选自C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基的基团所取代，或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环；和
R7为：卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、或卤代-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，n为0。
在式I的某些实施方案中，n为1。
在式I的某些实施方案中，m为0至2。
在式I的某些实施方案中，m为0或1。
在式I的某些实施方案中，m为0。
在式I的某些实施方案中，m为1。
在式I的某些实施方案中，r为0。
在式I的某些实施方案中，r为2。
在式I的某些实施方案中，X为-NRa-OR-O-。
在式I的某些实施方案中，X为-NRa。
在式I的某些实施方案中，X为-O-。
在式I的某些实施方案中，X为-S(O)n-。
在式I的某些实施方案中，X为-NH-OR-O-。
在式I的某些实施方案中，Ra为氢。
在式I的某些实施方案中，Ra为C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、或其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、或C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为卤代-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为氨基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为任选地被C1-6烷基所取代的C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为四氢吡喃基。
在式I的某些实施方案中，R1为四氢呋喃基。
在式I的某些实施方案中，R1为四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、3,3-二甲基丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环丙基乙基、甲氧基乙基、氧杂环丁烷基、或四氢呋喃基甲基。
在式I的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、3,3-二甲基丙基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环丙基乙基、甲氧基乙基、氧杂环丁烷基、或四氢呋喃基甲基。
在式I的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、3,3-二甲基丙基、环戊基、环己基、环戊基甲基、甲氧基乙基、氧杂环丁烷基、或四氢呋喃基甲基。
在式I的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、或异丁基。
在式I的某些实施方案中，R1为甲基或乙基。
在式I的某些实施方案中，R1为甲基。
在式I的某些实施方案中，R1为乙基。
在式I的某些实施方案中，R1为：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、或环丙基乙基。
在式I的某些实施方案中，R1为：环戊基、环己基、或环戊基甲基。
在式I的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、卤代-C1-6烷氧基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、氰基、C2-6炔基、C2-6烯基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、氰基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为：卤素、卤代-C1-6烷基、或氰基。
在式I的某些实施方案中，R2为：卤素、或卤代-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为卤素。
在式I的某些实施方案中，R2为C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R2为卤代-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R2为卤代-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为C3-6环烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为四氢呋喃基。
在式I的某些实施方案中，R2为四氢呋喃基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为氧杂环丁烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R2为卤素、三氟甲基或氰基。
在式I的某些实施方案中，R2为氯、三氟甲基或氰基。
在式I的某些实施方案中，R2为氟、氯或溴。
在式I的某些实施方案中，R2为氯。
在式I的某些实施方案中，R2为氟。
在式I的某些实施方案中，R2为溴。
在式I的某些实施方案中，R2为三氟甲基。
在式I的某些实施方案中，R2为甲氧基。
在式I的某些实施方案中，R2为氰基。
在式I的某些实施方案中，R2为C2-6炔基。
在式I的某些实施方案中，R2为C2-6烯基。
在式I的某些实施方案中，R3为-OR4。
在式I的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、或卤代-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R3为：卤素、或-OR4。
在式I的某些实施方案中，R3为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、或C3-6环烷基-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为：C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、或C3-6环烷基-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为：卤素、C1-6烷氧基、氰基、或卤代-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为：卤素、C1-6烷氧基、或卤代-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为：甲氧基、卤素、三氟甲氧基、二氟甲氧基、2-卤代-乙氧基或2,2,2-三卤代乙氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为：甲氧基、或卤素。
在式I的某些实施方案中，R3为：甲氧基、氯、或氟。
在式I的某些实施方案中，R3为甲氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为氯。
在式I的某些实施方案中，R3为氟。
在式I的某些实施方案中，R3为：C1-6烷氧基、氰基、或卤代-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为：C1-6烷氧基、或卤代-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为甲氧基。
在式I的某些实施方案中，R3为氰基。
在式I的某些实施方案中，R3为C3-6环烷基。
在式I的某些实施方案中，R3为C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R3为四氢呋喃基。在式I的某些实施方案中，R3为四氢呋喃基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R3为氧杂环丁烷基。
在式I的某些实施方案中，R3为氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
在式I的某些实施方案中，R4为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、或C3-6环烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为卤代-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为C3-6环烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为四氢呋喃基。
在式I的某些实施方案中，R4为四氢呋喃基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为氧杂环丁烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为或氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R4为：甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、环丙基甲基、环丁基甲基、2-卤代乙基、或2,2,2-三卤代乙基。
在式I的某些实施方案中，R4为甲基。
在式I的某些实施方案中，R5为氢。
在式I的某些实施方案中，R5为C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R5为甲基。
在式I的某些实施方案中，R5为乙基。
在式I的某些实施方案中，R6为氢。
在式I的某些实施方案中，R6为C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R6为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R6为羟基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R6为氨基-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R6为任选地被一个、两个或三个基团所取代的C3-6环烷基，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基；或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，R6为C3-6环烷基-C1-6烷基，其中其C3-6环烷基部分任选地被一个、两个或三个基团所取代，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基；或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，其中R6为杂环基，所述杂环可以是：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基、或8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代。
在式I的某些实施方案中，其中R6为杂环基，所述杂环可以是：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、或吗啉基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代，即，所述杂环基任选地被一个、两个或三个基团所取代，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基，或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，R6为任选地被一个、两个或三个基团所取代的杂环基，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基；或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，其中R6为杂环基-C1-6烷基，其杂环基部分可以是：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基、或8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代，即，所述杂环基部分任选地被一个、两个或三个基团所取代，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基；或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，其中R6为杂环基-C1-6烷基，其杂环基部分可以是：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、或吗啉基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代。
在式I的某些实施方案中，R6为杂环基-C1-6烷基，其中其杂环基部分任选地被一个、两个或三个基团所取代，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基；或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，R6为：氢、甲基、乙基、异丙基、或环丙基。
在式I的某些实施方案中，R6为：氢、甲基、乙基、异丙基、2-氨基-丙基、氧杂环丁烷-3-基、2-甲氧基-乙基、2-羟基-乙基、环丙基、哌啶-4-基、1-甲基-哌啶-4-基、叔丁基、2-羟基-2-甲基-丙基、环丁基、1-甲基-环丁基、2-羟基-丙基、1-氰基-环丙基、3,3-二氟-环丁基、环丙基甲基、3-氟-环丁基、或2,2-二氟乙基、
在式I的某些实施方案中，R6为氢。
在式I的某些实施方案中，R6为甲基。
在式I的某些实施方案中，R6为乙基。
在式I的某些实施方案中，R6为异丙基。
在式I的某些实施方案中，R6为2-氨基-丙基。
在式I的某些实施方案中，R6为氧杂环丁烷-3-基。
在式I的某些实施方案中，R6为2-甲氧基-乙基。
在式I的某些实施方案中，R6为2-羟基-乙基。
在式I的某些实施方案中，R6为环丙基。
在式I的某些实施方案中，R6为哌啶-4-基。
在式I的某些实施方案中，R6为1-甲基-哌啶-4-基。
在式I的某些实施方案中，R6为叔丁基。
在式I的某些实施方案中，R6为2-羟基-2-甲基-丙基。
在式I的某些实施方案中，R6为环丁基。
在式I的某些实施方案中，R6为1-甲基-环丁基。
在式I的某些实施方案中，R6为2-羟基-丙基。
在式I的某些实施方案中，R6为1-氰基-环丙基。
在式I的某些实施方案中，R6为3,3-二氟-环丁基。
在式I的某些实施方案中，R6为环丙基甲基。
在式I的某些实施方案中，R6为3-氟-环丁基。
在式I的某些实施方案中，R6为2,2-二氟乙基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成三元到七元环，该环任选地包括选自O、N和S(O)n的另外的杂原子，并任选地被一个、两个或三个基团所取代，该基团独立地选自C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、或杂环基，或两个所述基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，其中R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成三元到七元环，该环任选地包括选自O、N和S(O)n的另外的杂原子，所述环可以是：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、氮杂基(azepinyl)、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基、或8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代。
在式I的某些实施方案中，其中R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成三元到七元环，该环任选地包括选自O、N和S(O)n的另外的杂原子，所述环可以是：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、或吗啉基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成吗啉基团，该基团任选地被独立选自C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基的基团取代一次或两次，或两个基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成哌啶基团，该基团任选地被独立选自C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基的基团取代一次或两次，或两个基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成哌嗪基团，该基团任选地被独立选自C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基的基团取代一次或两次，或两个基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷基团，该基团任选地被独立选自C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基的基团取代一次或两次，或两个基团与它们所连接的原子可一起形成五元或六元环。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成选自下述的基团：吗啉-4-基、4-羟基-哌啶-1-基、八氢-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、2-羟基-哌啶-1-基、4,4-二甲基-哌啶-1-基、3,5-二甲基-哌啶-1-基、1-羟基-1-甲基-乙基-哌啶-1-基、3-羟基-吡咯烷-1-基、4-甲基-哌啶-1-基、哌啶-1-基、氮杂环丁烷-1-基、4,4-二氟-哌啶-1-基、3-甲基-哌啶-1-基、4-甲氧基-哌啶-1-基、3,3-二氟-哌啶-1-基、4-氰基-哌啶-1-基、4-氟-哌啶-1-基、3-甲氧基-哌啶-1-基、4-乙基-哌嗪-1-基、4-乙酰基-哌嗪-1-基、3-三氟甲基-哌啶-1-基、4-叔丁基-哌啶-1-基、2-羟基-乙基-哌嗪-1-基、2-甲基-吡咯烷-1-基、4-羟基甲基-哌啶-1-基、2-甲基-哌啶-1-基、吡咯烷-1-基、4-甲烷磺酰基-哌嗪-1-基、3-三氟甲基-吡咯烷-1-基、4-(2,2,2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基、2-甲基-吗啉-4-基、2,6-二甲基-吗啉-4-基、2,2-二乙基-吗啉-4-基、3-羟基甲基-吗啉-4-基、2-异丁基-吗啉-4-基、2-羟基甲基-吗啉-4-基、3,3-二甲基-吗啉-4-基、4-甲基-哌嗪-1-基、4-异丙基-哌嗪-1-基、哌嗪-1-基、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基、(S)-3-甲基-吗啉-4-基、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基、(R)-3-甲基-吗啉-4-基、4-环丙烷羰基-哌嗪-1-基、4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-哌啶-1-基、4-环丁基-哌嗪-1-基、(R)-3-羟基-吡咯烷-1-基、4-氧杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基、3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基、4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基、3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-基、4-二甲基氨基-哌啶-1-基、4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基、4,4-二氟-哌啶-1-基、3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基、2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基、4-甲氧基-哌啶-1-基、[1,4]氧杂氮杂环庚烷-4-基、(2R,6S)-2,6-二甲基-吗啉-4-基、3-羟基-氮杂环丁烷-1-基、3-氰基-吡咯烷-1-基、3,5-二甲基-哌嗪-1-基、(3R,5S)-二甲基-哌嗪-1-基、3-氟-吡咯烷-1-基、(S)-3-氟-吡咯烷-1-基、哌嗪-1-基、3,3-二氟-吡咯烷-1-基、3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-基、2,2,6,6-四氟-吗啉-4-基、2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基、(S)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基、(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基、(3S,4S)-3,4-二氟吡咯烷-1-基、3,4-二氟吡咯烷-1-基、和3-甲氧基吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成选自下述的基团：吗啉-4-基、4-羟基-哌啶-1-基、八氢-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、2-羟基-哌啶-1-基、4,4-二甲基-哌啶-1-基、3,5-二甲基-哌啶-1-基、1-羟基-1-甲基-乙基-哌啶-1-基、3-羟基-吡咯烷-1-基、4-甲基-哌啶-1-基、哌啶-1-基、氮杂环丁烷-1-基、4,4-二氟-哌啶-1-基、3-甲基-哌啶-1-基、4-甲氧基-哌啶-1-基、3,3-二氟-哌啶-1-基、4-氰基-哌啶-1-基、4-氟-哌啶-1-基、3-甲氧基-哌啶-1-基、4-乙基-哌嗪-1-基、4-乙酰基-哌嗪-1-基、3-三氟甲基-哌啶-1-基、4-叔丁基-哌啶-1-基、2-羟基-乙基-哌嗪-1-基、2-甲基-吡咯烷-1-基、4-羟基甲基-哌啶-1-基、2-甲基-哌啶-1-基、吡咯烷-1-基、4-甲烷磺酰基-哌嗪-1-基、3-三氟甲基-吡咯烷-1-基、4-(2,2,2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基、2-甲基-吗啉-4-基、2,6-二甲基-吗啉-4-基、2,2-二乙基-吗啉-4-基、3-羟基甲基-吗啉-4-基、2-异丁基-吗啉-4-基、2-羟基甲基-吗啉-4-基、3,3-二甲基-吗啉-4-基、4-甲基-哌嗪-1-基、4-异丙基-哌嗪-1-基、哌嗪-1-基、3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基、(S)-3-甲基-吗啉-4-基、2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基、8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基、(R)-3-甲基-吗啉-4-基、4-环丙烷羰基-哌嗪-1-基、4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-哌啶-1-基、4-环丁基-哌嗪-1-基、(R)-3-羟基-吡咯烷-1-基、4-氧杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基、3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基、4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基、3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-基、4-二甲基氨基-哌啶-1-基、和4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-羟基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成八氢-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-羟基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4,4-二甲基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3,5-二甲基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成1-羟基-1-甲基-乙基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-羟基-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-甲基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成氮杂环丁烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4,4-二氟-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-甲基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-甲氧基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3,3-二氟-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-氰基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-氟-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-甲氧基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-乙基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-乙酰基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-三氟甲基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-叔丁基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-羟基-乙基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-甲基-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-羟基甲基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-甲基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-甲烷磺酰基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-三氟甲基-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-(2,2,2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2,6-二甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2,2-二乙基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-羟基甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-异丁基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-羟基甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3,3-二甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-甲基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-异丙基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(S)-3-甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(R)-3-甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-环丙烷羰基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-环丁基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(R)-3-羟基-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-氧杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-二甲基氨基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4,4-二氟-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基。在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成4-甲氧基-哌啶-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成[1,4]氧杂氮杂环庚烷-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(2R,6S)-2,6-二甲基-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-羟基-氮杂环丁烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-氰基-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3,5-二甲基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(3R,5S)-二甲基-哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3-氟-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(S)-3-氟-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成哌嗪-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3,3-二氟-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2,2,6,6-四氟-吗啉-4-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基。在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(S)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基。
在式I的某些实施方案中，R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成(3S,4S)-3,4-二氟吡咯烷-1-基、3,4-二氟吡咯烷-1-基、和3-甲氧基吡咯烷-1-基。
在式I的某些实施方案中，R7为卤素。
在式I的某些实施方案中，R7为C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R7为C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R7为卤代-C1-6烷基。
在式I的某些实施方案中，R7为卤代-C1-6烷氧基。
在式I的某些实施方案中，R7为卤素或甲氧基。
在式I的某些实施方案中，R7为氟、氯或甲氧基。
在式I的某些实施方案中，R7为氟或氯。
在式I的某些实施方案中，R7为甲氧基。
在式I的某些实施方案中，R7为氯。
在式I的某些实施方案中，R7为氟。
在式I的某些实施方案中，所述LRRK2调节剂化合物为：
[4-(5-氟-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氟-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N,N-二甲基-苯甲酰胺
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-环丙基-3-甲氧基-苯甲酰胺
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-二氟甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(八氢-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-羟基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4,4-二甲基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3,5-二甲基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-哌啶-1-基]-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-羟基-吡咯烷-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-甲基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-哌啶-1-基-甲酮
氮杂环丁烷-1-基-[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4,4-二氟-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-甲基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-甲氧基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3,3-二氟-哌啶-1-基)-甲酮
1-[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰基]-哌啶-4-腈
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-氟-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-甲氧基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-乙基-哌嗪-1-基)-甲酮
1-{4-[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-三氟甲基-哌啶-1-基)-甲酮
(4-叔丁基-哌啶-1-基)-[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-[4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-1-基]-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-甲基-吡咯烷-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-羟基甲基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-甲基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-甲烷磺酰基-哌嗪-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-三氟甲基-吡咯烷-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-[4-(2,2,2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-甲酮
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2,6-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2,2-二乙基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-羟基甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-异丁基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-羟基甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3,3-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-哌嗪-1-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-二氟甲氧基-苯基]-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-乙氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰胺
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基-苯甲酰胺
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-异丙基-3-甲氧基-苯甲酰胺
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
[4-(5-氯-4-丙氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-乙基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-氧杂-8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-8-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-乙氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-异丙氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-((S)-3-甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-((R)-3-甲基-吗啉-4-基)-甲酮
N-(3-氨基-丙基)-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰胺
[4-(5-环丙基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-异丁基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-丙基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-异丙基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-环丙烷羰基-哌嗪-1-基)-甲酮
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-哌啶-1-基]-甲酮
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-三氟甲基-吡咯烷-1-基)-甲酮
1-[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰基]-哌啶-4-腈
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-环丁基-哌嗪-1-基)-甲酮
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-[4-(2,2,2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-甲酮
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-甲氧基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-((R)-3-羟基-吡咯烷-1-基)-甲酮
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-氧杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-异丙氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(环丙基甲基-氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-环丁基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-羟基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-乙基-哌嗪-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-环丁氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-环丁氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-乙基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-环戊基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(1-甲基-环丁基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-环己基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(4-{5-氯-4-[(四氢-呋喃-3-基甲基)-氨基]-嘧啶-2-基氨基}-3-甲氧基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-碘-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-异丙氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-乙氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4,4-二氟-哌啶-1-基)-甲酮
(4-{5-氯-4-[(四氢-呋喃-2-基甲基)-氨基]-嘧啶-2-基氨基}-3-甲氧基-苯基)-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(环丁基甲基-氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-碘-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-环丁基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-环丙基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(2-环丙基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(环戊基甲基-氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-((R)-2,2-二-氘代-3-甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-(2,2,2-三氟-乙氧基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-[5-氯-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-(2,2,2-三氟-乙氧基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-((S)-2,2-二-氘代-3-甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基]-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-三氟甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-环丁基-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-乙氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-基)-甲酮
{4-[5-溴-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-乙氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-甲酮
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺
4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N-(四氢-吡喃-3-基)-苯甲酰胺
{4-[5-氯-4-(四氢-吡喃-3-基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-环丁氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-溴-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-环丁氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(4-哌啶-4-基-哌嗪-1-基)-甲酮
{4-[5-氯-4-(2,2,2-三氟-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(2,2-二氟-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-异丙氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-溴-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-哌啶-1-基]-甲酮
(4-(5-溴-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯基)(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)甲酮
1-(4-(5-溴-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰基)哌啶-4-腈
(3-甲氧基-4-(5-甲氧基-4-(甲基氨基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(吗啉代)甲酮
N-(3-氨基丙基)-4-(5-氯-4-(甲基氨基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺
[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-丙-1-炔基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-5-丙-1-炔基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-溴-4-(2-甲氧基-乙氧基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N,N-二甲基-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-(2-羟基-乙基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-环丙基-2-甲氧基-苯甲酰胺
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-(4,4-二氟-哌啶-1-基)-甲酮
[5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
5-氯-N-环丙基-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-苯甲酰胺
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-哌嗪-1-基-甲酮
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-甲酮
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-(3-羟基-吡咯烷-1-基)-甲酮
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺
5-氯-N-环丙基-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
N-叔丁基-5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
5-氯-2-甲氧基-N,N-二甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-(2-羟基甲基-吗啉-4-基)-甲酮
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-(2-羟基-乙基)-2-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-(1-甲基-环丁基)-苯甲酰胺
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-[1,4]氧杂氮杂环庚烷-4-基-甲酮
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-((2R,6S)-2,6-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮
1-[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯甲酰基]-哌啶-4-腈
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-(2-羟基-丙基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-(3-羟基-氮杂环丁烷-1-基)-甲酮
5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-(1-氰基-环丙基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
1-[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯甲酰基]-吡咯烷-3-腈
[5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-((3R,5S)-二甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺
5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺
5-氯-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-哌嗪-1-基-甲酮
1-[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰基]-吡咯烷-3-腈
1-[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰基]-吡咯烷-3-腈
[5-氯-2-乙氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
2-氟-5-甲氧基-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
5-氯-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-2-甲氧基-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
(4-(5-环丙基-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮
1-{2-[2-甲氧基-4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-基}-乙酮
{4-[5-氯-4-(2-甲氧基-乙氧基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-溴-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-2-氟-5-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-溴-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-异丙氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(2-甲氧基-乙氧基)-嘧啶-2-基氨基]-3-环丁氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-环戊氧基-苯基]-(2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-环戊氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-(2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基)-甲酮
2-(2-甲氧基-4-(2,2,6,6-四氟吗啉-4-羰基)苯基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(4-(4,4-二氟哌啶-1-羰基)-2-甲氧基苯基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-环丙基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-(3,3-二氟-环丁基)-3-甲氧基-苯甲酰胺
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-环丙基甲基-3-甲氧基-苯甲酰胺
2-[4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N,N-二甲基-苯甲酰胺
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N,N-二乙基-3-甲氧基-苯甲酰胺
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-异丙基-3-甲氧基-苯甲酰胺
2-[2-甲氧基-4-(吡咯烷-1-羰基)-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
2-[4-(3-氟-氮杂环丁烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基-苯甲酰胺
2-[2-甲氧基-4-(哌啶-1-羰基)-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-(2,2-二氟-乙基)-3-甲氧基-苯甲酰胺
N-叔丁基-4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰胺
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-乙基-N-异丙基-3-甲氧基-苯甲酰胺
2-[4-(3,3-二氟-吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
2-[4-(3,3-二氟-氮杂环丁烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
2-[4-((R)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
2-[4-(氮杂环丁烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-N-异丙基-3-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
{4-[5-氯-4-(四氢-呋喃-3-基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[3-异丙氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-乙氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-环丙氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-环丙氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(2-甲烷磺酰基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
2-[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-甲氧基-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
2-[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-甲氧基-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
2-[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
2-[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
2-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-甲氧基-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
2-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
2-[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
2-[2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-1-吗啉-4-基-乙酮
N-(3-氨基-丙基)-5-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
{4-[5-溴-4-(2-甲氧基-乙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(2-甲氧基-丙基氨基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
4-(5-氯-4-(甲基氨基)嘧啶-2-基氨基)-N,N,3-三甲基苯甲酰胺
(4-(5-氯-4-(甲基氨基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲基苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(5-氯-4-(甲基氨基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲基苯基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-(三氟甲氧基)苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-(三氟甲氧基)苯基)(吗啉代)甲酮
(5-氯-2-甲氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(全氘吗啉代)甲酮
(5-氟-2-甲氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮
[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(5-氰基-4-乙基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-N,N-二甲基-苯甲酰胺
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-2-氟-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮
(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-2-氟-3-甲氧基苯基)甲酮
(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基(2-氟-3-甲氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)甲酮
5-氯-4-(5-氯-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺
2-(4-((3S,4S)-3,4-二氟吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
(5-氯-2-甲氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(3-甲氧基吡咯烷-1-基)甲酮
(2-氟-5-甲氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(3-甲氧基吡咯烷-1-基)甲酮
2-氟-N-(2-羟基-2-甲基丙基)-5-甲氧基-N-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯甲酰胺
((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)(2-氟-5-甲氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)甲酮
(2-氟-5-甲氧基-4-(4-(2-甲氧基乙氧基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(吗啉代)甲酮
(2-乙氧基-5-氟-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-异丙氧基苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-2-氟-3-异丙氧基苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(5-氯-4-(哌啶-1-基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(5-氯-4-(吡咯烷-1-基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(5-氯-4-乙基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-氯-4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氯-5-甲氧基-4-(4-甲氧基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-甲氧基-4-(4-甲氧基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{4-[5-氯-4-(四氢-吡喃-4-基氧基)-嘧啶-2-基氨基]-3-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
5-氯-N-(1-氰基-环丙基)-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
5-氯-N-(1-氰基-环丙基)-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(2,6-二甲基-吗啉-4-基)-甲酮
[3-甲氧基-4-(4-吡咯烷-1-基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-环丁氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
N-(3,3-二氟-环丁基)-3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-氧杂环丁烷-3-基-苯甲酰胺
[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基)-甲酮
[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基)-甲酮
[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
N,N-二乙基-3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
(4-二甲基氨基-哌啶-1-基)-[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-甲酮
(2,6-二甲基-吗啉-4-基)-[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-甲酮
1-[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰基]-哌啶-4-腈
[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-[4-(2,2,2-三氟-乙基)-哌嗪-1-基]-甲酮
[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(4-甲氧基-哌啶-1-基)-甲酮
3-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺
N-(4,4-二氟-环己基)-3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-(氧杂环丁烷-3-基氧基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-环丙基甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-环丁基甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
N-乙基-3-甲氧基-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
[4-(5-溴-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-5-氯-2-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-环丙基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-溴-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-氯-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氯-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氯-4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-溴-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-2-氯-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(5-氯-4-(5-氯-4-(甲基氨基)嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-(2-氟-乙氧基)-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(4-(5-氯-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮
[5-乙氧基-2-氟-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
3-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-苯甲酰胺
2-氟-5-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-N-甲基-苯甲酰胺
[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-((S)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基)-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-((S)-2-甲氧基甲基-吡咯烷-1-基)-甲酮
N-乙基-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-苯甲酰胺
N-乙基-2-氟-5-甲氧基-N-(2-甲氧基-乙基)-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
[5-乙氧基-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基-氨基)-3-异丙氧基苯基)(吗啉代)甲酮
(2-氟-3-异丙氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(吗啉代)甲酮
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-(三氟甲氧基)苯基)(吗啉代)甲酮
(2-氟-3-异丙氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(吗啉代)甲酮
2-(2-甲氧基-4-(吗啉-4-羰基)苯基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
4-甲氧基-2-[2-甲氧基-4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
4-乙基氨基-2-[5-氟-2-甲氧基-4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
2-[5-氟-2-甲氧基-4-(吗啉-4-羰基)-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
2-[4-((2R,6S)-2,6-二甲基-吗啉-4-羰基)-5-氟-2-甲氧基-苯基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
2-[4-((2R,6S)-2,6-二甲基-吗啉-4-羰基)-5-氟-2-甲氧基-苯基氨基]-4-乙基氨基-嘧啶-5-腈
4-(5-氰基-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-N,N-二甲基-苯甲酰胺
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-[4-(2-甲氧基-乙基)-哌嗪-1-基]-甲酮
[5-氯-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-甲氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(六氢-吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基)-甲酮
[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(1S,5R)-8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-(1S,5R)-8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷-3-基-甲酮
2-氟-5-甲氧基-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-苯甲酰胺
[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-基)-甲酮
[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-羟基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-2-羟基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基-甲酮
[2,3-二氟-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2,3-二氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基-甲酮
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(1S,4S)-2-氧杂-5-氮杂-双环[2.2.1]庚烷-5-基-甲酮
[2,5-二氟-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-二氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(3-吗啉-4-基-氮杂环丁烷-1-基)-甲酮
N-叔丁基-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰胺
[3-氟-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(4-氧杂环丁烷-3-基-哌嗪-1-基)-甲酮
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-甲酮
[4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-氮杂环丁烷-1-基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
5-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-2-甲氧基-苯甲酰胺
5-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-2-甲氧基-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-2-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-二氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-4-(4-异丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-甲氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-(1-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基)-甲酮
2-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
((3S,4S)-3,4-二氟-吡咯烷-1-基)-[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-甲酮
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺
2-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-[5-(2-氟-乙氧基)-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-甲酮
[5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-(1-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基)-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2,3-二氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-2-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-(2-氧杂-6-氮杂-螺[3.3]庚烷-6-基)-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-2-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
N-叔丁基-4-(5-氰基-4-乙基氨基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲氧基-苯甲酰胺
[3-二氟甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-5-(2-氟-乙氧基)-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-(2-氟-乙氧基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲氧基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2,3-二氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-二氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氯-5-氟-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-乙基氨基-2-[4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
5-氯-2-甲氧基-N-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯甲酰胺
(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-甲氧基-苯基]-甲酮
[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-(2-氟-乙氧基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[3-氯-2-氟-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-(2-氟-乙氧基)-2-甲氧基-苯基]-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2,6-二氟-3-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2,6-二氟-3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-乙氧基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2,5-二甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟甲氧基-2-甲氧基-苯基]-甲酮
[5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-三氟甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲基氨基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-2-三氟甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-2-氟-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-(2-氟-乙氧基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氟-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{2-氟-4-[4-((1R,2S)-2-氟-环丙基氨基)-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基]-5-甲氧基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
(2,2-二甲基-吗啉-4-基)-[2-氟-5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-甲酮
[3-环丙氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-2-二氟甲氧基-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-2-二氟甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-乙基氨基-2-[5-氟-4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
4-乙基氨基-2-[2-氟-4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-5-甲氧基-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
[3-氯-2,6-二甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(2,2-二甲基-吗啉-4-基)-[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-甲酮
[5-(2-氟-乙氧基)-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-(2-氟-乙氧基)-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
(5-氯-4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基苯基)(全氘吗啉代)甲酮
[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氟甲氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
{4-[乙基-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基)-氨基]-5-氟甲氧基-2-甲基-苯基}-吗啉-4-基-甲酮
[5-氟甲氧基-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
[4-(4-环丁基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-2-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-乙氧基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-2-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氟-5-氟甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
4-环丙基氨基-2-[4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
4-乙基氨基-2-[4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基-5-甲基-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
4-乙基氨基-2-[2-氟-4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-苯基氨基]-嘧啶-5-腈
[5-异丙氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-乙氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氟甲氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
[5-氯-4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(5-甲氧基-2-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(全氘吗啉代)甲酮
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5-甲氧基-2-甲基-苯甲酰胺
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-N-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
2-[2-氯-4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-5-甲基-苯基氨基]-4-乙基氨基-嘧啶-5-腈
2-[2-氯-4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-苯基氨基]-4-乙基氨基-嘧啶-5-腈
[5-环丙基甲氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氟甲氧基-2-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-哌啶-1-基-甲酮
[5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟甲氧基-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
[4-(4-环丁基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[5-氯-4-(4-环丁基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-N-(1-羟基甲基-环丙基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-N-(1-羟基-环丙基甲基)-5-甲氧基-苯甲酰胺
N-(2-羟基-2-甲基-丙基)-5-甲氧基-2-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
2-[2-氯-4-((S)-3-氟-吡咯烷-1-羰基)-5-甲氧基-苯基氨基]-4-乙基氨基-嘧啶-5-腈
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟甲氧基-2-甲基-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
5-氟甲氧基-2-甲氧基-N,N-二甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-氟-2-氟甲氧基-苯基]-吡咯烷-1-基-甲酮
[3-氟-2,6-二甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(4-(4-(2,3-四氘代-环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)(吗啉代)甲酮
[5-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2-三氟甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-2,5-甲氧基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
[2-氯-5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮
(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-2-氟-5-甲氧基苯基)(全氘吗啉代)甲酮
(5-溴-2-甲氧基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)苯基)(吗啉代)甲酮
[4-(4-环丁基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲氧基-2-甲基-苯基]-吗啉-4-基-甲酮或
[2,5-二甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮。
在另一个实施方案中，所述LRRK2调节剂为式II的化合物：
Figure BDA00003588085300691
或其可以药用的盐，
其中：
X为：-NRa-、或-O-，其中Ra为氢或C1-6烷基；
R1为：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、或任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基；
或X和R1一起形成C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、或其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基；
或R1和Ra与它们所连接的原子可一起形成三元到六元杂环，该杂环任选地被R7取代一次或多次；
R2为：C1-6烷基；卤素；C1-6烷氧基；氰基；C2-6炔基；C2-6烯基；卤代-C1-6烷基；卤代-C1-6烷氧基；任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基；其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基；-ORb，其中Rb为C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基或其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基；或-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基或任选地被R7取代一次或多次的杂环基；
R3为：氢、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-磺酰基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、其中杂环基部分任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基、任选地被R8取代一次或多次的芳基、其中芳基部分任选地被R8取代一次或多次的芳基-C1-6烷基、任选地被R8取代一次或多次的杂芳基、其中杂芳基部分任选地被R8取代一次或多次的杂芳基-C1-6烷基、或-Y-C(O)-Rd；
Y为C2-6亚烷基或键；
Rd为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基-氨基、二-C1-6烷基-氨基、卤代-C1-6烷基-氨基、二-卤代-C1-6烷基-氨基、卤代-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、或其中杂环基部分任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基；
R4为：氢、C1-6烷基、卤素、氰基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、或-Y-C(O)-Rd；
R5为：氢、或C1-6烷基;
各个R6独立地为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、氧代、氰基、卤素、或Y-C(O)-Rd；
各个R7独立地为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、卤素、氧代、C1-6烷氧基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基、-Y-C(O)-Rd、杂环基、杂环基-C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、或C3-6环烷基磺酰基；和
各个R8独立地为：氧代、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、卤素、C1-6烷基-磺酰基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基、杂环基、杂环基-C1-6烷基、-Y-C(O)-Rd、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、或C3-6环烷基-磺酰基。
在式II的某些实施方案中，X为-NRa-OR-O-。
在式II的某些实施方案中，X为-NRa。
在式II的某些实施方案中，X为-O-。
在式II的某些实施方案中，X为-NH-OR-O-。
在式II的某些实施方案中，X为-NH-。
在式II的某些实施方案中，X为-O-。
在式II的某些实施方案中，Ra为氢。
在式II的某些实施方案中，Ra为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基、或杂环基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、或其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、或C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为C1-6烷基或卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为氨基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为任选地被C1-6烷基所取代的C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为杂环基或杂环基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，其中R1为杂环基或杂环基-C1-6烷基，所述杂环基可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、吡咯烷基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代。
在式II的某些实施方案中，其中R1为杂环基或杂环基-C1-6烷基，所述杂环基可以是四氢吡喃基、哌啶基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基，各基团如本文中所定义的那样任选被取代。
在式II的某些实施方案中，R1为四氢呋喃基。
在式II的某些实施方案中，R1为四氢吡喃基。
在式II的某些实施方案中，R1为四氢呋喃基-C1-6烷基或氧杂环丁烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为四氢呋喃基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为氧杂环丁烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为或氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、3,3-二甲基丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环丙基乙基、甲氧基乙基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、2,2-二氟乙基、或四氢呋喃基甲基。
在式II的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、3,3-二甲基丙基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环丙基乙基、甲氧基乙基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、2,2-二氟乙基、或四氢呋喃基甲基。
在式II的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、3,3-二甲基丙基、环戊基、环己基、环戊基甲基、甲氧基乙基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、或四氢呋喃基甲基。
在式II的某些实施方案中，R1为2,2-二氟乙基。
在式II的某些实施方案中，R1为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、或异丁基。
在式II的某些实施方案中，R1为甲基或乙基。
在式II的某些实施方案中，R1为甲基。
在式II的某些实施方案中，R1为乙基。
在式II的某些实施方案中，R1为：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、或环丙基乙基。
在式II的某些实施方案中，R1为：环戊基、环己基、或环戊基甲基。
在式II的某些实施方案中，R1为：环丙基。
在式II的某些实施方案中，R1和Ra与它们所连接的原子一起形成三元至六元杂环。
在式II的某些实施方案中，R1和Ra与它们所连接的原子一起形成三元杂环。
在式II的某些实施方案中，R1和Ra与它们所连接的原子一起形成四元杂环。
在式II的某些实施方案中，R1和Ra与它们所连接的原子一起形成五元杂环。
在式II的某些实施方案中，R1和Ra与它们所连接的原子一起形成六元杂环。
在式II的某些实施方案中，X和R1一起形成C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、或其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，X和R1一起形成C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，X和R1一起形成任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，X和R1一起形成其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为：C1-6烷基；卤素；C1-6烷氧基；氰基；C2-6炔基；C2-6烯基；卤代-C1-6烷基；卤代-C1-6烷氧基；任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基；其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基-C1-6烷基；-ORb，其中Rb为C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基或其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基；或-C(O)-Rc。
在式II的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、卤代-C1-6烷氧基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、氰基、C2-6炔基、C2-6烯基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、氰基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为：卤素、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、C3-6环烷基、或C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为：卤素、卤代-C1-6烷基或氰基。
在式II的某些实施方案中，R2为：氟、溴、氯、碘、三氟甲基、或氰基。
在式II的某些实施方案中，R2为：氯、三氟甲基、或氰基。
在式II的某些实施方案中，R2为：卤素、或卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为卤素。
在式II的某些实施方案中，R2为C1-6烷氧基。
在式II的某些实施方案中，R2为卤代-C1-6烷氧基。
在式II的某些实施方案中，R2为卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为四氢呋喃基。
在式II的某些实施方案中，R2为四氢呋喃基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为氧杂环丁烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为氧杂环丁烷-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为氟、氯或溴。
在式II的某些实施方案中，R2为氯。
在式II的某些实施方案中，R2为氟。
在式II的某些实施方案中，R2为溴。
在式II的某些实施方案中，R2为溴。
在式II的某些实施方案中，R2为碘。
在式II的某些实施方案中，R2为三氟甲基。
在式II的某些实施方案中，R2为甲氧基。
在式II的某些实施方案中，R2为氰基。
在式II的某些实施方案中，R2为C2-6炔基。
在式II的某些实施方案中，R2为C2-6烯基。
在式II的某些实施方案中，R2为-ORb，其中Rb为C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基或其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R2为-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、其中杂环基部分任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基、任选地被R8取代一次或多次的芳基、任选地被R8取代一次或多次的杂芳基、或-Y-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，R3为：氢、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰基烷基、氨基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基、杂环基-C1-6烷基、芳基、杂芳基、或-C(O)-Rc。
在式II的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基、杂环基-C1-6烷基，或R3为-C(O)-Rb，其中Rb为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基、杂环基-C1-6烷基、或-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基，或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、其中杂环基部分任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基、或-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、杂环基、杂环基-C1-6烷基、或-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、杂环基、或杂环基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为：C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、或C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂环基或杂环基-C1-6烷基，所述杂环基可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、吡咯烷基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂环基或杂环基-C1-6烷基，所述杂环基可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基，各自任选地被本文中所定义的R7取代一次或多次或取代一次或两次。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂环基或杂环基-C1-6烷基，所述杂环基可以是哌啶基、吗啉基、四氢吡喃基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂环基或杂环基-C1-6烷基，所述杂环基可以是哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、吗啉基、四氢吡喃基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基各自任选地被本文中所定义的R7取代一次或多次或取代一次或两次。
在式II的某些实施方案中，R3为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲氧基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、2-(吗啉-4-基)-乙基、2-羟基-2-甲基-丙烷-1-基、四氢吡喃-4-基、或吗啉-4-基-羰基。
在式II的某些实施方案中，R3为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲氧基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、2-(吗啉-4-基)-乙基、2-羟基-2-甲基-丙烷-1-基、或四氢吡喃-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为氢。
在式II的某些实施方案中，R3为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为C2-6烯基。
在式II的某些实施方案中，R3为C2-6炔基。
在式II的某些实施方案中，R3为羟基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为任选地被R7取代一次或多次的杂环基。
在式II的某些实施方案中，R3为杂环基。
在式II的某些实施方案中，R3为其中杂环基部分任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为杂环基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R3为氰基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为C1-6烷基磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为氨基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R3为任选地被R8取代一次或多次的芳基。
在式II的某些实施方案中，R3为芳基。
在式II的某些实施方案中，R3为任选地被R8取代一次或多次或取代一次或两次的苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为任选地被R8取代一次或多次或取代一次或两次的杂芳基。
在式II的某些实施方案中，R3为杂芳基。
在式II的某些实施方案中，R3为其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为：氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、甲烷磺酰基、乙磺酰基、环丙基磺酰基、仲丁基磺酰基、吗啉-4-基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、2-甲氧基乙基、2-羟基-2-甲基-丙基、3-羟基-2-甲基-丙烷-2-基、2-甲氧基-丙基、四氢-2H-吡喃-4-基、四氢呋喃-3-基、2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基、四氢-2H-吡喃-3-基、苯基、4-(甲磺酰基)苯基、4-氰基-苯基、4-氟-苯基、4-氯-苯基、3,5-二氟苯基、4-(二甲基氨基-羰基)-苯基、4-(环丙基磺酰基)苯基、2,2,2-三氟乙基、2-氟乙基、二氟甲基、2-二甲基-1,3-二噁烷-5-基、1-甲基-环丙基-羰基、3-甲基吡啶-4-基、2-甲基吡啶-4-基、吡啶-2-基、嘧啶-2-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基甲基、1-(吡啶-2-基)乙基、环丙基磺酰基、1-氰基-1-甲基-乙基(也称作2-氰基-丙烷-2-基)、2-氰基-乙基、1-氰基-乙基、2-氰基-2-甲基-丙基、1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基、1-(甲磺酰基)氮杂环丁烷-3-基、(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基、(1S,5S)-8-氧杂双环[3.2.1]辛烷-3-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基、1-乙酰基-哌啶-4-基、1-(环丙基-羰基)-哌啶-4-基、1-甲基-哌啶-4-基、1-甲基-2-氧代-哌啶-5-基、2-氧代-哌啶-5-基、1-(异丙基-羰基)-哌啶-4-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)氮杂环丁烷-3-基、1-(环丙基-羰基)-哌啶-4-基、2-甲氧基环戊基、3-甲氧基环戊基、1-甲氧基-2-甲基丙烷-2-基、四氢-2H-1,1-二氧代-噻喃-4-基、3-氟-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基、1-甲氧基丙烷-2-基、1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)吡咯烷-3-基、1-异丙基氮杂环丁烷-3-基、3-氟-1-甲基哌啶-4-基、1-乙基-3-氟哌啶-4-基、1-甲基吡咯烷-3-基、2-(甲氧基乙基)哌啶-4-基、1-甲基-1-(甲基氨基-羰基)-乙基、2-甲基-2-吗啉代-丙基、4,4-二氟环己基、吗啉-4-基-羰基、二甲基氨基-羰基-甲基、甲基氨基-羰基-甲基、1-甲基-1-(二甲基氨基-羰基)-乙基、吡咯烷-`-基-羰基、1-氰基-环丙基、1-(吡咯烷-`-基-羰基)-乙基、1-(二甲基氨基-羰基)-乙基、1-(甲氧基-羰基)-乙基、1-(叔丁基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(2,2,2-三氟乙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(乙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(环丙基甲基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(乙基氨基-羰基)-环丁基、1-(异丙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-氰基-环丁基、2-甲氧基-1-甲基-乙基、1-甲基-1-(甲氧基-羰基)-乙基、2-甲氧基-2-甲基-丙烷-1-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)-吡咯烷-3-基、异丙基磺酰基、丁烷-2-磺酰基、1-(2-氟乙基)-哌啶-4-基、3-氟-1-甲基-哌啶-4-基、1-乙基-3-氟-哌啶-4-基、吡啶-3-基甲基、6-甲基-吡啶-2-基甲基、2-(吗啉-1-基)-1,1,二甲基-乙基、嘧啶-2-基-甲基、3-氟-1-(氧杂环丁烷-3-基)-哌啶-4-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)-哌啶-3-基、1-([1,3]二氧戊环-2-基甲基)-哌啶-4-基、哒嗪-3-基甲基、哌啶-3-基、吡嗪-2-基甲基、2-羟基-3-甲基-丁烷-1-基、1-([1,3]二氧戊环-2-基甲基)-吡咯烷-3-基、嘧啶-4-基甲基、1-甲基-1H-吡唑-3-基甲基、1-甲基-1-(4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基、1-甲基-1-(5-甲基-4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基、3-氟-哌啶-4-基、2-羟基-环戊基、二甲基-[1,3]二噁烷-5-基、2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烷-2-基、2-(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)、2-(4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基、或1-甲基-1H-吡唑-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基、甲烷磺酰基、乙磺酰基、环丙基磺酰基、仲丁基磺酰基、吗啉-4-基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、2-甲氧基乙基、2-羟基-2-甲基-丙基、3-羟基-2-甲基-丙烷-2-基、2-甲氧基-丙基、四氢-2H-吡喃-4-基、四氢呋喃-3-基、2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基、四氢-2H-吡喃-3-基、苯基、4-(甲磺酰基)苯基、4-氰基-苯基、4-氟-苯基、4-氯-苯基、3,5-二氟苯基、4-(二甲基氨基-羰基)-苯基、4-(环丙基磺酰基)苯基、2,2,2-三氟乙基、2-氟乙基、二氟甲基、2-二甲基-1,3-二噁烷-5-基、1-甲基-环丙基-羰基、3-甲基吡啶-4-基、2-甲基吡啶-4-基、吡啶-2-基、嘧啶-2-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基甲基、1-(吡啶-2-基)乙基、环丙基磺酰基、1-氰基-1-甲基-乙基(也称作2-氰基-丙烷-2-基)、2-氰基-乙基、1-氰基-乙基、2-氰基-2-甲基-丙基、1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基、1-(甲磺酰基)氮杂环丁烷-3-基、(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基、(1S,5S)-8-氧杂双环[3.2.1]辛烷-3-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基、1-乙酰基-哌啶-4-基、1-(环丙基-羰基)-哌啶-4-基、1-甲基-哌啶-4-基、1-甲基-2-氧代-哌啶-5-基、2-氧代-哌啶-5-基、1-(异丙基-羰基)-哌啶-4-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)氮杂环丁烷-3-基、1-(环丙基-羰基)-哌啶-4-基、2-甲氧基环戊基、3-甲氧基环戊基、1-甲氧基-2-甲基丙烷-2-基、四氢-2H-1,1-二氧代-噻喃-4-基、3-氟-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基、1-甲氧基丙烷-2-基、1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)吡咯烷-3-基、1-异丙基氮杂环丁烷-3-基、3-氟-1-甲基哌啶-4-基、1-乙基-3-氟哌啶-4-基、1-甲基吡咯烷-3-基、2-(甲氧基乙基)哌啶-4-基、1-甲基-1-(甲基氨基-羰基)-乙基、2-甲基-2-吗啉代-丙基、4,4-二氟环己基、吗啉-4-基-羰基、二甲基氨基-羰基-甲基、甲基氨基-羰基-甲基、1-甲基-1-(二甲基氨基-羰基)-乙基、吡咯烷-`-基-羰基、1-氰基-环丙基、1-(吡咯烷-`-基-羰基)-乙基、1-(二甲基氨基-羰基)-乙基、1-(甲氧基-羰基)-乙基、1-(叔丁基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(2,2,2-三氟乙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(乙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(环丙基甲基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-(乙基氨基-羰基)-环丁基、1-(异丙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基、1-氰基-环丁基、2-甲氧基-1-甲基-乙基、1-甲基-1-(甲氧基-羰基)-乙基、2-甲氧基-2-甲基-丙烷-1-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)-吡咯烷-3-基、异丙基磺酰基、丁烷-2-磺酰基、1-(2-氟乙基)-哌啶-4-基、3-氟-1-甲基-哌啶-4-基、1-乙基-3-氟-哌啶-4-基、吡啶-3-基甲基、6-甲基-吡啶-2-基甲基、2-(吗啉-1-基)-1,1,二甲基-乙基、嘧啶-2-基-甲基、3-氟-1-(氧杂环丁烷-3-基)-哌啶-4-基、1-(氧杂环丁烷-3-基)-哌啶-3-基、1-([1,3]二氧戊环-2-基甲基)-哌啶-4-基、哒嗪-3-基甲基、哌啶-3-基、吡嗪-2-基甲基、2-羟基-3-甲基-丁烷-1-基、1-([1,3]二氧戊环-2-基甲基)-吡咯烷-3-基、嘧啶-4-基甲基、1-甲基-1H-吡唑-3-基甲基、1-甲基-1-(4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基、1-甲基-1-(5-甲基-4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基、3-氟-哌啶-4-基、2-羟基-环戊基、二甲基-[1,3]二噁烷-5-基、2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烷-2-基、2-(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)、2-(4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基、或1-甲基-1H-吡唑-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为：氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲氧基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、2-羟基-2-甲基-丙烷-1-基、四氢吡喃-4-基、或吗啉-4-基-羰基。
在式II的某些实施方案中，R3为：甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲氧基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、2-羟基-2-甲基-丙烷-1-基、或四氢吡喃-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为：甲基、乙基、异丙基、2-甲氧基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、或2-羟基-2-甲基-丙烷-1-基。
在式II的某些实施方案中，R3为：甲基、乙基、异丙基、2-甲氧基-乙基、氧杂环丁烷-3-基、或2-羟基-2-甲基-丙烷-1-基。
在式II的某些实施方案中，R3为：甲基、乙基、或异丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为氢。
在式II的某些实施方案中，R3为甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为正丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为异丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-甲氧基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为氧杂环丁烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-羟基-2-甲基-丙烷-1-基。
在式II的某些实施方案中，R3为四氢吡喃-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为吗啉-4-基-羰基。
在式II的某些实施方案中，R3为丁基。
在式II的某些实施方案中，R3为环丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为环丙基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为环丁基。
在式II的某些实施方案中，R3为甲烷磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为乙磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为环丙基磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为仲丁基磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为吗啉-4-基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-羟基-2-甲基-丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-羟基-2-甲基-丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-甲氧基-丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为四氢-2H-吡喃-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为四氢呋喃-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基。在式II的某些实施方案中，R3为四氢-2H-吡喃-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为4-(甲磺酰基)苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为4-氰基-苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为4-氟-苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为4-氯-苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为3,5-二氟苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为4-(二甲基氨基-羰基)-苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为4-(环丙基磺酰基)苯基。
在式II的某些实施方案中，R3为2,2,2-三氟乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-氟乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为二氟甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-二甲基-1,3-二噁烷-5-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-环丙基-羰基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-甲基吡啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-甲基吡啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为吡啶-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为嘧啶-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为嘧啶-5-基。
在式II的某些实施方案中，R3为吡啶-2-基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(吡啶-2-基)乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为环丙基磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-氰基-1-甲基-乙基(也称作2-氰基-丙烷-2-基)。
在式II的某些实施方案中，R3为2-氰基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-氰基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-氰基-2-甲基-丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(甲磺酰基)氮杂环丁烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为(1S,5S)-8-氧杂双环[3.2.1]辛烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-乙酰基-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(环丙基-羰基)-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-2-氧代-哌啶-5-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-氧代-哌啶-5-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(异丙基-羰基)-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(氧杂环丁烷-3-基)氮杂环丁烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(环丙基-羰基)-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-甲氧基环戊基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-甲氧基环戊基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲氧基-2-甲基丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为四氢-2H-1,1-二氧代-噻喃-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-氟-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲氧基丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(氧杂环丁烷-3-基)吡咯烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-异丙基氮杂环丁烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-氟-1-甲基哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-乙基-3-氟哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基吡咯烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(甲氧基乙基)哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-1-(甲基氨基-羰基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-甲基-2-吗啉代-丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为4,4-二氟环己基。
在式II的某些实施方案中，R3为二甲基氨基-羰基-甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为甲基氨基-羰基-甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-1-(二甲基氨基-羰基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为吡咯烷-`-基-羰基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-氰基-环丙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(吡咯烷-`-基-羰基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(二甲基氨基-羰基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(甲氧基-羰基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(叔丁基氨基-羰基)-1-甲基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(2,2,2-三氟乙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(乙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(环丙基甲基氨基-羰基)-1-甲基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(乙基氨基-羰基)-环丁基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(异丙基氨基-羰基)-1-甲基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-氰基-环丁基。
在式II的某些实施方案中，R3为二甲基-[1,3]二噁烷-5-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-甲氧基-2-甲基-丙烷-1-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-甲氧基-1-甲基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-1-(甲氧基-羰基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-氧杂环丁烷-3-基-吡咯烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为异丙基磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为丁烷-2-磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(2-氟乙基)-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-氟-1-甲基-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-乙基-3-氟-哌啶-4-基。在式II的某些实施方案中，R3为吡啶-3-基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为6-甲基-吡啶-2-基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(吗啉-1-基)-1,1,二甲基-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为嘧啶-2-基-甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-氟-1-(氧杂环丁烷-3-基)-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-(氧杂环丁烷-3-基)-哌啶-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-([1,3]二氧戊环-2-基甲基)-哌啶-4-基。
在式II的某些实施方案中，R3为哒嗪-3-基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为哌啶-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为吡嗪-2-基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-羟基-3-甲基-丁烷-1-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-([1,3]二氧戊环-2-基甲基)-吡咯烷-3-基。
在式II的某些实施方案中，R3为嘧啶-4-基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-1H-吡唑-3-基甲基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-1-(5-甲基-4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-1-(4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基。
在式II的某些实施方案中，R3为3-氟-哌啶-4-基、2-羟基-环戊基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烷-2-基、2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)。
在式II的某些实施方案中，R3为2-(4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基。
在式II的某些实施方案中，R3为1-甲基-1H-吡唑-4-基。
在式II的某些实施方案中，其中R3为芳基，所述芳基可以是未取代的苯基或被R8取代一次或多次的苯基，或在某些实施方案中，为被一个或多个基团取代一次、两次或三次的苯基，该基团独立地选自C1-6烷基、卤素、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、烷基或氰基。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂芳基或杂芳基-C1-6烷基，所述杂芳基部分可以是吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基或四唑基，各自为未取代的或被R8取代一次或两次的，或在某些实施方案中，为被C1-6烷基取代一次或两次的。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂芳基或杂芳基-C1-6烷基，所述杂芳基部分可以是吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基或噁二唑基，各自为未取代的或被R8取代一次或两次的，或在某些实施方案中，为被C1-6烷基取代一次或两次的。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂芳基或杂芳基-C1-6烷基，所述杂芳基部分可以是吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或哒嗪基，各自为未取代的或被R8取代一次或多次的。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂环基，所述杂环基部分可以是哌啶基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基，各自为未取代的或被R7取代一次或多次的。
在式II的某些实施方案中，其中R3为杂环基-C1-6烷基，所述杂环基部分可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基，各自为未取代的或被R7取代一次或多次的。
在式II的某些实施方案中，R3为-Y-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，Y为键。
在式II的某些实施方案中，Y为C2-6亚烷基。
在式II的某些实施方案中，Y为异亚丙基。
在式II的某些实施方案中，Y为亚甲基。
在式II的某些实施方案中，Y为亚乙基。
在式II的某些实施方案中，Y为-C(CH3)2-。
在式II的某些实施方案中，Y为-CH2-。
在式II的某些实施方案中，Y为-CH(CH3)-。
在式II的某些实施方案中，Y为-CH2-C(CH3)2-。
在式II的某些实施方案中，Y为-C(CH3)2-CH2-。
在式II的某些实施方案中，Rd为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基，或杂环基。
在式II的某些实施方案中，Rd为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为C1-6烷氧基。
在式II的某些实施方案中，Rd为氨基。
在式II的某些实施方案中，Rd为卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为羟基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为氰基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为C1-6烷基磺酰基C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为氨基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为任选被R6取代一次或多次的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，Rd为C3-6环烷基-C1-6烷基，其中所述C3-6环烷基部分任选被R6取代一次或多次。
在式II的某些实施方案中，Rd为任选被R7取代一次或多次的杂环基。
在式II的某些实施方案中，Rd为杂环基-C1-6烷基，其中所述杂环基部分任选被R7取代一次或多次。
在式II的某些实施方案中，Rd为1-甲基-环丙基、甲基氨基、二甲基氨基、吡咯烷-1-基、甲氧基、环丙基-甲基、乙基、2,2,2-三氟-乙基、叔丁基、或异丙基。
在式II的某些实施方案中，Rd为1-甲基-环丙基。
在式II的某些实施方案中，Rd为甲基氨基。
在式II的某些实施方案中，Rd为二甲基氨基。
在式II的某些实施方案中，Rd为吡咯烷-1-基。
在式II的某些实施方案中，Rd为甲氧基。
在式II的某些实施方案中，Rd为环丙基-甲基。
在式II的某些实施方案中，Rd为乙基。
在式II的某些实施方案中，Rd为2,2,2-三氟-乙基。
在式II的某些实施方案中，Rd为叔丁基。
在式II的某些实施方案中，Rd为异丙基。
在式II的某些实施方案中，其中Rd为杂环基或杂环基-C1-6烷基，所述杂环基可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢吡喃基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基，各自任选地被本文中所定义的R7取代一次或多次或取代一次或两次。
在式II的某些实施方案中，其中Rd为杂环基，所述杂环基部分可以是哌啶基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基，各自为未取代的或被R7取代一次或多次的。
在式II的某些实施方案中，其中Rd为杂环基-C1-6烷基，所述杂环基部分可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基，各自为未取代的或被R7取代一次或多次的。
在式II的某些实施方案中，R4为：氢、C1-6烷基、卤素、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、或-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R4为：C1-6烷基、卤素、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、或-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R4为：氢、C1-6烷基、卤素、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、或-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R4为：氢、C1-6烷基、卤素、或任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为氢或C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为氢。
在式II的某些实施方案中，R4为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为卤素。
在式II的某些实施方案中，R4为氰基。
在式II的某些实施方案中，R4为卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为羟基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为氢或甲基。
在式II的某些实施方案中，R4为其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、或杂环基。
在式II的某些实施方案中，R4为-C(O)-Rc，其中Rc为杂环基。
在式II的某些实施方案中，其中Rc为杂环基，所述杂环基可以是吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基。
在式II的某些实施方案中，其中Rc为杂环基，所述杂环基可以是哌啶基、哌嗪基或吗啉基。
在式II的某些实施方案中，R4为：氢、甲基、异丙基、环丙基、氯、或吗啉-4-基-羰基。
在式II的某些实施方案中，R4为：氢、甲基、异丙基、环丙基、或氯。
在式II的某些实施方案中，R4为氢。
在式II的某些实施方案中，R4为甲基。
在式II的某些实施方案中，R4为异丙基。
在式II的某些实施方案中，R4为环丙基。
在式II的某些实施方案中，R4为氯。
在式II的某些实施方案中，R4为吗啉-4-基-羰基。
在式II的某些实施方案中，R4为2-氟-乙基。
在式II的某些实施方案中，R4为任选地被R6取代一次或多次，或被R6取代一次或两次的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R4为C3-6环烷基-C1-6烷基，其中所述C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次，或被R6取代一次或两次。
在式II的某些实施方案中，R4为-Y-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，R3和R4与它们所连接的原子一起形成5元或6元环，该环任选地包括选自O、N和S的杂原子。
在式II的某些实施方案中，R5为氢。
在式II的某些实施方案中，R5为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R5为甲基。
在式II的某些实施方案中，各个R6独立地为C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基、或卤素。
在式II的某些实施方案中，R6为C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、或卤素。
在式II的某些实施方案中，R6为C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、或卤素。
在式II的某些实施方案中，R6为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R6为卤代-C1-6烷基。在式II的某些实施方案中，R6为C1-6烷氧基。
在式II的某些实施方案中，R6为氰基。
在式II的某些实施方案中，R6为卤素。
在式II的某些实施方案中，R6为Y-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，R6为氧代。
在式II的某些实施方案中，各个R7独立地为C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、卤素、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基、杂环基、或C3-6环烷基磺酰基，其中所述C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次。
在式II的某些实施方案中，R7为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为卤素。
在式II的某些实施方案中，R7为C1-6烷基磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R7为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为氰基。
在式II的某些实施方案中，R7为-Y-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，R7为杂环基。
在式II的某些实施方案中，R7为C3-6环烷基磺酰基，其中所述C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次。
在式II的某些实施方案中，R7为氧代。
在式II的某些实施方案中，R7为C1-6烷氧基。
在式II的某些实施方案中，R7为杂环基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，其中R7为杂环基，所述杂环基部分可以是哌啶基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基。
在式II的某些实施方案中，其中R7为杂环基-C1-6烷基，所述杂环基部分可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基。
在式II的某些实施方案中，各个R8独立地为氧代、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、卤素、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、或其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R8为氧代。在式II的某些实施方案中，R7为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为卤代-C1-6烷基。在式II的某些实施方案中，R7为卤素。在式II的某些实施方案中，R7为C1-6烷氧基。
在式II的某些实施方案中，R7为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为氰基。
在式II的某些实施方案中，R7为杂环基。
在式II的某些实施方案中，R7为-Y-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，R7为任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R7为其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R8为氧代。
在式II的某些实施方案中，R8为C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R8为卤代-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R8为卤素。
在式II的某些实施方案中，R8为C1-6烷基-磺酰基。
在式II的某些实施方案中，R8为C1-6烷氧基。
在式II的某些实施方案中，R8为C1-6烷氧基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R8为氰基、杂环基。
在式II的某些实施方案中，R8为杂环基-C1-6烷基。
在式II的某些实施方案中，R8为-Y-C(O)-Rd。
在式II的某些实施方案中，R8为C3-6环烷基。
在式II的某些实施方案中，R8为C3-6环烷基-C1-6烷基-C3-6环烷基-磺酰基。
在式II的某些实施方案中，其中R8为杂环基，所述杂环基部分可以是哌啶基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基。
在式II的某些实施方案中，其中R8为杂环基-C1-6烷基，所述杂环基部分可以是哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫吗啉基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环丁烷基、[1,3]二氧戊环基或四氢噻喃基。
在式II的某些实施方案中，所述化合物可以是：
N2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(1-(2-吗啉代乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N2-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)嘧啶-2-胺
N4-甲基-5-(三氟甲基)-N2-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基氧基)嘧啶-2-胺
5-氯-N-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
N-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺
N2-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-4-甲氧基-N-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
5-氯-4-甲氧基-N-(1-(2-甲氧基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
5-氯-4-甲氧基-N-(1-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
5-氯-N-(5-氯-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
2-甲基-1-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇
2-甲基-1-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-氯-嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇
N2-(1-(2-甲氧基乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
5-氯-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-异丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1-异丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
5-氯-N2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N2-(1-异丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(2-乙基-2H-吡唑-3-基)-5-氟-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-氟-N4-甲基-N2-(2-甲基-2H-吡唑-3-基)-嘧啶-2,4-二胺
5-氟-N4-甲基-N4-(2-丙基-2H-吡唑-3-基)-嘧啶-2,4-二胺
N2-(2,5-二甲基-2H-吡唑-3-基)-5-氟-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(3-异丙基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(3-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
N2-(3-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(3-异丙基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
5-氯-N2-(5-异丙基-2-甲基-2H-吡唑-3-基)-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-氯-4-甲氧基-N-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
5-氯-N4-甲基-N2-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N2-(5-环丙基-2-甲基-2H-吡唑-3-基)-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-氧杂环丁烷-3-基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
5-氯-N2-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N2-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1-异丙基-1H-吡唑-5-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
5-氯-4-甲氧基-N-(3-甲基-1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
N2-(1-乙基-1H-吡唑-3-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-4-甲氧基-N-(5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
N2-(1-异丙基-1H-吡唑-3-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(2,2-二甲基-1,3-二噁烷-5-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-4-甲氧基-N-(5-甲基-1-(4-(甲磺酰基)苯基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
N4-乙基-N2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(氧杂环丁烷-3-基氧基)嘧啶-2-胺
5-氯-4-(2,2-二氟乙氧基)-N-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
5-氯-N-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-2-胺
5-氯-4-甲氧基-N-(3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
(4-(4-(5-氯-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)(1-甲基环丙基)甲酮
(4-(4-(5-氯-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)(1-甲基环丙基)甲酮
4-(4-(5-氯-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)苄腈
5-氯-4-甲氧基-N-(3-甲基-1-(3-甲基吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
5-氯-N-(1-(环丙基磺酰基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
5-氯-N-(1-(环丙基磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-甲氧基嘧啶-2-胺
2-(4-(5-氯-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈
2-(4-(5-氯-4-甲氧基嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈
5-氯-4-乙氧基-N-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基)-[1-(4-甲烷磺酰基-苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-胺
(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基)-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基)-胺
(4-甲氧基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基)-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基)-胺
(4-甲氧基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基)-(5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基)-胺
(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基)-(1-甲烷磺酰基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-胺
(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基)-[5-甲基-1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基]-胺
4-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-N,N-二甲基-苯甲酰胺
4-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-吡唑-1-基]-N,N-二甲基-苯甲酰胺
4-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-吡唑-1-基]-苄腈
N2-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基)-[5-氯-1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基]-胺
(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基)-{1-[1-(2-氟-乙基)-哌啶-4-基]-3-甲基-1H-吡唑-4-基}-胺
N2-[1-(1-[1,3]二氧戊环-2-基甲基-哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(1-[1,3]二氧戊环-2-基甲基-哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-5-碘-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)嘧啶-2,4-二胺
2-甲基-1-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇
5-氯-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(二氟甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-乙基-N2-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-(4-氟苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-(甲磺酰基)氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-(3,5-二氟苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-(3,5-二氟苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-丙基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-异丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-(4-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(4-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(4-(甲磺酰基)苯基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(4-(甲磺酰基)苯基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-((1S,5S)-8-氧杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-丁基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(嘧啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(4-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(2-氟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(2-氟乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
1-(4-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙酮
环丙基(4-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲酮
环丙基(4-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲酮
1-(4-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)乙酮
N2-(5-氯-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-乙基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(嘧啶-5-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(4-甲基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(2-甲基吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(2-甲基吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
4-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)苄腈
4-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)苄腈
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(四氢呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-1-甲基哌啶-2-酮
5-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-1-甲基哌啶-2-酮
5-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-2-酮
5-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-2-酮
N2-(1-异丙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N,N-二甲基-4-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
4-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)-N,N-二甲基苯甲酰胺
N4-乙基-N2-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
4-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)苄腈
N4-乙基-N2-(5-甲基-1-(4-(甲磺酰基)苯基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N,N-二甲基-4-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)苯甲酰胺
N2-(1-(环丙基甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(5-甲基-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(环丙基磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(环丙基磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-乙基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-N4-(2,2-二氟乙基)-N2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2,4-二胺
5-氯-4-甲基-N-(3-甲基-1-(4-(甲磺酰基)苯基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-胺
N2-(1-(4-(环丙基磺酰基)苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-乙基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
2-甲基-1-(4-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)丙烷-1-酮
N4-乙基-N2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(3-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-环丙基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-((3-甲基氧杂环丁烷-3-基)甲基)-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
1-(4-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)-2-甲基丙烷-1-酮
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(1-(氧杂环丁烷-3-基)氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
环丙基(4-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲酮
环丙基(4-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-基)甲酮
1-(5-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
N4-乙基-N2-(1-乙基-1H-吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(S)-N2-(1-(2-甲氧基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(2-甲氧基环戊基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(S)-N2-(1-(2-甲氧基丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(1-甲氧基-2-甲基丙烷-2-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(R)-N2-(1-(2-甲氧基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(3-甲氧基环戊基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(1-甲基-5-(甲基氨基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(甲磺酰基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(四氢-2H-1,1-二氧代-噻喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
2-甲基-1-(4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇
2-甲基-1-(4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)丙烷-2-醇
N2-(1-(3-氟-1-(氧杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(R)-N2-(1-(1-甲氧基丙烷-2-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
1-(3-叔丁基-4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(1-甲氧基-2-甲基丙烷-2-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(R)-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-(氧杂环丁烷-3-基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(R)-N2-(1-(1-甲氧基丙烷-2-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(4-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(5-甲基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(R)-N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(1-(氧杂环丁烷-3-基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(吡啶-2-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(吡啶-2-基甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
1-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-5-腈
N4-乙基-N2-(1-(异丙基磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(异丙基磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(异丙基磺酰基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(仲丁基磺酰基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(仲丁基磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
1-(4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-异丙基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
N2-(1-(3-氟-1-甲基哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-异丙基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-(吡啶-2-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(1-(吡啶-2-基)乙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(3-异丙基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(3-环丁基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-环丁基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(R)-N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
1-(5-氯-4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
1-(3-环丙基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
1-(3-环丙基-4-(4-(乙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-2-醇
2-(5-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-N,2-二甲基丙酰胺
N2-(1-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
(R)-N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(1-甲基吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-(3-氟-1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氯-1-(1-乙基-3-氟哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(1-(乙磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(1-(乙磺酰基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(2-甲基-2-吗啉代丙基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(1-乙基-3-氟哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-(二甲基氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
2-(5-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙烷-1-醇
N2-(1-(乙磺酰基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
2-甲基-1-[3-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-丙烷-2-醇
N2-[1-(2-甲氧基-乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(2-甲氧基-乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-[3-甲基-1-(2,2,2-三氟-乙基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-二氟甲基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1-二氟甲基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-乙基-嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-[1-(4-氟-苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N4-甲基-N2-(5-甲基-1-丙基-1H-吡唑-4-基)-嘧啶-2,4-二胺
5-溴-N2-[1-(4-氯-苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
5-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-哌啶-2-酮
4-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-N,N-二甲基-苯甲酰胺
N2-[1-(4-环丙烷磺酰基-苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
4-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-苄腈
N4-乙基-N2-[1-(4-甲烷磺酰基-苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
1-{4-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-吡唑-1-基]-哌啶-1-基}-2-甲基-丙烷-1-酮
1-{4-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-哌啶-1-基}-2-甲基-丙烷-1-酮
N4-甲基-N2-[3-甲基-1-(3-甲基-吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-((R)-2-甲氧基-丙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(2,6-二甲基-四氢-吡喃-4-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(1,1-二氧代-六氢-噻喃-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-((R)-2-甲氧基-1-甲基-乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-((S)-2-甲氧基-1-甲基-乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-[3-甲基-1-((S)-1-氧杂环丁烷-3-基-吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-[5-甲基-1-((S)-1-氧杂环丁烷-3-基-吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(1-异丙基-氮杂环丁烷-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[5-甲基-1-(丙烷-2-磺酰基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-环丁基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(3-环丁基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-{1-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-3-甲基-1H-吡唑-4-基}-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-{1-[1-(2-甲氧基-乙基)-哌啶-4-基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-{1-[1-(2-氟-乙基)-哌啶-4-基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-{1-[1-(2-氟-乙基)-哌啶-4-基]-3-甲基-1H-吡唑-4-基}-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[5-氯-1-(3-氟-1-甲基-哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-乙烷磺酰基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-[5-甲基-1-(2-甲基-2-吗啉-4-基-丙基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-吡啶-3-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-环丙烷磺酰基-3-环丙基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-吡啶-3-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基)-{1-[1-(2-氟-乙基)-哌啶-4-基]-5-甲基-1H-吡唑-4-基}-胺
N4-甲基-N2-[3-甲基-1-(6-甲基-吡啶-2-基甲基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[1-(2-甲氧基-乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[1-(2-甲氧基-乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
1-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-吡唑-1-基]-2-甲基-丙烷-2-醇
1-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-2-甲基-丙烷-2-醇
N2-[1-(1,1-二甲基-2-吗啉-4-基-乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(1,1-二甲基-2-吗啉-4-基-乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(3-氟-1-甲基-哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-环丙基-N2-(1-甲烷磺酰基-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-环丙基-N2-(1-甲烷磺酰基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
1-[3-氯-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-2-甲基-丙烷-2-醇
2-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-N-甲基-异丁酰胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-嘧啶-2-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[5-氯-1-(3-氟-1-氧杂环丁烷-3-基-哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[5-氯-1-(3-氟-1-氧杂环丁烷-3-基-哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[5-甲基-1-((S)-1-氧杂环丁烷-3-基-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[3-甲基-1-((S)-1-氧杂环丁烷-3-基-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-哒嗪-3-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-哒嗪-3-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[5-甲基-1-((S)-1-甲基-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[3-甲基-1-((S)-1-甲基-哌啶-3-基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
3-[5-氯-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-2,2-二甲基-丙腈
N4-甲基-N2-[5-甲基-1-(6-甲基-吡啶-2-基甲基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-嘧啶-2-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-吡嗪-2-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-吡嗪-2-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
3-[5-氯-4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-2,2-二甲基-丙腈
N4-乙基-N2-[1-(3-氟-1-氧杂环丁烷-3-基-哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
3-甲基-1-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-丁烷-2-醇
3-甲基-1-[3-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-丁烷-2-醇
N2-[1-(1-[1,3]二氧戊环-2-基甲基-吡咯烷-3-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-嘧啶-4-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-[5-甲基-1-(1-甲基-1H-吡唑-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-[3-甲基-1-(1-甲基-1H-吡唑-3-基甲基)-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
3-[3-氯-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-2,2-二甲基-丙腈
N4-乙基-N2-{3-甲基-1-[1-甲基-1-(4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基]-1H-吡唑-4-基}-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-[1-(1-[1,3]二氧戊环-2-基甲基-吡咯烷-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]-N4-乙基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-嘧啶-4-基甲基-1H-吡唑-4-基)-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N2-(5-氟甲基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-{3-甲基-1-[1-甲基-1-(5-甲基-4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基]-1H-吡唑-4-基}-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-{3-甲基-1-[1-甲基-1-(4H-[1,2,4]三唑-3-基)-乙基]-1H-吡唑-4-基}-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-[1-(3-氟-哌啶-4-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]-5-三氟甲基-嘧啶-2,4-二胺
2-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-环戊醇
2-[3-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-环戊醇
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(2-(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(2-(1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(2-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(5-甲基-1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-乙基-N2-(3-甲基-1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N4-甲基-N2-(3-甲基-1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)丙烷-2-基)-1H-吡唑-4-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1',5-二甲基-1'H-1,4'-联吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1',3-二甲基-1'H-1,4'-联吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
N2-(1-(2-(4H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N4-甲基-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺
2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
2-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-异丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-乙基-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(3-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(3-甲基-1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(5-甲基-1-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(5-甲基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(3-甲基-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(乙基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-(4-氟苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(5-甲基-1-丙基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-(3,5-二氟苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-(4-氯苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-(4-氯苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(3-甲基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
4-(乙基氨基)-2-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-5-腈
4-(乙基氨基)-2-(3-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-5-腈
4-(乙基氨基)-2-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-异丙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-甲氧基嘧啶-5-腈
2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(2,2,2-三氟乙基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-乙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-甲氧基嘧啶-5-腈
4-(2,2-二氟乙基氨基)-2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-5-腈
2-(1-(环丙基甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-(4,4-二氟环己基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(3-甲基-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(2,2,2-三氟乙基氨基)嘧啶-5-腈
2-(5-氯-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基氨基)-4-(甲基氨基)嘧啶-5-腈
2-(1-二氟甲基-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-4-乙基氨基-嘧啶-5-腈
2-[1-(4-氟-苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
4-甲基氨基-2-(3-甲基-1-丙基-1H-吡唑-4-基氨基)-嘧啶-5-腈
4-甲基氨基-2-(5-甲基-1-氧杂环丁烷-3-基-1H-吡唑-4-基氨基)-嘧啶-5-腈
4-甲基氨基-2-(3-甲基-1-氧杂环丁烷-3-基-1H-吡唑-4-基氨基)-嘧啶-5-腈
2-[1-(3,5-二氟-苯基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
4-(2,2-二氟-乙氧基)-2-(1,5-二甲基-1H-吡唑-4-基氨基)-嘧啶-5-腈
2-[1-(4,4-二氟-环己基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基氨基]-4-甲基氨基-嘧啶-5-腈
N,N-二甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
N,N-二甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
N-甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
N-甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺
N,N,2-三甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
2-甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-(吡咯烷-1-基)丙烷-1-酮
2-甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
1-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)环丙腈
(R)-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-(吡咯烷-1-基)丙烷-1-酮
(R)-N,N-二甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
(S)-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-(吡咯烷-1-基)丙烷-1-酮
3-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
3-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
2-甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯
2-甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯
2-(3-乙基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈
(R)-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-(吡咯烷-1-基)丙烷-1-酮
(R)-N,N-二甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
(S)-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-1-(吡咯烷-1-基)丙烷-1-酮
(S)-N,N-二甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
(S)-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
(S)-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
2-(4-(5-氯-4-(甲基氨基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈
2-(5-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈
2-(3-环丙基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈
2,2-二甲基-3-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
2,2-二甲基-3-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙腈
1-(5-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)环丙腈
N-叔丁基-2-甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
2-甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-N-(2,2,2-三氟乙基)丙酰胺
2-(5-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-N-乙基-2-甲基丙酰胺
N-(环丙基甲基)-2-甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
N-(环丙基甲基)-2-甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
N-乙基-1-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)环丁烷酰胺
N-异丙基-2-甲基-2-(5-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
1-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)环丁烷腈
2-(4-(4-(环丙基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈
N,2-二甲基-2-(3-甲基-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)丙酰胺
1-(5-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)环丙腈
2-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-吡唑-1-基]-2-甲基-丙酸甲酯
2-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-2-甲基-丙酸甲酯
(S)-N,N-二甲基-2-[3-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-丙酰胺
R)-2-[3-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-丙腈
2-[4-(5-氯-4-甲氧基-嘧啶-2-基氨基)-3-环丙基-吡唑-1-基]-2-甲基-丙腈
(R)-2-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-丙腈
N-乙基-2-[3-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-异丁酰胺
N-乙基-2-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-异丁酰胺
1-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-环丁烷羧酸乙基酰胺
2-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-N-(2,2,2-三氟-乙基)-异丁酰胺
N-异丙基-2-[3-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-异丁酰胺
N-甲基-2-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-异丁酰胺
1-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-环丁烷腈
N-叔丁基-2-[5-甲基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-吡唑-1-基]-异丁酰胺
2-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-吡唑-1-基]-N-甲基-异丁酰胺
2-[4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-N-甲基-异丁酰胺
2-[4-(4-环丙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-5-甲基-吡唑-1-基]-N-甲基-异丁酰胺
2-[4-(4-乙基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-3-甲基-吡唑-1-基]-2-甲基-丙腈或
2-(3-氯-4-(4-(甲基氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙腈。
实验实施例
质谱分析
将切下的凝胶片(gel pieces)捣碎、烷基化并经胰蛋白酶过夜消化。对于磷酸基因测绘分析，将酶解的肽段提取、干燥并再混悬于10%乙腈/5%甲酸中。对于定量分析，在提取所述肽段之前将同位素标记的内标肽段(CellSignaling Technologies,Danvers,MA)的混合物引入酶解的凝胶片中，然后提取，考虑到含甲硫氨酸肽段的完全氧化，在分析前将干燥的肽段再混悬于3%腈/5%甲酸/10%H2O2中至少30min。用nanoAcquity UPLC(Waters,Milfor d MA)输送的包括H2O/乙腈/甲酸的标准梯度来分离肽段并用先前描述的条件(Phu and Kirkpatrick,Mol cell Proteomics2011)在LTQ-ORbitrap XL(Thermo,San Jose,CA)质谱仪上进行分析。在本研究中，所述质谱仪以数据依赖模式运行，60,000分辨率的MS全扫描收集在Orbitrap中而八种强度最高离子的MS/MS收集在离子阱中。将图谱数据转换为mzxml文件，用目标-诱饵策略对人类Uniprot数据库进行搜索并用线性判别分析(Huttlin andGygi,Cell2011)粗略滤至5%错误发现率(False Discovery Rate,FDR)。优化推定的磷酸化作用位点的定位并用AScore算法(Beausoliel and Gygi,NatBiotech2006)赋予置信分数，分数13和19分别代表95%和99%置信水平。尚未见报道磷酸肽肯定与不确定的定位(Asc或e<13)相匹配。对于剩余肽段-图谱的匹配，各条独特的磷酸肽序列至少一个代表性图谱的手动验证是本文中内容所需的。对于定量分析，用Qualbrowser软件(Thermo,San Jose,CA)整合MS全扫描来测定各个LRRK2磷酸肽最丰富电荷态的重和轻m/z离子的峰面积。
蛋白质印迹法
将培养的细胞和小鼠脑在含Complete蛋白酶和磷酸酶抑制剂复合物(Roche)的RIPA缓冲液(25mM Tris-HCl(pH7.6)、150mM NaCl、1%NP-40、1%脱氧胆酸钠、0.1%SDS)中匀浆化。细胞/组织裂解液在4℃经20,000g离心分离30分钟变清。用BCA分析方法(Pierce)测量上清液的蛋白浓度。将20ug裂解液装载至3～8%Tris-Acetate凝胶或4～12%Bis-Tris凝胶(Invitrogen)上并用下列抗体进行免疫印迹：磷酸-LRRK2(Custom generated)、LRRK2(Epitomics)、FLAG、微管蛋白(Sigma)。用Li-Cor Odyssey系统进行蛋白质印迹检测。
稳定的LRRK2细胞系的产生
将FLAG-标记的全长人类LRRK2插入pTre2Hygro载体(Clontech)。用QuickChange定点突变试剂盒引入3个帕金森突变，R1441G、Y1699C和G2019S(Stratagene)。用四环素调节的Tet-On系统产生LRRK2稳定的细胞系(Gossen et al)。上述LRRK2质粒与GFP一起转染HEK293Tet-On细胞(Clontech)。潮霉素用于稳定细胞的挑选并用克隆盘选择48个单一克隆。用蛋白质印迹比较LRRK2表达水平来鉴别最高表达的细胞系。通过杀死曲线法(killing curve)测定用于挑选的潮霉素的浓度(Gossen,M.,el al.(1995)Science268:1766-1769)。
LRRK2细胞的抑制剂处理
HEK293Tet-On LRRK2G2019S/R144G/Y1699C可诱导的稳定细胞系在完全培养液(高葡萄糖DMEM、10%Tet System FBS、1%Glutamax、1%NEAA、100ug/mL G418、30ug/mL潮霉素B)中生长。细胞在37摄氏度用1ug/mL多西环素诱导16小时。细胞用抑制剂处理1小时，然后用冷的MSD Tris LysisBuffer Cells进行裂解。
免疫分析法
将抗-FLAG M2抗体(Sigma,Saint Louis,MO,USA)固定在标准结合96孔小点滴板(MSD,Gaithersburg,MD,USA)上。在低盐TBS缓冲液(16.6mMTris、50mM NaCl、16.6mM HEPES、0.015%Triton X-100)中将抗体稀释至333ug/mL，滴5ul并干燥过夜。板用Sea Block(Thermo Scientific,Rockfor d,IL,USA)阻断1小时，然后用MSD Tris清洗缓冲液冲洗。
将细胞裂解液转移至测定板并在室温孵育2小时。用MSD清洗缓冲液冲洗后，在Complete Assay Buffer(20mM Tris、150mM NaCl、0.05%Tween20、10%Sea Block、1%正常小鼠血清)中将抗-磷酸-Ser1292pLRRK抗体稀释至0.370ug/mL，加入并在室温孵育1小时。冲洗后，在Complete Assay Buffer中将SULFOTAG山羊抗兔抗体稀释至1ug/mL，加入并在室温孵育1小时。用MSD清洗缓冲液冲洗测定板后，加入1x MSD Read Buffer T并依照产品说明书在MSD Sector Imager6000测量所述板。
海马培养物及转染
依照Brewer等人所述制备离解的海马神经元培养物。简而言之，将200海马神经元mm-2铺置于24孔涂覆的透明板或具有30μg/ml聚D-赖氨酸和2μg/ml层粘连蛋白的8孔培养室(BD)。对于IHC，室温下将细胞在含4%甲醛、4%蔗糖的PBS中固定10min。在GDB缓冲液(0.1%明胶、0.3%TX-100、450mM NaCl、32%0.1M磷酸盐缓冲液[pH7.4])中给予抗体。用LSM710共聚焦系统或GE InCell自动成像仪获取图像。图像分析用InCell Developer来完成.G.J.Brewer et al.,“Optimizing survival of海马神经元inB27-supplemented Neurobasal,a new serum-free medium combination”.J.Neuro.Meth.170:181-187。神经元在体外第6天用Lipofectamine2000被GFP和LRRK2(1:20比率)共转染。
免疫荧光法
将细胞用含4%甲醛/4%蔗糖的磷酸盐缓冲的盐水(PBS,pH7.4)固定。接下来经透化(0.1%Triton-X/PBS)、阻断(5%NGS,0.1%Triton X-100/PBS)和一次抗体孵育后，用缀合至Alexa405、Alexa488或Alexa568(Invitrogen)的二次抗体使抗体显现。下列抗体用于初级免疫染色：鼠抗FLAG(Sigma)、兔抗Flag(Cell signaling)、鸡抗GFP(Invitrogen)、兔抗MAP2(Millipore)、图β-微管蛋白(Abcam)、兔抗P62(Santa Cruz)、兔抗LC3(Cell signaling)、兔Lys63特异性抗泛素(Millipore)。
图像获取与定量分析
对于神经突生长定量，转染后11天将神经元固定。为便于树突观察将细胞用GFP和MAP2染色。用Zeiss LSM71020X(NA)物镜获得转染的神经元的共聚焦图像。用Neurolucida软件(MicroBrightField)对来自神经元的树突进行示踪。以Neurolucida Explorer(MicroBrightField)进行Sholl分析并分析全部树突长度。用JMP9软件进行统计分析。用非配对斯氏t检验，单因素ANOVA分析(non-paired Student's t test,one way ANOVA test)获得P值。所有图像获取和分析都是以双盲方式完成的。
对于LRRK2细胞定位，转染后3-4天将神经元固定。用Zeiss LSM710100X(NA)或Leica SP5共聚焦显微镜63X(NA)获得转染的神经元的共聚焦图像。各种LRRK2构建物细胞定位的定量分析在对实验条件呈盲态下进行。
动物研究
将G1023溶于1%RC591的水中。治疗组小鼠(每组n=3)接受10、30或100mg/kg腹膜内注射。媒介物物组(n=2)接受1%RC591。剂量大小根据动物体重计算且不超过500ul。给药后6小时将动物处死。迅速采集并切出脑、脾脏和淋巴结。所有动物均按照IACUC指导方针处理。
用MSD平台的基于细胞的分析方法
基于上述实验，在Meso Scale Discovery(MSD,Gaithersburg MD)板上用LRRK2的抗-FLAG抗体捕捉和抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体来实施基于细胞的分析方法，并按照以下实施例中的步骤用MSD sector读数器以MSD sulfotag山羊抗兔抗体检测捕捉的抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体。图5A显示的是经1ug/mL多西环素处理的表达LRRK2的四环素-On可诱导的LRRK2R1441G/Y1699C/G2019S三重突变型细胞系的蛋白质印迹，抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体显示于第一(上)列，抗-FLAG表位(对照)显示于第二(下)列。图5B是图5A蛋白质印迹图的图解，相对发光在纵轴上表示。
用LRRK2抑制剂索坦(SU-11248或舒尼替尼，American CustomChemicals Inc.)的分析方法通过抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体检测来测量LRRK2活性。
体内LRRK2自磷酸化作用的抑制作用
LRRK2抑制剂对S1292自磷酸化作用的体内影响，及由此而来的LRRK2抑制作用，能用本发明来进行测定。对三个月龄的过度表达LRRK2G2019S的BAC转基因小鼠口服给予10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg的LRRK2抑制剂[3-甲氧基-4-(4-甲基氨基-5-三氟甲基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-吗啉-4-基-甲酮。6小时后，采集海马、淋巴结和脾组织并通过如本文中所描述的抗-磷酸-丝氨酸1292-LRRK2抗体的检测来测定S1292处的自磷酸化作用水平。
HEK293R1441G/Y1699C/G2019S LRRK2HEK293Tet-On细胞系
采用标准诱变技术，将R1441G、Y1699C、G2019S突变和氨基末端FLAG标记引入全长人类LRRK2序列(下文称为“LRRK2-3M”)。用NotI和EcoRV限制酶切位点将LRRK2-3M克隆入pTre2Hyg载体(Clontech,Cat.No.631014)。然后按照其标准流程将pTre2Hyg-LRRK2-3M与pCaggs_GFP组合引入Clontech’sTet-OnHEK293细胞(http://www.clontech.com/images/pt/PT3898-1.pdf)。
LRRK2-3M细胞系操作及诱导步骤
实验材料：
含高葡萄糖的DMEM(Site Service)*
Glutamax100X(Invitrogen35050)*
NEAA100X(Invitrogen11140)*
Tet system FBS(Clontech631105)*
溶于H2O中的G418100mg/ml储备液(Clontech631308)*
Pen/Strep(Invitrogen)*
溶于H2O中的多西环素1mg/ml(Clontech)*
潮霉素B100mg/ml储备液(Invivogen)
*在线可得
HEK293Tet_On LRRK2三重突变型GFP细胞的DMEM培养液:
含谷氨酰胺的DMEM(1000ml)
加入100ml Tet system FBS，f.c.10%
加入10ml100X pen/strep溶液
加入10ml100X Glutamax
加入10ml100X NEAA
加入1ml100mg/ml的G418，f.c.100ug/ml
加入300ul100mg/ml的潮霉素B，f.c.30ug/ml
第1天：
在20%融合度接种细胞(根据不同板表面的差异而变)
第2天：
接种16～20小时后，直接向培养孔中加入多西环素(1mg/ml储备液)溶液得到1ug/ml f.c.多西环素(如果操作的容量太小，首先在培养液中将储备液Dox稀释至10X或100X)
第3天：
多西环素诱导后24小时，对化合物处理而言，细胞已准备就绪。
pLRRK2抗体
按照标准操作(Yenzyme)将兔用肽段CPNEMGKL-pS-KIWDLPL-酰胺免疫。首先经由通过缀合有肽段CPNEMGKL-pS-KIWDLPL-酰胺的琼脂糖柱纯化已免疫兔子的血清。将结合到柱上的抗体洗脱下来。然后使纯化过的材料通过缀合有肽段CPNEMGKLSKIWDLPL-酰胺的琼脂糖柱，以吸附与未磷酸化的肽段交叉反应的抗体。
BAC小鼠
过度表达G2019S和/或其他帕金森病突变的BAC小鼠通常可以经过Marshall et al.in"Generation of BAC transgenic mice”,Methods in Mol.Biol.Vol.256(2004)pp.159-182.的步骤来制备。
用Meso Scale Discovery平台的分析方法
将HEK293细胞短暂用CMV启动子控制下含FLAG表位标记的全长LRRK2cDNA质粒来转染。按照制造商说明在10-cm培养皿用Fugene6试剂(Roche Applied Science,Mannheim,Germany)进行转染。将转染24小时后的细胞采集、计数、接种到96孔板中并在化合物加入前附着1小时。
将细胞用化合物处理1小时，然后除去培养液并在补充有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的MSD(Meso Scale Discovery,Gaithersburg,MD)裂解缓冲液(MesoScale Discovery,Gaithersburg,MD)中裂解细胞。
通过向96孔MSD板的各个孔中滴入2ug抗-FLAG单克隆抗体(SigmaAldrich,St Louis,MO)来制备分析检测板，接着用Sea-Block(ThermoFisher,Rockfor d,IL)阻断。将细胞裂解液转移到MSD板上，孵育2小时，然后冲洗。通过加入抗-磷酸-Ser1292-LRRK2，孵育2小时，之后冲洗来检测捕捉的磷酸-LRRK2。按照制造商说明用MSD Sector读数器以MSD Sulfotag山羊抗兔抗体对捕捉的抗体进行检测。
其他分析形式
在以上分析形式的变型中，细胞裂解液中磷酸-Ser(1292)的测定是通过用编码全部或部分LRRK2蛋白的cDNA(稳定或短暂地)转染的或病毒转导的细胞来达到的，该细胞具有或没有向附加表位蛋白的融合。从细胞裂解液中捕捉过度表达的LRRK2或LRRK2片段是用固定的抗体、直接对抗LRRK2序列、其他附加表位或融合蛋白来完成的，该片段具有或没有融合的附加表位或融合蛋白配偶体。用于捕捉的固相基质可包括ELISA板、Meso ScaleDiscovery板(Meso Scale Discovery,Gaithersberg,MD)、膜(例如，硝化纤维素、PVDF)。用对抗磷酸-Ser1292的抗体检测捕捉的磷酸-Ser1292-LRRK2的方法包括：ELISA、DELFIA、电化学发光、荧光。
以上分析形式的另一个变型采用以固定的抗-磷酸-Ser1292-LRRK2抗体从细胞裂解液中捕捉磷酸-Ser1292-LRRK2，接着用对抗LRRK2序列的抗体、附加表位或融合蛋白配偶体来检测捕捉的LRRK2。
来自以上描述的任何形式中细胞裂解液的内源性磷酸-Ser(1292)的基于板的检测可以使用抗-LRRK2和抗-磷酸-Ser(1292)抗体。
完整细胞中磷酸-Ser(1292)的基于板的检测可以通过在固定的且透化处理的细胞中经显微镜检测和荧光强度定量的磷酸-Ser(1292)免疫荧光检测，或通过发光荧光(bulk fluorescence)(例如LiC或“In-Cell Western”)来完成。
完整细胞中磷酸-Ser(1292)的基于板的检测可以采用：比色/免疫组织化学检测和结合至固定并透化处理的细胞抗-磷酸-Ser(1292)的定量、全细胞裂解液或免疫沉淀的内源性或抗-磷酸-Ser(1292)转染的LRRK2的蛋白质印迹法、或以抗-磷Ser(1292)抗体免疫沉淀的蛋白的蛋白质印迹法和接下来以抗-LRRK或对抗融合蛋白/附加表位的抗体的检测。
尽管参照本发明的具体实施方案对本发明进行了描述，但本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种变换及等效替换。此外，可作出多种修改使得具体的情况、材料、物质组合物、方法、方法的一个步骤或多个步骤适应于本发明的客观精神和范围。所有这样的修改意在涵盖于所附权利要求的范围之内。
Figure IDA00003588085900011

Claims (16)

1.鉴别患有帕金森病或面临发展帕金森病危险的患者或受试者的方法，所述方法包括测定所述受试者中S1292自磷酸化作用的水平，其中升高的水平与患有帕金森病或面临发展帕金森病的危险相关。
2.权利要求1的方法，还包括从受试者获得或获取含LRRK2的样本。
3.权利要求2的方法，还包括测量、监测或检测受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平。
4.权利要求3的方法，还包括将受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与一个或多个对照样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
5.预测受试者对LRRK2调节剂的敏感度，或LRRK2调节剂对治疗帕金森病的功效的方法，所述方法包括测定该受试者中S1292自磷酸化作用的水平，由此升高的S1292自磷酸化作用水平与该抑制剂对治疗该疾病的功效相关。
6.权利要求5的方法，还包括从受试者获得或获取第一份含LRRK2的样本。
7.权利要求6的方法，还包括对所述受试者给予LRRK2调节剂。
8.权利要求7的方法，还包括在对所述受试者给予LRRK2调节剂之后从受试者获得或获取第二份含LRRK2的样本。
9.权利要求8的方法，还包括测量、监测或检测第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平。
10.权利要求9的方法，还包括测量、监测或检测第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平。
11.权利要求10的方法，还包括将第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
12.权利要求5的方法，其中所述LRRK2调节剂为式I的化合物：
Figure FDA00003588085200021
或其可药用的盐，
其中：
m为0至3；
X为：-NRa-、-O-、或-S(O)r-，其中r为0至2且Ra为氢或C1-6烷基；
R1为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基或卤素所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
或R1和Ra与它们所连接的原子一起形成三元至六元环，该环可以任选地包括选自O、N和S的另外的杂原子，并被氧代、卤素或C1-6烷基所取代；
R2为：卤素、C1-6烷氧基、氰基、C2-6炔基、C2-6烯基、卤代-C1-6烷基、卤代-C1-6烷氧基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、乙酰基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
R3为：-OR4、卤素、氰基、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
R4为：氢、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基或卤素所取代的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基或卤素取代的C3-6环烷基-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢呋喃基-C1-6烷基、氧杂环丁烷基、或氧杂环丁烷-C1-6烷基；
R5为：氢、或C1-6烷基；
n为0或1；
R6为：氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基、或杂环基-C1-6烷基，其中所述C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、杂环基和杂环基-C1-6烷基各自可以任选地被一个、两个、三个或四个基团所取代，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基；或两个该基团与它们所连接的原子一起形成五元或六元环；
或R5和R6与它们所连接的氮原子一起形成三元至七元环，该环任选地包括选自O、N和S(O)n的另外的杂原子，并任选地被一个、两个、三个或四个基团所取代，该基团独立地选自：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷氧基、羟基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、卤素、腈基、C1-6烷基-羰基、C1-6烷基-磺酰基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、C3-6环烷基-羰基、氨基、或杂环基；或两个该基团与它们所连接的原子一起形成五元或六元环；和
R7为：卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代-C1-6烷基、或卤代-C1-6烷氧基。
13.权利要求5的方法，其中所述LRRK2调节剂为式II的化合物：
Figure FDA00003588085200031
或其可药用的盐，
其中：
X为：-NRa-、或-O-，其中Ra为氢或C1-6烷基；
R1为：C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基-C1-6烷基、任选地被C1-6烷基取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被C1-6烷基取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、或任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基；
或X和R1一起形成C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、或其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基；
或R1和Ra与它们所连接的原子一起形成三元至六元杂环，该环任选地被R7取代一次或多次；
R2为：C1-6烷基；卤素；C1-6烷氧基；氰基；C2-6炔基；C2-6烯基；卤代-C1-6烷基；卤代-C1-6烷氧基；任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基；其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基；-ORb，其中Rb为C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基或其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基；或-C(O)-Rc，其中Rc为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基或任选地被R7取代一次或多次的杂环基；
R3为：氢、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、羟基-C1-6烷基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-磺酰基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、其中杂环基部分任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基、任选地被R8取代一次或多次的芳基、其中芳基部分任选地被R8取代一次或多次的芳基-C1-6烷基、任选地被R8取代一次或多次的杂芳基、其中杂芳基部分任选地被R8取代一次或多次的杂芳基-C1-6烷基、或-Y-C(O)-Rd；
Y为C2-6亚烷基或键；
Rd为C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基-氨基、二-C1-6烷基-氨基、卤代-C1-6烷基-氨基、二-卤代-C1-6烷基-氨基、卤代-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、羟基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基C1-6烷基、氨基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、任选地被R7取代一次或多次的杂环基、或其中杂环基部分任选地被R7取代一次或多次的杂环基-C1-6烷基；
R4为：氢、C1-6烷基、卤素、氰基、卤代-C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、羟基-C1-6烷基、任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基、其中C3-6环烷基部分任选地被R6取代一次或多次的C3-6环烷基-C1-6烷基、或-Y-C(O)-Rd；
R5为：氢、或C1-6烷基；
各个R6独立地为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、C1-6烷氧基、氧代、氰基、卤素、或Y-C(O)-Rd；
各个R7独立地为：C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、卤素、氧代、C1-6烷氧基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基、-Y-C(O)-Rd、杂环基、杂环基-C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、或C3-6环烷基磺酰基；和
各个R8独立地为：氧代、C1-6烷基、卤代-C1-6烷基、卤素、C1-6烷基-磺酰基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基-C1-6烷基、氰基、杂环基、杂环基-C1-6烷基、-Y-C(O)-Rd、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-6烷基、或C3-6环烷基-磺酰基。
14.鉴别患有帕金森病或面临发展帕金森病危险的受试者的方法，所述方法包括：
从受试者获得或获取含LRRK2的样本；
测量、监测或检测受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平；和
将受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与一个或多个对照样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
15.测定受试者对涉及LRRK2调节剂疗法响应的方法，所述方法包括：
从受试者获得或获取第一份含LRRK2的样本；
对所述受试者给予LRRK2调节剂；
在对所述受试者给予LRRK2调节剂之后从受试者获得或获取第二份含LRRK2的样本；
测量、监测或检测第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平；
测量、监测或检测第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平；和
将第一份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平与第二份受试者样本中S1292自磷酸化作用的量或水平相比较。
16.筛选抑制LRRK2活性的化合物和组合物的分析方法，所述方法包括：
将LRRK2或其片段暴露于潜在的抑制剂化合物；和
检测与所述LRRK2上S1292相关的磷酸化作用的水平或量。
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