CN103328461A - 使用渥曼青霉素类似物的结晶形式的组合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本文提供了化合物1的新型结晶形式。本文还提供了化合物1的结晶形式的组合物及使用方法。

Description

使用渥曼青霉素类似物的结晶形式的组合物及方法
交叉引用
本申请要求提交于2010年12月30日的美国临时申请61/428,439的权益，该申请通过引用整体并入本文。
技术领域
本文描述了化合物1(化学名为(4S，4aR，5R，6aS，9aR，Z)-1-((二烯丙基氨基)亚甲基)-11-羟基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，7，10-三氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氢茚并[4，5-h]异色烯-5-基乙酸酯，化学名也称4-二烯丙基氨基亚甲基-6-羟基-1-α-甲氧基甲基-10β，13β-二甲基-3，7，17-三氧代-1，3，4，7，10，11β，12，13，14α，15，16，17-十二氢-2-氧杂-环戊并[a]菲-11-基乙酸酯，也称为PX-866，是一种不可逆地抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI-3K)的小分子药物)的某些结晶形式。
化合物1。
背景技术
PI-3激酶(PI-3K)是能够使磷脂酰肌醇(PtdIns)的肌醇环的3位羟基得到磷酸化的一类相关细胞内信号转导酶。在癌症中，PI-3K细胞内信号传导途径的关键节点频繁突变。在正常细胞中，PI-3K途径受到严格控制。PI-3K的不恰当的激活或突变在许多人类癌症的发病机理中至关重要。
发明内容
在药学和药理学中，化合物的多晶型性常常是非常重要的。相同分子的多晶型物、晶体常常由于晶格中分子的顺序而具有不同的物理性质。多晶形式的物理性质差异会影响药学参数如储存稳定性、压缩性和密度(在制剂和产品制备中是重要的)以及溶出速率(在测定生物利用度中是重要的)。
无定形PX-866先前已经用于临床研究。本发明提供了PX-866的某些新形式，其克服了与无定形PX-866相关的一些缺点。
本文提供了PX-866(化合物1)的新型结晶形式。本文还提供了化合物1的结晶形式的组合物及其使用方法。在一些实施方案中，化合物1的新型结晶形式呈现出比无定形形式更好的物理性质。
本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700021
化合物1
其基本上无渥曼青霉素。
一方面，本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700022
化合物1
其中所述形式是
(a)结晶苯甲醚溶剂化物；且
(b)具有在以下2θ角有特征峰的X射线粉末衍射图(XRPD)：7.9±0.1度的2θ角、8.5±0.1度的2θ角、10.2±0.1度的2θ角、11.1±0.1度的2θ角、14.0±0.1度的2θ角、14.2±0.1度的2θ角、17.9±0.1度的2θ角、18.7±0.1度的2θ角、21.0±0.1度的2θ角、21.2±0.1度的2θ角和28.2±0.1度的2θ角。
本文提供了具有图1所示的XRPD的PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物形式。
一方面，本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700031
化合物1
其中所述形式是
(a)结晶苯甲醚溶剂化物；且
(b)具有在以下2θ角有特征峰的X射线粉末衍射图(XRPD)：10.2±0.1度的2θ角、11.1±0.1度的2θ角、14.0±0.1度的2θ角、14.2±0.1度的2θ角和21.0±0.1度的2θ角。
在一些实施方案中，上述结晶形式是基本上纯的结晶形式。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少90％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少95％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少98％的纯度。
如通过差示扫描量热仪所测量的，上述结晶形式在约146℃处显示明显吸热。在一些这样的实施方案中，当使用10℃/分钟的扫描速率时观察到吸热。
在一个实施方案中，本文提供了化合物1的结晶形式，其中所述形式具有总空间群(general space group)P212121。
上述结晶形式在120K下展示具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
Figure BDA00003441189700041
本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700042
化合物1
其中，如通过差示扫描量热仪所测量的，所述结晶形式在约146℃处显示明显吸热。
本文提供了制备基本上无渥曼青霉素的、具有以下结构式的化合物的结晶溶剂化物形式的方法，
Figure BDA00003441189700043
化合物1
该方法包括将该化合物在合适溶剂中的上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液冷却到4℃至-20℃的温度。
在上述方法的一些实施方案中，上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液包含选自甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇或其组合的溶剂。
在一些实施方案中，如实施例5所述，上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液包含苯甲醚。
本文提供了制备具有以下结构式的化合物的结晶溶剂化物形式的方法，
Figure BDA00003441189700051
化合物1
该方法包括向化合物在溶剂中的上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液中加入反溶剂，其中化合物1在所述溶剂中与在反溶剂中相比具有不同的溶解度。
在一些实施方案中，该方法包括任选地在加入反溶剂之前将化合物在溶剂中的上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液冷却至4℃至-20℃的温度。
在该方法的一些实施方案中，溶剂选自四氢呋喃(THF)、水、乙腈、丙酮、正丁醇、仲丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚(TBME)、氯仿、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙醇、1，4-二氧杂环己烷、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸异丁酯、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、甲苯、二甲苯、苯甲醚、己烷、环己烷、甲基环己烷、异丙基苯、乙酸丙酯、氯苯、戊烷、1-戊醇、4-甲基-2-戊酮和1，1，2-三氯乙烯，或其组合。
在该方法的一些实施方案中，反溶剂选自水、甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇，或其组合。
在该方法的一些实施方案中，溶剂选自THF、乙腈、MTBE、乙二醇、丙酮、乙酸乙酯和乙醇，而反溶剂选自甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇。
在一些实施方案中，溶剂是苯甲醚，而反溶剂是己烷、庚烷、环己烷或水。
本文提供了制备具有图1所示的XRPD的结晶PX-866形式的方法，该方法包括
(a)将化合物1溶解在四氢呋喃(THF)中；
(b)向步骤(a)的混合物中加入苯甲醚；和
(c)浓缩步骤(b)的混合物。
在上述方法的一些实施方案中，在步骤(b)之前将步骤(a)的溶液任选地冷却到约-4℃至约15℃，优选地约0℃至约10℃的温度。在上述方法的一些其他实施方案中，在步骤(b)之前将步骤(a)的溶液任选地保持在高于环境温度的温度(例如，约25℃至约100℃，优选地约25℃至约50℃)。
在上述方法的一些实施方案中，在步骤(c)之前任选地用权利要求2的晶体对步骤(b)的溶液进行引晶(seed)。
在上述方法的一些实施方案中，任选地在浓缩期间将步骤(c)的混合物冷却(例如，保持在约0℃至约10℃的温度)一段时间，然后在继续浓缩的同时使其升温至环境温度。
在一些上述实施方案中，将步骤(b)的混合物在环境温度或低于环境温度的温度(例如，约0℃至10℃、约15℃至约25℃)下搅拌一段时间(例如，约2-8小时)。在一些实施方案中，例如在环境温度或低于环境温度的温度获如，约0℃至10℃、约15℃至约25℃)下经由缓慢真空蒸馏进行一段时间(例如，约2-8小时)的浓缩以获得浆体。任选地在继续真空蒸馏的同时使浆体升温至环境温度，之后过滤该混合物并干燥结晶产物。
在上述方法的一些实施方案中，通过以下步骤制备晶种：
(a)在环境温度下将PX-866溶解或悬浮于苯甲醚中；和
(b)将来自步骤(a)的上清液冷却至4℃，然后冷却至-20℃。
在上述方法的一些实施方案中，任选地将得到的固体在氮气流或在真空下干燥。
本文提供了药学上可接受的组合物，其包含PX-866、苯甲醚和药学上可接受的载体的。
在一些实施方案中，该药物组合物配制为用于静脉内注射、皮下注射、舌下给药、直肠给药、颊给药、口服给药、局部给药、经皮给药或吸入给药。
在一些实施方案中，该组合物是片剂。
本文提供了包含化合物1(即PX-866)的结晶苯甲醚溶剂化物形式和药学上可接受的载体的药物组合物。
在一些实施方案中，对于上文或下文所述的任何药物组合物，化合物1以约0.1-20mg的量存在于单位剂型中。
在一些实施方案中，对于上文或下文所述的任何药物组合物，药物组合物进一步包含第二抗癌剂。
在一些实施方案中，对于上文或下文所述的任何药物组合物，组合物进一步包含选自溶剂化物形式、共结晶或溶剂化物-水合物的、化合物1的一种或多种另外的结晶形式。
在一些实施方案中，化合物1的一种或多种另外的结晶形式选自具有图4所示的XRPD图的甲苯溶剂化物；具有图6所示的XRPD图的乙酸丙酯溶剂化物；具有图9所示的XRPD图的4-甲基-2-戊酮溶剂化物形式；具有图10所示的XRPD图的异丙基苯溶剂化物；具有图11所示的XRPD图的1-戊醇溶剂化物；和具有图12所示的XRPD图的氯苯溶剂化物形式。
本文提供了在有需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含治疗有效量的上述任何结晶形式的组合物。
在所述方法的一些实施方案中，癌症选自乳腺癌、肺癌、头颈癌、脑癌、腹部癌、结肠癌、结直肠癌、食道癌、咽旁癌、胃肠癌、神经胶质瘤、肝癌、舌癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、肾癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、维尔姆斯瘤(Wilm′s tumor)、多发性骨髓瘤、皮肤癌、淋巴瘤、白血病、血癌、间变性甲状腺瘤、皮肤肉瘤、黑素瘤、腺囊瘤、肝样瘤、非小细胞肺癌、软骨肉瘤、胰岛细胞瘤、前列腺癌(包括去势难治性形式)、卵巢癌(包括粘液性卵巢癌)、头颈部鳞状细胞癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、胃癌、胰腺癌、平滑肌肉瘤、乳腺癌、囊性腺样癌、神经内分泌瘤、脑瘤、中枢神经系统癌症、胶质母细胞瘤和胚细胞瘤。
在所述方法的一些实施方案中，癌症是头颈部鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、结肠癌或前列腺癌。
在一些实施方案中，该方法进一步包括施用抗癌剂。
本文还提供了在有需要的受试者中治疗纤维化病况的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含治疗有效量的化合物1的结晶苯甲醚溶剂化物形式的组合物。
本文还提供了在有需要的受试者中治疗肺纤维化的方法，该方法包括向有需要的受试者施用包含治疗有效量的化合物1的结晶苯甲醚溶剂化物形式的组合物。
在进一步的方面，本文提供了基本上无渥曼青霉素的PX-866(包括无定形或结晶PX-866)。在一些实施方案中，基本上无渥曼青霉素的PX-866包含少于0.2％的渥曼青霉素。在一些实施方案中，基本上无渥曼青霉素的PX-866包含少于0.15％的渥曼青霉素。在一些实施方案中，基本上无渥曼青霉素的PX-866包含少于0.1％的渥曼青霉素。在一些实施方案中，基本上无渥曼青霉素的PX-866包含少于0.05％的渥曼青霉素。在一些实施方案中，基本上无渥曼青霉素的PX-866包含少于0.01％的渥曼青霉素。在一些实施方案中，当检测(例如，通过高压液相色谱法(HPLC)或气相色谱法(GC))时，基本上无渥曼青霉素的PX-866包含的渥曼青霉素水平检测不到。
一方面，本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700091
其中所述形式是
(a)结晶乙酸丙酯溶剂化物；且
(2)具有这样一种X射线粉末衍射图，其具有至少两个具有选自以下的2θ值的特征峰：8.0±0.1度的2θ角、8.4±0.1度的2θ角、10.2±0.1度的2θ角、11.0±0.1度的2θ角、14.0±0.1度的2θ角和19.2±0.1度的2θ角。
本文提供了具有图6所示的XRPD的PX-866的结晶乙酸丙酯溶剂化物形式。
在一些实施方案中，上述结晶形式是基本上纯的结晶形式。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少90％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少95％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少98％的纯度。
如通过差示扫描量热仪所测量的，上述结晶形式在约80℃处显示明显吸热。在一个实施方案中，扫描速率是10℃/分钟。
上述结晶形式在100K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
Figure BDA00003441189700092
本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
化合物1
其中如通过差示扫描量热仪所测量的，该结晶形式在约80℃处显示明显吸热。
另一方面，本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700102
其中所述形式是
(a)结晶甲苯溶剂化物；且
(2)具有这样一种X射线粉末衍射图，其具有至少两个具有选自以下的2θ值的特征峰：12.5±0.1度的2θ角、14.0±0.1度的2θ角和21.1±0.1度的2θ角。
本文提供了具有图4所示的XRPD的PX-866的结晶甲苯溶剂化物形式。
在一些实施方案中，上述结晶形式是基本上纯的结晶形式。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少90％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少95％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少98％的纯度。
如通过差示扫描量热仪所测量的，上述结晶形式在约142.0℃处显示明显吸热。在一个实施方案中，扫描速率是10℃/分钟。
另一方面，本文提供了具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700111
其中所述形式是
(a)结晶异丙基苯溶剂化物；且
(2)具有这样一种X射线粉末衍射图，其具有至少两个具有选自以下的2θ值的特征峰：7.8±0.1度的2θ角、8.4±0.1度的2θ角、10.1度的2θ度±0.1度的2θ度、10.7±0.1度的2θ角、13.7±0.1度的2θ角、14.1±0.1度的2θ角、18.1±0.1度的2θ角、18.9±0.1度的2θ角、20.6±0.1度的2θ角和20.8±0.1度的2θ角。
本文提供了具有图10所示的XRPD的PX-866的结晶异丙基苯溶剂化物形式。
在一些实施方案中，上述结晶形式是基本上纯的结晶形式。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少90％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少95％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少98％的纯度。
另一方面，本文提供了基本上纯的具有以下结构式的化合物的结晶形式：
其中所述形式是
(a)结晶4-甲基-2-戊酮溶剂化物；且
(2)具有这样一种X射线粉末衍射图，其具有至少两个具有选自以下的2θ值的特征峰：7.9±0.1度的2θ角、8.4±0.1度的2θ角、10.2±0.1度的2θ角、10.9±0.1度的2θ角、13.9±0.1度的2θ角、14.2±0.1度的2θ角、18.5±0.1度的2θ角、19.2±0.1度的2θ角和20.7±0.1度的2θ角。
本文提供了具有图9所示的XRPD的PX-866的结晶4-甲基-2-戊酮溶剂化物形式。
在一些实施方案中，上述结晶形式是基本上纯的结晶形式。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少90％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少95％的纯度。在一些实施方案中，以上所述结晶形式具有至少98％的纯度。
在进一步的方面，本文提供了基本上纯的具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700122
其中所述形式是
(a)结晶1-戊醇溶剂化物；且
(2)具有这样一种X射线粉末衍射图，其具有至少两个具有选自以下的2θ值的特征峰：8.1±0.1度的2θ角、8.5±0.1度的2θ角、10.2±0.1度的2θ角、11.1±0.1度的2θ角、12.5±0.1度的2θ角、14.0±0.1度的2θ角、14.3±0.1度的2θ角、17.9±0.1度的2θ角、18.8±0.1度的2θ角、20.7±0.1度的2θ角和21.3±0.1度的2θ角。
本文提供了具有图11所示的XRPD的PX-866的结晶1-戊醇溶剂化物形式。
在一些实施方案中，上述结晶形式是基本上纯的结晶形式。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少90％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少95％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少98％的纯度。
又一方面，本文提供了基本上纯的具有以下结构式的化合物的结晶形式：
Figure BDA00003441189700131
其中所述形式是
(a)结晶氯苯溶剂化物；且
(2)具有这样一种X射线粉末衍射图，其具有至少两个具有选自以下的2θ值的特征峰：8.0±0.1度的2θ角、8.5±0.1度的2θ角、10.3±0.1度的2θ角、11.1±0.1度的2θ角、14.1±0.1度的2θ角、17.9±0.1度的2θ角、18.8±0.1度的2θ角、19.1±0.1度的2θ角、21.0±0.1度的2θ角和28.3±0.1度的2θ角。
本文提供了具有图12所示的XRPD的PX-866的结晶氯苯溶剂化物形式。
在一些实施方案中，上述结晶形式是基本上纯的结晶形式。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少90％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少95％的纯度。在一些实施方案中，上述结晶形式具有至少98％的纯度。
对于上文或下文所述的任何结晶形式，在环境温度下该结晶形式显示出比无定形形式更高的稳定性。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物形式具有总空间群P212121的形式。
在其他实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式与化合物1的无定形形式相比易于配制。在一些情况下，化合物1和/或其类似物的结晶形式与无定形形式相比具有更好的流动性。
在任何上述实施方案中，包含化合物1的结晶溶剂化物形式的药物组合物进一步包含第二抗癌剂。
在任何上述实施方案中，包含化合物1的结晶苯甲醚溶剂化物形式的药物组合物进一步包含选自溶剂化物形式、共结晶或溶剂化物-水合物的、化合物1的一种或多种另外的结晶形式。
在上文或下文所述的任何实施方案中，任选地将PX-866的任何结晶形式(包括PX-866的任何结晶溶剂化物形式、PX-866的任何结晶溶剂化物-共结晶形式和/或PX-866的任何溶剂化物-水合物形式)从合适的溶剂或溶剂与反溶剂的混合物中进行第二次(或更多次)重结晶。
在一些实施方案中，本文提供了包含或来源于结晶形式和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，该药物组合物中的化合物1的结晶形式以约0.1至约20mg的量存在于单位剂型中。在某些实施方案中，该药物组合物配制为用于静脉内注射、皮下注射、舌下给药、直肠给药、颊给药、口服给药、局部给药、经皮给药或吸入给药。在某些实施方案中，该药物组合物是片剂、丸剂、胶囊、悬浮液、凝胶、分散剂、溶液剂、乳剂、微粉、锭剂、透皮贴剂、软膏剂或洗剂。在某些实施方案中，该药物组合物是片剂。在一些实施方案中，将片剂配制为速释型、缓释型、控释型或其组合。在某些实施方案中，该药物组合物进一步包含第二治疗活性剂。在某些实施方案中，该药物组合物进一步包含第二抗癌剂。
在一些实施方案中，本发明还提供了治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用上文或下文所述的化合物1和/或其类似物的任何结晶形式或包含该结晶形式的药物组合物。
可通过本文所述的方法治疗的癌症包括但不限于乳腺癌、肺癌、头颈癌、脑癌、腹部癌、结肠癌、结直肠癌、食道癌、咽旁癌、胃肠癌、神经胶质瘤、肝癌、舌癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、肾癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、维尔姆斯瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、淋巴瘤、白血病、血癌、间变性甲状腺瘤、皮肤肉瘤、黑素瘤、腺囊瘤、肝样肿瘤、非小细胞肺癌、软骨肉瘤、胰岛细胞瘤、前列腺癌(包括去势难治性形式)、卵巢癌(包括粘液性卵巢癌)，和/或包括但不限于以下各项的癌：头颈部鳞状细胞癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、胃癌、胰腺癌、平滑肌肉瘤、乳腺癌、囊性腺样癌、神经内分泌瘤(包括胰腺神经内分泌瘤)、脑瘤、中枢神经系统癌症、胶质母细胞瘤和胚细胞瘤。在某些实施方案中，癌症是头颈癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌或前列腺癌。
在一些实施方案中，本文所述的治疗方法治疗肺癌如非小细胞肺癌(NSCLC)。在其他实施方案中，本文所述的治疗方法治疗头颈癌如头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)。在一些实施方案中，本文所述的治疗方法治疗诸如粘液性卵巢癌或结直肠癌等癌。在一些实施方案中，本文所述的治疗方法治疗胰腺癌如胰腺神经内分泌瘤。
在一些实施方案中，还提供了治疗纤维化的方法，该方法包括向有需要的受试者施用上述化合物1和/或其类似物的任何结晶形式和/或包含该结晶形式的药物组合物。
援引并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用以相同程度并入本文，犹如每个单独的出版物、专利和专利申请特别地和单独地被指出为通过引用而并入。
附图说明
本文所述的实施方案的新特征在随附的权利要求中具体阐述。通过参考以下对在其中利用到这些实施方案原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述和附图，将会获得对本实施方案的特征和优点的更好的理解，在附图中：
图1示出了由绘图员重绘的、PX-866的苯甲醚溶剂化物的X射线粉末衍射图。
图2示出了由绘图员重绘的、PX-866的苯甲醚溶剂化物的DSC热谱图。
图3示出了PX-866的苯甲醚溶剂化物中晶体堆积的a轴投影。
图4示出了由绘图员重绘的、PX-866的甲苯溶剂化物的X射线粉末衍射图。
图5示出了由绘图员重绘的、PX-866的甲苯溶剂化物的DSC热谱图。
图6示出了由绘图员重绘的、PX-866的乙酸丙酯溶剂化物的X射线粉末衍射图。
图7示出了由绘图员重绘的、PX-866的乙酸丙酯溶剂化物的DSC热谱图。
图8示出了PX-866的乙酸丙酯溶剂化物中晶体堆积的a轴投影。
图9示出了由绘图员重绘的、由包含4-甲基-2-戊酮的溶液制备的结晶PX-866的X射线粉末衍射图。
图10示出了由绘图员重绘的、由包含异丙基苯的溶液制备的结晶PX-866的X射线粉末衍射图。
图11示出了由绘图员重绘的、由包含1-戊醇的溶液制备的结晶PX-866的X射线粉末衍射图。
图12示出了由绘图员重绘的、由包含氯苯的溶液制备的结晶PX-866的X射线粉末衍射图。
图13示出了由绘图员重绘的、在40℃、75％相对湿度下PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物、甲苯溶剂化物、乙酸丙酯溶剂化物与无定形形式之间的稳定性测试的结果。
图14具有两幅图：图A和图B，并且示出了PX-866在血小板和肿瘤衍生细胞系中的体外剂量响应。图A)：向来自三个不同供体的全血中加入PX-866，并将样品在37℃下温育2小时。从样品中分离血小板并用TRAP刺激15min。随后通过ELISA分析样品裂解物的p-Akt和总Akt水平。针对每个供体样品示出了经计算的IC50值；由绘图员重新绘图。图B)：在缺乏或存在各种量的PX-866的情况下用IGF1刺激肿瘤细胞系10min。随后通过ELISA分析样品裂解物的p-Akt和总Akt水平。针对每个细胞系示出了经计算的IC50值；由绘图员重新绘图。
图15示出了在将无定形PX-866和PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物形式施用至人体后，由绘图员重绘的17-羟基PX-866的平均血浆浓度图，显示无定形和结晶形式具有相似的谱图。
图16(A)示出了使用非偏振光在10X放大倍率下，无定形PX-866的显微照片。
图16(B)示出了使用偏振光在10X放大倍率下，无定形PX-866的显微照片。
图17(A)示出了使用非偏振光在10X放大倍率下，PX-866苯甲醚溶剂化物的显微照片。
图17(B)示出了使用偏振光在10X放大倍率下，PX-866苯甲醚溶剂化物的显微照片。
具体实施方式
化合物1(化学名为(4S，4aR，5R，6aS，9aR，Z)-1-((二烯丙基氨基)亚甲基)-11-羟基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基1-2，7，10-三氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氢茚并[4，5-h]异色烯-5-基乙酸酯，化学名也称4-二烯丙基氨基亚甲基-6-羟基-1-α-甲氧基甲基-10β，13β-二甲基-3，7，17-三氧代-1，3，4，7，10，11β，12，13，14α，15，16，17-十二氢-2-氧杂-环戊并[a]菲-11-基乙酸酯，也称为PX-866)是一种不可逆地抑制磷脂酰肌醇-3-激酶的小分子药物。化合物1具有以下结构式：
Figure BDA00003441189700181
PX-866的非无定形形式的鉴定
通常，化合物1由渥曼青霉素以若干合成步骤制备。化合物1在色谱分析后被制备为橙色油状物。参见，例如US7,081,475。至今尚未鉴定出化合物1的多晶型形式。本文所述的实施方案的多晶型物包括化合物1的外消旋物、外消旋混合物以及与所有可能的异构体的非对映混合物，及其混合物。
由于原材料渥曼青霉素与化合物1之间的结构相似性，对化合物1的纯化(例如，色谱法)面临挑战。因此，本文提供了用于化合物1和/或其类似物的纯化和/或结晶的某些条件。
PX-866的无定形形式显示出可变的批次间残留溶剂水平和纯度水平，并且含有低水平的原材料渥曼青霉素。此外，无定形PX-866在环境温度下稳定性较差并趋于形成粘性固体，这会在制备过程中造成困难。
因此，在寻找PX-866的改良形式中的一些期望目标为结晶度、终产物中原材料的去除、稳定性和易于处理，同时保持溶解度和批次之间的再现性。本文描述了PX-866的结晶形式，其为PX-866的改良形式。
此外，通过将未处理的、未混合的无定形PX-866按重量缓慢填充至胶囊中而将无定形PX-866制成胶囊。无定形材料常常是粘性的并且趋于结块(例如，形成粘性团块)，这在制备过程中造成困难。用无定形PX-866不容易制备片剂形式。
此外，由于使全部溶液接近存在于胶囊中的粉末所需的时间的可变性以及PX-866在溶液中的较差稳定性，所以仅测试了胶囊产物的崩解而非溶解。作为胶囊水合物，胶囊中的一些粉末早于其余粉末被湿润，并且可形成妨碍一部分PX-866活性剂从胶囊释放的堵塞。
因此，在开发改良剂型中的一些期望的目标为可放大性和可制造性、改良的纯度、给以后的研究设盲(blind)的能力、混合均匀性、流动性以及降低的水分含量。片剂相对于胶囊是理想的，能提高生产效率并且避免上述胶囊制剂的缺点。本文描述了实现了开发出改良剂型的期望目标的PX-866的结晶形式。进一步地，本文所述的结晶形式允许更快的过滤、更快的干燥且更容易从过滤器和反应器中回收，因此易于处理。
用于鉴定PX-866的非无定形形式的研究
对PX-866进行初始溶剂筛选以确定合适的主溶剂和反溶剂。之后以50mg的规模利用数种主溶剂和反溶剂进行成浆(slurries)和数次沉淀。干燥后，显示从纯去离子水中的浆体中分离的材料显著降低了庚烷的含量。之后将水浆体按比例放大至0.5g，并在环境温度下进行。由于担心在环境温度下于成浆期间发生降解，所以在10℃进行了0.5g规模的额外的成浆，以试图使任何潜在的降解最小化。从10℃的浆体分离的材料未显示出庚烷含量的显著降低。从环境温度水浆体中分离的固体得到的庚烷含量为3,800ppm，其低于药品注册时对人类使用极限(5,000ppm)的技术要求；然而，还观察到了PX-866纯度的显著降低。
在表1A和表2A中示出了初始溶剂筛选的结果。PX-866的该初始溶剂筛选在18种溶剂中进行以选择适用于浆体实验的溶剂。将大约1-2mg的材料放入2打兰(dram)的小玻璃瓶中，并按50μL的份量加入选择的溶剂以确定溶解所需溶剂的最小量。在环境温度下摇动小瓶并在每次添加之间进行目测检查以确定是否发生了完全溶解。如表1A所示，PX-866在环境温度下于以下溶剂中显示出良好的溶解度，并将其指定为主溶剂：乙腈(MeCN)、二氧杂环己烷、丙酮、MTBE、乙醇(EtOH)、乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸异丙酯(IPAc)、异丙醇(IPA)、四氢呋喃(THF)、甲基乙基酮(MEK)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸(AcOH)、甲醇(MeOH)、甲苯和二氯甲烷(DCM)。
表1A：用庚烷作为反溶剂的初始溶剂筛选结果
表2A：用H2O作为反溶剂的初始溶剂筛选结果
Figure BDA00003441189700202
PX-866在环己烷、庚烷和水中显示出有限的溶解度或无溶解，因此将这些溶剂指定为反溶剂。为了评估在成浆实验中必需使用的主溶剂与反溶剂的比例，然后可按50mL的份量将庚烷或水加入至溶解的PX-866中，直至形成混浊溶液或沉淀出固体。如表1A和2A中所示，在多数实验中观察到沉淀或混浊，其中反溶剂可与主溶剂混溶。当使用MeCN和AcOH作为主溶剂时，发生了异常现象，因为在添加反溶剂后，产物呈油状析出(oiled out)。
使用大约50mg的PX-866和0.5-1.0mL的预混合溶剂体系进行了进一步的浆体实验。溶剂体系是基于初始溶剂筛选的结果而选择的。称量PX-866并放入小瓶中，小瓶中加有期望的溶剂体系。之后在环境温度下将得到的混合物用磁力搅拌进行搅拌。如表3中所示，仅有三种溶剂体系[THF/庚烷(1∶10)、MTBE/庚烷(2∶1)和甲苯/庚烷(1∶1)]得到了具有自由流动的固体的浆体。两种溶剂混合物[THF/庚烷(1∶5)和IPAc/庚烷(1∶2)]在小瓶的底部和侧壁得到了具有粘性固体的浆体。所有其他溶剂混合物得到了油状物。
如表3A中所示，几种溶剂体系得到了与原材料相比残留庚烷含量降低的固体。然而，在多数情况下，庚烷含量的降低伴随着所用的共溶剂的残留溶剂含量的增加。一些所得材料的残留溶剂含量低于或接近于每种各自溶剂的容许极限的浆体溶剂体系为IPAc/庚烷(1∶2)和纯水。IPAc/庚烷浆体最初得到了粘性固体，但在加入另一份庚烷后变为自由流动的。
表3A：浆体研究结果
Figure BDA00003441189700221
Figure BDA00003441189700231
Figure BDA00003441189700241
除了浆体研究之外，还评估了沉淀实验以降低PX-866中庚烷的残留量。在第一次实验中，在环境温度下将PX-866溶解在甲苯(0.25mL)中。之后缓慢加入庚烷(0.25mL)以试图诱导沉淀。在添加庚烷后形成粘性/油状固体。之后加入少量晶种(约1mg原材料)，并用刮勺搅拌混合物。搅拌约1分钟后，产生自由流动的固体。搅拌20小时后，取出浆体样品，并通过离心机过滤分离固体，然后在环境温度下真空干燥过夜。之后将一部分固体在55℃下进一步真空干燥过夜。然后通过1H-NMR分析两种干燥的样品以确定残留溶剂含量。将剩余的浆体在环境温度下继续搅拌7天。之后采集一份样品并如前所述进行分析。如表4A中所示，对于来自该浆体的样品，残留庚烷含量显著降低；然而，甲苯含量非常高(＞50,000ppm)。
第二次实验如下进行：首先向PX-866[51.5mg]中加入MTBE(1mL)以试图溶解原材料。当形成粘性固体时未观察到溶解。之后加入丙酮(0.05mL)以溶解所有固体。将得到的溶液在环境温度下搅拌过夜。无固体沉淀。之后通过在氮气流下蒸发去除溶剂。再次加入MTBE(0.5mL)，形成粘性固体。之后加入庚烷(0.45mL)，得到自由流动固体的形成。将浆体在环境温度下继续搅拌7天，此时将固体分离并如前所述进行干燥。然后通过1H-NMR分析干燥的固体以确定残留溶剂含量。如表4A中所示，残留庚烷含量显著降低，然而MTBE含量仍然很高(＞16,000ppm)。
表4A-沉淀实验
对于寻找用于上述PX-866的结晶的成功溶剂体系的初步尝试，由于高残留溶剂量和/或缺乏结晶性和/或形成粘性固体或油状物，得到了次优的结果。需要大量实验来鉴定产生PX-866的结晶形式的溶剂体系，并且这些额外的尝试在实施例1-3中示出。
举例来说，稳定性研究建立了结晶溶剂化物与无定形材料相比改善的对热和湿度的稳定性。该研究在40℃和75％的相对湿度下进行，并且在第1、2、3、4和8周时间点取出进行HPLC和XRPD分析。(参见实施例17和图13)。此外，可以观察到，在仅一周后，示例性的苯甲醚和甲苯溶剂化物具有比无定形PX-866更好的稳定性。乙酸丙酯溶剂化物也比无定形材料更稳定。XRPD分析还表明结晶形式在研究持续期间不发生转变或经历物理变化。
图16(A)、图16(B)、图17(A)和图17(B)示出了无定形PX-866和PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物形式之间的对比。如图中所示，PX-866的无定形形式显示出小且不均匀的粒径和颗粒聚集。结晶苯甲醚溶剂化物形式显示出了轮廓分明的棱形晶体和均匀的粒径，而无颗粒聚集。本文所述的实验导致对某些溶剂化物形式(包括克服了与无定形PX-866相关的一些缺点的结晶苯甲醚溶剂化物形式)的鉴定。
非无定形PX-866的制剂
在初始制剂研究中，观察到化合物1的无定形形式显示出对于制剂而言不期望的性质，包括热和湿度引起的快速降解、低流动性以及不需要的吸湿性，这需要低湿度条件来产生样品制剂。在一些情况下，无定形形式的合成路径导致可变的纯度，并且在一些情况下观察到庚烷以广泛不同的程度残留在最后一步中。溶解研究也已表明填充有无定形化合物1的胶囊在该胶囊中显示出堵塞(即，粘性团块)。
因此，本文提供了易于配制的化合物1和/或其类似物的结晶形式。在一些实施方案中，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式及其溶剂化物具有相对于无定形形式改善的性质。在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式显示出比无定形形式更高的稳定性。在一些实施方案中，本文所述的化合物1的结晶形式和溶剂化物未显示出形成粘性团块的趋势并且在制造过程中更容易处理。
对化合物1和/或其类似物的结晶形式的进一步研究表明，这些形式比无定形形式具有更好的流动性，当填充至胶囊中时不显示出堵塞，具有良好的水溶解性，且具有更高的熔点和如上所述的更好的稳定性。在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式与无定形形式相比显示出更低可变性的体外溶解谱。在一些情况下，化合物1和/或其类似物的结晶形式与无定形形式相比具有更好的流动性。
此外，本文提供的化合物1的结晶形式由于其晶体形态而更易于混合。这些结晶形式在制造过程中还显示出改善的流动性。例如，PX-866苯甲醚溶剂化物、甘露糖醇和硬脂酸镁的干混物具有4mm直径的流动性，具有0.5262g/mL的堆积密度和0.6446g/mL的振实密度。包含化合物1的结晶形式的制剂比包含无定形PX-866的胶囊显示出更小的体内活性剂释放的变化。例如，实施例19e描述了包含PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物的2mg片剂制剂。实施例19e的片剂通过了在30分钟内释放不少于80％的溶出实验规范。临床PK研究表明，与服用无定形PX-866胶囊的志愿者中的变异相比，服用结晶PX-866片剂的志愿者中PK参数具有更小的变异系数。
此外，化合物1(PX-866)的结晶形式比无定形形式具有增加的纯度或基本上更纯。例如，本文所述的苯甲醚溶剂化物形式没有可检测的渥曼青霉素，例如，当通过HPLC和/或GC检测时。
某些定义
还必须指出，在本文以及在随附的权利要求中所用的单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数形式的引用，除非上下文另有明确指示。因此，例如，提及“细胞”是提及一个或多个细胞及本领域技术人员已知的其等价物，等等。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员所通常理解的相同的含义。现在描述某些优选的方法、装置和材料，但是与本文所述的那些相似或等价的任何方法和材料可用于实施或检验本文所述的实施方案。
如本文所用的术语“约”是指所使用的数字的数值±10％。因此，约50％是指在45％-55％的范围内。“任选的”或“任选地”可用于指随后描述的结构、事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括事件发生的情况和事件不发生的情况。
“施用”当与治疗手段结合使用时，是指系统地或局部地将治疗药物直接施用至靶组织内或其上，或向患者施用治疗药物，借此使得治疗药物积极地影响其靶向的组织。因此，如本文所用的术语“施用”，当与渥曼青霉素类似物或其代谢物结合使用时，可包括但不限于，将渥曼青霉素类似物或其代谢物提供至靶组织内或其上；通过例如静脉内注射将渥曼青霉素类似物或其代谢物系统地提供至患者，借此使得治疗药物到达靶组织或细胞。“施用”组合物可通过注射、局部给药和口服给药或通过其他方法单独地或与其他已知技术联合地实现。
如本文所用的术语“治疗药物”是指用于治疗、对抗、减轻、预防或改善患者的不期望的病况或疾病的药剂。
在一些实施方案中，治疗剂涉及本文所述的癌症症状的治疗和/或减轻或逆转。在一些实施方案中，治疗剂涉及本文所述的纤维化病况的症状的治疗和/或减轻或逆转。在一些实施方案中，本文所述的治疗剂涉及肺纤维化的治疗和/或肺纤维化的症状的改善或逆转。
如本文所用的术语“动物”包括但不限于人类和非人类脊椎动物如野生动物、家畜和农场动物。术语“患者”和“受试者”以及“个体”可互换，并且可用于指可用本发明的化合物治疗的任何活生物体。同样，术语“患者”和“受试者”可包括但不限于任何非人类哺乳动物、任何灵长类动物或人。
术语“抑制”包括施用本发明的化合物以预防症状的发作，减轻症状或消除疾病、病况或病症。
“药学上可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其他成分相容并且对其受体无害。
术语“药物组合物”应指包含至少一种有效成分的组合物，借此该组合物经得起对哺乳动物(例如，但不限于人)中指定的有效结果的研究的检验。本领域普通技术人员将会明白并领会到适合于根据技术人员的需求来确定有效成分是否具有期望的有效结果的技术。
如本文所用的“治疗有效量”或“有效量”是指在组织、系统、动物、个体或人体内引发研究者、兽医、医生或其他临床医生所寻找的生物或药物响应的活性化合物或药剂的量，所述生物或药物响应包括以下一种或多种：(1)预防疾病；例如，预防可能有倾向患疾病、病况或病症但还未经历或表现出疾病的病理或症状的个体中的疾病、病况或病症，(2)抑制疾病；例如，抑制经历或表现出疾病、病况或病症的病理或症状的个体中的疾病、病况或病症(即，阻止病理和/或症状的进一步发展)，和(3)减轻疾病；例如，减轻经历或表现出疾病、病况或病症的病理或症状的个体中的疾病、病况或病症(即，逆转病理和/或症状)。这样，本发明的组合物的“治疗有效量”或“有效量”的非限制性实例可用于抑制、阻断、或逆转细胞的激活、迁移或增殖或有效地治疗癌症或减轻癌症症状。
“渥曼青霉素”是从真菌渥曼青霉(Penicillium wortmannin)的肉汤培养基中分离的天然存在的化合物。渥曼青霉素通过与激酶上的特定赖氨酸的共价相互作用不可逆地抑制PI-3激酶，所述特定赖氨酸为：p110α同种型的催化部位的ATP结合袋的Lys802或p110δ同种型的Lys883。PI-3激酶的大多数同种型，如p110α、p110β、p110δ和p110γ，可同等地被渥曼青霉素抑制。然而，渥曼青霉素证明具有肝脏和血液毒性，并且是一种生物学不稳定的分子。作为水溶液在中性pH、37℃或0℃储存的样品通过呋喃环的水解开环而经历分解。已经表明，呋喃环的亲电性是渥曼青霉素抑制活性的关键。在激酶的活性赖氨酸在渥曼青霉素的位置C(20)处攻击呋喃环后，通过形成烯胺而发生PI-3激酶的不可逆抑制。因此，渥曼青霉素的分解可干扰其对PI-3激酶的抑制活性。
在一个实施方案中，如本文所用的术语“治疗”、“治疗的”、“处理”或“处理的”是指治疗性处理。对于本文所述的目的，治疗所诱导的有益的或期望的临床结果包括但不限于：症状的减轻；病况、病症或疾病程度的降低；病况、病症或疾病状态的稳定化(即，不恶化)；发病延迟或病况、病症或疾病的进展放慢；病况、病症或疾病状态的改善；以及病况、病症或疾病的可检测或不可检测的缓解(部分或全部)或增强或改善。治疗包括引起临床上显著的响应，而无过高水平的副作用。治疗还包括与如果不接受治疗的预期生存期相比延长生存期。在其他实施方案中，如本文所用的术语“治疗”、“治疗的”、“处理”或“处理的”包括预防性的或防止性的措施，其中目标是预防或延缓(减轻)不期望的生理病况、病症或疾病。
实施方案
一方面，本文提供了具有结构式化合物1的化合物和/或其类似物的结晶形式，
Figure BDA00003441189700301
(化合物1)，
其基本上无渥曼青霉素。在一些实施方案中，该结晶形式具有多达约2％的渥曼青霉素。在某些实施方案中，该结晶形式具有多达约1％的渥曼青霉素、多达约0.5％的渥曼青霉素、多达约0.3％的渥曼青霉素、多达约0.1％的渥曼青霉素或多达约0.01％的渥曼青霉素。在一些实施方案中，该结晶形式无渥曼青霉素。在某些实施方案中，该结晶形式是化合物1和/或其类似物的甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇溶剂化物。
另一方面，本文提供了具有结构式化合物1的化合物和或其类似物的基本上纯的结晶形式，
Figure BDA00003441189700302
(化合物1)，
其中所述形式是溶剂化物。在某些实施方案中，该基本上纯的结晶溶剂化物形式是化合物1的甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮或1-戊醇溶剂化物。这类溶剂化物形式包括苯甲醚溶剂化物、异丙基苯溶剂化物、乙酸丙酯溶剂化物、4-甲基-2-戊酮溶剂化物、氯苯溶剂化物、1-戊醇溶剂化物，等等。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是苯甲醚溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含苯甲醚的溶液制备的结晶形式。例如，化合物1和/或其类似物的苯甲醚溶剂化物是由含有苯甲醚的上清液、溶液、分散液或乳液制备的。在其他实施方案中，苯甲醚溶剂化物通过将苯甲醚作为反溶剂添加至包含化合物1和/或其类似物的溶液中而制备。在一些实施方案中，制备苯甲醚溶剂化物的过程利用引晶(例如，加入苯甲醚溶剂化物的晶体或玻璃粉)或经由任何其他已知的过程。在其他实施方案中，制备苯甲醚溶剂化物的过程不使用引晶。通常，将结晶形式在室温或升高的温度(例如40℃)下在氮气流中或在真空下干燥。通过XRPD、DSC、单晶X射线晶体学和/或其他合适的仪器分析来确定结晶形式。
在某些实施方案中，如通过差示扫描量热仪所测量的，苯甲醚结晶形式在约146℃处显示明显吸热。在一些实施方案中，扫描速率为10℃/分钟。在某些实施方案中，苯甲醚结晶形式具有这样一种X射线粉末衍射图，该X射线粉末衍射图具有至少两个选自7.9±0.1、8.5±0.1、10.2±0.1、11.1±0.1、14.0±0.1、14.2±0.1、17.9±0.1、18.7±0.1、21.0±0.1、21.2±0.1和28.2±0.1度的2θ值。在某些实施方案中，该结晶形式在120K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是乙酸丙酯溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含乙酸丙酯的溶液制备的结晶形式。在某些实施方案中，如通过差示扫描量热仪所测量的，结晶形式在约80.5℃处显示明显吸热。在一些这样的实施方案中，扫描速率是约10℃/分钟。在某些实施方案中，该结晶形式具有这样一种X射线粉末衍射图，该X射线粉末衍射图具有至少两个选自8.0±0.1、8.4±0.1、10.2±0.1、11.0±0.1、14.0±0.1和19.2±0.1度的2θ值。在某些实施方案中，该结晶形式在100K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
Figure BDA00003441189700321
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是甲苯溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含甲苯的溶液制备的结晶形式。在某些实施方案中，如通过差示扫描量热仪所测量的，结晶形式在约142.0℃处显示明显吸热。在一些这样的实施方案中，扫描速率是约10℃/分钟。在某些实施方案中，该结晶形式具有这样一种X射线粉末衍射图，该X射线粉末衍射图具有至少两个选自12.5±0.1、14.0±0.1和21.1±0.1度的2θ值。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是异丙基苯溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含异丙基苯的溶液制备的结晶形式。在某些实施方案中，该结晶形式具有以7.8±0.1、8.4±0.1、10.7±0.1、10.1±0.1、13.7±0.1、14.1±0.1、18.1±0.1、18.9±0.1、20.6±0.1和20.8±0.1度的2θ角来表示的X射线粉末衍射图。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是4-甲基-2-戊酮溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含4-甲基-2-戊酮的溶液制备的结晶形式。在某些实施方案中，该结晶形式具有以7.9±0.1、8.4±0.1、10.2±0.1、10.9±0.1、13.9±0.1、14.2±0.1、18.5±0.1、19.2±0.1和20.7±0.1度的2θ角来表示的X射线粉末衍射图。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是1-戊醇溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含1-戊醇的溶液制备的结晶形式。在某些实施方案中，该结晶形式具有以8.1±0.1、8.5±0.1、10.2±0.1、11.1±0.1、12.5±0.1、14.0±0.1、14.3±0.1、17.9±0.1、18.8±0.1、20.7±0.1和21.3±0.1度的2θ角来表示的X射线粉末衍射图。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是氯苯溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含氯苯的溶液制备的结晶形式。在某些实施方案中，该结晶形式具有以8.0±0.1、8.5±0.1、10.3±0.1、11.1±0.1、14.1±0.1、17.9±0.1、18.8±0.1、19.1±0.1、21.0±0.1和28.3±0.1度的2θ角来表示的X射线粉末衍射图。
另一方面，本文提供的实施方案的范围内包括PX-866的结晶形式，其中该形式为共晶。这些实施方案的范围内包括PX-866的这类结晶形式，它们是与例如抗坏血酸、酒石酸、柠檬酸、醇胺、醇吡啶等的共晶。
又一方面，本文提供的实施方案的范围内包括PX-866的结晶形式，其中该形式为溶剂化物/共晶。这些实施方案的范围内包括PX-866的这类结晶形式，使得PX-866溶剂化物(例如，苯甲醚溶剂化物、甲苯溶剂化物)与例如抗坏血酸、酒石酸、柠檬酸、醇胺、醇吡啶等共结晶。
在进一步的方面，本文提供的实施方案的范围内包括PX-866的结晶形式，其中该形式为混合的溶剂化物-水合物，例如，(其中水和溶剂组成晶格中的成分)。这些实施方案的范围内包括PX-866的这类结晶溶剂化物形式(例如，苯甲醚溶剂化物)，使得PX-866溶剂化物为溶剂化物水合物(例如，苯甲醚溶剂化物水合物)。
在其他实施方案中，提供了制备具有以下结构式的化合物的结晶溶剂化物形式的方法：
Figure BDA00003441189700341
(化合物1)，
该方法包括向该化合物在溶剂中的溶液、悬浮液、分散液或乳液中加入反溶剂，其中化合物1在溶剂中与在反溶剂中相比具有不同的溶解度。
在一些这样的实施方案中，溶剂选自水、乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚、异丙基苯、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇和乙酸丙酯，或其组合。
在一些这样的实施方案中，溶剂选自乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、1，2-二氯乙烷、二氯甲烷、1，2-二甲氧基乙烷、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧杂环己烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢呋喃、1，2，3，4-四氢化萘、甲苯和二甲苯，或其组合。
在一些这样的实施方案中，反溶剂选自水、乙酸、丙酮、苯甲醚、1-丁醇、2-丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚、异丙基苯、二甲亚砜、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、甲酸乙酯、甲酸、庚烷、乙酸异丁酯、乙酸异丙酯、乙酸甲酯、3-甲基-1-丁醇、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、2-甲基-1-丙醇、戊烷、1-戊醇、1-丙醇、2-丙醇和乙酸丙酯，或其组合。
在一些这样的实施方案中，反溶剂选自乙腈、氯苯、氯仿、环己烷、1，2-二氯乙烷、二氯甲烷、1，2-二甲氧基乙烷、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、1，4-二氧杂环己烷、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、己烷、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、甲基环己烷、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、四氢呋喃、1，2，3，4-四氢化萘、甲苯和二甲苯，或其组合。
在其他实施方案中，提供了制备具有以下结构式的化合物的结晶溶剂化物形式的方法：
Figure BDA00003441189700351
(化合物1)，
该方法包括向该化合物在THF中的溶液中加入反溶剂。在一些实施方案中，反溶剂是甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是苯甲醚溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含苯甲醚的溶液制备的结晶形式。例如，化合物1和/或其类似物的苯甲醚溶剂化物是由苯甲醚上清液制备的。在其他实施方案中，苯甲醚溶剂化物是通过将苯甲醚作为反溶剂加入包含化合物1和/或其类似物的溶液中而制备的。在一些实施方案中，制备苯甲醚溶剂化物的过程利用引晶(例如，加入苯甲醚溶剂化物的晶体或玻璃粉)或经由任何其他已知的过程。在其他实施方案中，制备苯甲醚溶剂化物的过程不使用引晶。通常，将结晶形式在室温或升高的温度(例如40℃)下在氮气流中或在真空下进行干燥。通过XRPD、DSC、单晶X射线晶体学和/或其他合适的仪器分析来确定结晶形式。
在某些实施方案中，如通过差示扫描量热仪所测量的，化合物1和/或其类似物的苯甲醚溶剂化物的结晶形式在约146℃处显示明显吸热。在一些这样的实施方案中，扫描速率为约10℃/分钟。在某些实施方案中，该结晶形式具有这样一种X射线粉末衍射图，该X射线粉末衍射图具有至少两个选自7.9±0.1、8.5±0.1、10.2±0.1、11.1±0.1、14.0±0.1、14.2±0.1、17.9±0.1、18.7±0.1、21.0±0.1、21.2±0.1和28.2±0.1度的2θ值。在某些实施方案中，该结晶形式在120K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
Figure BDA00003441189700361
在一些情况下，相似的溶剂如甲苯、异丙基苯、氯苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯等用于制备相似的结晶溶剂化物。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是乙酸丙酯溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含乙酸丙酯的溶液制备的结晶形式。例如，化合物1和/或其类似物的乙酸丙酯溶剂化物是由乙酸丙酯上清液制备的。在其他实施方案中，乙酸丙酯溶剂化物是通过将乙酸丙酯作为反溶剂加入包含化合物1和/或其类似物的溶液中而制备的。在一些实施方案中，制备乙酸丙酯溶剂化物的过程利用引晶(例如，加入乙酸丙酯溶剂化物的晶体或玻璃粉)或经由任何其他已知的过程。在其他实施方案中，制备乙酸丙酯溶剂化物的过程不使用引晶。通常，将结晶形式在室温或升高的温度(例如40℃)下在氮气流中或在真空下进行干燥。通过XRPD、DSC、单晶X射线晶体学和/或其他合适的仪器分析来确定结晶形式。
在某些实施方案中，如通过差示扫描量热仪所测量的，化合物1和/或其类似物的结晶乙酸丙酯溶剂化物在约80.5℃处显示明显吸热。在一些这样的实施方案中，扫描速率为约10℃/分钟。在某些实施方案中，结晶乙酸丙酯溶剂化物具有这样一种X射线粉末衍射图，该X射线粉末衍射图具有至少两个选自8.0±0.1、8.4±0.1、10.2±0.1、11.0±0.1、14.0±0.1和19.2±0.1的2θ值。在某些实施方案中，结晶乙酸丙酯溶剂化物在100K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
在一些实施方案中，其他相似的溶剂如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯等用于制备相似的结晶溶剂化物。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是甲苯溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含甲苯的溶液制备的结晶形式。例如，化合物1和/或其类似物的甲苯溶剂化物是由甲苯上清液制备的。在其他实施方案中，甲苯溶剂化物是通过将甲苯作为反溶剂加入至包含化合物1和/或其类似物的溶液中而制备的。在一些实施方案中，制备甲苯溶剂化物的过程利用引晶(例如，加入甲苯溶剂化物的晶体或玻璃粉)或经由任何其他已知的过程。在其他实施方案中，制备甲苯溶剂化物的过程不使用引晶。通常，将结晶形式在室温或升高的温度(例如40℃)下在氮气流中或在真空下进行干燥。通过XRPD、DSC、单晶X射线晶体学和/或其他合适的仪器分析来确定结晶形式。
在某些实施方案中，如通过差示扫描量热仪所测量的，结晶甲苯溶剂化物在约142.0℃处显示明显吸热。在一些这样的实施方案中，扫描速率为约10℃/分钟。在某些实施方案中，结晶甲苯溶剂化物具有这样一种X射线粉末衍射图，该X射线粉末衍射图具有至少两个选自12.5±0.1、14.0±0.1和21.1±0.1的2θ值。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是异丙基苯溶剂化物。在某些实施方案中，结晶形式是由包含异丙基苯的溶液制备的化合物1和/或其类似物的结晶形式。例如，化合物1和/或其类似物的异丙基苯溶剂化物是由异丙基苯上清液制备的。在其他实施方案中，异丙基苯溶剂化物是通过将异丙基苯作为反溶剂加入包含化合物1和/或其类似物的溶液中而制备的。在一些实施方案中，制备异丙基苯溶剂化物的过程利用引晶(例如，加入异丙基苯溶剂化物的晶体或玻璃粉)或经由任何其他已知的过程。在其他实施方案中，制备异丙基苯溶剂化物的过程不使用引晶。通常，将结晶形式在室温或升高的温度(例如40℃)下在氮气流中或在真空下进行干燥。通过XRPD、DSC、单晶X射线晶体学和/或其他合适的仪器分析来确定结晶形式。
在某些实施方案中，结晶异丙基苯溶剂化物具有以7.8±0.1、8.4±0.1、10.1±0.1、10.7±0.1、13.7±0.1、14.1±0.1、18.1±0.1、18.9±0.1、20.6±0.1和20.8±0.1度的2θ角表示的X射线粉末衍射图。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是氯苯溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含氯苯的溶液制备的结晶形式。在某些实施方案中，结晶氯苯溶剂化物具有以8.0±0.1、8.5±0.1、10.3±0.1、11.1±0.1、14.1±0.1、17.9±0.1、18.8±0.1、19.1±0.1、21.0±0.1和28.3±0.1度的2θ角表示的X射线粉末衍射图。
在一些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是4-甲基-2-戊酮溶剂化物。在某些实施方案中，结晶形式是由包含4-甲基-2-戊酮的溶液制备的化合物1和/或其类似物的结晶形式。例如，化合物1和/或其类似物的4-甲基-2-戊酮溶剂化物是由4-甲基-2-戊酮上清液制备的。在其他实施方案中，4-甲基-2-戊酮溶剂化物是通过将4-甲基-2-戊酮作为反溶剂加入到包含化合物1和/或其类似物的溶液中而制备的。在一些实施方案中，制备4-甲基-2-戊酮溶剂化物的过程利用引晶(例如，加入4-甲基-2-戊酮溶剂化物的晶体或玻璃粉)或经由任何其他已知的过程。在其他实施方案中，制备4-甲基-2-戊酮溶剂化物的过程不使用引晶。通常，将结晶形式在室温或升高的温度(例如40℃)下在氮气流中或在真空下进行干燥。通过XRPD、DSC、单晶X射线晶体学和/或其他合适的仪器分析来确定结晶形式。
在某些实施方案中，结晶4-甲基-2-戊酮溶剂化物具有以7.9±0.1、8.4±0.1、10.2±0.1、10.9±0.1、13.9±0.1、14.2±0.1、18.5±0.1、19.2±0.1和20.7±0.1度的2θ角表示的X射线粉末衍射图。
同样，在一些情况下，其他酮溶剂如丙酮、2-丁酮等用于制备相似的结晶溶剂化物。
在其他实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是1-戊醇溶剂化物。在某些实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶形式是由包含1-戊醇的溶液制备的结晶形式。例如，化合物1和/或其类似物的1-戊醇溶剂化物是由1-戊醇上清液制备的。在其他实施方案中，1-戊醇溶剂化物是通过将1-戊醇作为反溶剂加入包含化合物1和/或其类似物的溶液中而制备的。在一些实施方案中，制备1-戊醇溶剂化物的过程利用引晶(例如，加入1-戊醇溶剂化物的晶体或玻璃粉)或经由任何其他已知的过程。在其他实施方案中，制备1-戊醇溶剂化物的过程不使用引晶。通常，将结晶形式在室温或升高的温度(例如40℃)下在氮气流中或在真空下进行干燥。通过XRPD、DSC、单晶X射线晶体学和/或其他合适的仪器分析来确定结晶形式。
在某些实施方案中，结晶1-戊醇溶剂化物具有以8.1±0.1、8.5±0.1、10.2±0.1、11.1±0.1、12.5±0.1、14.0±0.1、14.3±0.1、17.9±0.1、18.8±0.1、20.7±0.1和21.3±0.1度的2θ角表示的X射线粉末衍射图。
同样，在一些实施方案中，其他醇溶剂如乙醇、异丙醇、1-丁醇、叔丁醇、甲醇、异戊醇、甘油、1-辛醇、2，2，2-三氟乙醇等用于制备相似的结晶溶剂化物。
在一些实施方案中，本文提供了制备具有以下结构式的化合物和/或其类似物的结晶溶剂化物形式的方法：
Figure BDA00003441189700401
(化合物1)，
该方法包括向该化合物在THF中的溶液中加入反溶剂。在一些实施方案中，反溶剂是苯样溶剂如甲苯、苯甲醚、异丙基苯、二甲苯、氯苯等。在一些实施方案中，反溶剂是酯类溶剂如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等。在一些实施方案中，反溶剂是酮类溶剂如丙酮、2-丁酮、2-戊酮、3-戊酮、3-甲基-2-戊酮、4-甲基-2-戊酮等。在一些实施方案中，反溶剂是醇类溶剂如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇等。在某些实施方案中，反溶剂是甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇。
在一些实施方案中，本文提供了制备基本上无渥曼青霉素的、具有以下结构式的化合物和/或其类似物的结晶形式的方法：
(化合物1)，
该方法包括将该化合物的上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液冷却至4℃至-20℃。在一些实施方案中，上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液是由酯类溶剂如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯等制备的。在一些实施方案中，上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液是由酮类溶剂如丙酮、2-丁酮、2-戊酮、3-戊酮、3-甲基-2-戊酮、4-甲基-2-戊酮等制备的。在一些实施方案中，上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液是由醇类溶剂如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇等制备的。在某些实施方案中，上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液包含甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇。
化合物1的类似物
在一些实施方案中，化合物1的类似物包括式IA或IB的化合物：
Figure BDA00003441189700411
其中：
---是任选的键；
n为1-6；
Y为杂原子；
R1和R2独立地选自不饱和烷基、非直链烷基、环烷基和取代的烷基，或者R1和R2与它们所连接的原子一起形成杂环烷基；
R3为不存在的、H或C1-C6取代的或未取代的烷基；
R4为(C＝O)R5、(C＝O)OR5、(S＝O)R5、(SO2)R5、(PO3)R5、(C＝O)NR5R6；
R5为取代的或未取代的C1-C6烷基；且
R6为取代的或未取代的C1-C6烷基。
在一些实施方案中，化合物1的类似物包括下式的化合物：
Figure BDA00003441189700421
其中Y为杂原子，且R1和R2独立地选自不饱和烷基、非直链烷基、环烷基和取代的烷基。
在式IIA或IIB的化合物的某些实施方案中，Y为选自氮和硫的杂原子，且R1和R2独立地选自不饱和烷基、环烷基，或R1和R2与Y一起形成杂环。
在又一进一步的实施方案中，化合物1的类似物为具有以下结构的6-羟基-1α-甲氧基甲基-10β，13β-二甲基-3，7，17-三氧代-4-吡咯烷-1-亚甲基-1，3，4，7，10，11β，12，13，14α，15，16，17-十二氢-2-氧杂-环戊并[a]菲-11-基乙酸酯(PX-867)，
Figure BDA00003441189700422
在另外的实施方案中，化合物1包括选自但不限于PX-868、PX-870、PX-871、PX-880、PX-881、PX-882、PX-889、PX-890、DJM2-170、DJM2-171、DJM2-177、DJM2-181及其组合的化合物。在一些实施方案中，本文所述的渥曼青霉素类似物包括在英国专利2302021中所述的化合物，通过引用将这些化合物并入本文。
在某些实施方案中，化合物1的类似物为17-羟基(17-OH)衍生物。在一些实施方案中，化合物1的类似物是PX-866的17-羟基(17-OH)衍生物。在其他实施方案中，化合物1的类似物是PX-867的17-羟基(17-OH)衍生物。
在一些情况下，17-羟基(17-OH)衍生物具有以下结构式：
在其他情况下，17-羟基(17-OH)衍生物具有以下结构式：
Figure BDA00003441189700432
药物组合物/制剂
在一些实施方案中，将本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物配制为药物组合物。在特定的实施方案中，使用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式来配制药物组合物，该载体包含可促进活性化合物被加工成为药学上可使用的制品的赋形剂和助剂。合适的制剂取决于选择的给药途径。任何药学上可接受的技术、载体和赋形剂均可适当地用于配制本文所述的药物组合物：Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，第十九版(Easton，Pa.：Mack PublishingCompany，1995)；Hoover，John E.，Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania1975；Liberman，H.A.和Lachman，L.编，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980；和Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第十七版(Lippincott Williams&Wilkins1999)。
本文提供了包含本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物和药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体的药物组合物。在某些实施方案中，如在联合治疗中，本文所述的结晶溶剂化物作为药物组合物进行施用，其中本文所述的结晶溶剂化物(例如，苯甲醚溶剂化物)与其他有效成分混合。本文包括在下文的联合治疗部分和整个公开内容中阐述的活性成分的所有组合。
如本文所用的药物组合物是指本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物与其他化学成分如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。在某些实施方案中，药物组合物促进结晶溶剂化物向生物体的施用。在一些实施方案中，实施本文提供的治疗方法或使用方法，将治疗有效量的本文所述结晶溶剂化物以药物组合物的方式施用于待治疗的患有疾病或病况的哺乳动物。在特定的实施方案中，哺乳动物是人。在某些实施方案中，治疗有效量根据疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康、使用的结晶溶剂化物的效能以及其他因素而变化。本文所述的结晶溶剂化物可单独使用或作为混合物的成分与一种或多种治疗剂联合使用。
在这样的组合物中，药物活性成分被称为“有效成分”。在组合物的制备中，有效成分(例如，结晶溶剂化物)通常将与载体混合，或由载体稀释，或封闭在可为胶囊、小袋、纸包或其他容器的形式的载体内。当载体充当稀释剂时，其可以是充当有效成分的介质的载体、赋形剂的固体、半固体或液体材料。因此，组合物可以为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、悬浮液、软及硬明胶胶囊、无菌注射溶液和无菌包装粉末的形式。
合适的载体、赋形剂和稀释剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙藻酸盐、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、黄蓍胶、明胶、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、水和矿物油。此外，组合物可包含润滑剂、湿润剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂、甜味剂或矫味剂。组合物可配制为在通过使用本领域公知的程序施用至患者后提供有效成分的快速、持续或延迟释放。
本文提出的实施方案的范围内考虑多种赋形剂的粒级。举例来说，实施例19e示出了包含平均粒径为100微米的Pearlitol的片剂。也考虑赋形剂的其他粒径(例如，200微米粒径的Pearlitol)以允许通过较大尺寸的筛进行筛分，并因此将较大的晶体留在片剂中。较大的晶体将允许较大直径颗粒的表面积与质量的比值降低，因此允许释放谱的改进。
合适的给药途径包括但不限于口服、静脉内、直肠、气雾剂、肠胃外、经眼、经肺、经粘膜、经皮、阴道、经耳、经鼻和局部给药。此外，仅通过举例来说，肠胃外递送包括肌肉内、皮下、静脉内、髓内注射以及鞘内、直接心室内、腹膜内、淋巴管内和鼻内注射。
在某些实施方案中，通常在长效制剂或缓释制剂中，本文所述的结晶溶剂化物以局部而非全身方式进行施用，例如，通过将结晶溶剂化物直接注射至器官中。
在某些情况下，用于治疗纤维化(例如，肺纤维化)或癌症的治疗有效量的化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物的局部递送，可通过将结晶溶剂化物施用至纤维化或癌症部位或其附近的各种技术来实现。局部递送技术的实例包括但不限于局部递送导管、位点特异性载体、植入物、直接注射或直接施用。
另一实例是化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物通过聚合腔内密封的递送。该技术使用导管将聚合植入物施加至内腔的内表面。掺入到可生物降解聚合物植入物中的结晶溶剂化物从而在手术部位释放。PCT WO90/01969(Schindler，1989年8月23日)中描述了这种递送的一个实例。
通过植入物的局部递送的另一实例是通过将囊泡或微粒直接注射至部位。这些微粒可由诸如蛋白质、脂质、碳水化合物或合成聚合物之类的物质组成。这些微粒具有掺入整个微粒或作为涂层覆于微粒之上的治疗剂。掺入微粒的递送系统在Lange，Science249：1527-1533(1990)和Mathiowitz等人，J.App.Poly.Sci.，26：809(1981)中有所描述。
通过位点特异性载体的局部递送描述了使化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物附着于载体上，该载体将引导药物到达靶器官。该递送技术的实例包括如蛋白质配体或单克隆抗体等载体的使用。
在一些实施方案中，长效制剂是通过植入(例如，皮下或肌内)或通过肌内注射而施用的。此外，在其他实施方案中，化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物是在靶向药物递送系统中，例如，在涂覆有器官特异性抗体的脂质体中递送的。在这样的实施方案中，脂质体靶向于器官并被器官选择性地摄取。在其他实施方案中，以快速释放制剂的形式、延长释放制剂的形式或中等释放制剂的形式提供本文所述的结晶溶剂化物。在其他实施方案中，局部施用本文所述的结晶溶剂化物。
在另一实施方案中，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物配制为用于口服给药。在多个实施方案中，本文所述的结晶溶剂化物配制为口服剂型，仅举例来说，包括片剂、粉剂、丸剂、糖锭剂、胶囊、液体、凝胶剂、糖浆剂、酏剂、浆剂、悬浮液等等。
对于口服给药，化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物可与载体和稀释剂混合、模塑为片剂或封闭在明胶胶囊内。
在某些实施方案中，通过以下步骤来获得口服施用的药物制剂：将一种或多种固体赋形剂与本文所述的结晶溶剂化物混合，任选地研磨得到的混合物，并且在加入合适的助剂(如果需要的话)之后加工颗粒的混合物，从而获得片剂或糖锭核。合适的赋形剂尤其是：填料，如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制剂，如：例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；或其他物质，如：聚乙烯吡咯烷酮(PVP或聚维酮)或磷酸钙。在特定的实施方案中，任选地加入崩解剂。崩解剂包括，仅举例来说，交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐如藻酸钠。
在一个实施方案中，如糖锭核和片剂的剂型设有一个或多个合适的包衣。在特定的实施方案中，浓缩的糖溶液用于涂覆剂型。该糖溶液任选地包含附加成分，仅举例来说，例如阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。出于辨识目的，还可任选地将染料和/或颜料加入包衣中。此外，可任选地利用染料和/或颜料表示活性化合物剂量的不同组合。
在某些实施方案中，本文所述的治疗有效量的化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物配制为其他口服剂型。口服剂型包括由明胶制成的推入配合胶囊，和由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇制成的软的密封胶囊。在特定的实施方案中，推入配合胶囊含有与一种或多种填料混合的有效成分。填料包括，仅举例来说，乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁以及任选的稳定剂。在其他实施方案中，软胶囊含有溶解或悬浮在合适的液体中的结晶溶剂化物。合适的液体包括，仅举例来说，一种或多种脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。此外，任选地加入稳定剂。
在其他实施方案中，本文所述的治疗有效量的化合物1和/或其类似物的至少一种结晶溶剂化物配制为用于颊给药或舌下给药。适合于颊给药或舌下给药的制剂包括，仅举例来说，片剂、锭剂或凝胶剂。
在其他实施方案中，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物配制为用于肠胃外注射，包括适合于推注或连续输注的制剂。本文所述的结晶溶剂化物可备选地溶解在诸如10％的葡萄糖水溶液、等渗盐水、无菌水等液体中，并静脉内施用或通过注射施用。
在特定的实施方案中，用于注射的制剂呈单位剂型(例如，在安瓿瓶中)或在多剂量容器中。向注射制剂中任选地加入防腐剂。在其他实施方案中，本文所述化合物1和/或其类似物的结晶溶剂化物的药物组合物以适合于肠胃外注射的形式在油性或水性载体中配制为无菌悬浮液、溶液剂或乳剂。肠胃外注射制剂任选地含有调配剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。在特定的实施方案中，用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。在另外的实施方案中，活性化合物的悬浮液制备为合适的油状注射悬浮液。供本文所述的药物组合物使用的合适的亲脂性溶剂或载体包括，仅举例来说，脂肪油如芝麻油，或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。在某些特定的实施方案中，水性注射悬浮液含有增强悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。任选地，悬浮液含有合适的稳定剂或增强化合物溶解性的药剂，以允许制备高度浓缩的溶液。或者，在其他实施方案中，有效成分呈粉末形式，以供在使用之前用合适的载体如无菌无热原水调配。
一方面，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式制备成本文所述的或本领域已知的供肠胃外注射的溶液并用自动注射器进行施用。自动注射器，如美国专利4,031,893、5,358,489、5,540,664、5,665,071、5,695,472和WO/2005/087297(对于该公开内容而言，各自通过引用并入本文)中公开的自动注射器是已知的。通常，所有自动注射器都含有待注射的一定体积的包含本文所述结晶形式的溶液。通常，自动注射器包括用于容纳溶液的储器，该储器与用于递送药物的针流体连通，以及包括用于自动展开针、将针插入患者并将剂量递送至患者体内的机构。
在其他实施方案中，局部施用化合物1和/或其类似物的结晶形式。本文所述的结晶形式配制为多种可局部施用的组合物，如溶液剂、悬浮液、洗剂、凝胶剂、糊剂、药棒、香膏、乳膏或软膏。这类药物组合物任选地含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
在其他实施方案中，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式配制为用于经皮给药。在特定的实施方案中，经皮制剂采用经皮递送装置和经皮递送贴剂，并且可以是溶解和/或分散于聚合物或粘合剂中的亲脂性乳剂或缓冲的水溶液。在多个实施方案中，构建这类贴剂用于药剂的连续、脉冲式或按需给药。在另外的实施方案中，本文所述的结晶形式是通过离子电渗贴剂等手段来实现的。在某些实施方案中，透皮贴剂提供了本文所述结晶形式的受控递送。在特定的实施方案中，通过使用速率控制膜或通过将化合物捕集在聚合物基质或凝胶中来放慢吸收速率。在备选的实施方案中，使用吸收增强剂增强吸收。吸收增强剂或载体包括协助通过皮肤的可吸收的药学上可接受的溶剂。例如，在一个实施方案中，经皮装置呈绷带形式，包含支持构件、含有化合物(任选地与载体一起)的储器、任选的速率控制屏障(用于以受控的和预定的速率在一段延长的时间内将化合物递送至宿主皮肤)和将该装置固定于皮肤的工具。
本文所述的经皮制剂可使用本领域已描述的多种装置进行施用。例如，这类装置包括但不限于美国专利3,598,122、3,598,123、3,710,795、3,731,683、3,742,951、3,814,097、3,921,636、3,972,995、3,993,072、3,993,073、3,996,934、4,031,894、4,060,084、4,069,307、4,077,407、4,201,211、4,230,105、4,292,299、4,292,303、5,336,168、5,665,378、5,837,280、5,869,090、6,923,983、6,929,801和6,946,144。
本文所述的经皮剂型可包含某些本领域常规的药学上可接受的赋形剂。在一个实施方案中，本文所述的经皮剂型包括至少三种成分：(1)本文的结晶形式的制剂；(2)渗透促进剂；和(3)水性佐剂。此外，经皮制剂可包括另外的成分，例如，但不限于，胶凝剂、乳膏和软膏基质等。在一些实施方案中，经皮制剂进一步包括织造或非织造基底材料以增强吸收并防止经皮制剂从皮肤上脱落。在其他实施方案中，本文所述的经皮制剂保持饱和或过饱和状态以促进向皮肤内的扩散。
在其他实施方案中，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式配制为用于经吸入给药。适合于吸入给药的多种形式包括，但不限于，气雾剂、雾剂(mist)或粉剂。使用合适的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)，以来自加压包或雾化器的气雾剂喷射形式方便地递送本文所述的结晶形式的药物组合物。在特定的实施方案中，通过提供阀门以递送计量的量来确定加压气雾剂的剂量单位。在某些实施方案中，将在吸入器或吹入器中使用的例如(仅举例来说)明胶的胶囊和药筒(cartridges)配制为含有化合物与合适的粉体基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
鼻内制剂是本领域已知的，并且在例如美国专利4,476,116、5,116,817和6,391,452中有所描述，其各自通过引用而明确并入。包括本文所述的结晶形式的制剂采用苄醇或其他合适的防腐剂、氟碳化合物和/或本领域已知的其他增溶剂或分散剂。参见，例如，Ansel，H.C.等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第6版.(1995)。优选地，用合适的无毒的药学上可接受的成分来制备这些组合物和制剂。这些成分见于以下来源，如REMINGTON：THESCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY，第21版，2005(本领域的标准参考书)。对合适载体的选择高度依赖于所需经鼻剂型(例如，溶液剂、悬浮液、软膏剂或凝胶剂)的确切性质。经鼻剂型通常除了有效成分外还含有大量的水。还可能存在少量的其他成分如pH调节剂、乳化剂或分散剂、防腐剂、表面活性剂、胶凝剂或缓冲剂以及其他稳定剂和增溶剂。优选地，经鼻剂型应与鼻分泌物等渗。
在其他实施方案中，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式配制为直肠组合物如灌肠剂、直肠凝胶剂、直肠泡沫剂、直肠气雾剂、栓剂、胶冻型栓剂或保留灌肠剂，其含有常规栓剂基质如可可脂或其他甘油酯以及合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等。在组合物的栓剂形式中，低熔点蜡例如但不限于脂肪酸甘油酯任选地与可可脂组合的混合物先被熔化。
在某些实施方案中，使用一种或多种生理学上可接受的载体以任何常规方式来配制药物组合物，该载体包含促进活性化合物加工成药学上可使用的制剂的赋形剂和助剂。合适的制剂取决于所选择的给药途径。任何药学上可接受的技术、载体和赋形剂任选地适当地并且如本领域中所理解地使用。包含本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式的药物组合物可例如(仅举例来说)通过常规的混合、溶解、成粒、制糖锭剂、磨细、乳化、包封、包埋或压缩工艺以常规方式来制备。
用于制备包含本文所述化合物1和/或其类似物的结晶形式的组合物的方法包括用一种或多种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体配制该结晶形式以形成固体、半固体或液体。固体组合物包括，但不限于，粉剂、片剂、可分散颗粒剂、胶囊、扁囊剂和栓剂。液体组合物包括其中溶解有化合物的溶液、包含化合物的乳剂或含有包含本文所公开的化合物的脂质体、胶束或纳米颗粒的溶液。半固体组合物包括，但不限于，凝胶剂、悬浮液和乳膏。本文所述的药物组合物的制剂包括液体溶液剂或悬浮液，适合在使用之前于液体中形成溶液和悬浮液的固体形式，或作为乳剂。这些组合物还任选地含有少量的无毒的辅助物质，如湿润剂或乳化剂、pH缓冲剂等。
在一些实施方案中，包含本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式的药物组合物示例性地采用液体的制剂，其中药剂存在于溶液、悬浮液或两者中。通常，当组合物作为溶液或悬浮液施用时，药剂的第一部分存在于溶液中，而药剂的第二部分存在于悬浮于液体基质中的颗粒制剂中。在一些实施方案中，液体组合物包括凝胶制剂。在其他实施方案中，液体组合物是水性的。
在某些实施方案中，水性药物悬浮液包括作为悬浮剂的一种或多种聚合物。聚合物包括水溶性聚合物如纤维素聚合物例如羟丙基甲基纤维素，以及水不溶性聚合物如含羟基的交联聚合物。本文所述的某些药物组合物包含选自例如羧甲基纤维素、卡波姆(丙烯酸聚合物)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯酰胺、聚卡波非、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、藻酸钠和葡聚糖的粘膜粘着性聚合物。
药物组合物还任选地包含增溶剂以有助于本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式的溶解性。术语“增溶剂”通常包括可导致形成药剂的胶束溶液或真溶液的试剂。某些可接受的非离子型表面活性剂例如聚山梨醇酯80可用作增溶剂，眼科学上可接受的二醇类、聚二醇类例如聚乙二醇400和二醇醚也可用作增溶剂。
此外，药物组合物任选地包含一种或多种pH调节剂或缓冲剂，包括：酸类，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱类，如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；和缓冲剂，如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。这类酸、碱和缓冲剂以将组合物的pH维持在可接受的范围内所需的量包含于其中。
此外，药物组合物任选地以使得组合物的重量摩尔渗透压浓度处于可接受范围内所需的量包含一种或多种盐。这类盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
其他药物组合物任选地包含一种或多种防腐剂以抑制微生物活性。合适的防腐剂包括含有汞的物质如硼酸苯汞(merfen)和硫柳汞；稳定化的二氧化氯；和季胺化合物如苯扎氯铵、十六烷基三甲基溴化铵和十六烷基氯化吡啶鎓。
其他药物组合物包含一种或多种表面活性剂以增强物理稳定性或用于其他目的。合适的非离子型表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油，例如，聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油；和聚氧乙烯烷基醚和聚氧乙烯烷基苯基醚，例如，辛苯昔醇10、辛苯昔醇40。
其他药物组合物在需要时可包含一种或多种抗氧化剂以增强化学稳定性。合适的抗氧化剂包括，仅举例来说，抗坏血酸和焦亚硫酸钠。
在某些实施方案中，将药物组合物水性悬液包装在单剂量的不能重新盖紧的容器中。或者，使用多剂量的可重新盖紧的容器，在这种情况下，通常在组合物中包含防腐剂。
在备选的实施方案中，使用了用于疏水性药物化合物的其他递送系统。脂质体和乳剂是本文的递送媒介或载体的实例。在某些实施方案中，还使用了有机溶剂如N-甲基吡咯烷酮。在另外的实施方案中，使用持续释放系统如含有治疗剂的固体疏水性聚合物的半透性基质来递送本文所述的化合物。多种持续释放材料可在本发明中使用。在一些实施方案中，持续释放胶囊在几小时至超过24小时的时间里释放化合物。根据治疗剂的化学性质和生物稳定性，可使用其他蛋白质稳定化策略。
在某些实施方案中，本文所述的制剂包含一种或多种抗氧化剂、金属螯合剂、含巯基化合物和/或其他常规稳定剂。这类稳定剂的实例包括，但不限于：(a)约0.5％至约2％w/v的甘油，(b)约0.1％至约1％w/v的甲硫氨酸，(c)约0.1％至约2％w/v的单硫代甘油，(d)约1mM至约10mM的EDTA，(e)约0.01％至约2％w/v的抗坏血酸，(f)0.003％至约0.02％w/v的聚山梨醇酯80，(g)0.001％至约0.05％w/v的聚山梨醇酯20，(h)精氨酸，(i)肝素，(j)硫酸葡聚糖，(k)环糊精，(1)戊聚糖多硫酸酯和其他类肝素类，(m)二价阳离子如镁和锌；或(n)其组合。
在一些实施方案中，本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式以约0.1-20mg的量存在于单位剂型中。在某些实施方案中，本文所述的结晶形式以约0.5-15mg、约0.5-10mg或约1.0-10mg的量存在于单位剂型中。在一些情况下，本文所述的结晶形式以约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg或约12mg的量存在于单位剂型中。
在某些情况下，本文所述的结晶形式以总计约1mg至约20mg/天的一种或多种剂量来施用。在某些情况下，本文所述的结晶形式以总计约1mg至约10mg/天的一种或多种剂量来施用。在某些情况下，本文所述的结晶形式以总计约5mg至约20mg/天的一种或多种剂量来施用。在某些情况下，本文所述的结晶形式以总计约8mg/天的一种或多种剂量来施用。在某些情况下，本文所述的结晶形式以总计约10mg/天的一种或多种剂量来施用。在某些情况下，本文所述的结晶形式以总计约12mg/天的一种或多种剂量来施用。
在一些情况下，对于上文或下文所述的任何实施方案，对患者施用包含PX-866的结晶形式的组合物根据连续给药方案来进行。在其他情况下，对于上文或下文所述的任何实施方案，对患者施用包含PX-866的结晶形式的组合物根据间歇给药方案来进行。
治疗方法
在一些实施方案中，本文提供了治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式或包含该结晶形式的药物组合物。在某些实施方案中，癌症选自乳腺癌、肺癌、头颈癌、脑癌、腹部癌、结肠癌、结直肠癌、食道癌、咽旁癌、胃肠癌、神经胶质瘤、肝癌、舌癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、肾癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、维尔姆斯瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、淋巴瘤、白血病、血癌、间变性甲状腺瘤、皮肤肉瘤、黑素瘤、腺囊瘤、肝样肿瘤、非小细胞肺癌、软骨肉瘤、胰岛细胞瘤、前列腺癌(包括去势难治性形式)、卵巢癌(包括粘液性卵巢癌)、头颈部鳞状细胞癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、胃癌、胰腺癌、平滑肌肉瘤、乳腺癌、囊性腺样癌、神经内分泌瘤、脑瘤、中枢神经系统癌症、胶质母细胞瘤和胚细胞瘤。在某些实施方案中，癌症为头颈癌、肺癌、结肠癌或前列腺癌。
因此，包含本文提供的结晶溶剂化物的方法和组合物可减少、逆转或延迟本文所述癌症的进展和/或发病。在一些实施方案中，将本文所述的结晶溶剂化物施用至有需要的个体降低了肿瘤大小，从而减少、逆转或延迟本文所述癌症的进展和/或发病。
在一些实施方案中，本文所述的癌症治疗方法进一步包括施用抗癌剂。对于上文或下文所述的任何实施方案，将包含具有图1所示XRPD的PX-866的结晶苯甲醚形式的组合物与第二抗癌剂联合施用于患者。
图15显示了在人类患者中，PX-866的无定形和结晶苯甲醚溶剂化物形式显示出相似的血浆图。PX-866已经在人体试验中显示出疗效，如WO2011/153488和WO2011/153495国际申请公开文本所述，该公开文本通过引用并入本文。
适合与本文所述的结晶PX-866形式(例如，苯甲醚溶剂化物)联合使用的抗癌剂的实例包括但不限于甲氨蝶呤(
Figure BDA00003441189700541
氨甲喋呤)、环磷酰胺
Figure BDA00003441189700542
沙利度胺
Figure BDA00003441189700543
吖啶甲酰胺、
Figure BDA00003441189700544
放线菌素、17-N-烯丙基氨基-17-去甲氧格尔德霉素、氨基蝶呤、安吖啶、蒽环类药物、抗肿瘤药、抗肿瘤物质、5-氮杂胞苷、硫唑嘌呤、BL22、苯达莫司汀、比立考达、博来霉素、硼替佐米、苔藓抑素、白消安、花萼海绵诱癌素、喜树碱、卡培他滨、卡铂、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、二氯乙酸、盘皮海绵内酯(discodermolide)、多烯紫杉醇、多柔比星、表柔比星、埃博霉素、艾立布林、雌莫司汀、依托泊苷、依沙替康、依昔舒林、弥罗松酚、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、磷雌酚、福莫司汀、更昔洛韦、吉西他滨、羟基脲、IT-101、伊达比星、异环磷酰胺、咪喹莫特、伊立替康、伊罗夫文、伊沙匹隆、拉尼喹达、拉帕替尼、来那度胺、洛莫司汀、勒托替康、马磷酰胺、马索罗酚、氮芥、美法仑、巯嘌呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、奈拉滨、尼罗替尼、奥利美生、奥沙利铂、PAC-1、紫杉醇、培美曲塞、喷司他丁、哌泊溴烷、匹克生琼、普卡霉素、丙卡巴肼、蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)、雷替曲塞、雷别卡霉素、
Figure BDA00003441189700551
芦比替康、SN-38、salinosporamide A、沙铂、链脲霉素、苦马豆素、他立喹达、紫杉烷、替加氟-尿嘧啶、替莫唑胺、睾内酯、硫代TEPA、硫鸟嘌呤、托泊替康、曲贝替定、维甲酸、四硝酸三铂、三(2-二氯乙基)胺、曲沙他滨、乌拉莫司汀、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、伏林司他、佐舒喹达等。
在一些实施方案中，将包含PX-866的结晶形式(例如PX-866苯甲醚溶剂化物)的组合物与西妥昔单抗联合施用于有需要的个体。在一些实施方案中，将包含PX-866的结晶形式(例如PX-866苯甲醚溶剂化物)的组合物与多烯紫杉醇联合施用于有需要的个体。
本文所述的联合疗法可治疗多个阶段的癌症，包括局部晚期、转移期和/或复发期。在癌症分期中，局部晚期通常定义为已从局部区域扩散至附近组织和/或淋巴结的癌症。在罗马数字分期体系中，局部晚期通常分为II或III期。转移期癌症是其中癌症扩散至整个身体到达远端组织和器官的阶段(IV期)。称为复发期的癌症通常定义为通常在进入缓解期或肿瘤已被明显去除之后的一段时间后复发的癌症。复发可以是局部的，即，出现在与原始部位相同的部位，也可以出现在远端，即，出现在身体的不同部分。在某些情况下，可通过本文所述的联合疗法治疗的癌症是不可切除的，或不能通过手术去除。在进一步的情况下，可通过本文所述的联合疗法治疗的癌症是不能治愈的，即，通过现有治疗方法无法治疗。
在一些实施方案中，将本文所述的联合疗法作为一线或主要治疗进行施用。适合用本文所述的联合疗法治疗的其他受试者包括已完成一线抗癌治疗的受试者。一线抗癌治疗包括化学疗法、放射疗法、免疫疗法、基因疗法、激素疗法、手术或其他疗法，它们能够消极地影响患者体内的癌症，例如，通过杀死癌细胞、诱导癌细胞的凋亡、降低癌细胞的生长速率、降低转移的发生率或数目、减小肿瘤大小、抑制肿瘤生长、降低对肿瘤或癌细胞的血液供应、促进对癌细胞或肿瘤的免疫应答、防止或抑制癌症的进展或增加癌症患者的寿命。
用于一线和后续治疗和/或联合治疗的化学治疗剂包括，但不限于，激素调节剂、雄激素受体结合剂(例如，抗雄激素、比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特、MDV3100)、促性腺激素释放激素激动剂和拮抗剂(例如，亮丙瑞林、布舍瑞林、组氨瑞林、戈舍瑞林、地洛瑞林、那法瑞林、阿巴瑞克、西曲瑞克、加尼瑞克、地加瑞克)、雄激素合成抑制剂(阿比特龙、TOK-001)、替莫唑胺、米托唑胺、达卡巴嗪、顺铂(CDDP)、卡铂、丙卡巴肼、氮芥、环磷酰胺、喜树碱、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、硝基脲(nitrosurea)、更生霉素、蒽环类药(例如，柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星)、博来霉素、plicomycin、丝裂霉素、依托泊苷(VP16)、他莫昔芬、雷洛昔芬、雌激素受体结合剂、卡巴他赛、紫杉醇、吉西他滨、诺维本、法呢基蛋白质转移酶抑制剂、反式铂、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、新长春碱、长春碱和甲氨蝶呤、拓扑异构酶抑制剂(例如，伊立替康、托泊替康、喜树碱、依托泊苷)或与上述药剂相关的任何衍生物。许多上述药剂也被称作激素治疗剂，如雄激素受体结合剂、促性腺激素释放激素激动剂和拮抗剂、雄激素合成抑制剂、雌激素受体结合剂以及芳香酶抑制剂。
用于一线和后续治疗和/或联合治疗的放射疗法包括引起DNA损伤的因素(包括通常称作γ射线、X射线的那些)和/或放射性同位素向肿瘤细胞的引导递送。DNA损伤因素的其他形式包括微波和紫外线照射。所有这些因素很可能影响对DNA、DNA前体、DNA的复制和修复以及染色体的装配和维持的宽范围损伤。X射线的剂量范围可从持续一段延长的时间(例如，3到4周)的50-200伦琴的日剂量到2000-6000伦琴的单剂量。放射性同位素的剂量范围变化很大，并且取决于同位素的半衰期，所发射的辐射的强度和类型，和肿瘤细胞的吸收。
免疫疗法通常依靠使用免疫效应细胞和分子来靶向和消灭癌细胞。免疫效应物可以是，例如，肿瘤抗原或针对肿瘤细胞表面上的一些标记物的特异性抗体。单独的肿瘤抗原或抗体可充当治疗效应物，或者其可以募集其他细胞从而实际上实现细胞杀伤。抗体还可与药物或毒素(化疗剂、放射性核素、蓖麻毒蛋白A链、霍乱毒素、百日咳毒素等)偶联并且仅充当靶向剂。或者，效应物可以是携带能与肿瘤细胞靶标直接地或间接地相互作用的表面分子的淋巴细胞。多种效应细胞包括细胞毒性T细胞和NK细胞。或者，肿瘤抗原可以刺激受试者的免疫系统以促使其使用细胞毒性T细胞和NK细胞靶向特定肿瘤细胞。免疫治疗剂包括Sipuleucel-T
Figure BDA00003441189700571
贝伐珠单抗等。
基因疗法包括在联合治疗之前、之后或与此同时施用治疗性多核苷酸。治疗性基因可包括细胞增殖诱导剂的反义形式(癌基因)、细胞增殖抑制基因(肿瘤抑制基因)或程序性细胞死亡的诱导物(促凋亡基因)。
针对可切除的癌症进行某种类型的手术。手术类型包括预防性、诊断性或分期性、治疗性和姑息性手术，并且可以作为一线和后续治疗来进行。
在一些实施方案中，在一线治疗变为无效或癌症复发之后，将本文所述的联合治疗作为二线治疗来施用。在其他实施方案中，在一线和二线治疗失败后将本文所述的联合治疗作为三线治疗施用。在进一步的实施方案中，预先选择已经完成一线和二线治疗的个体。在一些情况下，向之前铂基治疗已失败的患者施用本文所述的联合治疗。在其他情况下，向之前伊立替康治疗已失败的患者施用本文所述的联合治疗。
在一些实施方案中，还可根据对本文所述联合治疗的敏感性和有效性来对受试者进行预筛选或预选择。可针对允许受试者适合联合治疗的某些生物标记物来对受试者进行检查。例如，如磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)突变和PI-3K催化亚基的激活突变等生物标记物可增强对本文所述的联合治疗的敏感性，而其他突变如Ras途径突变可降低敏感性。在一些实施方案中，基于例如PTEN突变状态、PTEN拷贝数、PI3K基因扩增、PI3K催化亚基α(PIK3CA)突变状态、K-ras突变状态来对受试者进行预选择。
本文还提供了用于治疗纤维化疾病和/或纤维化综合征的方法，该方法包括向有需要的受试者施用本文所述的化合物1和/或其类似物的结晶形式或包含该结晶形式的药物组合物。
在一些实施方案中，纤维化疾病为轻微的、中度的或严重的肺纤维化、囊性纤维化、眼纤维化(例如，青光眼滤过术后瘢痕形成)、心内膜心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、骨纤维化、纤维化结肠病、腹膜后纤维化、间质性肺炎、肺进行性大块纤维化、瘢痕疙瘩、硬皮病、增厚性瘢痕、肾纤维化、肠纤维化、肝纤维化、纤维化胆汁淤积性肝炎、肾原性系统性纤维化、与器官移植相关的纤维化、多灶性纤维硬化或过敏性休克纤维化。如WO2010/118250(其公开内容通过引用并入本文)所述，PX-866在肺纤维化方面已经显示出疗效。
在一些实施方案中，纤维化疾病为轻微的、中度的或严重的特发性肺纤维化。在一些实施方案中，纤维化疾病是与石棉肺、囊性纤维化、感染、暴露于环境变应原、肺移植、自身免疫病相关的肺纤维化，或者纤维化疾病是药物诱发的肺纤维化。在一些实施方案中，纤维化综合征与器官移植相关。
实施例
HPLC法：
仪器：Agilent HP1100
检测器：UV254nm
柱：Phenomenex Luna C18(2)，3μm，4.6×150mm
温度：25℃
流动相A：在80％水、20％ACN中的10mM甲酸铵，用甲酸调节至pH4.2
流动相B：乙腈
流速：1.0mL/min
进样体积：5μL(利用ACN进行针洗涤)
检测时间：30min
运行时间：38min
样品制备：在乙腈中稀释
梯度：
时间(min) ％A ％B
0 100 0
6 79 21
16 79 21
25 6 94
30 6 94
31 100 0
38 100 0
使用装备有2θ范围为120°的CPS(曲面位置敏感的)检测器的InelXRG-3000衍射仪进行XRPD分析。使用分辨率为0.03°2θ的Cu-Kα辐射收集实时数据。将管电压和电流强度分别设定为40kV和30mA。将单色仪狭缝设定为5mm×160μm。该模式在2.5-40°2θ显示。通过将样品包装至薄壁玻璃毛细管中来制备每个样品以供分析。将该毛细管安装至测角仪头上，该测角仪头是机动化的以在数据采集期间允许毛细管旋转。分析样品5min。使用硅参考标准进行仪器校准。
使用TA Instruments Q2000差示扫描量热仪来进行差示扫描热量分析(DSC)。使用NIST可追踪铟金属进行温度校准。将使用的样品放于DSC铝盘中，并准确记录重量。用盖将盘盖住，并对盖进行卷边压接(crimped)。将已称重的、卷边压制的铝盘放在室的参照侧。样品室在-30℃下进行平衡，并在氮气吹扫下以10℃/分钟的速率加热至最终温度250℃。
实施例1溶解度筛选试验I
对于每种溶剂，向100μL的顶部卷边压接的玻璃小瓶中装入约10mg的PX-866，并进行密封。通过注射器加入两份合适的溶剂。如果PX-866完全溶解，则不再进行进一步的工作。如果有必要的话，可加入更多的溶剂以获得上清液。对卷边压接的小瓶超声处理15分钟，然后离心30秒钟。用注射器取出1.0μL上清液，加入到含有500μL乙腈的密封HPLC小瓶中。之后将相同的饱和溶液加热30分钟达到设定值50℃，再次离心，在50℃下用1.0μL的上清液准备第二个HPLC小瓶。对于甲苯、苯甲醚、邻二甲苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮和1-戊醇，将室温上清液转移至干净的小瓶内并冷却至0℃，然后冷却至-20℃。针对每个温度，用1.0μL的上清液准备HPLC小瓶。使用以下所述方法测试HPLC样品，并且将254nm AUC绘制在校准曲线上以获得溶解度数据。
对第一组溶剂的筛选表明，PX-866在大多数常见溶剂中极易溶解。此外，对于具有中等溶解度的溶剂，将温度从室温增加至50℃几乎不影响溶解度。烷类都是良好的反溶剂，但似乎在供应过程中以与庚烷反溶剂相同的方式被无定形固体吸收和保留。溶解性样品储存在-20℃时，在存在甲苯和异丙醇(IPA)的情况下化合物呈油状析出，这提示这些溶剂可能已经过饱和。
还研究了渥曼青霉素在甲苯、苯甲醚和邻二甲苯中的溶解度，以确保可在结晶过程中排除渥曼青霉素。在每种情况下，溶解度很低；然而，渥曼青霉素向PX-866的转化总是足够接近不用担心的量。
表1.PX-866溶解度筛选I
Figure BDA00003441189700601
Figure BDA00003441189700611
Figure BDA00003441189700621
实施例2.结晶试验I
所针对的第一单溶剂体系是表1中具有中等溶解度的那些体系：MTBE和DMSO。在室温下将PX-866溶解在最小量的溶剂中，并冷却至-20℃，保持几天。引入玻璃粉以成核。这些尝试都未成功。
还作为单溶剂体系研究了一些导致化合物在-20℃下呈油状析出的溶剂(甲苯，IPA)。将PX-866溶解在最小量的溶剂中，并将溶液加入到含有玻璃粉的新小瓶中。在甲苯的情况下，化合物在注射器尖端和小瓶壁上结晶。通过显微镜发现该固体呈晶体状。采用IPA，化合物在冷却后结晶，而在升温回到室温后呈油状析出。
鉴于甲苯的阳性结果，筛选了苯甲醚和三种二甲苯异构体，因为它们与甲苯是类似的。PX-866以与甲苯中相似的方式从苯甲醚和邻二甲苯中结晶。使用更大的溶剂体积(20体积当量)将从甲苯、苯甲醚和邻二甲苯中的结晶(从10mg)放大至50mg，并用来自先前实验的晶体代替玻璃粉进行引晶。通过XRPD发现得到的固体都是结晶的。
通过1H NMR积分来测定三种固体中的残留溶剂。在每种情况下都不存在庚烷，但仍存在大致1∶1摩尔比的芳香族溶剂。将材料(来自苯甲醚)在90℃真空干燥18小时，其未能除去任何苯甲醚。在相同条件下干燥88小时除去了大量苯甲醚(定性地，通过HPLC)，但也导致材料转变为玻璃状并分解，纯度(从99％)变为95％。这些数据(连同早期稳定性结果)导致以下共识：结晶形式为溶剂化物，并且PX-866对于通过与晶体内溶剂分子的相互作用而发生分解而言是稳定的。
开始合成10g PX-866以研究如何将结晶并入供应过程。一旦通过HPLC发现转化完成，则取出几份反应混合物以测试各种处理(workup)条件(参见表4中的实验16)。在最好的程序(最高的产率和纯度)中，将混合物干燥至稠油状，溶解在3.5份THF中，并缓慢加入反溶剂(苯甲醚/甲苯)至总共达到8份。由于对毒性的担心，选择用苯甲醚处理该批次，并且分离得到7.9g的PX-866苯甲醚溶剂化物(产率为78％)。通过HPLC(254nm AUC)测得该材料的纯度为99.2％，通过XRPD观察到结晶，并且其含有1.18mol当量的苯甲醚，但不含庚烷或二烯丙基胺。
尝试了苯甲醚溶剂化物的连续重结晶以确定随后的重结晶是否能导致纯度的任何改善(表4中的实验18)。该实验未能产生纯度＞99.2％的材料，并且在每次重结晶中损失将近50％的材料。还尝试了几种溶剂的蒸汽扩散(表4中的实验19)以便获得PX-866的无水的结晶形式，但是在一个月之后放弃了该尝试，因为未观察到阳性结果。
实施例3.溶解度筛选试验II
对一组新的溶剂(表2)进行筛选，以试图找到不产生溶剂化物的结晶溶剂。发现几种新溶剂使得化合物在溶解之后立即自发结晶。将结晶的样品冷却至0℃，随后冷却至-20℃以获得两个额外的温度点。随着温度从室温降到-20℃，在脂肪族溶剂(乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮和1-戊醇)中的溶解度大幅降低。
表2.PX-866溶解度筛选II
Figure BDA00003441189700631
Figure BDA00003441189700641
实施例4.结晶试验II
通过将固体于室温下溶解在最小量的溶剂中并冷却至-20℃过夜来从乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、1-戊醇、异丙基苯和氯苯中重结晶苯甲醚溶剂化PX-866。在脂肪族溶剂的情况下得到更慢的结晶和更大的晶体尺寸。对每种固体进行NMR残留溶剂分析；每一种含有添加达到大致1mol当量的结晶溶剂和苯甲醚。这些固体的XRPD图彼此都非常相似并与先前批次也很相似。
从无定形PX-866开始重复进行结晶，以观察是否完全排除苯甲醚将产生无水晶形。然而，这些晶体的XRPD图指示了相同的晶形。
将新的脂肪族溶剂并入10g批次的生产过程中。取出三份完成的反应混合物以测试处理中的乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮和1-戊醇(参见表4中的实验26)。所有三种选择都得到了具有约0.8mol当量溶剂的相似高纯度材料的可接受的产率。选定用乙酸丙酯来处理该批次，并且获得了8.79g的PX-866乙酸丙酯溶剂化物(80.7％的产率)。通过HPLC(254nmAUC)测得材料的纯度为99.3％，并且通过NMR发现其含有0.85mol当量的乙酸丙酯。
出于确定溶剂挥发温度的目的获得苯甲醚和乙酸丙酯溶剂化物的DSC和TGA谱。在这两种情况下，由于熔融只观察到一次DSC吸热，但是两种溶剂化物的熔点是不同的(苯甲醚为146℃，PrOAc为80.5℃)。TGA结果是非结论性的，因为在宽温度范围内发生重量损失，并且与溶剂含量不符。TG-IR将是洞察溶剂损失以及分解途径的有用的技术。
实施例5.单一溶剂中的结晶研究：苯甲醚(18倍体积，无玻璃粉)
在室温下将53mg PX-866放入2mL平底小瓶中，之后加入约940μL(18倍体积)的苯甲醚。将上清液转移至另一小瓶中并首先冷却至4℃，然后冷却至-20℃(对两种温度下上清液小份中的PX-866进行定量)。将得到的固体在氮气流下干燥并在室温下进一步真空干燥16小时，之后在40℃下真空干燥16小时。上清液中PX-866的浓度为：室温：9.9mg/mL；4℃：7.0mg/mL；-20℃：6.2mg/mL。
在显微镜下观察到分离的固体呈现结晶。在氮气干燥后该结晶含有15.8％(w/w)的苯甲醚、0.8％的庚烷(通过1H NMR积分)。在室温真空干燥后，未检测到更多的庚烷并且苯甲醚的量未变。在40℃真空干燥后，通过HPLC(254nm AUC)测得结晶的纯度为98.5％，并且通过NMR可知苯甲醚的量似乎未变。分离的结晶的XRPD图表明是结晶材料(参见图1)。
XRPD数据：(2θ)7.9±0.1、8.5±0.1、10.2±0.1、11.1±0.1、14.0±0.1、14.2±0.1、17.9±0.1、18.7±0.1、21.0±0.1、21.2±0.1和28.2±0.1(参见图1)。
DSC数据：在146℃处明显吸热(参见图2)。
在PX-866的苯甲醚溶剂化物中的晶体堆积的a轴投影在图3中示出。该结晶形式在120K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
Figure BDA00003441189700661
实施例6.PX-866的THF溶液的苯甲醚结晶研究
向含有10mg PX-866的100μL V形玻璃小瓶中加入20μL(2倍体积)的THF进行完全溶解。将苯甲醚(1-3倍体积)慢慢加入所得溶液中；加入2倍体积的苯甲醚后可见固体。形成固体并在氮气下干燥。在显微镜下观察到分离的固体呈结晶状态。
还进行了更大规模(在102μL的THF和408μL的苯甲醚中51mg)的研究。XRPD图提示与实施例5相同的晶体。NMR积分显示晶体中含1.74当量的苯甲醚。
实施例7.在单一溶剂中的结晶研究：甲苯(2-5倍体积)
在室温下将大约10mg的PX-866溶解在甲苯(20μL；2倍体积)中，其中加入或不加入玻璃粉。当温和搅拌以溶解固体时，产物在小瓶壁上结晶。还进行了更大规模的实验。将大约50mg的PX-866放入2mL平底HPLC小瓶中。在室温下向小瓶中加入约250μL(5倍体积)的甲苯。将上清液转移至含有来自10mg规模的晶种的另一小瓶中，并将其先冷却至4℃，然后冷却至-20℃(对两种温度下上清液小份中的PX-866进行定量)。形成结晶并在氮气流下干燥。分离的结晶的XRPD图是结晶材料所特有的。
实施例8.在单一溶剂中的结晶研究：甲苯(20倍体积，无玻璃粉)
将大约47mg的PX-866放入2mL平底HPLC小瓶中。在室温下向小瓶中加入约1000μL(20倍体积)的甲苯。将上清液转移至另一小瓶中，并将其先冷却至4℃，然后冷却至-20℃(对两种温度下上清液小份中的PX-866进行定量)。形成结晶并在氮气流下干燥。
在氮气干燥后，结晶含有12.5％(w/w)的甲苯、0.98％的庚烷(通过1H NMR积分测定)。在室温真空干燥后，未检测到更多的庚烷并且甲苯的量未变。在40℃真空干燥后，通过HPLC(254nm AUC)测得结晶的纯度为97.7％，并且通过NMR可知甲苯的量似乎未改变。
XRPD数据：(2θ)7.9±0.1、8.5±0.1、10.2±0.1、11.1±0.1、12.5±0.1、14.0±0.1、18.7±0.1和21.1±0.1(图4)。
DSC数据：在142.0℃处明显吸热(图5)。
实施例9.PX-866的THF溶液的甲苯结晶研究
向含有10mg PX-866的100μL V形玻璃小瓶中加入20μL(2倍体积)的THF以达到完全溶解。将甲苯(1-3倍体积)慢慢加入所得溶液中；加入2倍体积甲苯后可见固体。在氮气流下蒸发掉初始体积的大约50％得到上清液，将其转移至另一小瓶中。形成固体并在氮气下干燥。在显微镜下观察到分离的固体呈结晶状态。
还进行了更大规模(在129μL的THF和516μL的甲苯中64.5mg)的试验。XRPD图提示与实施例8相同的晶体。NMR积分显示晶体中含1.54当量的甲苯。
实施例10.乙酸丙酯结晶
向闪烁小瓶中的100mg的苯甲醚溶剂化物中加入12倍体积的乙酸丙酯以达到完全溶解。将得到的溶液在室温下保持2小时，然后冷却至-20℃过夜。将产生的固体过滤并用最小量的冷乙酸丙酯洗涤，在室温下真空干燥过夜。通过NMR分析晶体的溶剂含量，并通过XRPD分析结晶度(参见图6)。发现晶体含有0.76mol当量的PrOAc和0.34mol当量的苯甲醚。
XRPD数据：(2θ)8.0±0.1、8.4±0.1、10.2±0.1、11.0±0.1、14.0±0.1和19.2±0.1(图6)。
DSC数据：在80.5℃处明显吸热(图7)。
在PX-866的乙酸丙酯溶剂化物中的晶体堆积的a轴投影在图8中示出。结晶乙酸丙酯溶剂化物在100K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线结晶学分析：
Figure BDA00003441189700681
实施例11.4-甲基-2-戊酮结晶
向闪烁小瓶中的100mg的苯甲醚溶剂化物中加入25倍体积的4-甲基-2-戊酮以达到完全溶解。将得到的溶液在室温下保持2小时然后冷却至-20℃过夜。将产生的固体进行过滤并用最小量的冷4-甲基-2-戊酮洗涤，并且在室温下真空干燥过夜。通过NMR分析晶体的溶剂含量并通过XRPD分析结晶度。发现晶体含有0.90mol当量的4-甲基-2-戊酮和0.15mol当量的苯甲醚。
XRPD数据：(2θ)7.9±0.1、8.4±0.1、10.2±0.1、10.9±0.1、13.9±0.1、14.2±0.1、18.5±0.1、19.2±0.1和20.7±0.1(图9)。
实施例12.异丙基苯结晶
向闪烁小瓶中的100mg的苯甲醚溶剂化物中加入221倍体积的异丙基苯以达到完全溶解。将得到的溶液在室温下保持2小时然后冷却至-20℃过夜。将产生的固体进行过滤并用最小量的冷异丙基苯洗涤，并且在室温下真空干燥过夜。通过NMR分析晶体的溶剂含量并通过XRPD分析结晶度。发现晶体含有0.96mol当量的异丙基苯和0.06mol当量的苯甲醚。
XRPD数据：(2θ)7.8±0.1、8.4±0.1、10.1±0.1、10.7±0.1、13.7±0.1、14.1±0.1、18.1±0.1、18.9±0.1、20.6±0.1和20.8±0.1(参见图10)。
实施例13.1-戊醇结晶
向闪烁小瓶中的100mg的苯甲醚溶剂化物中加入35倍体积的1-戊醇以达到完全溶解。将得到的溶液在室温下保持2小时然后冷却至-20℃过夜。对产生的固体进行过滤并用最小量的冷1-戊醇洗涤，并且在室温下真空干燥过夜。通过NMR分析晶体的溶剂含量并通过XRPD分析结晶度。发现晶体含有0.46mol当量的1-戊醇和0.77mol当量的苯甲醚。
XRPD数据：(2θ)8.1±0.1、8.5±0.1、10.2±0.1、11.1±0.1、12.5±0.1、14.0±0.1、14.3±0.1、17.9±0.1、18.8±0.1、20.7±0.1和21.3±0.1(图11)。
实施例14.氯苯结晶
向闪烁小瓶中的100mg的苯甲醚溶剂化物中加入52倍体积的氯苯以达到完全溶解。将得到的溶液在室温下保持2小时然后冷却至-20℃过夜。将产生的固体进行过滤并用最小量的冷氯苯洗涤，并且在室温下真空干燥过夜。通过NMR分析晶体的溶剂含量并通过XRPD分析结晶度。发现晶体含有0.86mol当量的氯苯和0.15mol当量的苯甲醚。
XRPD数据：(2θ)8.0±0.1、8.5±0.1、10.3±0.1、11.1±0.1、14.1±0.1、17.9±0.1、18.8±0.1、19.1±0.1、21.0±0.1和28.3±0.1(图12)。
实施例15.由渥曼青霉素合成PX-866苯甲醚溶剂化物
在配备有氮气鼓泡器、热电偶、磁力搅拌器和冷却水浴的250mLRBF中，使渥曼青霉素(10g，23.34mmol)悬浮在50mL的无水THF中，得到稀薄的黄色浆体。向浆体中慢慢加入二烯丙基胺(34.5mL，280.1mmol)，保持温度低于30℃。10分钟的COR样品显示约2％的渥曼青霉素残留。90分钟后，未检测到渥曼青霉素。取出6等份2.5mL的反应混合物以测试处理条件；同时将剩余的溶液储存在-20℃。去除溶剂得到浓稠的橙色油状物，并加入THF(29mL，3.5倍体积)，搅拌至均匀。加入苯甲醚(25mL，3倍体积)并用苯甲醚溶剂化物晶体对该溶液进行引晶。缓慢加入额外的苯甲醚达到总共8倍体积。将上清液搅拌过夜。在布氏漏斗上分离固体并用2倍体积的3.5：8的THF/苯甲醚进行洗涤。将分离的固体在室温下于真空干燥箱中干燥过夜，得到7.9g的PX-866苯甲醚溶剂化物(78％的产率)。
实施例16.由渥曼青霉素合成PX-866乙酸丙酯溶剂化物
在配备有氮气鼓泡器、热电偶、磁力搅拌器和冷却水浴的250mLRBF中，将渥曼青霉素(10g，23.34mmol)悬浮在50mL的无水THF中，得到稀薄的黄色浆体。向浆体中慢慢加入二烯丙基胺(3.5mL，28.0mmol)，保持温度低于30℃。60分钟的COR样品显示0.2％的渥曼青霉素残留。90分钟后，取出3等份2mL的反应混合物以研究处理条件；同时将剩余的溶液储存在-20℃。去除溶剂得到浓稠的橙色油状物，并加入乙酸丙酯(45mL，5倍体积)，搅拌至均匀。约1分钟后溶液变混浊。在室温下继续搅拌2小时，然后将溶液冷却至-20℃过夜。在布氏漏斗上分离固体并用1倍体积的冷乙酸丙酯进行洗涤。将分离的固体在旋转蒸发仪上干燥过夜(30℃浴温，8mm Hg)，得到8.79g的PX-866乙酸丙酯溶剂化物(80.7％的产率)。
实施例17.稳定性试验
开始非GMP稳定性研究，以确定PX-866溶剂化物与无定形材料相比对热和湿度的稳定性。将苯甲醚溶剂化物、甲苯溶剂化物和无定形PX-866的样品放在设定在40℃和75％相对湿度的稳定室内，在第1、2、3、4和8周的时间点取出用于HPLC分析。一旦获得，就将乙酸丙酯溶剂化物加入室内，将在第2.5周的单一时间点取出(参见图13)。
苯甲醚和甲苯溶剂化物具有比无定形PX-866明显提升的稳定性，这在仅一周后就很明显。基于有限的数据(仅单一时间点)，乙酸丙酯溶剂化物比无定形材料更稳定，但不如苯甲醚溶剂化物稳定。
在稳定室放置8周时间后，通过NMR分析材料的溶剂含量并通过XRPD分析结晶度。苯甲醚和甲苯溶剂化物分别含有1.34和1.25mol当量的溶剂，这大致与原用量相当。乙酸丙酯溶剂化物含有0.36mol当量的溶剂(大约为原用量的一半)以及大量的水。通过XRPD可知所有三种固体都是结晶的。
实施例18.无定形和结晶PX-866API胶囊的大鼠口服药代动力学研究
已研究了大鼠(进食或空腹)中经口服施用的PX-866的无定形和结晶苯甲醚溶剂化物的吸收以探究其体内药代动力学。给予大鼠0.3mg的PX-866的无定形和结晶苯甲醚溶剂化物，并且在给药后采集血液。
Figure BDA00003441189700711
结果
在施用无定形粉末胶囊或结晶苯甲醚溶剂化物PX-866粉末胶囊之后，在进食或空腹大鼠中的PX-866或代谢物17-OH-PX-866的血浆浓度之间不存在统计学显著的差异。
实施例19.结晶/溶剂化物PX-866制剂
实施例19a：用于口服给药的硬明胶胶囊
为了制备用于口服给药的药物制剂，将10mg粉末形式的PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物不加处理地或与任意赋形剂混合地直接填充至硬明胶胶囊中。用胶囊充填机(Xcelodose，Capsugel)对胶囊分别进行打开、称皮重、填充和密封。
实施例19b：用于口服给药的直接压制片剂
为了制备用于口服给药的药物制剂，对PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物、硬脂酸镁和甘露醇(Pearlitol100SD，Roquette)进行称量、筛分，并且随后进行干混(Turbula混合器)。先将API和甘露醇混合，并测试干混物的均匀性。通过测试后，加入硬脂酸镁进行额外的短暂混合，之后通过具有合适重量和硬度检查器的直接压片机对材料进行压片。产生10mg的结晶PX-866片剂。
然后对片剂喷涂黄色防潮层(Opadry AMB80W120002Yellow)，以避免患者和药剂师直接接触API以及防止API的可能的水分进入。
实施例19c：用于颊给药的硬锭剂
为了制备用于颊递送的舌下药物制剂，例如硬锭剂，将10mg的PX-866的结晶苯甲醚溶剂化物与490mg糖粉、1.6ml低度玉米糖浆、2.4mL蒸馏水和0.42mL薄荷提取物混合。将该混合物轻轻地混合，倒入模具中以形成适合于颊给药的锭剂。
实施例19d：用于肠胃外给药的注射溶液
为了制备适合于注射给药的肠胃外药物制剂，将10mg的PX-866的苯甲醚溶剂化物与10mL的0.9％无菌盐水混合。将混合物加入适合于注射给药的单位剂型中。
实施例19e：PX-866苯甲醚溶剂化物的2mg片剂
在用PX-866苯甲醚溶剂化物填充混合容器之前，通过筛分将苯甲醚溶剂化物的大棱形晶体(见图17(A)、图17(B))减小至均一尺寸。
使用了尺寸受控的粒化的甘露醇结晶形式-Pearlitol100SD。该颗粒的平均粒径为100微米。在混合前对Pearlitol进行筛分以确保不存在聚集。
在混合前对硬脂酸镁进行筛分以消除任何聚集物。将PX-866苯甲醚溶剂化物和赋形剂填充至搅拌机中并混合19分钟。对散装干混物增加一次额外的硬脂酸镁填充(总共为批次重量的2％)，并且再继续混合2-4分钟。目测该粉末是均匀的，且无分层。将混合物压成片剂。之后用盘式包衣机向片剂包以Yellow
Figure BDA00003441189700732
AMB。下表示出了25,000个PX-866苯甲醚溶剂化物片剂(2mg)的批配方。
Figure BDA00003441189700733
下表示出了每2mg片剂的赋形剂的量。对片剂进行包衣，使散装重量增加不少于4％。对于150mg的平均片剂重量，每个片剂的干燥包衣重量约为6mg。
Figure BDA00003441189700734
实施例20.临床试验
在健康受试者中，对空腹状态施用的结晶PX-866片剂和无定形PX-866胶囊以及进食和空腹状态施用的结晶PX-866片剂的药代动力学和药效学的1期双向交叉研究。
研究目标：
主要目标：
部分1：评估并比较施用结晶PX-866片剂和无定形PX-866胶囊之后(PX-866和代谢物)的药代动力学(PK)谱。
部分2：评估食物对结晶PX-866片剂的PK谱的影响。
次要目标：
评估结晶PX-866片剂的安全性和耐受性。
探索性目标：
探索PX-866对血小板中PI-3K途径中蛋白质激活状态以及空腹血浆C肽水平的药效学影响。
研究人群
18-65岁的健康受试者。
研究设计
这是一项两部分、1期、开放标签的交叉研究，设计用于评估结晶PX-866片剂相对于无定形PX-866胶囊的PK谱，并评估进食对结晶PX-866的PK的影响。
每个入选的受试者将仅参加本研究的一个部分。本研究的部分1中的受试者将在至少相隔7天的A期和B期接受两次单剂量8mg的PX-866治疗(结晶PX-866片剂和无定形PX-866胶囊各一个)。本研究的部分2中的受试者将在至少相隔7天的C期和D期接受两次单剂量6mg的PX-866治疗(在进食或空腹状态施用的结晶PX-866片剂)。
在最后一次施用研究药物后大约一周，每个受试者将按计划返回以进行最后的随访。
测试产物、剂量和给药方式
部分1：在第1天和第8天口服施用8mg无定形PX-866胶囊或结晶PX-866片剂。
部分2：在第1天和第8天在空腹或进食状态下口服施用6mg结晶PX-866片剂。
计划受试者数目
纳入了多达大约46名受试者，以便可对大约36名可评估的受试者(部分1中24名受试者，部分2中12名受试者)进行评估。
治疗持续时间
两周。在最后一剂PX-866后的7天，每个受试者将按计划返回进行安全性随访。
安全性评价
安全性评价将包括不良事件、ECG和实验结果的文件。
药代动力学评价
药代动力学评价将包括对PX-866和代谢物血浆水平的测定。
药效学评价
仅在部分1中进行的药效学评价将包括对空腹C肽变化和血小板中PI-3K途径信号传导蛋白(包括但不限于AKT、EGFR、mTOR和S6)的磷酸化状态的评价。
药代动力学方法
使用标准非房室法由血浆浓度-时间数据产生PX-866和相关代谢物的药代动力学参数。待评价的药代动力学参数包括但不一定限于：
Cmax：观测到的最大血浆浓度
Tmax：从时间零点(剂量给药时间)到观测到最大血浆浓度的时间，AUC最终：从时间零点到最后一个可量化时间点的血浆浓度-时间曲线下的面积，AUC∞：从时间零点外推至无穷大的血浆浓度-时间曲线下的面积，t1/2：终末半衰期
将使用实际采集时间进行分析。关于药代动力学方法和分析的其他细节将在统计分析计划(SAP)中提供。
统计方法
治疗分配
在本研究的每一部分中，将受试者分配至针对两种待施用的治疗的两种交替给药顺序之一中：结晶PX-866片剂和无定形PX-866胶囊(部分1)；进食和空腹下结晶PX-866片剂(部分2)。将根据登记时分配给受试者的研究编号(奇数或偶数)来指定治疗的顺序。将不使用分层因素。将不使用盲试。
样本量的确定
部分1：这是对PX-866的两种口服药物形式的药代动力学的前导评价，因此其没有正式地设计为用于证明生物等效性。然而，假设在部分1中将观察到合理的受试者间和受试者内的可变性，预期大约24名可评价受试者的样本量(每组12名)可提供对两种药物形式的PX-866药代动力学参数的充分评价，以在未来的PX-866临床研究中提供结晶PX-866片剂的剂量给药指导。此外，如果对于AUC，真实的受试者间CV为75％，并且受试者内CV为20％，则24人的样本量将足以证明单侧α为0.05和权重为80％的生物等效性(假设没有顺序影响，并且被定义为平均值的比例的等效值应该在80-125％内)。
部分2：未检验形式假设(formal hypothesis)，因此未进行形式样本量计算。然而，12名受试者的样本量应能提供关于食物对结晶PX-866片剂的药代动力学参数的影响的初步估计。
统计分析
针对所有变量产生调整后的平均值。对于转换后的变量，在对数尺度上的调整平均值将被转换回来，以提供原始测量尺度上的几何平均值。将对治疗(结晶的对比无定形的，或进食对比空腹)对照进行评估并且产生90％的置信区间。这些对照将基于未转换变量的差异和对数转换变量的比例，使用无定形PX-866胶囊值(部分1)或空腹结晶PX-866片剂值(部分2)作为参照。
为了评估两种药物制剂或进食与空腹状态对口服生物利用度的影响，对经对数转换的AUC∞和Cmax值进行方差分析(ANOVA)。ANOVA中的因素将包括顺序、顺序中的受试者、时期和治疗。将对平均值的点估计和90％置信区间以及对数尺度上的平均值之间的差异取幂，以获得原始尺度上的几何平均值的估计值和比例。评估结晶片剂与无定形胶囊治疗(部分1)或进食与空腹状态(部分2)的群体几何平均值的比值的90％置信区间，以确定制剂或食物对PX-866药代动力学的影响。按照治疗(结晶的和无定形的；进食对比空腹)针对所有药代动力学参数将汇总统计结果制成表。列出每名受试者的个体药代动力学参数。对所有变量产生调整后的平均值。对于转换后的变量，在对数尺度上的调整的平均值将被转换回来，以提供原始测量尺度上的几何平均值。对治疗对照进行评估并产生90％的置信区间。这些对照将基于未转换变量的差异和对数转换变量的比例，使用无定形值(部分1)或空腹值(部分2)作为参照。
主要目标
部分1：评估和对比施用结晶PX-866片剂和无定形PX-866胶囊之后(PX-866及代谢物)的药代动力学(PK)谱。
部分2：评估食物对结晶PX-866片剂的PK谱的影响。
次要目标
评估结晶PX-866片剂的安全性和耐受性。
探索性目标
探索PX-866对血小板中PI-3K途径中蛋白质的激活状态和血浆C肽的空腹水平的药效学效果。
终点
主要终点
PX-866和PX-866代谢物血浆浓度的Cmax、Tmax、AUC最终、AUC∞和t1/2
次要终点
不良反应的发生率和严重性、生命体征、临床实验室检验和ECG变化或异常情况
探索性终点
血小板中PI-3K途径信号传导蛋白(包括但不限于AKT、EGFR、mTOR、S6)的磷酸化状态的变化以及空腹C肽水平的变化。
实施例21.非侵入性药效学实验
为了对临床药物的药效学进行非侵入性监测，开展了在暴露于PX-866之后利用血小板来定量PI-3K途径抑制的实验。在该实验中，使用凝血酶激活肽(TRAP)于37℃下刺激分离的血小板15分钟以激活PI-3K信号传导。刺激后，由血小板制备裂解物并使用可购买到的人ELISA试剂盒分析该裂解物的磷酸化Akt(P-Akt)和总Akt(T-Akt)水平。在该实验中使用从三种不同的供体分离的血小板对PX-866的体外剂量响应关系的分析在图14中示出。出于对比目的，在该图中包括了使用两种不同的人肿瘤衍生细胞系(MCF-7和A549)获得的PX-866的体外剂量响应关系。
虽然本文已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员显而易见的是，这类实施方案仅通过举例的方式提供。本领域技术人员现将想到未偏离本发明的众多更改、改变和替换。应当理解，本文所述的本发明实施方案的各种备选方案可用于实施本发明。以下权利要求旨在限定本发明的范围，并由此覆盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等价物。

Claims (34)

1.具有以下结构式的化合物的一种结晶形式：
Figure FDA00003441189600011
化合物1
其基本上无渥曼青霉素。
2.具有以下结构式的化合物的一种结晶形式：
Figure FDA00003441189600012
化合物1
其中所述形式是
(a)结晶苯甲醚溶剂化物；且
(b)具有在以下2θ角有特征峰的X射线粉末衍射图(XRPD)：7.9±0.1度的2θ角、8.5±0.1度的2θ角、10.2±0.1度的2θ角、11.1±0.1度的2θ角、14.0±0.1度的2θ角、14.2±0.1度的2θ角、17.9±0.1度的2θ角、18.7±0.1度的2θ角、21.0±0.1度的2θ角、21.2±0.1度的2θ角和28.2±0.1度的2θ角。
3.如权利要求2所述的结晶形式，其为基本上纯的结晶形式。
4.如权利要求3所述的结晶形式，其具有至少90％的纯度。
5.如权利要求3所述的结晶形式，其具有至少95％的纯度。
6.如权利要求2所述的结晶形式，其中如通过差示扫描量热仪所测量的，所述结晶形式在约146℃处显示明显吸热。
7.如权利要求1-6中任一项所述的结晶形式，其中所述形式具有总空间群P212121。
8.如权利要求1-6中任一项所述的结晶形式，其中所述结晶形式在120K下展示出具有以下晶体参数的单晶X射线晶体学分析：
Figure FDA00003441189600021
9.具有以下结构式的化合物的一种结晶形式：
化合物1
其中如通过差示扫描量热仪所测量的，所述结晶形式在约146℃处显示明显吸热。
10.一种制备基本上无渥曼青霉素的、具有以下结构式的化合物的结晶溶剂化物形式的方法：
Figure FDA00003441189600023
化合物1
该方法包括将化合物在合适的溶剂中的上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液冷却至4℃至-20℃的温度。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液包含选自甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇或其组合的溶剂。
12.如权利要求10所述的方法，其中所述上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液包含苯甲醚。
13.一种制备具有以下结构式的化合物的结晶溶剂化物形式的方法：
Figure FDA00003441189600031
化合物1
该方法包括向该化合物在溶剂中的上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液中加入反溶剂，其中与在该反溶剂中相比，化合物1在所述溶剂中具有不同的溶解度。
14.如权利要求13所述的方法，包括在加入反溶剂之前任选地将化合物在溶剂中的上清液、溶液、悬浮液、分散液或乳液冷却至4℃至-20℃的温度。
15.如权利要求13所述的方法，其中所述溶剂选自四氢呋喃(THF)、水、乙腈、丙酮、正丁醇、仲丁醇、乙酸丁酯、叔丁基甲基醚(TBME)、氯仿、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、乙醇、1，4-二氧杂环己烷、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸异丁酯、2-乙氧基乙醇、乙二醇、甲酰胺、甲醇、2-甲氧基乙醇、甲基丁基酮、N-甲基吡咯烷酮、硝基甲烷、吡啶、环丁砜、甲苯、二甲苯、苯甲醚、己烷、环己烷、甲基环己烷、异丙基苯、乙酸丙酯、氯苯、戊烷、1-戊醇、4-甲基-2-戊酮和1，1，2-三氯乙烯，或其组合。
16.如权利要求13所述的方法，其中所述反溶剂选自水、甲苯、苯甲醚、异丙基苯、乙酸丙酯、4-甲基-2-戊酮、氯苯或1-戊醇，或其组合。
17.一种制备具有图1所示的XRPD的结晶PX-866形式的方法，该方法包括
(a)将化合物1溶解在四氢呋喃(THF)中；
(b)向步骤(a)的混合物中加入苯甲醚；和
(c)浓缩步骤(b)的混合物。
18.如权利要求17所述的方法，其中在步骤(b)之前将步骤(a)的溶液任选地冷却至约0℃至约10℃的温度。
19.如权利要求17所述的方法，其中在步骤(c)之前任选地用权利要求2的晶体对步骤(b)的溶液进行引晶。
20.如权利要求19所述的方法，其中通过以下步骤制备晶种：
(a)在环境温度下将PX-866溶解或悬浮在苯甲醚中；和
(b)将来自步骤(a)的上清液冷却至4℃，之后冷却至-20℃。
21.如权利要求17所述的方法，其中在浓缩期间将步骤(c)的混合物任选地保持在约0℃至约10℃的温度一段时间，之后在继续浓缩的同时使之升温至环境温度。
22.一种药学上可接受的组合物，其包含PX-866、苯甲醚和药学上可接受的载体。
23.如权利要求22所述的药物组合物，其中所述药物组合物配制为用于静脉内注射、皮下注射、舌下给药、直肠给药、颊给药、口服给药、局部给药、经皮给药或吸入给药。
24.如权利要求22所述的药物组合物，其中所述组合物是片剂。
25.一种药物组合物，其包含如权利要求2所述的结晶形式和药学上可接受的载体。
26.如权利要求22-25中任一项所述的药物组合物，其中化合物1以约0.1-20mg的量存在于单位剂型中。
27.如权利要求22-25中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物进一步包含第二抗癌剂。
28.如权利要求22-25中任一项所述的组合物，进一步包含选自溶剂化物形式、共结晶或溶剂化物-水合物的、化合物1的一种或多种另外的结晶形式。
29.如权利要求28所述的组合物，其中化合物1的一种或多种另外的结晶形式选自具有图4所示的XRPD图的甲苯溶剂化物；具有图6所示的XRPD图的乙酸丙酯溶剂化物；具有图9所示的XRPD图的4-甲基-2-戊酮溶剂化物形式；具有图10所示的XRPD图的异丙基苯溶剂化物；具有图11所示的XRPD图的1-戊醇溶剂化物；和具有图12所示的XRPD图的氯苯溶剂化物形式。
30.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括向该有需要的受试者施用包含治疗有效量的如权利要求1、权利要求2或权利要求9所述的结晶形式的组合物。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、头颈癌、脑癌、腹部癌、结肠癌、结直肠癌、食道癌、咽旁癌、胃肠癌、神经胶质瘤、肝癌、舌癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、肾癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、宫颈癌、子宫癌、维尔姆斯瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、淋巴瘤、白血病、血癌、间变性甲状腺瘤、皮肤肉瘤、黑素瘤、腺囊瘤、肝样肿瘤、非小细胞肺癌、软骨肉瘤、胰岛细胞瘤、包括去势难治性形式在内的前列腺癌、包括粘液性卵巢癌在内的卵巢癌、头颈部鳞状细胞癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、子宫内膜癌、胃癌、胰腺癌、平滑肌肉瘤、乳腺癌、囊性腺样癌、神经内分泌瘤、脑瘤、中枢神经系统癌症、胶质母细胞瘤和胚细胞瘤。
32.如权利要求30所述的方法，其中所述癌症为头颈部鳞状细胞癌、非小细胞肺癌、结肠癌或前列腺癌。
33.如权利要求30所述的方法，其中所述方法进一步包括施用抗癌剂。
34.一种治疗有需要的受试者的肺纤维化的方法，其包括向有需要的受试者施用包含治疗有效量的如权利要求1、权利要求2或权利要求9所述的结晶形式的组合物。
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