CN103313714A

CN103313714A - 地塞米松组合治疗

Info

Publication number: CN103313714A
Application number: CN2011800544683A
Authority: CN
Inventors: 易庆; 郑宇欢
Original assignee: University of Texas System
Current assignee: University of Texas System
Priority date: 2010-11-12
Filing date: 2011-11-11
Publication date: 2013-09-18
Also published as: WO2012065021A1; US20130310352A1; AU2011326394A1; RU2013126798A; EP2637665A1; KR20140009222A; BR112013011728A2; CA2816601A1; EP2637665B1; MX2013005271A; JP2013542262A

Abstract

本发明涉及治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(1)如本文所述式(I)的化合物和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及一定量的(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物，从而治疗受试者。在另一方面，本文提供治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(1)式(I)的化合物以及一定量的(2)地塞米松，从而治疗受试者；包含用于治疗多发性骨髓瘤的所述组合的药物制剂；及其组合物。

Description

地塞米松组合治疗

相关申请

本申请要求2010年11月12日提交的标题为“COMBINATIONTHERAPY(组合治疗)”的美国临时申请第61/413,260号，律师签号NVT-183-1的优先权。本申请还要求2010年12月6日提交的标题为“COMBINATION THERAPY(组合治疗)”的美国临时申请第61/420,089号，律师签号NVT-183-2的优先权。本说明书引用的任何专利、专利申请和参考文献的内容据此以引用的方式整体并入。

背景

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)在细胞代谢中起重要作用。通过生长因子、细胞因子和其它刺激因子结合其受体来激活PI3K。激活的PI3K进而引发Akt-mTOR信号转导并且导致细胞生长、增殖和凋亡的调节。通路调节异常在包括多发性骨髓瘤(MM)在内的不同类型的人类癌症中广泛可见。因此，预期PI3K-Akt抑制可发挥广谱的抗MM活性。化合物5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺(化合物A)是泛-PI3K抑制剂。该化合物已经在多种肿瘤细胞系中显示出显著的细胞生长抑制和诱导凋亡作用。目前正在I期临床试验中在实体瘤患者中对化合物A进行研究。

多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓中浆细胞的增殖为特征的恶性B细胞肿瘤(Kyle RA，Raj kumar SV.Multiple myeloma.N Engl J Med.2004；351(18)：1860-1873)。MM伴有溶骨性病变、高水平单克隆免疫球蛋白(Ig)的产生以及正常Ig产生和血细胞生成的抑制(Dvorak C.Common complaints，difficult diagnosis：multiple myeloma.J Am AcadNurse Pract.2006；18(5)：190-194)。化学疗法是对MM患者最常规的治疗(Jagannath S，Kyle RA，Palumbo A，Siegel DS，Cunningham S，Berenson J.The current status and future of multiple myeloma in theclinic.Clin Lymphoma Myeloma Leuk；10(1)：28-43)。然而，尽管改进了化学疗法并且引入了新药，MM仍然是不治之症。在美国，由血液恶性肿瘤造成的死亡中MM占将近10％(Jemal A，Siegel R，Ward E，HaoY，Xu J，Thun MJ.Cancer statistics，2009.CA Cancer J Clin.2009；59(4)：225-249)。因此，在MM研究中正在不断努力开发新的化学治疗剂。

发明概要

仍然存在对于多发性骨髓瘤的新的化学治疗的需求。

因此，一方面，本文提供治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(1)式(I)的化合物和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及一定量的(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物，从而治疗受试者。在另一方面，本文提供治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，所述方法包括向受试者施用一定量的(1)式(I)的化合物以及一定量的(2)地塞米松，从而治疗受试者。

在方法的一个实施方案中，受试者是人。在另一实施方案中，治疗包括共施用所述量的(1)和所述量的(2)。在又一实施方案中，所述量的(1)和所述量的(2)在单一制剂或单位剂型中。在又一实施方案中，所述量的(1)和所述量的(2)在单独制剂或单位剂型中。

在另一实施方案中，治疗包括基本上同时施用所述量的(1)和所述量的(2)。在又一实施方案中，治疗包括在不同时间施用所述量的(1)和所述量的(2)。在又一实施方案中，所述量的(1)和/或所述量的(2)以当(1)和(2)的一者或两者单独施用时将无效的剂量施用，但所述量在组合时有效。

在另一方面，本文提供包含一定量的(1)式(I)的化合物和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及一定量的(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物的药物制剂，其中组合量的(1)和(2)对多发性骨髓瘤的治疗有效。在又一方面，本文提供包含一定量的(1)式(I)的化合物，以及一定量的(2)地塞米松的药物制剂，其中组合量的(1)和(2)对多发性骨髓瘤的治疗有效。

在药物制剂的一个实施方案中，所述量的(1)和所述量的(2)在单一制剂或单位剂型中。在另一实施方案中，制剂或单位剂型是口服制剂或单位剂型。在又一实施方案中，所述量的(1)和/或所述量的(2)当(1)和(2)的一者或两者单独施用时将无效，但所述量在组合时有效。

在另一方面，本文提供包含(1)式(I)的化合物和(2)地塞米松的组合物。在又一方面，本文提供包括式(I)的化合物和地塞米松的组合治疗。在组合治疗的一个实施方案中，所述组合治疗用于多发性骨髓瘤的治疗。

在另一方面，本文提供治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，包括向受试者施用一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及一定量的(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物，从而治疗受试者。在又一方面，本文提供治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，包括向受试者施用一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺以及一定量的(2)地塞米松，从而治疗受试者。

在另一方面，本文提供包含一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及一定量的(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物的药物制剂，其中组合量的(1)和(2)对多发性骨髓瘤的治疗有效。

在又一方面，本文提供包含一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺，以及一定量的(2)地塞米松的药物制剂，其中组合量的(1)和(2)对多发性骨髓瘤的治疗有效。

在药物制剂的一个实施方案中，所述量的(1)和所述量的(2)在单一制剂或单位剂型中。在另一实施方案中，制剂或单位剂型为口服制剂或单位剂型。在又一实施方案中，所述量的(1)和/或所述量的(2)当(1)和(2)的一者或两者单独施用时将无效，但所述量在组合时有效。

在另一方面，本文提供包含5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺和地塞米松的组合物。

在又一方面，本文提供包括5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺和地塞米松的组合治疗。在组合治疗的一个实施方案中，所述组合治疗用于多发性骨髓瘤的治疗。

附图简述

图1A-1E显示化合物A诱导MM细胞生长抑制和凋亡，但是对正常PBMC的细胞毒性有限。

图2A-2B显示BMSC或IL-6的存在不会减少化合物A诱导的MM细胞凋亡。

图3A-3B显示化合物A处理引起细胞周期在G1期停滞。

图4A-4C显示化合物A诱导的MM细胞中的细胞内信号传导和胱天蛋白酶活化。

图5A-5F显示化合物A和地塞米松具有协同抗MM活性。

图6A-6C展示化合物A对SCID小鼠中建立的MM模型的体内疗效。

发明详述

已经发现，施用式(I)的化合物和地塞米松的组合提供对于治疗受试者中的多发性骨髓瘤的令人惊讶的协同作用。式(I)的化合物的立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐以及地塞米松的药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物还可用于本文公开的组合治疗。该方法(两种类型的试剂组合或共施用)尤其可用于治疗对目前可用的治疗不应答或耐受的患有多发性骨髓瘤的个体，还可用于提高目前可用的对该治疗应答的个体的多发性骨髓瘤治疗的功效和/或降低其副作用。

以下描述本文使用的某些术语。使用标准命名法描述本发明的化合物。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。

本文提供治疗剂的组合和试剂组合治疗多发性骨髓瘤的施用方法。如本文所使用，“试剂组合”和类似术语是指两种类型的试剂组合：(1)式(I)的化合物和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐。还提供单个试剂的异构或外消旋混合物的用途。地塞米松的药理学活性代谢物包括无活性但是施用后在体内转化为药理学活性形式的那些。

WO07/084786描述嘧啶衍生物，已经发现所述嘧啶衍生物抑制诸如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的脂质激酶的活性。适用于本发明的特定嘧啶衍生物、其制剂以及含有所述嘧啶衍生物的适合的药物制剂描述于WO07/084786中并且包括(I)的化合物：

或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中W是CR_w或N，其中

R_w选自由以下组成的组：

(1)氢、

(2)氰基、

(3)卤素、

(4)甲基、

5)三氟甲基、

(6)磺酰胺；

R₁选自由以下组成的组：

(1)氢、

(2)氰基、

(3)硝基、

(4)卤素、

(5)取代或未取代的烷基、

(6)取代或未取代的烯基、

(7)取代或未取代的炔基、

(8)取代或未取代的芳基、

(9)取代或未取代的杂芳基、

(10)取代或未取代的杂环基、

(11)取代或未取代的环烷基、

(12)-COR_1a、

(13)-CO₂R_1a、

(14)-CONR_1aR_1b、

(15)-NR1_aR_1b、

(16)-NR_1aCOR_1b、

(17)-NR_1aSO₂R_1b、

(18)-OCOR_1a、

(19)-OR_1a、

(20)-SR_1a、

(21)-SOR_1a、

(23)-SO₂NR_1aR_1b其中

R_1a和R_1b独立地选自由以下组成的组：

(a)氢、

(b)取代或未取代的烷基、

(c)取代或未取代的芳基、

(d)取代或未取代的杂芳基、

(e)取代或未取代的杂环基，以及

(f)取代或未取代的环烷基；

R₂选自由以下组成的组：

(1)氢、

(2)氰基、

(3)硝基、

(4)卤素、

(5)羟基、

(6)氨基、

(7)取代或未取代的烷基、

(8)-COR_2a，以及

(9)-NR_2aCOR_2b，其中

R_2a和R_2b独立地选自由以下组成的组：

(a)氢，以及

(b)取代或未取代的烷基；

R₃选自由以下组成的组：

(1)氢、

(2)氰基、

(3)硝基、

(4)卤素、

(5)取代或未取代的烷基、

(6)取代或未取代的烯基、

(7)取代或未取代的炔基、

(8)取代或未取代的芳基、

(9)取代或未取代的杂芳基、

(10)取代或未取代的杂环基、

(11)取代或未取代的环烷基、

(12)-COR_3a、

(14)-NR_3aR_3b

(13)-NR_3aCOR_3b、

(15)-NR_3aSO₂R_3b、

(16)-OR_3a、

(17)-SR_3a、

(18)-SOR_3a、

(19)-SO₂R_3a，其中

R_3a和R_3b独立地选自由以下组成的组：

(a)氢、

(b)取代或未取代的烷基、

(c)取代或未取代的芳基、

(d)取代或未取代的杂芳基、

(e)取代或未取代的杂环基，以及

(f)取代或未取代的环烷基；并且

R₄选自由以下组成的组

(1)氢，以及

(2)卤素。

如本文所使用，术语“烷基”是指不含杂原子的烷基基团。因此该短语包括直链烷基基团例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。该短语还包括直链烷基基团的支链异构体，包括但不限于通过实例提供的以下基团：-CH(CH₃)₂、-CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH(CH₂CH₃)₂、-C(CH₃)₃、-C(CH₂CH₃)₃、-CH₂CH(CH₃)₂、-CH₂CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH₂CH(CH₂CH₃)₂、-CH₂C(CH₃)₃、-CH₂C(CH₂CH₃)₃、-CH(CH₃)-CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH₂CH₂CH(CH₃)₂、-CH₂CH₂CH(CH₃)(CH₂CH₃)、-CH₂CH₂CH(CH₂CH₃)₂、-CH₂CH₂C(CH₃)₃、-CH₂CH₂C(CH₂CH₃)₃、-CH(CH₃)CH₂-CH(CH₃)₂、-CH(CH₃)CH(CH₃)CH(CH₃)₂、-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)CH(CH₃)(CH₂CH₃)等。因此短语“烷基基团”包括伯烷基基团、仲烷基基团和叔烷基基团。优选的烷基基团包括具有1至12个碳原子或1至6个碳原子的直链和支链烷基基团。

术语“烯基”是指2至约20个碳原子的直链、支链或环状基团，例如关于如上文所定义的烷基基团所描述的那些，除了具有一个或多个碳-碳双键以外。实例包括但不限于乙烯基、-CH＝C(H)(CH₃)、-CH＝C(CH₃)₂、-C(CH₃)＝C(H)₂、-C(CH₃)＝C(H)(CH₃)、-C(CH₂CH₃)＝CH₂、环己烯基、环戊烯基、环己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等。优选的烯基基团包括具有2至12个碳原子或2至6个碳原子的直链和支链烯基基团和环状烯基基团。

术语“炔基”是指2至约20个碳原子的直链、支链或环状基团，例如对于如上文所定义的烷基基团所描述的那些，除了具有一个或多个碳-碳三键以外。实例包括但不限于-C≡C(H)、-C≡C(CH₃)、-C≡C(CH₂CH₃)、-C(H₂)C≡C(H)、-C(H)₂C≡C(CH₃)和-C(H)₂C≡C(CH₂CH₃)等。优选的炔基基团包括具有2至12个碳原子或2至6个碳原子的直链和支链炔基基团。

烷基、烯基和炔基基团可以被取代。“取代的烷基”是指如上文所定义的烷基基团，其中与碳或氢的一个或多个键被与非氢和非碳原子的键替代，所述非氢和非碳原子例如但不限于诸如F、Cl、Br和I的卤素原子；诸如羟基基团、烷氧基基团、芳氧基基团和酯基团的基团中的氧原子；诸如硫醇基团、烷基和芳基硫化物基团、砜基团、磺酰基基团和亚砜基团的基团中的硫原子；诸如胺、酰胺、烷基胺、二烷基胺、芳基胺、烷基芳基胺、二芳基胺、N-氧化物、酰亚胺和烯胺的基团中的氮原子；诸如三烷基硅烷基基团、二烷基芳基硅烷基基团、烷基二芳基硅烷基基团和三芳基硅烷基基团的基团中的硅原子；以及各种其它基团中的其它杂原子。取代的烷基基团还包括其中与碳或氢原子的一个或多个键被与杂原子(例如氧代、羰基、羧基和酯基团中的氧；诸如亚胺、肟、腙和腈的基团中的氮)的更高等级键(例如，双键或三键)取代的基团。取代的烷基基团进一步包括烷基基团，其中与碳或氢原子的一个或多个键被与芳基、杂芳基、杂环基或环烷基基团的键替代。优选的取代的烷基基团尤其包括其中与碳或氢原子的一个或多个键被与氟、氯或溴基团的一个或多个键替代的烷基基团。另一优选的取代的烷基基团是三氟甲基基团以及含有三氟甲基基团的其它烷基基团。其它优选的取代的烷基基团包括其中与碳或氢原子的一个或多个键被与氧原子的键取代的那些，从而使取代的烷基基团含有羟基、烷氧基或芳氧基基团。其它优选的取代的烷基基团包括具有胺或取代或未取代的烷基胺、二烷基胺、芳基胺、(烷基)(芳基)胺、二芳基胺、杂环基胺、二杂环基胺、(烷基)(杂环基)胺或(芳基)(杂环基)胺基团的烷基基团。另外还优选的取代的烷基基团包括其中与碳或氢原子的一个或多个键被与芳基、杂芳基、杂环基或环烷基基团的键取代的那些。取代的烷基的实例是：-(CH₂)₃NH₂、-(CH₂)₃NH(CH₃)、-(CH₂)₃NH(CH₃)₂、-CH₂C(＝CH₂)CH₂NH₂、-CH₂C(＝O)CH₂NH₂、-CH₂S(＝O)₂CH₃、-CH₂OCH₂NH₂、-CO₂H。取代的烷基的取代基的实例为：-CH₃、-C₂H₅、-CH₂OH、-OH、-OCH₃、-OC₂H₅、-OCF₃、-OC(＝O)CH₃、-OC(＝O)NH₂、-OC(＝O)N(CH₃)₂、-CN、-NO₂、-C(＝O)CH₃、-CO₂H、-CO₂CH₃、-CONH₂、-NH₂、-N(CH₃)₂、-NHSO₂CH₃、-NHCOCH₃、-NHC(＝O)OCH₃、-NHSO-₂CH₃、-SO₂CH₃、-SO₂NH₂、卤基。

术语“取代的烯基”关于烯基基团具有的含义与取代的烷基基团关于未取代的烷基基团具有的含义相同。取代的烯基基团包括其中非碳或非氢原子与双键连接于另一个碳的碳连接的烯基基团以及其中非碳或非氢原子中的一个与不涉及与另一个碳的双键的碳连接的那些。

术语“取代的炔基”关于炔基基团具有的含义与取代的烷基基团关于未取代的烷基基团具有的含义相同。取代的炔基基团包括其中非碳或非氢原子与三键连接于另一个碳的碳连接的炔基基团以及其中非碳或非氢原子与不涉及与另一个碳的三键的碳连接的那些。

术语“烷氧基”是指RO-，其中R是烷基。烷氧基基团的代表性实例包括甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、三氟甲氧基等。

术语“卤素”或“卤基”是指氯、溴、氟和碘基团。术语“卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷基原子团。术语“卤基烷氧基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷氧基原子团。

术语“烷氧基烷基”是指基团-alk₁-O-alk₂，其中alk₁是烷基或烯基并且alk₂是烷基或烯基。术语“芳氧基烷基”是指基团-烷基O-芳基。术语“芳烷氧基烷基”是指基团-烯基-O-芳烷基。

术语“羰基”是指二价基团-C(O)-。

术语“环烷基”是指单环或多环、杂环或碳环烷基取代基。代表性环烷基基团包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基以及被如上文所定义的直链和支链烷基基团取代的此类环。典型的环烷基取代基具有3至8个骨架(即，环)原子，其中每个骨架原子是碳或杂原子。本文中的术语“杂环烷基”是指在环结构中具有1至5个，更通常具有1至4个杂原子的环烷基取代基。本发明的化合物中采用的适合的杂原子是氮、氧和硫。代表性杂环烷基部分包括，例如，吗啉代、哌嗪基、哌啶基(piperadinyl)等。碳环烷基基团是环烷基基团，其中所有环原子是碳。当结合环烷基取代基使用时，本文中的术语“多环”是指稠合的和非稠合的烷基环状结构。

术语“芳基”是指具有3至14个骨架碳或杂原子的任选取代的单环和多环芳香基团，并且包括碳环芳基基团和杂环芳基基团两者。该术语是指，但不限于，基团例如苯基、联苯基、蒽基、萘次甲基。碳环芳基基团是芳基基团，其中芳香环中的所有环原子是碳。本文中的术语“杂芳基”是指具有1至4个杂原子作为芳香环中的环原子而其余环原子为碳原子的芳基基团。

术语“未取代的芳基”包括含有诸如萘的稠环的基团。该术语不包括具有其它基团(诸如连接于环成员中的一个的烷基或卤基基团)的芳基基团，因为本文中诸如甲苯基的芳基基团被认为是如下所述的取代的芳基基团。优选的未取代的芳基基团是苯基。然而，未取代的芳基基团可以连接于母体化合物中的一个或多个碳原子、氧原子、氮原子和/或硫原子。

术语“取代的芳基基团”具有关于未取代的芳基基团具有的含义与取代的烷基基团关于未取代的烷基基团具有的含义相同。然而，取代的芳基基团还包括其中芳香碳中的一个连接于上述非碳或非氢原子中的一个的芳基基团，并且还包括其中芳基基团的一个或多个芳香碳连接于取代的和/或未取代的如本文所定义的烷基、烯基或炔基基团的芳基基团。这包括其中芳基基团的两个碳原子连接于烷基、烯基或炔基基团的两个原子的成键排列(bonding arrangement)以定义稠环系统(例如，二氢化萘基或四氢化萘基)。因此，该短语“取代的芳基”包括但不限于甲苯基和羟基苯基等。

如本文所使用的术语“取代的杂芳基”是指通过用以下基团独立替代其上的一个、两个或三个氢原子而被取代的如本文所定义的杂芳基基团：Cl、Br、F、I、OH、CN、C₁-C₃-烷基、C₁-C₆-烷氧基；被芳基、卤代烷基、硫代烷氧基、氨基、烷氨基、二烷氨基、巯基、硝基、甲醛(carboxaldehyde)，羧基、烷氧基羰基和甲酰胺取代的C₁-C₆-烷氧基。此外，任何一个取代基可以是芳基、杂芳基或杂环烷基基团。

如本文所使用的术语“取代的杂环”、“杂环基团”、“杂环”或“杂环基”是指任何含有选自氮、氧和硫的杂原子的3或4元环或含有选自由氮、氧或硫组成的组的一个至三个杂原子的5或6元环；其中5元环具有0-2个双键并且6元环具有0-3个双键；其中氮和硫原子可以任选地被氧化；其中氮和硫杂原子可以任选地被季铵化(quarternized)；并且包括其中任何以上的杂环稠合于苯环或以上独立定义的另一5或6元杂环的任何二环基团。杂环基基团的实例包括但不限于：含有1至4个氮原子的不饱和的3至8元环，例如但不限于吡咯基、二氢吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基，(例如，1H-四唑基、2H-四唑基)；含有1至4个氮原子的稠合的不饱和的杂环基团，例如但不限于异吲哚基、吲哚啉基、吲哚嗪基、喹啉基、吲唑基；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和的3至8元环，例如但不限于噁二唑基(例如，1，2，4-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基)；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的饱和的3至8元环，例如但不限于吗啉基；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和的稠合杂环基团，例如，苯并噁二唑基、苯并噁嗪基(例如，2H-1，4-苯并噁嗪基)；含有1至3个硫原子和1至3个氮原子的不饱和的3至8元环，例如但不限于噻二唑基(例如，1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，-噻二唑基)；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的饱和的3至8元环，例如但不限于噻唑烷基(thiazolodinyl)；含有1至2个硫原子的饱和的和不饱和的3至8元环，例如但不限于二氢二噻吩基、二氢二亚硫酰基(dihydrodithionyl)、四氢噻吩、四氢噻喃；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和的稠合杂环，例如但不限于苯并噻二唑基、苯并噻嗪基(例如，2H-1，4-苯并噻嗪基)、二氢苯并噻嗪基(例如，2H-3，4-二氢苯并噻嗪基)，含有氧原子的不饱和的3至8元环，例如但不限于呋喃基；含有1至2个氧原子的不饱和的稠合杂环，例如苯并间二氧杂环戊烯基(benzodioxoyl)(例如，1，3-苯并间二氧杂环戊烯基)；含有氧原子和1至2个硫原子的不饱和的3至8元环，例如但不限于二氢氧硫杂环己烯基；含有1至2个氧原子和1至2个硫原子的饱和的3至8元环，例如1，4-氧硫杂环己烷；含有1至2个硫原子的不饱和的稠环，例如苯并二噻吩基；以及含有氧原子和1至2个氧原子的不饱和的稠合杂环，例如苯并氧硫杂环己烯基。优选的杂环包括，例如：二氮杂

基(diazapinyl)、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、哌啶基、吡嗪基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、氮杂环丁基、N-甲基氮杂环丁基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑基、异噁唑烷基、吗啉基、噻唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、噻吩基、三唑基和苯并噻吩基。杂环基基团还包括上述的其中环中的一个或多个S原子双键连接于一个或两个氧原子(亚砜和砜)的那些。例如，杂环基基团包括四氢噻吩、四氢噻吩氧化物和四氢噻吩1，1-二氧化物。优选的杂环基基团含有5或6环成员。更优选的杂环基基团包括哌嗪、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、四唑、硫代吗啉、高哌嗪、噁唑烷-2-酮、吡咯烷-2-酮、奎宁环和四氢呋喃。

杂环部分可以是未取代的或者被独立地选自以下的各种取代基单取代或二取代：羟基、卤基、氧代(C＝O)、烷基亚氨基(RN＝，其中R是烷基或烷氧基基团)、氨基、烷氨基、二烷氨基、酰基氨基烷基、烷氧基、硫代烷氧基、聚烷氧基、烷基、环烷基或卤代烷基。“未取代的杂环基”包括稠合杂环例如苯并咪唑基，其不包括具有其它基团(诸如连接于环成员中的一个的烷基或卤基基团)的杂环基基团，因为诸如2-甲基苯并咪唑基的化合物是取代的杂环基基团。

有机和药物化学领域技术人员结合本文的公开内容显而易见的是，杂环基团可以连接在各个位置。杂环基团的非限制性实例还包括以下：

其中R是H或杂环取代基，如本文所述。

代表性杂环包括，例如，咪唑基、吡啶基、哌嗪基、氮杂环丁基、噻唑基、呋喃基、三唑基苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、酞嗪基、吲哚基、萘啶基(naphthpyridinyl)、吲唑基和喹嗪基。

术语“任选取代的”或“取代的”是指用一个或多个单价或二价基团替代氢。适合的取代基团包括，例如，羟基、硝基、氨基、亚氨基、氰基、卤基、硫代、磺酰基、硫代酰胺、脒基、亚胺基(imidino)、氧代、氧代脒基(oxamidino)、甲氧代脒基(methoxamidino)、亚胺基(imidino)、胍基、亚磺酰氨基、羧基、甲酰基、烷基、取代的烷基、卤代烷基、烷基氨基(alkyamino)、卤代烷基氨基、烷氧基、卤基烷氧基、烷氧基-烷基、烷基羰基、氨基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、杂芳基羰基、杂芳烷基-羰基、烷基硫代、氨基烷基、氰基烷基、芳基、苄基、吡啶基、吡唑基、吡咯、噻吩、咪唑基等。

取代基团自身可以被取代。取代基团上取代的基团可以是羧基、卤基、硝基、氨基、氰基、羟基、烷基、烷氧基、氨基羰基、-SR、硫代酰胺、-SO₃H、-SO₂R或环烷基，其中R通常是氢、羟基或烷基。

当被取代的取代基包括直链基团时，取代可以在链中(例如，2-羟基丙基、2-氨基丁基等)或在链末端(例如，2-羟基乙基、3-氰基丙基等)发生。被取代的取代基可以是共价连接的碳或杂原子的直链、支链或环排列。

代表性取代的氨基羰基基团包括，例如，下面显示的那些。有机和药物化学领域技术人员结合本文的公开内容显而易见的是，这些可以被杂环基基团和杂芳基基团进一步取代。优选的氨基羰基基团包括：N-(2-氰基乙基)甲酰胺、N-(3-甲氧基丙基)甲酰胺、N-环丙基甲酰胺、N-(2-羟基-异丙基)甲酰胺、2-羰基氨基-3-羟基丙酸甲酯、N-(2-羟基丙基)甲酰胺、N-(2-羟基-异丙基)甲酰胺、N-[2-羟基-1-(羟基甲基)乙基]甲酰胺、N-(2-羰基氨基乙基)乙酰胺、N-(2-(2-吡啶基)乙基)甲酰胺、N-(2-吡啶基甲基)甲酰胺、N-(氧杂戊环-2-基甲基)-甲酰胺、N-(4-羟基吡咯烷-2-基)甲酰胺、N-[2-(2-羟基乙氧基)乙基]-甲酰胺、N-(4-羟基环己基)甲酰胺、N-[2-(2-氧代-4-咪唑啉基)乙基]-甲酰胺、N-(羰基氨基甲基)乙酰胺、N-(3-吡咯烷基丙基)甲酰胺、N-[1-(羰基氨基甲基)吡咯烷-3-基]乙酰胺、N-(2-吗啉-4-基乙基)-甲酰胺、N-[3-(2-氧代吡咯烷基)丙基]甲酰胺、4-甲基-2-氧代哌嗪甲醛、N-(2-羟基-3-吡咯烷基丙基)甲酰胺、N-(2-羟基-3-吗啉-4-基丙基)甲酰胺、N-{2-[(5-氰基-2-吡啶基)氨基]乙基}甲酰胺、3-(二甲氨基)吡咯烷甲醛、N-[(5-甲基吡嗪-2-基)甲基]甲酰胺、2，2，2-三氟-N-(1-甲酰基吡咯烷-3-基)乙酰胺、

代表性取代的烷氧基羰基基团包括，例如，下面显示的那些。有机和药物化学领域技术人员结合本文的公开内容显而易见的是，这些烷氧基羰基基团可以被进一步取代。

本文中的术语“氨基”是指-NH₂基团。本文中的术语“烷氨基”是指-NRR′基团，其中R是烷基并且R′是氢或烷基。本文中的术语“芳基氨基”是指-NRR′基团，其中R是芳基并且R′是氢、烷基或芳基。本文中的术语“芳烷基氨基”是指-NRR′基团，其中R是芳烷基并且R′是氢、烷基、芳基或芳烷基。

本文中的术语“烷氧基烷氨基”是指-NR-(烷氧基烷基)基团，其中R通常是氢、芳烷基或烷基。

本文中的术语“氨基羰基”是指-C(O)-NH₂基团。本文中的“取代的氨基羰基”是指-C(O)-NRR′基团，其中R是烷基并且R′是氢或烷基。本文中的术语“芳基氨基羰基”是指-C(O)-NRR′基团，其中R是芳基并且R′是氢、烷基或芳基。本文中的“芳烷基氨基羰基”是指-C(O)-NRR′基团，其中R是芳烷基并且R′是氢、烷基、芳基或芳烷基。

术语“脒基”是指R-C(＝N)-NR′-(原子团在“N¹”氮上)和R(NR′)C＝N-(原子团在“N²”氮上)部分，其中R和R′可以是氢、烷基、芳基或芳烷基。

在优选的实施方案中，式(I)的化合物是泛-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺(下文“化合物A”)。

化合物A的合成描述于WO 2007/084786的实施例10中，其内容通过引用并入本文。

PI3K在细胞代谢中起重要作用(Sasaki T，Takasuga S，Sasaki J，等Mammalian phosphoinositide kinases and phosphatases.Prog Lipid Res.2009；48(6)：307-343；Di Paolo G，De Camilli P.Phosphoinositides in cellregulation and membrane dynamics.Nature.2006；443(7112)：651-657)。通过生长因子、细胞因子和其它刺激因子结合其受体来激活PI3K。激活的PI3K进而引发Akt-mTOR信号转导并且导致细胞生长、增殖和凋亡的调节(Engelman JA，Luo J，Cantley LC.The evolution ofphosphatidylinositol 3-kinases as regulators of growth and metabolism.Nat Rev Genet.2006；7(8)：606-619)。通路调节异常在不同类型的人类癌症中广泛可见(Bunney TD，Katan M.Phosphoinositide signalling incancer：beyond PI3K and PTEN.Nat Rev Cancer；10(5)：342-352；Engelman JA.Targeting PI3K signalling in cancer：opportunities，challenges and limitations.Nat Rev Cancer.2009；9(8)：550-562)。特别是在多发性骨髓瘤(MM)中，诸如胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和白细胞介素-6(IL6)的许多骨髓瘤生长因子通过与它们在MM细胞上的受体相互作用来激活PI3K-Akt通路，并且促进MM增殖、存活和耐药性(Harvey RD，Lonial S.PI3 kinase/AKT pathway as a therapeutic target inmultiple myeloma.Future Oncol.2007；3(6)：639-647；Younes H，Leleu X，Hatjiharissi E，等Targeting the phosphatidylinositol 3-kinase pathway inmultiple myeloma.Clin Cancer Res.2007；13(13)：3771-3775；HideshimaT，Nakamura N，Chauhan D，Anderson KC.Biologic sequelae ofinterleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling in multiple myeloma.Oncogene.2001；20(42)：5991-6000；Descamps G，Pellat-Deceunynck C，Szpak Y，Bataille R，Robillard N，Amiot M.The magnitude ofAkt/phosphatidylinositol 3′-kinase proliferating signaling is related toCD45 expression in human myeloma cells.J Immunol.2004；173(8)：4953-4959)。因此，预期PI3K-Akt抑制可发挥广谱的抗MM活性，并且数个PI3K-Akt抑制化合物正在进行临床前研究或I期和II期临床试验(Harvey RD，Lonial S.PI3 kinase/AKT pathway as a therapeutictarget in multiple myeloma.Future Oncol.2007；3(6)：639-647)。化合物A已经显示出显著的细胞生长抑制和诱导凋亡多种肿瘤细胞系，目前正在I期临床试验中在实体瘤患者中对化合物A进行研究。

地塞米松被称为(8S，9R，10S，11S，13S，14S，16R，17R)-9-氟-11，17-二羟基-17-(2-羟基乙酰基)-10，13，16-三甲基-6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氢-3H-环戊并[a]菲-3-酮。地塞米松是强的合成糖皮质激素类固醇药物，具有抗炎和免疫抑制活性。地塞米松用于治疗某些炎症性和自身免疫疾患，例如风湿性关节炎。地塞米松还用于抵抗由抗肿瘤治疗引起的某些副作用，并且还用作某些血液恶性肿瘤中的化学治疗剂。参见，例如，由Pharmaceutical Press出版的Martindale：Martindale：The Complete Drug Reference，第37版。

组合(例如，式(I)的化合物和地塞米松的组合，例如，化合物A和地塞米松的组合)的施用包括单一制剂或单位剂型中的组合的施用、组合的单个试剂的同时但是单独地施用或组合的单个试剂通过任何适合的途径的相继施用。与组合中的其它试剂相比，组合的单个试剂的剂量可能需要更频繁施用试剂中的一个。因此，为允许适当给药，包装的药品可包含含有试剂组合的一个或多个剂型，以及含有试剂组合中的一个，但是不含组合的其它试剂的一个或多个剂型。

试剂可包含一个或多个不对称元素例如立体中心或立体轴，例如，不对称碳原子，从而使化合物可以以不同立体异构形式存在。这些化合物可以是，例如，外消旋物或光学活性形式。对于具有两个或多个不对称元素的化合物，这些化合物还可以是非对映体的混合物。对于具有不对称中心的化合物，应理解涵盖其所有光学异构体和混合物。此外，具有碳碳双键的化合物可能以Z-和E-形式存在；化合物的所有异构形式均包括在本发明中。在这些情况下，单个对映体(光学活性形式)可以通过不对称合成由光学纯前体合成，或者通过外消旋物的拆分获得。外消旋物的拆分也可(例如)通过常规方法来完成，例如在拆分试剂存在下结晶，或者使用(例如)手性HPLC柱的色谱。

除非另有规定或在本文中明确指示，关于本发明的组合治疗中使用的化合物包括化合物的游离碱以及化合物的所有药学上可接受的盐。

如本文所使用，术语“药学上可接受的盐”是指本发明的嘧啶化合物的非毒性酸式盐或碱土金属盐。这些盐可以在嘧啶化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或通过使碱或酸官能团分别与适合的有机或无机酸或碱单独反应来制备。代表性盐包括但不限于以下：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。同样，碱性含氮基团可以用诸如以下的试剂季铵化：烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸盐，例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸盐；长链卤化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物，例如苄基和苯乙基的溴化物等。因此可获得水溶性或油溶性或可分散产物。

可能用来形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括诸如盐酸、氢溴酸(hydroboric acid)、硝酸、硫酸和磷酸的无机酸和诸如甲酸、乙酸、三氟乙酸、富马酸、酒石酸、草酸、马来酸、甲磺酸、琥珀酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸、柠檬酸的有机酸，以及诸如天冬氨酸和谷氨酸的酸性氨基酸。

碱加成盐可以在嘧啶化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或单独通过使羧酸部分与诸如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐的适合的碱，或者与氨或有机伯、仲或叔胺反应来制备。药学上可接受的盐包括但不限于基于以下的阳离子：碱金属和碱土金属，例如钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐、铝盐等，以及非毒性铵、季铵，以及胺阳离子，包括但不限于铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、吡啶、甲基吡啶、三乙醇胺等，以及碱性氨基酸例如精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸。如本文所使用的术语“单一制剂”是指配制为递送有效量的两种治疗剂至患者的单一载体或媒介物。单一媒介物被设计为连同任何药学上可接受的载体或赋形剂一起递送有效量的每种试剂。在一些实施方案中，媒介物是片剂、胶囊、丸剂或贴剂。在其它实施方案中，媒介物是溶液或混悬液。

本文使用的术语“单位剂量”意指同时将两种试剂以一个剂型一起施用至所治疗的患者。在一些实施方案中，单位剂量是单一制剂。在某些实施方案中，单位剂量包括一种或多种媒介物，从而使各种媒介物包括连同药学上可接受的载体和赋形剂一起的有效量的至少一种试剂。在一些实施方案中，单位剂量是同时施用于患者的一个或多个片剂、胶囊、丸剂或贴剂。

如本文所使用的术语“剂量范围”是指所述量的指定试剂的可接受变量的上限和下限。通常，在指定范围内的任何量的试剂剂量可以被施用于经历治疗的患者。

本文使用的术语“治疗”意指减轻、减少或缓解受试者中至少一种疾病的症状。在本发明的含义以内，术语“治疗”还表示停滞、延缓疾病症状的发作(即，疾病或疾病的症状的临床表现之前的时间)和/或减少疾病症状发展或恶化的风险。

术语“受试者”意图包括动物。受试者的实例包括哺乳动物，例如，人、犬、牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、大鼠和转基因非人类动物。在某些实施方案中，受试者是人，例如，患有、有风险患有或者潜在地有可能患有多发性骨髓瘤的人。

术语“约”或“大约”通常意指在给定数值或范围的20％以内，更优选在给定数值或范围的10％以内，最优选在给定数值或范围的5％以内。可选地，特别是在生物系统中，术语“约”意指在约对数(即，数量级)以内，优选在给定数值的2倍以内。

如本文所使用的术语“协同作用”是指两种试剂(例如，式(I)的化合物，例如，化合物A和地塞米松)的作用，所述作用产生(例如)减缓多发性骨髓瘤或其症状的症状进展的影响，所述影响大于自身施用的每种药物的效应的简单加和。可以通过，例如，使用诸如Sigmoid-Emax方程(Holford，N.H.G.和Scheiner，L.B.，Clin.Pharmacokinet.6：429-453(1981))、Loewe additivity方程(Loewe，S.和Muischnek，H.，Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114：313-326(1926))和中效方程(Chou，T.C.和Talalay，P.，Adv.Enzyme Regul.22：27-55(1984))的适合的方法来计算协同作用。上面提及的各方程可以被应用于实验数据以生成相应的图表以帮助评估药物组合的作用。与上面提及的方程相关的相应的图表分别为浓度-效应曲线、等效曲线和组合指数曲线。

“有效量”的试剂组合(例如，式(I)的化合物，例如，化合物A和地塞米松)是足以提供相对于用所述组合治疗的抑郁症的基线临床可见体征和症状的可见改善的量。

“口服剂型”包括规定的或预期用于口服施用的单位剂型。

治疗方法

本发明提供通过向个体施用式(I)的化合物(例如，化合物A)和地塞米松的组合来治疗个体多发性骨髓瘤的方法。

本发明涉及治疗多发性骨髓瘤的方法。如本文所使用的术语“骨髓瘤”涉及由通常在骨髓中发现的类型的细胞组成的肿瘤。如本文所使用的术语“多发性骨髓瘤”意指浆细胞的弥散性恶性肿瘤，其特征为多个骨髓肿瘤病灶和M组分(单克隆免疫球蛋白碎片)的分泌，与导致骨痛、骨折、高血钙和正常色素正常红细胞性贫血的普通溶骨性病变有关。通过使用常规和高剂量化学治疗无法治愈多发性骨髓瘤。

在一些实施方案中，可以确定待治疗的受试者(例如，人)对一种或多种多发性骨髓瘤治疗不应答或耐受。

本文提供通过向患有多发性骨髓瘤的个体施用有效量的式(I)的化合物(例如，化合物A)和地塞米松来治疗多发性骨髓瘤的方法。所述量的试剂组合可有效治疗多发性骨髓瘤。需要注意到试剂组合的协同作用：即使一种或多种试剂以特定剂量单独施用可能无效，但是当以相同剂量的各种试剂组合施用时治疗有效。因此组合的一种或多种试剂的剂量可以低于FDA批准的各种试剂的剂量。

剂量

各种个体的用于治疗多发性骨髓瘤的试剂组合的最佳剂量可以使用已知方法由经验确定并且将取决于多种因素，包括但不限于疾病发展的程度；个体的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；施用的时间和途径；以及个体服用的其它药物。最佳剂量可以使用本领域熟知的常规测试和程序来确定。例如，地塞米松的每日剂量可以是0.25mg-9mg(例如，0.25、0.5、0.6、0.75、2或4mg)。(I)的化合物的每日剂量可以是10mg至约2000mg。

可以与载体材料组合以产生单一剂型的所述量的试剂组合将根据所治疗的个体和特定施用方式而变化。在一些实施方案中，含有如本文所述的试剂组合的单位剂型将含有当单独施用试剂时通常施用的组合的各种试剂的量。

剂量的频率可能根据所使用的化合物和待治疗或预防的特定疾患而变化。一般而言，优选使用足以提供有效治疗的最小剂量。通常可使用本领域普通技术人员熟悉的适用于所治疗或预防的疾患的测定来监测患者的疗效。

剂型可以通过药物制剂化学领域的技术人员显而易见的各种常规混合、粉碎和制造技术来制备。

含有试剂组合或试剂组合的单个试剂的口服剂型可以呈包封在胶囊(例如明胶胶囊)中的微片形式。为此，可以使用如药物制剂中所采用的明胶胶囊，例如商购自Pfizer的称为CAPSUGEL的硬明胶胶囊。

本文使用的许多口服剂型含有颗粒形式的试剂组合或试剂组合的单个试剂。可将该颗粒压制成片剂，在诸如矫味剂型、压制包衣剂型或肠溶包衣剂型的包衣剂型的片芯成分中提供，或者可以包含在胶囊、渗透泵剂型或其它剂型中。

在本文公开的组合、剂型、药物组合物和药物制剂中以100∶1至1∶100，更优选1∶1至1∶100，并且更加优选1∶10至1∶100的范围内的比例提供药物本发明的化合物(例如，式(I)的化合物，尤其化合物A和地塞米松)。

最佳比例、单个和组合剂量以及产生功效而没有毒性的药物化合物的浓度基于活性成分针对靶部位的利用度的动力学，并使用本领域技术人员已知的方法来确定。

药物组合物

可以在临床研究中测试本文提供的药物组合物或组合(例如，式(I)的化合物，尤其化合物A和地塞米松)。适合的临床研究可以是，例如，增殖疾病患者中的开放标签、剂量递增研究。该研究尤其证明了本发明的组合的活性成分的协同作用。可以直接通过这些研究的结果来确定对增殖疾病的有益作用，所述研究本身是本领域技术人员已知的。该研究可能尤其适用于对比使用活性成分的单药治疗与本发明的组合的作用。在一个实施方案中，式(I)的化合物(例如，化合物A)的剂量递增直至达到最大耐受剂量，并以固定剂量施用地塞米松。可选地，式(I)的化合物(例如，化合物A)可以以固定剂量施用而地塞米松的剂量可以递增。每名患者可以每日或者间断地接受式(I)的化合物(例如，化合物A)的剂量。在此类研究中，例如，可以通过在12、18或24周后每隔6周症状评分的评估来确定疗效。

本发明的药物组合的施用可能不仅导致诸如协同治疗作用(例如关于缓解症状、延迟症状进展或抑制症状)的有益作用，而且导致更加令人惊讶的有益作用，例如与仅应用本发明的组合中使用的药学活性成分中的一种的单药治疗相比副作用更少、生活质量改善或发病率降低。

进一步益处可能是可以使用更低剂量的本发明的组合的活性成分，例如，剂量需求不仅通常更小而且可能应用频率更低，这可以减少副作用的发生率或严重程度。这符合待治疗患者的期望和要求。

本发明的一个目的是提供包含可对靶向或预防多发性骨髓瘤联合治疗有效的量的药物组合物。在该组合物中，式(I)的化合物和地塞米松可以在一种组合的单位剂型中或在两种单独的单位剂型中一起、依次或单独施用。单位剂型也可以是固定组合。

用于两种化合物的单独施用，或用于在固定组合中施用的药物组合物(即，包含根据本发明的两种化合物的单一盖仑组合物)可以以本身已知的方式来制备，并且是适用于肠内(例如口服或直肠)以及胃肠外施用于包括人的哺乳动物(温血动物)的那些，其包含治疗有效量的至少一种药理学活性组合配伍(partner)单独(例如如上所说明)或与一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂组合，特别适用于肠内或胃肠外应用。

制剂

在一个实施方案中，本文提供包含以下的药物组合物：(1)式(I)的化合物、尤其化合物A和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物，从而治疗受试者，其中组分(1)和(2)各自与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合配制。

本文提供的药物组合可以通过药物制剂领域技术人员显而易见的多种方法来配制。可以以多种不同方式达到上面描述的各种释放性质。适合的制剂包括，例如，片剂、胶囊、压制包衣制剂，以及其它容易施用的制剂。

适合的药物制剂可包含，例如，约0.1％至约99.9％，优选约1％至约60％的活性成分。例如，用于肠内或胃肠外施用的组合治疗的药物制剂是诸如糖包衣片剂、片剂、胶囊或栓剂或安瓿的单位剂型中的那些。如果没有另外指示，这些以本身已知的方式，例如通过常规混合、制粒、包糖衣、溶解或冻干工艺来制备。应理解，各种剂型的单个剂量中含有的组合配伍的单位含量本身不需要构成有效量，因为可通过施用多个剂量单位来达到必需的有效量。

具体而言，治疗有效量的本发明的组合的每种组合配伍可以同时或相继且以任何顺序施用，并且组分可以单独或作为固定组合施用。例如，治疗根据本发明的多发性骨髓瘤的方法可包括(i)施用呈游离或药学上可接受的盐形式的第一试剂(a)和(ii)施用呈游离或药学上可接受的盐形式的试剂(b)，同时或相继以任何顺序，以联合治疗有效量，优选以协同有效量，例如以对应于本文描述的量的每日或间断剂量。本发明的组合的单个组合配伍可以在治疗期间的在不同时间单独施用或以分开或单一组合形式同时施用。而且，术语施用还涵盖组合配伍的前药的使用，所述前药在体内转化为组合配伍本身。本发明因此应当被理解为包括同时或交替治疗的所有此类方案并且术语“施用”应当被相应地解释。

在本发明的组合中采用的有效剂量的每种组合配伍可以根据采用的特定化合物或药物组合物、施用的方式、所治疗的疾患、所治疗的疾患的严重程度而变化。因此，根据包括施用途径和患者的肾和肝功能在内的多种因素来选择本发明的组合的剂量方案。本领域普通临床医生或医师可以容易地确定缓解、抵抗或停滞疾患的进展所需的有效量的单一活性成分并开处方。

实施例

通过以下实施例进一步说明本发明。不得将实施例解释为进一步限制。

材料和方法

细胞系、原代骨髓瘤细胞、骨髓基质细胞(BMSC)、外周血单核细胞(PBMC)、抗体和试剂

在37℃和5％CO₂下，将MM细胞系ARP1、ARK、MM.1S、MM.1R和U266保持在补充有10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养基中。原代MM细胞和MM BMSC分离自骨髓瘤患者的骨髓抽出液中。PBMC获自健康志愿者。该研究经The University of Texas M.D.Anderson Cancer Center的InstitutionalReview Board批准。抗胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-9、PARP、Bim、XIAP、细胞周期蛋白D1、pp70S6K(Thr389)和p27(Kip1)抗体购自Cell Signaling。抗bcl-2、Bcl-XL、Akt、pAkt(Thr 308)、pAkt(Ser 473)、p70S6K和β-肌动蛋白抗体购自Santa Cruz。化合物A以10mM溶于DMSO作为贮存液。地塞米松和碘化丙啶(PI)购自Sigma-Aldrich。重组人IL6购自R&D Systems。FITC共轭的膜联蛋白V获自Invitrogen。

5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺(化合物 A)的制备

向2-吗啉代-4，6-二氯嘧啶(2.0g，8.54mmol)在NMP(14mL)中的的浆液中加入三乙胺(1.43mL，10.25mmol)。将该多相混合物搅拌15分钟，然后用吗啉(0.75mL，8.54mmol)处理。在氩气下在85℃下回流2小时后，将溶液冷却，然后加至EtOAc(160mL)。有机溶液用25mL NaHCO₃(饱和)(2x)、水(2x)和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。将粗品溶于200mL EtOAc并通过SiO₂垫过滤，进一步用EtOAc洗脱，得到2.2g(93％)2，4-二吗啉代-6-氯嘧啶，为类白色固体。LCMS(m/z)：285.0(MH+)，¹H NMR(CDCl₃)：δ5.86(s，IH)，3.71-3.76(m，12H)，3.52-3.56(m，4H).

将氩气鼓泡通过2，4-二吗啉代-6-氯嘧啶(4.1g，14.3mmol)和4-(三氟甲基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡啶-2-胺(16.5g，57.3mmol)在1，2-二甲氧基乙烷和2M Na2Cθ3(3∶1)中的多相混合物，持续20分钟。加入1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(292mg，0.36mmol)并将含有混合物的高压玻璃容器密封。然后将反应混合物在90℃下加热15小时，冷却并且用EtOAc(300mL)稀释。有机溶液用300mL水∶Na₂CO₃(饱和)∶NH₄OH(浓)＝5∶4∶1的混合物洗涤，然后用NH₄Cl(饱和)和盐水(2x)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过SiO₂色谱(含0.1％TEA的50-90％EtOAc/己烷)纯化粗品得到5.62g(95％)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺，为类白色固体。LCMS(m/z)：411.3(MH+)；¹H NMR(CDCl₃)：δ8.27(s，IH)，6.78(s，IH)，5.97(s，IH)，4.77(bs，2H)，3.59-3.80(m，12H)，3.58-3.61(m，4H).

细胞生长测定

按照生产商的方案(Promega)通过MTS测定来评价化合物A对多发性骨髓瘤(MM)细胞系的生长抑制作用。简言之，将MM细胞以5,000细胞/100μl培养基/孔的浓度加至96孔板并且用0至1mM最终浓度的化合物A处理24或72小时。在测定结束时，将20μlMTS/PMS溶液加至各孔中的培养基。然后将板在37℃和5％CO₂下孵育4小时。使用ELISA板读数仪记录在490nm的吸光度。所有实验重复三次。

凋亡测定

如前所述，通过膜联蛋白V结合测定来检测化合物A诱导的细胞凋亡(Zheng Y，Cai Z，Wang S，等Macrophages are an abundantcomponent of myeloma microenvironment and protect myeloma cellsfrom chemotherapy drug-induced apoptosis.Blood.2009；114(17)：3625-3628)。简言之，将MM细胞在24孔板中培养并且用0至1mM最终浓度的化合物A处理24或72小时。将细胞用冷PBS洗涤两次并且重新悬浮于膜联蛋白V结合缓冲液(Invitrogen)中。将MM细胞用FITC-共轭的膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)在室温下染色15min。确定凋亡细胞为膜联蛋白V阳性细胞。

细胞周期分析

将MM细胞系ARP1、MM.1S和MM.1R在含有或不含1μM化合物A下培养24小时。然后，收获细胞并在70％乙醇中在4℃下透化过夜，并且用50μg/ml PI和20μg/ml RNA酶A孵育15min。通过流式细胞仪和FlowJo软件分析DNA含量。

化合物A对建立的多发性骨髓瘤的体内作用

将六至八周龄雌性SCID小鼠在MD.Anderson Cancer Center动物研究机构饲养和监测。所有实验程序和方案已经经过The Universityof Texas M.D.Anderson Cancer Center的Institutional Animal Care andUse Committee批准。在SCID小鼠右侧皮下接种悬浮于50μl PBS中的100万个ARP1细胞。形成可触摸的肿瘤(肿瘤直径≥5mm)后，通过每日腹腔内注射PBS或化合物A(5μmol/kg/天)来治疗小鼠。每隔5天测量肿瘤大小，同时收集血样。通过测量肿瘤大小和检测循环人κ链来评估肿瘤负荷。

ELISA

按照供应商的方案通过定量ELISA(Bethyl Laboratories Inc)测量小鼠血清中人κ链的水平。

统计学分析

所有数据表示为平均值±标准差。使用Student t检验来对比各实验组。当P＜0.05时确定显著性。

结果

化合物A抑制MM细胞系的生长并且诱导细胞凋亡

为评估化合物A对骨髓瘤细胞的作用，将MM细胞系ARP1、ARK、MM.1S、MM.1R和U266用不同剂量的化合物A处理24小时或72小时。如材料和方法中所述测量化合物A诱导的MM细胞凋亡。如图1A中所示，化合物A以剂量依赖性和时间依赖性两种方式诱导MM细胞凋亡。不同MM细胞系对化合物A的敏感性不同。与其它MM细胞系相比，U266对化合物A敏感性较低。在等于或大于10μM的浓度下，化合物A在24小时在所有测试的MM细胞系中诱导显著的凋亡(与对照相比P＜0.05)。因此，在以下实验中使用10μM化合物A处理24小时。

化合物A对MM细胞生长的作用通过MTS测定来测试。如图1B中所示，化合物A处理在所有测试的MM细胞系中导致剂量依赖性生长抑制。在测试的MM细胞中化合物A IC₅₀(50％抑制时的浓度)不同。在24小时处理时，ARP1、ARK和MM.1R的IC₅₀在1μM至10μM之间，而MM.1S的IC₅₀低于1μM并且U266的IC₅₀在10μM至100μM之间。总之，这些发现表明化合物A处理导致MM细胞生长抑制和以化合物A剂量依赖性方式凋亡。

化合物A诱导离体原代MM细胞凋亡

为评估化合物A在原代MM细胞中的功能，将研究扩展到自骨髓瘤患者新鲜分离的CD138+原代MM细胞。根据之前的发现，除非将细胞与BMSC共同培养，否则离体原代MM细胞发生凋亡(Zheng Y，Cai Z，Wang S，等Macrophages are an abundant component of myelomamicroenvironment and protect myeloma cells from chemotherapydrug-induced apoptosis.Blood.2009；114(17)：3625-3628)。因此，CD138+原代MM细胞与分离自MM骨髓抽出液的CD138-BMSC按1∶1比例共同培养。将细胞用0至1mM的不同剂量的化合物A处理24小时。通过APC-CD138染色分离原代MM细胞和BMSC。如获自来自检验的三分之一患者的骨髓瘤细胞和BMSC的代表性数据所示(图1C)，化合物A以剂量依赖性方式诱导原代MM细胞(CD138+)凋亡。10μM化合物A诱导超过70％的原代MM细胞凋亡。令人感兴趣的是，化合物A对于CD138-基质细胞的细胞毒性显著更低。图1D显示化合物A诱导来自3名不同MM患者的原代MM细胞凋亡。总之，这些数据表明化合物A诱导原代MM细胞凋亡，但是对于非肿瘤BMSC具有低毒性。

化合物A对于健康志愿者的正常血细胞具有低毒性

为检验化合物A是否诱导正常PBMC凋亡，将来自不同健康志愿者的正常PBMC用0至1mM化合物A孵育24小时。如上所述测量细胞凋亡速率。如图1E中所示，化合物A对于正常PBMC具有相对较低毒性。对MM细胞有效的化合物A浓度(10μM或100μM)仅导致低于40％的PBMC凋亡。因此，这些发现表明化合物A对于静息PBMC具有低细胞毒性。

图1说明

(A).在0至1mM化合物A存在下培养五种MM细胞系ARP1、ARK、MM.1S、MM.1R和U266。处理1天或3天后收获细胞。通过如材料和方法中所述的膜联蛋白V染色来测量化合物A诱导的MM细胞凋亡。(B).将相同的MM细胞系用0至1mM化合物A处理1或3天。通过MTS测定来评价细胞生长。(C).用化合物A处理的原代MM细胞的代表性直方图。(D).显示新鲜分离的原代MM细胞中凋亡的剂量依赖性诱导的来自3名患者的数据。将细胞用不同剂量的化合物A处理1天。(E).将分离自3名健康志愿者的PBMC用化合物A处理1天。

IL-6的加入或BMSC的存在不能保护MM细胞免受化合物A诱导的凋亡

IL-6是MM的重要的存活细胞因子(Klein B，Zhang XG，JourdanM，等Interleukin-6 is the central tumor growth factor in vitro and in vivoin multiple myeloma.Eur Cytokine Netw.1990；1(4)：193-201；Gado K，Domjan G，Hegyesi H，Falus A.Role of INTERLEUKIN-6 in thepathogenesis of multiple myeloma.Cell Biol Int.2000；24(4)：195-209)。之前的工作已经显示IL-6在化学治疗剂地塞米松处理下促进MM细胞存活(Frassanito MA，Cusmai A，Iodice G，Dammacco F.Autocrineinterleukin-6 production and highly malignant multiple myeloma：relationwith resistance to drug-induced apoptosis.Blood.2001；97(2)：483-489)。因此，检验通过IL6加入的化合物A诱导的MM细胞凋亡的减少。为此目的，将不同MM细胞系ARP1、MM.1和MM.1R用或未用重组hIL-6(最终浓度5μg/ml)培养并用或未用10μM化合物A处理2天。作为阳性对照，将MM.1S细胞用加入或不加hIL-6的40μg/ml地塞米松处理相同的时间。如图2A中所示，IL6的加入不会影响化合物A诱导的MM细胞凋亡，但是在地塞米松处理下促进MM.1S细胞存活。

日益增多的证据已经显示骨髓瘤肿瘤床中的骨髓基质细胞(BMSC)提供肿瘤诱发微环境并且保护MM细胞免受化学疗法药物诱导的凋亡(De Raeve HR，Vanderkerken K.The role of the bone marrowmicroenvironment in multiple myeloma.Histol Histopathol.2005；20(4)：1227-1250；Mitsiades CS，McMillin DW，Klippel S，等The role ofthe bone marrow microenvironment in the pathophysiology of myelomaand its significance in the development of more effective therapies.Hematol Oncol Clin North Am.2007；21(6)：1007-1034，vii-viii)。因此，还测试了来自MM患者骨髓的BMSC是否能够保护MM细胞免受化合物A诱导的细胞凋亡。为此目的，将自MM患者分离的BMSC与MM细胞系ARP1、MM.1和MM.1R共同培养。将细胞用或未用10μM化合物A处理24小时。作为阳性对照，将MM.1S细胞用或未用BMSC共同培养并且用或未用40μg/ml地塞米松处理24小时。处理后，通过APC-CD138染色将MM细胞鉴别为CD138+细胞。如图2B中所示，BMSC不能保护MM细胞免受化合物A诱导的凋亡，但是保护MM.1S细胞免受地塞米松诱导的细胞凋亡。

图2说明

(A).将MM细胞系ARP1、MM.1和MM.1R用10μM化合物A培养3天。加入rhIL-6至5ng/ml的最终浓度。作为阳性对照，将MM.1S细胞在5ng/mL rhIL6存在下用40μg/ml地塞米松处理相同的时间。通过膜联蛋白V染色来测量细胞凋亡速率。(B).将相同的MM细胞用或不用MM BMSC共同培养，并用10μM化合物A处理1天。作为阳性对照，将MM.1S细胞用或不用BMSC共同培养并用40μg/ml地塞米松处理1天。CD138+MM通过膜联蛋白V染色来测量细胞凋亡速率。

化合物A引起细胞周期在G1期停滞

为研究化合物A诱导的MM细胞生长抑制和凋亡的机理，检验化合物A处理是否影响MM细胞周期。如图3A中所示，ARP1细胞用或不用1μM化合物A培养24小时。化合物A处理导致G1期细胞增加和S期细胞减少。在其它MM细胞系MM.1S和MM.1R中观察到类似发现(图3B)。

图3说明

(A).用1μM化合物A处理1天的ARP1的代表性直方图。(B).用1μM化合物A处理1天的MM细胞ARP1、MM.1S和MM.1R。按描述测试细胞周期。

化合物A通过胱天蛋白酶活化触发MM细胞凋亡

为阐明化合物A诱导的MM细胞凋亡，将用或不用化合物A处理24小时的MM细胞系ARP1、MM.1S和MM.1R通过蛋白质印迹分析来评价。结果显示了胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9的裂解(图4A)。

还在化合物A处理后在所有测试的细胞系中检测PARA裂解。总的来说，这些发现表明化合物A处理通过胱天蛋白酶活化诱导MM细胞凋亡。

化合物A暴露引起BimS的上调和XIAP的下调

为进一步分析受MM细胞中化合物A暴露影响的信号传导通路，将免疫印迹扩展到其它细胞信号传导分子。首先，测试化合物A对MM细胞中PI3K-Akt-mTOR通路的抑制作用。如图4B中所示，Thr473和Ser308的p-Akt在化合物A处理后均下调。在化合物A处理后ARP1和MM.1R细胞中的总Akt水平也降低(图4C)。这可能是由于化合物A处理后凋亡细胞增加。化合物A处理后测试的MM细胞系中的p-P70S6K水平也降低，而总P70S6K表达保持不变。该发现表明化合物A抑制MM细胞中的PI3K-Akt-mTOR通路。

其次，由于化合物A处理引起细胞周期在G1期停滞，测试细胞周期调控子的表达。如图4B中所示，在化合物A处理后细胞周期阻抑子p27(Kip1)蛋白表达上调，而细胞周期蛋白D1表达下调。

然后，测试凋亡调控因子的表达。我们的数据显示化合物A处理后细胞毒性Bim的小的同种型BimS表达上调。Bim是属于Bcl-2家族的促凋亡因子(O′Connor L，Strasser A，O′Reilly LA，等Bim：anovel member of the Bcl-2 family that promotes apoptosis.EMBO J.1998；17(2)：384-395)。Bim有通过选择性剪接生成的三种主要同种型BimEL、BimL和BimS。最短的形式BimS是细胞毒性最强的同种型(Weber A，Paschen SA，Heger K，等BimS-induced apoptosis requiresmitochondrial localization but not interaction with anti-apoptotic Bcl-2proteins.J Cell Biol.2007；177(4)：625-636)。之前的工作已经显示Bim的转录受PI3K的下游效应子叉头转录因子FKHR-L1调控(Dijkers PF，Medema RH，Lammers JW，Koenderman L，Coffer PJ.Expression of thepro-apoptotic Bcl-2 family member Bim is regulated by the forkheadtranscription factor FKHR-L1.Curr Biol.2000；10(19)：1201-1204)。除Bim以外，XIAP和Bcl-XL(均为抗细胞凋亡蛋白)在化合物A处理后表达下调(Deveraux QL，Roy N，Stennicke HR，等IAPs block apoptoticevents induced by caspase-8 and cytochrome c by direct inhibition ofdistinct caspases.EMBO J.1998；17(8)：2215-2223；Minn AJ，Kettlun CS，Liang H，等Bcl-xL regulates apoptosis by heterodimerization-dependentand-independent mechanisms.EMBO J.1999；18(3)：632-643)。因此，化合物A诱导的MM细胞凋亡可能由细胞毒性Bim的上调和抗细胞凋亡XIAP和Bcl-XL的下调引起。

图4说明

(A).将MM细胞ARP1、MM.1S和MM.1R用或不用10μM化合物A处理1天。显示了化合物A诱导的胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-9和PARP的活化和裂解。(B).将用10μM化合物A处理的相同的MM细胞溶解，用于蛋白质印迹。(C)将RP1细胞用10μM化合物A处理1、6、12和24小时。

化合物A和地塞米松组合处理对MM细胞的协同细胞毒性

为测试化合物A是否与其它MM化学治疗剂具有协同/叠加作用，用化合物A与美法仑、地塞米松、来那度胺和硼替佐米组合处理ARP1细胞。如图5A中所示，在ARP1细胞中化合物A和地塞米松组合处理具有协同/叠加细胞毒性。然后，将实验扩展到其它MM细胞系，并将其用低剂量化合物A(1μM)和地塞米松(40μg/ml)处理。如图5B中所示，尽管单独的低剂量化合物A或地塞米松的细胞毒性作用有限，但是组合的双重药物处理在地塞米松敏感的细胞系ARP1和MM.1S中诱导显著的细胞凋亡，但是在地塞米松耐受性细胞MM.1R中不会诱导显著的细胞凋亡。细胞生长测试还显示化合物A和地塞米松协同抑制MM.1S细胞生长(图5C)。

为检验最小剂量的各种药物的协同作用，将MM.1S细胞用不同剂量的化合物A和地塞米松处理24小时。如图5D中所示，1μM化合物A是协同作用必需的，而低至40ng/ml地塞米松足以协同刺激细胞凋亡。增加的地塞米松剂量不会增加细胞死亡率。

为阐明化合物A和地塞米松在对MM.1S细胞的协同作用中的作用，依次用药物处理细胞。具体来说，第一天用地塞米松处理MM.1S细胞，第二天变换为化合物A处理，或者相反。第二天后测量细胞凋亡速率。如图5E中所示，在地塞米松之后用化合物A处理导致比任何其它处理方式更高的凋亡速率。

最后，通过免疫印迹测试协同作用。如图5F中所示，化合物A和地塞米松共同处理导致PARP裂解、Bcl-2裂解和胱天蛋白酶3活化增加。这些发现表明在双重药物处理后凋亡增加。在组合处理中BimS表达上调，这可能是协同作用的原因。总之，这些发现表明化合物A和地塞米松的组合在地塞米松敏感的MM细胞中具有协同细胞毒性。

图5说明

(A).将ARP1细胞用10μM化合物A(BK)、15nM美法仑(Me)、40μg/ml地塞米松(De)、100μM来那度胺(Le)、10μM硼替佐米(BT)或其组合处理1天。按描述测量细胞凋亡。(B).将MM细胞ARP1、MM.1S和MM.1R用1μM化合物A、40μg/ml地塞米松或其组合处理1天。测量细胞凋亡。(C).将相同的MM细胞系用化合物A处理1天并通过MTS测量细胞生长。(D).将MM.1S细胞用不同剂量的化合物A(10nM、100nM和1000nM)、地塞米松(40ng/ml、400ng/ml和4000ng/ml)或其组合处理1天。通过膜联蛋白V染色测量细胞凋亡。(E).将MM.1S细胞用1μM化合物A或4μg/ml地塞米松处理1天。然后将细胞用PBS洗涤一次并且变换为含有1μM化合物A或4μg/ml地塞米松的第二条件培养基再处理24小时。通过膜联蛋白V染色测量细胞凋亡速率。(F).MM.1S细胞用地塞米松(4ug/ml)、化合物A(1μM)或两者处理24小时。

化合物A对建立的MM的体内作用

为检验化合物A的体内抗MM作用，如材料和方法中所述建立SCID小鼠中的人MM模型。当形成可触摸的肿瘤(直径≥5mm)时，小鼠(10只/组)每日接受腹腔内注射化合物A(5μmol/kg/天)或媒介物对照PBS。如图6A和6B中所示，接受化合物A处理的小鼠的肿瘤负荷与对照小鼠相比显著更小，这是通过肿瘤体积(图6A，P＜0.05)和循环人κ链的水平(图6B，P＜0.05)来测量的。此外，化合物A处理显著地延长了荷瘤小鼠的存活(图6C)。因此，这些数据展示化合物A在体内的抗MM能力。

图6说明

在SCID小鼠右侧皮下接种1X10⁶个ARP1细胞。3至4周后，当形成可触摸的肿瘤(直径≥5mm)时，用每日腹腔内注射PBS或化合物A(100nmol/小鼠/天)来治疗小鼠(10只/组)。肿瘤负荷测量为(A)肿瘤体积和(B)通过ELSA检测的SCID小鼠血清中循环人κ链的水平，以及(C)荷瘤小鼠的存活率。

讨论

多发性骨髓瘤(MM)仍然是不治之症，生存中值仅为约5年(Kumar SK，Rajkumar SV，Dispenzieri A，等Improved survival inmultiple myeloma and the impact of novel therapies.Blood.2008；111(5)：2516-2520)。因此，在MM治疗中需要新的治疗剂。已经报道了MM中PI3K-Akt通路的过度激活(Pene F，Claessens YE，Muller O，等Role of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt and mTOR/P70S6-kinasepathways in the proliferation and apoptosis in multiple myeloma.Oncogene.2002；21(43)：6587-6597)。MM中的两种主要的生长因子IGF-1和IL6通过激活PI3K-Akt通路来促进骨髓瘤细胞增殖和耐药性(Hideshima T，Nakamura N，Chauhan D，Anderson KC.Biologicsequelae of interleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling in multiplemyeloma.Oncogene.2001；20(42)：5991-6000；Mitsiades CS，MitsiadesNS，McMullan CJ，等Inhibition of the insulin-like growth factorreceptor-1 tyrosine kinase activity as a therapeutic strategy for multiplemyeloma，other hematologic malignancies，and solid tumors.Cancer Cell.2004；5(3)：221-230)。一组PI3K-Akt-mTOR通路抑制剂已经显示在体外和体内均表现出抗MM活性(McMillin DW，Ooi M，Delmore J，等Antimyeloma activity of the orally bioavailable dual phosphatidylinositol3-kinase/mammalian target of rapamycin inhibitor NVP-BEZ235.CancerRes.2009；69(14)：5835-5842；Ikeda H，Hideshima T，Fulciniti M，等PI3K/p 110{delta}is a novel therapeutic target in multiple myeloma.Blood；Cirstea D，Hideshima T，Rodig S，等Dual inhibition ofakt/mammalian target of rapamycin pathway by nanoparticlealbumin-bound-rapamycin and perifosine induces antitumor activity inmultiple myeloma.Mol Cancer Ther；9(4)：963-975)。因此，PI3K-Akt-mTOR通路靶向治疗是有前景的治疗MM的方法。

在该研究中，已经展示了化合物A、泛-PI3K抑制剂的抗MM活性。化合物A处理在所有测试的MM细胞系和原代MM细胞中以剂量依赖性方式导致细胞生长抑制和凋亡诱导(图1A、1B、1C、1D和2A)。化合物A对于正常PBMC或非恶性BMSC仅有有限的细胞毒性(图1C，1E)。此外，化合物A在SCID小鼠中的MM模型中显示体内抗MM活性。化合物A处理的患有MM的小鼠的肿瘤生长受抑制并且存活延长(图6A、6B和6C)。重要的是，化合物A诱导的MM细胞毒性克服了由BMSC或IL-6的存在提供的耐药性(图2A、2B)。之前的研究已经显示，MM骨髓中的BMSC在MM耐药性中起关键作用(Epstein J，Yaccoby S.Consequences of interactions between thebone marrow stroma and myeloma.Hematol J.2003；4(5)：310-314；Dalton WS.Drug resistance and drug development in multiple myeloma.Semin Oncol.2002；29(6增刊17)：21-25)。BMSC介导的耐药性的一种机理是BMSC分泌药物耐受因子IL-6并且保护MM细胞免受化学疗法诱导的凋亡(Hideshima T，Nakamura N，Chauhan D，Anderson KC.Biologic sequelae of interleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling inmultiple myeloma.Oncogene.2001；20(42)：5991-6000)。因此，MM患者通常在治疗期间产生对常规化学治疗剂的药物耐受性并且具有对药物更耐受的复发肿瘤(Kastritis E，Palumbo A，Dimopoulos MA.Treatment of relapsed/refractory multiple myeloma.Semin Hematol.2009；46(2)：143-157)。因此，这些发现表明化合物A具有强效的抗MM活性并且有益于耐受常规化学疗法药物的那些MM患者。

已经在不同癌细胞模型中研究了PI3K-Akt-mTOR通路的信号转导和下游效应子。一般而言，PI3K-Akt抑制导致细胞周期停滞、细胞生长抑制和凋亡(Sasaki T，Takasuga S，Sasaki J，等Mammalianphosphoinositide kinases and phosphatases.Prog Lipid Res.2009；48(6)：307-343；Di Paolo G，De Camilli P.Phosphoinositides in cellregulation and membrane dynamics.Nature.2006；443(7112)：651-657)。

在公开的实验中，已经展示了化合物A对MM细胞系中的PI3K-Akt-mTOR通路的抑制作用(图3B和3C)。化合物A通过p27(Kip1)的上调和细胞周期蛋白D1的下调引起MM细胞在细胞周期G1期停滞(图3A、3B和4B)。此外，化合物A暴露导致细胞凋亡BimS表达的上调和抗细胞凋亡XIAP表达的下调，两者均可引起MM细胞凋亡。

这些发现表明了化合物A和地塞米松的组合的协同抗MM活性(图5A、5B)。该协同作用仅在地塞米松敏感的细胞中存在，但在地塞米松耐受性细胞中不存在。更重要的是，即使用低剂量的各药物，化合物A和地塞米松的组合仍然表现出协同作用(图5B、5D)。此外，与仅用地塞米松或化合物A处理相比，地塞米松暴露后化合物A处理的组合也显示增强的抗MM活性(图5E)。地塞米松在MM治疗中广泛使用，单独使用或与其它化学治疗药物一起使用(Ludwig H，Beksac M，Blade J，等Current multiple myeloma treatment strategieswith novel agents：a European perspective.Oncologist；15(1)：6-25)。地塞米松使用的原则是给予得到良好应答以及将副作用降至最低所必需的最小剂量。因此，这些发现展示化合物A和地塞米松组合治疗是治疗MM的有效且低毒性的方法。正在进行地塞米松治疗的MM患者在变换为化合物A后也会受益。这些发现展示用相对低剂量的化合物A和地塞米松的组合治疗是治疗MM的有用的方法。

总之，本公开展示化合物A的体外和体内抗MM活性。化合物A单独或与其它MM化学治疗剂(尤其是地塞米松)一起，是对MM的有效治疗。

Claims

1.一种治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，其包括向所述受试者施用一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及一定量的(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物，从而治疗所述受试者。

2.一种治疗受试者多发性骨髓瘤的方法，其包括向所述受试者施用一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺以及一定量的(2)地塞米松，从而治疗所述受试者。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述治疗包括共施用所述量的(1)和所述量的(2)。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述量的(1)和所述量的(2)在单一制剂或单位剂型中。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述量的(1)和所述量的(2)在单独制剂或单位剂型中。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述治疗包括基本上同时施用所述量的(1)和所述量的(2)。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述治疗包括在不同时间施用所述量的(1)和所述量的(2)。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述量的(1)和/或所述量的(2)以当(1)和(2)的一者或两者单独施用时将无效的剂量施用，但所述量在组合时有效。

9.一种药物制剂，其包含一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺和/或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，以及一定量的(2)地塞米松和/或其药学上可接受的盐、溶剂化物、代谢物或外消旋物，其中所述组合量的(1)和(2)对多发性骨髓瘤的治疗有效。

10.一种药物制剂，其包含一定量的(1)5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺，以及一定量的(2)地塞米松，其中所述组合量的(1)和(2)对多发性骨髓瘤的治疗有效。

11.根据权利要求9或10所述的药物制剂，其中所述量的(1)和所述量的(2)在单一制剂或单位剂型中。

12.根据权利要求9或10所述的药物制剂，其中所述制剂或单位剂型为口服制剂或单位剂型。

13.根据权利要求9或10所述的药物制剂，其中所述量的(1)和/或所述量的(2)当(1)和(2)的一者或两者单独施用时将无效，但所述量在组合时有效。

14.一种组合物，其包含5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺以及地塞米松。

15.一种组合治疗，其包括用于治疗多发性骨髓瘤的5-(2，6-二-吗啉-4-基-嘧啶-4-基)-4-三氟甲基-吡啶-2-基胺以及地塞米松。