CN103338650B - 用于提高伴侣动物的免疫力的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种提高伴侣动物的免疫力的方法。所述方法可包括将葡萄糖抗代谢物施用于伴侣动物。所述葡萄糖抗代谢物可为2-脱氧-D-葡萄糖;5-硫代-D-葡萄糖;3-O-甲基葡萄糖;1,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-甘露糖醇;甘露庚酮糖;以及它们的混合物和组合。所述伴侣动物可为犬或猫。提高免疫力可包括例如改变T和B免疫细胞的增殖能力,以及改变免疫细胞表型的相对分布。
Description
技术领域
本发明的实施例涉及提高伴侣动物的免疫力的方法。更具体地,但并非排他性地,本发明的实施例涉及将葡萄糖抗代谢物施用于伴侣动物以提高所述伴侣动物的免疫力的方法。
背景技术
生物学理论已正确预测了在实验动物中,通过食物剥夺对热量摄取的限制减缓了某些不可取的细胞过程的发现,这些细胞过程很多与老化以及老化相关的疾病相关联。
具体地,热量限制已显示一贯地在许多系统中延长寿命、延缓肿瘤的发作和进展并延迟生理老化。实际上,跨度超过七十年的研究已显示出,热量限制是一种营养干预,一贯地延长动物的寿命。参见Weindruch和Walford,“TheRetardationofAgingandDiseasebyDietaryRestriction,”Springfield,IL:CharlesC.Thomas(1988);Yu,“ModulationofAgingProcessesbyDietaryRestriction,”BocaRaton:CRCPress(1994);和Fishbein,“BiologicalEffectsofDietaryRestriction,”Springer,NewYork(1991)。热量限制对寿命和肿瘤发生的这些效应自从McKay的早期研究已被报道过多次。参见McKay等人,“TheEffectofRetardedGrowthUpontheLengthofLifespanandUponUltimateBodySize,”J.Nutr.,第10卷,第63-79页(1935)。实际上,在过去的二十年中,在老年医学中对热量限制兴趣的恢复已经导致人们普遍相信,饮食操纵能减缓许多系统中的生理老化。参见Weindruch和Walford,“TheRetardationofAgingandDiseasebyDietaryRestriction,”Springfield,IL:CharlesC.Thomas(1988);Yu,“ModulationofAgingProcessesbyDietaryRestriction,”BocaRaton。CRCPress(1994);和Fishbein,“BiologicalEffectsofDietaryRestriction,”Springer,NewYork(1991)和Masoro,E.J.“OverviewofCaloricRestrictionandAgeing,”Mech.AgingDev.,第126卷,第913-922页(2005)。
空腹血糖和胰岛素水平的降低和胰岛素敏感度的提高是易于测量的热量限制的生物指标。热量限制的啮齿动物显示具有较低的空腹血糖和胰岛素水平,并且其在热量限制葡萄糖负荷试验期间所能达到的血糖峰值和胰岛素水平也被降低。参见Kalant等人,“EffectofDietRestrictiononGlucoseMetabolismandInsulinResponsivenessandAgingRats,”Mech.AgingDev.,第46卷,第89-104页(1988)。也已知高胰岛素血症是与包括心脏病和糖尿病在内的几种此类疾病过程相关联的危险因素(Balkau和Eschwege,DiabetesObes.Metab.1(Suppl.1):S23-31,1999)。降低的胰岛素水平和体温是这种改变的代谢特征图的两种最可靠的指标(Masoro等人,J.Gerontol.Biol.Sci.47:B202-B208,1992;Koizumi等人,J.Nutr.117:361-367,1987;Lane等人,Proc.Nat.Acad.Sci.93:4154-4164,1996)。
葡萄糖抗代谢物如2-脱氧-D-葡萄糖是与葡萄糖相关的化合物。然而,由于与葡萄糖的结构差异,此类化合物阻碍或抑制碳水化合物代谢的某些方面,并从而可模拟热量限制的效应(Rezek等人,J.Nutr.106:143-157,1972)。这些抗代谢物发挥多种生理效应,包括减轻体重、降低血浆胰岛素水平、降低体温、延迟肿瘤形成和发展、以及提高循环糖皮质素激素的浓度。(综述参见Roth等人,Ann.NYAcad.Sci.928:305-315,2001)。这些生理效应是由碳水化合物代谢的抑制造成的。
如此,使用葡萄糖抗代谢物作为提高动物免疫力的组分将是有利的。营养与免疫应答之间的相互作用是过去的五十年中被大量研究的领域。Scrimshaw在20世纪50年代提出了营养、免疫应答和传染病之间的双向相互作用(SchrimshawNS,TaylorCE,GordonJE.Interactionofnutritionandinfection.AmJMedSci1959;237:367-403)。随后,人们认识到营养不良的个体处于感染危险之中。随访研究已证明,大多数微量营养物的缺乏导致了宿主防御受损。在另一方面,其他人已证明,超过公认的要求的补充某些营养物可改善免疫应答的某些指标。一并考虑,很显然,营养物能够影响免疫力。免疫功能的调节异常是有详实记录的老化的后果。这种调节异常能够导致升高的发病率(疾病)和死亡率(死亡)的发生。细胞介导的免疫力,主要是T细胞明显地是最不利地被增长的年龄影响的免疫力的部分。综述参见Pawelec(PawelecG,WagnerW,AdibzadehM,EngelA.Tcellimmunosenescenceinvitroandinvivo.ExpGerontol1999;34:419-29)。年龄相关的T细胞免疫力调节异已被指为老年人中许多慢性退行性疾病的原因,包括关节炎、癌症、自体免疫疾病、和提高的对感染性疾病的敏感性。已有许多理论被提出,用于尝试和解释对这些衰退负责的机制,但没有一种理论能够完全解释所观察到的全部变化。已报道年老的狗表现出与较年轻的狗相比降低的免疫应答。与较年轻的狗相比,较老的狗还在它们免疫力的组成方面有差异。基于这些观察,与其他物种相似,老化过程在狗中也导致了免疫应答的调节异常,并进一步提供了在该物种或相关的物种中进行营养调节的时机。
因此,例如,提供营养如对免疫力具有生理效应(例如通过改变T和B免疫细胞的增殖能力,和改变免疫细胞表型的相对分布)的葡萄糖抗代谢物将是有利的。提供包含此类葡萄糖抗代谢物组分的组合物也将是有利的。相应地,本发明的实施例涉及此类有益效果。
发明内容
本文的实施例涉及用于提高伴侣动物的免疫力的方法。在一个实施例中,所述方法可包括以有效提高伴侣动物的免疫力的量将葡萄糖抗代谢物施用于所述伴侣动物。所述葡萄糖抗代谢物可选自2-脱氧-D-葡萄糖;5-硫代-D-葡萄糖;3-O-甲基葡萄糖;1,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-甘露糖醇;甘露庚酮糖;以及它们的混合物和组合。所述伴侣动物可为犬科动物和猫科动物。在具体实施例中,所述葡萄糖抗代谢物可为甘露庚酮糖。在具体实施例中,所述组合物可为粗磨食物,其可为营养平衡的,并且其可包含小于约5%的甘露庚酮糖。
所述方法可包括每天饲喂约1mg/kg至约50mg/kg甘露庚酮糖给所述伴侣动物。所述方法还也可包括每天饲喂约1mg至约1000mg甘露庚酮糖。
在某些实施例中,所述用于提高伴侣动物的免疫力的方法包括以有效提高伴侣动物的免疫力的量将葡萄糖抗代谢物施用于所述伴侣动物,其中提高免疫力包括提高所述伴侣动物的免疫系统的响应能力,使得T和B免疫细胞响应于刺激微生物攻击的增殖能力在施用所述葡萄糖抗代谢物之后被改变。
在某些实施例中,所述用于提高伴侣动物的免疫力的方法包括以有效提高伴侣动物的免疫力的量将葡萄糖抗代谢物施用于所述伴侣动物,其中提高免疫力包括通过减少年龄相关的CD18+细胞的增加而减少免疫系统的衰退。
附图说明
图1是犬组1的CD18+免疫细胞的图。
图2是犬组2的CD18+免疫细胞的图。
图3是ConA对犬组1的T细胞促有丝分裂刺激的图。
图4是ConA对犬组2的T细胞促有丝分裂刺激的图。
图5是PHA对犬组1的T细胞促有丝分裂刺激的图。
图6是PHA对犬组2的T细胞促有丝分裂刺激的图。
图7是PWM对犬组1的B细胞促有丝分裂刺激的图。
图8是PWM对犬组2的B细胞促有丝分裂刺激的图。
图9是犬组1的平均血清8-OHdG水平的图。
具体实施方式
定义
如本文所用,当用于权利要求或说明书中时,包括“所述”、“一个/一种”的冠词被理解为是指一个或多个/一种或多种受权利要求书保护或受说明书保护的物质。
如本文所用,术语“包括/包含”是非限制性的。
如本文所用,术语“多个”是指多于一个的。
如本文所用,术语“动物”或“宠物”意指家畜,包括但不限于家犬(犬科动物)、猫(猫科动物)、马、牛、雪貂、兔、猪、大鼠、小鼠、沙鼠、仓鼠、马等。家犬和家猫是宠物的具体例子,并且在本文中被称为“伴侣动物”。应当理解的是,在本公开的上下文中,当使用术语动物、宠物、或伴侣动物时,所述动物、宠物、或伴侣动物是处于非患病的状态,除非另有说明。
如本文所用,术语“动物饲料”、“动物饲料组合物”、“动物饲料粗磨食物”、“宠物食品”、或“宠物食品组合物”均指旨在被宠物摄取的组合物。宠物食品可无限制地包括适于日常饲养的营养平衡的组合物,以及可为营养平衡的或不平衡的补充剂和/或犒赏食物。
如本文所用,术语“营养平衡的”是指基于宠物营养学领域公认权威机构(例如但不限于美国食品和药品管理局的兽用药品中心、美国饲料监督官协会)的推荐,该组合物,例如宠物食品,除对水的附加需求之外,以适当的量和比例具有已知维持生命所需的营养素。
本发明的全部口服剂量均是按哺乳动物的每千克体重计算的,除非另有说明。
应当理解,在本说明书中给出的每一最大数值限度包括每一较低数值限度,如同该较低数值限制在本文中也被明确表示。在本说明书全文中给出的每一最小数值限度将包括每一较高数值限度,如同该较高数值限度在本文中被明确表示。在本说明书全文中给出的每一数值范围将包括包含于该较宽数值范围内的每一较窄数值范围,如同该较窄数值范围在本文中被明确表示。
所有项目的列表,例如成分的列表,均旨在作为并应当被解释为马库什(Markush)组。因此,所有的列表均可被理解并解释为“选自”项目的列表“以及它们的组合和混合物组成的组”的项目。
本文所引用的是本发明的实施例中所用的包括多种成分的组分的商品名。本文的发明者不旨在限于某一商品名的材料。在本文的描述中与以商品名引用的那些材料等价的材料(如以不同的名称或附图标号从不同来源得到的那些)可被取代和应用。
本文的工艺、方法、组合物、和装置可包括如本文所述的任何特征或实施例,或基本上由它们组成,或由它们组成。
在本公开的多个实施例的描述中,公开了多个实施例或个别的特征。对于本领域的普通技术人员来讲将显而易见的是,这些实施例和特征的所有组合都是可能的并可导致本公开的优选实施。虽然只举例说明和描述了本发明的多种实施例和个别的特征,可实现许多其它的改变和变型而不脱离本发明的实质和范围。还显而易见的是,前述公开中提出的实施例和特征的所有组合都是可能的并可导致本发明的优选实施。
本发明的实施例
本发明的实施例涉及包含选自以下的葡萄糖抗代谢物组分的组合物:2-脱氧-D-葡萄糖;5-硫代-D-葡萄糖;3-O-甲基葡萄糖;1,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-甘露糖醇;甘露庚酮糖;以及它们的混合物和组合。不受理论的限制,这些组分被认可是葡萄糖抗代谢物。在另一个实施例中,所述组分可在所述组合物中以植物物质组分的形式存在,所述植物物质如鳄梨,或其它富含甘露庚酮糖的植物如紫花苜蓿、无花果、或樱草等。
本发明的实施例还涉及提高哺乳动物的免疫力的方法。此类方法涉及将如本文所公开的组合物施用于所述哺乳动物,其中无论所述哺乳动物的年龄如何,所述组合物对于提高该哺乳动物的免疫力均是有效的。在一个具体实施例中,所述方法涉及通过施用包含葡萄糖抗代谢物的组合物,提高哺乳动物如伴侣动物的免疫系统的响应能力(也叫提高免疫应答)。在另一个具体实施例中,所述方法涉及通过施用包含葡萄糖抗代谢物的组合物,随着哺乳动物如伴侣动物的年龄增长,维持其免疫系统和/或减少其衰退。
免疫力可被分为先天的和获得性免疫力。免疫系统的获得性部分表现为细胞和体液免疫,并且可被界定为提高的T和B细胞应答,其可通过例如但不限于氚化胸腺嘧啶核苷淋巴增殖反应的测定法被测量。免疫系统的先天部分表现为CD18+免疫细胞,其可通过例如但不限于白血细胞群体的改变的相对和绝对百分比(如通过免疫荧光测定的)的测定法被测量。
另外,提高免疫力可包括,例如,改变T和B免疫细胞的增殖能力,以及改变免疫细胞表型的相对分布。
本文所公开的哺乳动物可包括脊椎动物和无脊椎动物,例如昆虫(例如,果蝇)和/或线虫(例如,秀丽隐杆线虫(Caenorbabditiselegans))。本文公开了人类和伴侣动物。
如本文所公开的葡萄糖抗代谢物组分包括2-脱氧-D-葡萄糖、5-硫代-D-葡萄糖、3-O-甲基葡萄糖、脱水糖包括1,5-无水-D-葡萄糖醇、2,5-无水-D-葡萄糖醇、和2,5-无水-D-甘露糖醇、甘露庚酮糖、以及它们的混合物和组合。甘露庚酮糖是一种具体的葡萄糖抗代谢物。在一个实施例中,甘露庚酮糖可作为植物物质如鳄梨、鳄梨提取物、鳄梨粗粉、鳄梨浓缩物或其它甘露庚酮糖富集源的组分,存在于所述组合物中。甘露庚酮糖富集源的非限制性例子包括苜蓿、无花果、或樱草。植物物质可包括果实、种子(或核)、枝、叶、或任何相关植物的其它部分或它们的组合。
鳄梨(通常也称为alligatorpear、aguacate或palta)包含异常丰富的甘露庚酮糖源,以及相关的糖和其它碳水化合物。鳄梨是一种亚热带常青树果实,最适宜生长在以下地区:加利福尼亚、佛罗里达、夏威夷、危地马拉、墨西哥、西印度群岛、南非和亚洲。
鳄梨的种类包括,例如,PerseaAmericana和Perseanubigena,在这些例证性的种类中包括所有的栽培品种。栽培品种可包括‘Anaheim’、‘Bacon’、‘Creamhart’、‘Duke’、‘Fuerte’、‘Ganter’、‘Gwen’、‘Hass’、‘Jim’、‘Lula’、‘Lyon’‘MexicolaGrande’、‘MurrietaGreen’、‘Nabal’、‘Pinkerton’、‘Queen’、‘Puebla’、‘Reed’、‘Rincon’、‘Ryan’、‘Spinks’、‘TopaTopa’、‘Whitsell’、‘Wurtz’、和‘Zutano’。鳄梨果实尤其优选用于本文,该鳄梨果实可包含核或其中所述核被移除或至少部分地移除。对于用于本文,来自鳄梨(PerseaAmericana)的果实,以及来自产生更大的果实(例如,当果实成熟时为约12盎司或以上)的栽培品种(例如Anaheim、Creamhart、Fuerte、Hass、Lula、Lyon、MurrietaGreen、Nabal、Queen、Puebla、Reed、Ryan和Spinks)的果实是尤其优选的。
来自苜蓿、无花果、或樱草等植物的植物物质据报道也提供相对高含量的甘露庚酮糖。苜蓿也被称为紫花苜蓿(Medicagosativa)。也可使用无花果(Ficuscarica)(包括例如丛生榕或悬铃木),以及樱草或黄花九轮樱草(Primulaofficinalis)。
已发现特定水平的选自以下的组分可被用于本文:2-脱氧-D-葡萄糖;5-硫代-D-葡萄糖;3-O-甲基葡萄糖;1,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-葡萄糖醇;2,5-无水-D-甘露糖醇;甘露庚酮糖;以及它们的混合物和组合。具体地,已经发现此组分相对较低的含量,以及相对较高的剂量,虽然是有用的,但不能提供期望的最佳功效。剂量将取决于所使用的葡萄糖抗代谢物组分,并且将根据葡萄糖抗代谢物所将施用于哺乳动物的大小和状况而变化。约0.0001或约0.001克/千克至约1克/千克范围内的剂量在一些实施例中可为有利的。如本文所用,当使用以mg/kg为单位的剂量时,“mg”是指组分如甘露庚酮糖的水平,而“kg”是指哺乳动物如犬或猫的体重的千克数。当在大动物中使用2-脱氧-D-葡萄糖时,更低范围的剂量也可为适当的。更高的剂量,尤其是例如5-硫代-D-葡萄糖或甘露糖醇的化合物,也可被容易地接受。在一个实施例中,提供给哺乳动物的组分的剂量以每天计可为约0.1、0.5、1、2、或5mg/kg至约15、20、50、100、150、或200mg/kg,以及这些范围的全部组合,其中“mg”是指所述组分的水平,而“kg”是指所述哺乳动物的体重的千克数。在一个实施例中,提供给哺乳动物的剂量以每天计可为约1mg/kg至约15mg/kg、约2mg/kg至约10mg/kg、或约2mg/kg至约5mg/kg。在一个实施例中,提供给哺乳动物的剂量以每天计可以是约1mg/kg至约5mg/kg、约1.5mg/kg至约5mg/kg、约2mg/kg至约5mg、或约2mg/kg。在某些实施例中,这些量可转化为包含所述组分的小于约5%、或小于约2%、或约0.0001%至约0.5%、或约0.1%至约10%、或约0.1%至约5%的组合物,全部按所述组合物的重量计。预期了其间的全部范围。组分的水平可由本领域的普通技术人员基于多种因素确定,例如,组合物的形式(例如,是否为干燥组合物、半潮湿组合物、湿润组合物、或补充剂、或任何其它形式或它们的混合物)。普通技术人员将能够利用优选的剂量,并且确定在给定组合物中的最佳组分含量。
类似地,可提供每天被提供给哺乳动物的所述组分的总剂量。此类日剂量可为约0.1mg/天至约1000mg/天。此类日剂量可取决于摄入所述组合物的哺乳动物的大小。例如,在一个实施例中,较大的哺乳动物可比较小的哺乳动物摄入更多。当然,这与本文所公开的关于按哺乳动物的质量配量是相符的。因此,在一个实施例中,随着哺乳动物的大小增大,更多的组合物可被施用。
相应地,在一个实施例中,此类日剂量可相当于按哺乳动物的质量每天的剂量,如本文所述。具体地,基于哺乳动物的大小和如上文所述的日剂量,在一些实施例中日剂量可在约0.1mg/天至约1000mg/天或甚至更多的范围内变化。在其它实施例中,日剂量可为约1mg/天至约500mg/天,或约1mg/天至约200mg/天,或约1mg/天至约100mg/天,或约5mg/天至约100mg/天,或约5mg/天至约80mg/天,或约10mg/天至约50mg/天,或约40mg/天。还预期了其间的全部范围。
同样,当其中植物物质提取物或粗粉被利用在本文的组合物中,提取物或粗粉的水平将取决于在此提取物或粗粉中的有效组分的水平。本文已发现了包含约0.5%至约99%的葡萄糖抗代谢物组分、或者约0.5%至约75%的葡萄糖抗代谢物组分、或者约0.5%至约50%的葡萄糖抗代谢物组分、或者约0.5%至约25%的葡萄糖抗代谢物组分的提取物和/或粗粉(全部按所述提取物或粗粉的重量计)。本文已发现了葡萄糖抗代谢物在其中可为约0.5、1、2、5、或10%至约15、25、50或75%(按所述提取物和/或粗粉的重量计)的提取物和/或粗粉。
因此,本发明的实施例指向旨在被哺乳动物摄取的组合物。组合物包括旨在提供必要的膳食需求的食品,以及犒赏食物(例如,饼干)或其它食品补充剂。任选地,本文的组合物可为干燥组合物(例如,粗磨食物)、半潮湿组合物、润湿组合物、或它们的任何混合物。作为另外一种选择或除此之外,所述组合物为补充剂,例如肉汁、饮用水、酸奶、粉末、悬浮液、咀嚼物、犒赏食物(例如,饼干)或任何其它递送形式。
此外,在一个实施例中,所述组合物可为营养平衡的,例如宠物食品粗磨食物。在另一个实施例中,所述组合物是非营养平衡的,例如补充剂、犒赏食物、或用于宠物的其它递送形式。
本文使用的组合物可任选地包含一种或多种其它组分。其它组分对本文使用的组合物中的内含物是有益的,但是对于本发明而言是任选的。在一个实施例中,所述组合物基于干燥物质可包含按所述组合物的重量计约10%至约90%的粗蛋白,或者约20%至约50%的粗蛋白,或者约20%至约40%的粗蛋白,或者约20%至约35%的粗蛋白。所述粗蛋白材料可包括基于植物的蛋白质例如大豆、谷类(玉米、小麦等)、棉籽,或基于动物的蛋白质例如酪蛋白、白蛋白、和肉类蛋白质。用于本文的肉类蛋白质的非限制性例子包括选自牛肉、猪肉、羊羔肉、家禽、鱼、以及它们的混合物的蛋白质源。
此外,所述组合物基于干燥物质可包含按所述组合物的重量计约5%至约40%的脂肪,或者约10%至约35%的脂肪。
涉及本发明的组合物的实施例还可包含碳水化合物源。在一个实施例中,所述组合物可包含按所述组合物的重量计约35%至按所述组合物的重量计最多约50%的碳水化合物源。在其它实施例中,所述组合物可包含按所述组合物的重量计约35%至约45%,或按所述组合物的重量计约40%至50%的碳水化合物源。谷物或谷类如大米、玉米、蜀黍、高粱、大麦、小麦等是示例性的碳水化合物源。
所述组合物还可包含其它材料,例如但不限于,乳清粉和其它乳品副产物、甜菜浆、纤维素、纤维、鱼油、亚麻、维生素、矿物、风味剂、抗氧化剂、和牛磺酸。
所述组合物还可包含其它任选的成分。任选的成分可包括益生素组分(双歧杆菌和/或乳杆菌)和益生元(低聚果糖)组分。可被包括的益生素组分和益生元组分的例子和量公开于例如美国专利公布2005/0158294中。其它可被包括的任选的成分是ω6和ω3脂肪酸、肉毒碱、六偏磷酸钠、葡糖胺、硫酸软骨素、类胡萝卜素包括β胡萝卜素、维生素E、和叶黄素,以及如下文的表1中所显示的那些成分。
免疫力
如本文所公开的,所述组合物对于提高哺乳动物尤其是伴侣动物的免疫力可为有用的。就免疫力而言,CD18是一种泛白细胞细胞表面标记,其已被显示随年龄和在炎症期间升高(Valente.Immunologicfunctionintheelderlyafterinjury--theneutrophilandinnateimmunity;JTrauma.2009;67(5):968-74)。在炎症导致的组织损伤的发病机理中,白细胞起着重要作用。在提高的白细胞-内皮细胞相互作用的位点,微循环中的白细胞与内皮细胞上的粘附分子相互作用,其导致滚动、粘附、和迁移。白细胞随后释放细胞因子并产生蛋白酶和超氧自由基类,这些也参与炎症级联反应。正是白细胞的这些反应导致了炎性组织和内皮细胞损伤。与较年轻的被试者相比,CD11b/CD18(CR3)的表达(其与活性氧中间体(ROI)的噬菌细胞生产相关,如上文所述)在来自较老的被试者的单核细胞中是上调的。同样,自体免疫部分地是由于异源二聚体β2整联蛋白淋巴细胞功能相关的抗原-1(LFA-1)CD11a/CD18的过表达。因此,淋巴细胞上CD11a/CD18抗原密度的升高已作为在体外导致降低的淋巴细胞增殖反应和导致在老年被试者中被报道的其它免疫失调的机制中的事件被讨论(ChiricoloM,MoriniMC,ManciniR,BeltrandiE,BellettiD,ConteR.CelladhesionmoleculesCD11aandCD18inbloodmonocytesinoldageandtheconsequencesforimmunologicaldysfunction.Gerontology.1995;41(4):227-34)。由于随着年龄增加出现的CD18过表达的全部这些先前报道的负面效应,减少/减缓与年龄相关的CD18的升高将是合乎期望的,而葡萄糖抗代谢物,尤其是甘露庚酮糖,在本文中在伴侣动物如犬中显示实现了这点,如本文所提供的。
如图1中所显示的,当按年龄分析时,饲喂被配制为递送每千克动物体重2毫克甘露庚酮糖的测试饮食的犬,与它们的饮食匹配的对照相比,表现出CD18+免疫细胞的升高的显著减缓。CD18+免疫细胞的升高被认为是在体外导致降低的淋巴细胞增殖反应和导致在老年被试者中被报道的其它免疫失调的机制中的事件,因此这种升高的减缓将被认为是在免疫上对动物有益的。
如图2中所显示的,当按年龄分析时,饲喂含有甘露庚酮糖的测试饮食的犬,与它们的饮食匹配的对照相比,显示出CD18+免疫细胞的升高减缓的趋势。CD18+免疫细胞的升高被认为是在体外导致降低的淋巴细胞增殖反应和导致在老年被试者中被报道的其它免疫失调的机制中的事件,因此这种升高的减缓将被认为是在免疫上对动物有益的。
与犬组1相关联的图1的犬,代表了比与犬组2相关联的图2的那些老约两岁的较老的一组犬。
伴刀豆球蛋白A(ConA)表现出促有丝分裂活性,尤其是对T-淋巴细胞(Ruscetti和Chervenick1975;Novogrodsky和Katchalski1971;Perlmann等人1970)。提取自红芸豆(Phaseolusvulgaris)的凝集素,植物血球凝集素(PHA),包含有效的T-细胞促有丝分裂活性(Hammerstrom,S.等人(1982)Proc.Nall.Acad.Sci.USA79,1611-1615)。来源于美洲商陆(PhytolaccaAmericana)的商陆促分裂原(PWM)是B细胞有丝分裂原(Schreck等人,AnnalsofClinicalandLaboratoryScience,第12卷,第6期,455-462)。在淋巴细胞母细胞化试验(一种被广泛接受的体内免疫应答的指标)中,这三种有丝分裂原一起被用于在体外刺激免疫细胞。许多研究已显示了这种试验对于免疫系统应答与年龄相关的减弱有应答(Goldrosen等人,1977-Journalofsurgicaloncology9:229-234页)。较低的增殖能力表明免疫细胞不能有效地被活化和增殖(实现有效的免疫应答过程中的关键步骤)。这种降低的增殖能力被归因于随着年龄增加出现的升高的发病率和死亡率,并因此是免疫能力的重要指标。
对于上述两组犬,来自ConA、PHA、和PWM的数据显示于图3-8中。
就ConA而言,图3和4表明了甘露庚酮糖对T细胞增殖能力的有益效果。全部的基准值是相近的(p>0.05),而就饲喂了包含甘露庚酮糖的饮食的犬对对照饮食而言,在数值上、统计趋势上、或统计学上是较高的。合在一起,这些观察支持了甘露庚酮糖对于免疫细胞群体的这一部分是有益的这个结论。T细胞响应能力随年龄下降,并且是随年龄增加出现的升高的发病率和死亡率的主要作用因素。因此,逆转或减缓这种效应正面地影响犬的健康状态和免疫应答。因此,图3和4显示,饲喂包含甘露庚酮糖的测试饮食的犬具有ConA对T细胞的促有丝分裂刺激的统计趋势或统计学的提高。这种提高表明,饲喂包含甘露庚酮糖的饮食的犬的T细胞,与来自饲喂对照饮食的犬的T细胞相比,更加能够响应于微生物攻击。
与ConA相似,图5和6中显示的PHA反应表明了甘露庚酮糖对T细胞部分响应促有丝分裂刺激的能力的有益效果。全部的基准值是相近的(p>0.05),并且在处理期间,就饲喂了甘露庚酮糖的犬对对照而言,全部的PHA刺激的T细胞数据均在数值上、统计趋势上、或统计学上是更高的。连同关于ConA所观察到的证据一起,这些观察结果支持了甘露庚酮糖对免疫细胞群体的T细胞部分是有益的这一结论。众所周知,T细胞响应能力随年龄下降,并且是随年龄增加出现的升高的发病率和死亡率的主要作用因素。因此,逆转或减缓这种效应正面地影响犬的免疫应答、健康状态、和保健。上文的图5和6同样显示,饲喂包含甘露庚酮糖的测试饮食的犬具有PHA对T细胞的促有丝分裂刺激的统计趋势或统计学的提高。这种提高表明,饲喂包含甘露庚酮糖的饮食的犬的T细胞,与来自饲喂对照饮食的犬的T细胞相比,更加能够响应于微生物攻击。
图7和8中显示的结果表明了饲喂甘露庚酮糖在犬中对B细胞增殖能力的有益效果,如图中的PWM所显示的。全部的基准数据是统计学上近似的,并且只要观察到显著的有益效应时,其均是饲喂甘露庚酮糖的结果。B细胞响应能力同样已知随年龄降低,并且还是随着年龄增加出现的升高的发病率和死亡率的另一作用因素。因此,逆转或减缓这种效应正面地影响犬的免疫应答、健康状态、和保健。上文的图7和8同样显示,饲喂包含甘露庚酮糖的测试饮食的犬具有PWM对B细胞的促有丝分裂刺激的统计趋势或统计学的提高。这种提高表明,饲喂包含甘露庚酮糖的饮食的犬的B细胞,与来自饲喂对照饮食的犬的B细胞相比,更加能够响应于微生物攻击。
8-氧代-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)是脱氧鸟苷的氧化衍生物。8-OHdG是DNA氧化的一种主要产物。作为免疫应答的一部分,T和B细胞必须增殖(变成活化的并分裂)。健康增殖的关键步骤是DNA复制。如果细胞具有受损的DNA或必须修复DNA,这一关键步骤能够受阻。如图9所示,饲喂包含甘露庚酮糖的测试饮食的犬与饲喂对照饮食的犬相比具有显著更低的血清8-OHdG。通过在饲喂甘露庚酮糖的犬中减少DNA损伤,免疫细胞复制将被促进,有助于启动免疫细胞活化级联反应中的关键步骤。
作为总结,下文提供了表1。表1在第一列中显示了具体的反应。第二列被称为“普通老化”,表示在许多物种中随着老化的进行,该标记所发生的情况。第三列与犬相关,与许多物种的普通老化的第二列相匹配,并从而表示没有甘露庚酮糖时,犬的普通老化的迹象将会持续。然而,在第四列中,显示了当犬消耗包含甘露庚酮糖的饮食时关于老化的标记。如同所能看见的,当犬摄入包含甘露庚酮糖的饮食时,T细胞增殖和B细胞增殖反应升高,而T细胞增殖和B细胞增殖反应通常随着年龄降低。CD18+细胞和DNA损伤也是如此,因为相对于这些标记随着年龄通常发生的升高,包含甘露庚酮糖的饮食的消耗将会使这些标记降低。因此,包含甘露庚酮糖的饮食可正面地影响免疫应答,尤其是通过减缓免疫应答随着犬的老化发生的降低,和通过提高免疫系统被微生物攻击时的响应能力。
表1
普通老化 | 没有MH | 有MH | |
T细胞增殖 | ↓ | ↓ | ↑ |
B细胞增殖 | ↓ | ↓ | ↑ |
%CD18+细胞 | ↑ | ↑ | ↓ |
DNA损伤 | ↑ | ↑ | ↓ |
在另一个实施例中,提供了商业制品。所述商业制品可包括包装。用于递送和销售如本文所公开的组合物的任何标准包装均可被使用。所述包装可包含本文所公开的组合物,如包含甘露庚酮糖、或任何其它葡萄糖抗代谢物的组合物。所述组合物可为营养平衡的宠物食品组合物。所述包装可包括记述在该包装上的具体有益效果的声明。所述具体有益效果的声明可涉及被提供给所述组合物的消费者的有益效果。所述具体有益效果的声明可涉及当所述组合物被消耗时提高免疫力。例如,所述具体有益效果的声明可涉及提高伴侣动物的免疫系统的响应能力,如果将所述组合物施用于该伴侣动物的话。另一个例子包括可涉及维持老化伴侣动物的免疫系统和/或减缓其降低的具体有益效果的声明,如果将所述组合物施用于该伴侣动物的话。因此,提供了商业制品,其中所述商业制品包括包装,所述包装包含伴侣动物组合物,其中所述包装包括涉及提高所述伴侣动物免疫力的有益效果声明,如果该伴侣动物消耗该包装内所包含的所述伴侣动物组合物的话。
实例
提供以下实例来举例说明本发明的实施例,而不旨在以任何方式来限制其范围。
包含甘露庚酮糖的鳄梨粗粉的制备:
从FreshKingIncorporated(Homestead,FL)获得了新鲜的鳄梨(Lula品种)。手动分开鳄梨,分离并移除核。使用121/4筛网,通过Hobart商品化食物制备机(序列号11-10410235)研磨了剩余的果皮和果肉。然后将研磨的鳄梨转移至Edwards冷冻干燥机(SuperModulyoModel,Crawely,Sussex,England)中。将冷冻干燥机在第一个24小时内被设为-20℃,在随后的24小时内设为-5℃,在最后的72小时内设为5℃。从冷冻干燥机移出后,用Straub研磨机(4E型,Philadelphia,PA)将粗粉研磨为粉末。对鳄梨粗粉进行了分析,并且发现其包含按所述粗粉的重量计约10.35%的甘露庚酮糖。应当指出的是,鳄梨中所存在的甘露庚酮糖的量是随着具体的品种和成熟状态变化的。
鳄梨提取物的制备
包含高含量甘露庚酮糖的鳄梨提取物根据以下任选方法制备,并用于本发明的实施例的组合物中。
提供完整的鳄梨果实(约900千克)。部分地或完全地分开所述果实并移除核,提供约225千克去核的半块鳄梨。所述未加工的鳄梨被置于粉碎机中粉碎,随后进行搅拌,并加入水(约3000千克)和CELLUBRIX(市售于NovozymesA/S)(约1升)。将混合物进一步搅拌,并同时加热至约66℃。加热完成时,再次加入CELLUBRIX(约1升),于约5.5的受控的pH,保持搅拌整个混合物约12小时。然后将温度进一步升高至约80℃,并然后保持至少约2小时。然后将所得经消化的植物混合物在80℃下过滤,以提供滤液形式的碳水化合物提取物。然后将所述碳水化合物提取物在一个简单的再循环系统中在80℃下真空蒸发,以提供具有约10%至约20%的固体和约5.5的pH的碳水化合物提取物。然后使用折射窗口烘干机将所述提取物进一步浓缩,以提供约100千克结晶或粉末形式的提取物(基于所述全部鳄梨果实的起始量,约11%的碳水化合物的收率,其经分析相当于基于所述全部鳄梨果实的起始量约0.25%至约4.5%的甘露庚酮糖收率)。应当指出的是,鳄梨中所存在的甘露庚酮糖的量是随着具体的品种和果实的成熟状态变化的。所述提取物可被用于本发明的实施例的组合物中。
粗磨食物组合物
表1显示,使用本领域的标准方法,包括挤出方法,制备了具有近似指示量的以下组分的两种粗磨组合物,并且作为日常饲料饲喂给犬和/或猫:
表1
*可用其它具有提高的甘露庚酮糖含量的植物物质取代鳄梨。甘露庚酮糖源的掺入很可能在所述组合物中替代了近似量的谷物源。
**维生素和矿物可包括:维生素E、β-胡萝卜素、维生素A、抗坏血酸、泛酸钙、生物素、维生素B12、维生素B1、烟酸、维生素B2、维生素B6、维生素D3、维生素D2、叶酸、氯化胆碱、肌醇、碳酸钙、磷酸二钙、氯化钾、氯化钠、氧化锌、硫酸锰、硫酸铜、一氧化锰、硫酸亚铁、碘化钾、碳酸钴。
***微量组分可包括:鱼油、亚麻种子、亚麻粗粉、纤维素、风味剂、抗氧化剂、牛磺酸、酵母、肉毒碱、硫酸软骨素、葡糖胺、叶黄素、迷迭香提取物。
用法
八十(n=80)只拉布拉多猎犬按年龄、性别和同窝随机地接受与Eukanuba高龄大型犬犬粮相似的完全且营养平衡的对照饮食,或除了包括如下文所公开的甘露庚酮糖之外与上述对照饮食相同的实验饮食。犬被分为了两个研究组。
研究1:用以0或约2mg/kg犬体重的水平提供甘露庚酮糖的营养平衡的组合物饲喂了总计39只较老的拉布拉多猎犬。在为期4年的研究开始时,这些犬(12只阉割了的雄性,27只摘除了卵巢的雌性)的平均年龄是6.7岁,就群体中最年轻和最老的犬而言,分别为5.1至8.2岁的年龄跨度。对照组合物作为营养平衡的组合物被饲喂,其不含有甘露庚酮糖(0mg/kg)、鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物。测试组合物是配有鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物,来以约2mg/kg犬体重的剂量提供甘露庚酮糖的营养平衡的对照组合物。每天在0730和1430以较老的犬每天食物分配量的二分之一饲喂它们。饲喂犬以维持体重和2-4分范围内的身体组成评分(BCS)。如果进行食物调整,则它们是按季度进行的。对于全部的免疫测量,全部的犬被通宵禁食,并且早餐被推迟直至能够完成血液采集之后。水被无限制地提供。
研究2:用以0或约2mg/kg犬体重的水平提供甘露庚酮糖的营养平衡的组合物饲喂了总计41只较老的拉布拉多猎犬。在为期36个月的饲喂研究开始时,这些犬(12只阉割了的雄性,29只摘除了卵巢的雌性)的平均年龄是4.0岁,就群体中最年轻和最老的犬而言,分别为2.0至6.1岁的年龄跨度。对照组合物作为营养平衡的组合物(Eukanuba高龄大型犬犬粮)被饲喂,其不含有甘露庚酮糖(0mg/kg)、鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物。测试组合物是配有鳄梨提取物、鳄梨粗粉、或鳄梨浓缩物,来以约2mg/kg犬体重的剂量提供甘露庚酮糖的营养平衡的对照组合物。每天在0730和1430以较年轻的犬每天食物分配量的二分之一饲喂它们。饲喂犬以维持体重和2-4分范围内的身体组成评分(BCS)。如果进行食物调整,则它们是按季度进行的。然而,对于全部的免疫测量,全部的犬被通宵禁食,并且早餐被推迟直至能够完成血液采集。水被无限制地提供。
方法
母细胞化材料和方法:
犬科动物全血被收集至肝素管中,并以600g离心10分钟。血沉棕黄层被转移至新的无菌聚丙烯管中,并用PBS稀释至13ml。该血液混合物随后在9ml室温histopaque1.077上分层,并以500g离心30分钟。从梯度中移出PBMC(外周血单核细胞)层并用PBS洗涤。用ACK溶解缓冲液(NH4CL-155mM,EDTA-0.1mM,KHCO3-10mM,pH7.4)除去了残余的红细胞,并再次用PBS洗涤PBMC。在Z2库尔特计数器(BeckmanCoulter)上确定细胞计数。
从Sigma购得有丝分裂原,并稀释于完全培养基(含10%FBS和1%PenStrep的RPMI)中。稀释的有丝分裂原在浓度下加入到96孔组织培养板的孔中。伴刀豆球蛋白A2.5ug/ml、5ug/ml和10ug/ml。PHA2.5ug/ml、10ug/ml和20ug/ml。商陆促分裂原0.25ug/ml、1ug/ml和5ug/ml。完全培养基中的PBMC也被以每孔2×10^5细胞加入到每个孔中。每个孔的总体积是200ul。然后将平板在37度下在5%CO2中温育总计72小时。在52小时(+/-2小时)时,用每孔1uCi的3H-胸腺嘧啶核苷脉冲处理细胞。收获细胞,并通过液体闪烁法计量放射性。
8-OHDG测定:
使用从全血分离的犬科动物血清样品进行测定。使用可以从OxisHealthProducts商购获得的ELISA试剂盒(目录号#21026)对8-OHDG的量进行定量。
全部的试剂和样品在使用前被平衡至室温。
1.用第一抗体稀释缓冲液重溶第一抗体。
2.每孔加入50mL样品或标准品。为了防止边缘效应,不使用最外面的行(行A和H)。
3.将50mL重溶的第一抗体加入到全部的孔中,空白孔除外。用平板密封物紧密地密封平板。左右摇晃平板以充分混合。在37℃下温育1小时。
4.倒出平板内容物。吸取250mL稀释的洗涤缓冲液至每个孔中。通过搅拌彻底洗涤,弃除洗涤缓冲液。颠倒平板,并用干净的纸巾吸干,以移除任何残余的洗涤缓冲液。重复洗涤两次。
5.用第二抗体稀释缓冲液重溶第二抗体。
6.每孔加入100mL重溶的第二抗体。用平板密封物紧密地密封平板。左右摇晃平板以充分混合。在37℃下温育1小时。
7.用100倍体积的发色体稀释缓冲液稀释发色体。
8.重复步骤4。
9.每孔加入100mL稀释的发色体。左右摇晃平板以充分混合。在室温下于黑暗中温育15分钟。
10.加入100mL停止液,混合,等候3分钟,并在450nm下读取吸光度。
流式细胞术-CD18方法:
犬科动物全血被收集至EDTA管中,并以400g离心30分钟。血沉棕黄层被转移至新的无菌聚丙烯管中,并用2mlPBS稀释。通过加入5mlH2O保持一分钟使红细胞溶解,并用5ml2X冷PBS停止反应。以300g离心细胞10分钟使其沉淀。重复细胞溶解步骤,直到获得白细胞沉淀物。然后将细胞重悬于0.8mlFACS洗涤缓冲液(含有1%FBS和0.02%NaN3的PBS)。等分100ul细胞悬浮液至每个FACS管中,以进行染色。
染色抗体购自Serotec。第一抗体:小鼠抗犬CD18(MCA1780),以1:10稀释使用。第二抗体:山羊抗小鼠IgG(H&L)FITC(STAR117F),以1:50稀释使用。阴性对照抗体:小鼠IgG1FITC/大鼠IgG2aRPE(DC050),以1:10稀释使用。用每种抗体在冰上温育细胞30分钟,用FACS洗涤缓冲液洗涤,然后在分析之前用4%福尔马林固定。在FACScan流式细胞仪(BectonDickinson)上,使用CellQuestPro软件,分析了细胞群体。
本文所公开的量纲和值不旨在被理解为严格地限于所述的精确值。相反,除非另外指明,每个这样的量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如,所公开的量纲“40mm”旨在表示“约40mm”。
除非明确地不包括在内或换句话讲有所限制,本文所引用的每篇文献,包括任何交叉引用的或相关的专利或专利申请,均特此全文以引用方式并入本文。任何文献的引用不是对其作为本文所公开的或受权利要求书保护的任何发明的现有技术,或者其单独地或者与任何其它参考文献的任何组合,或者参考、提出、建议或公开任何此类发明的认可。此外,当本发明中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文件中术语的任何含义或定义矛盾时,应当服从在本发明中赋予该术语的含义或定义。
虽然已经举例说明和描述了本发明的具体实施例,但是对于本领域的技术人员来讲显而易见的是,在不脱离本发明的实质和范围的情况下可做出各种其它改变和变型。因此,随附权利要求书中旨在涵盖本发明范围内的所有这些改变和变型。
Claims (13)
1.甘露庚酮糖在制备用于预防或减少与CD18+细胞在老年伴侣动物中过度增殖有关的组织损伤或内皮细胞损伤的物质中的应用,其中,所述甘露庚酮糖降低伴侣动物中血清8-羟基脱氧鸟苷并减少DNA损伤。
2.甘露庚酮糖在制备在伴侣动物年老期间降低血清8-羟基脱氧鸟苷使得减小DNA损伤的物质中的应用。
3.甘露庚酮糖在制备用于提高在伴侣动物年老期间的T和B免疫细胞响应于刺激微生物攻击的增殖能力的物质中的应用。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,其中所述伴侣动物选自犬科动物和猫科动物。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,并且其中所述物质为粗磨食物形式。
6.根据权利要求5所述的应用,其中所述的粗磨食物是营养平衡的粗磨食物。
7.根据权利要求5所述的应用,其中所述粗磨食物包含小于5%的甘露庚酮糖。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,其中所述物质为每天饲喂每千克体重1mg至50mg甘露庚酮糖给所述伴侣动物的形式。
9.根据权利要求8所述的应用,其中所述物质为每天饲喂每千克体重2mg甘露庚酮糖给所述伴侣动物的形式。
10.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,其中所述物质为每天饲喂1mg至1000mg甘露庚酮糖的形式。
11.根据权利要求10所述的应用,其中所述物质为每天饲喂5mg至100mg甘露庚酮糖的形式。
12.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,其中所述物质为补充剂。
13.根据权利要求1-3中任一项所述的应用,其中所述甘露庚酮糖源选自鳄梨、鳄梨提取物、鳄梨粗粉、鳄梨浓缩物、以及它们的组合和混合物。
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