CN1032842C - 角膜保护质的制取方法 - Google Patents

Abstract

本发明与医学领域有关。角膜保护质的制取方法包括：将甲基纤维溶解于0.85%氯化钠水溶液与pH值7.2-7.4的缓冲溶液的混和液中，配制出0.7-0.8%甲基纤维溶液，经离心分离而滗出上层溶液，经过滤除去粒径大于0.4微米的部分甲基纤维。角膜保护质可供眼科诊疗所摘除各种病因的白内障、注射人造晶体和做角膜成型术时使用。

Description

角膜保护质的制取方法

本发明与医学有关，说得准确些，是有关角膜保护质的制取方法，这种保护质可供眼科诊疗室剥除各种病因引起的白内障、注射人工角膜整形时使用。

目前，角膜保护质采用的是一些粘稠物质，纤维素的衍生物—甲基纤维素是这些粘稠物质中的一种。

角膜保护质的制取方法已是人所共知的(《英国眼科学杂志》，1983，67，259-263)，这种保护质乃是溶解在0.85％氯化钠水溶液或Ringer氏溶液中的不加防腐剂的2％甲基纤维素溶液。其制取的方法是：将甲基纤维素溶解在沸腾溶剂中，制得的溶液使之冷却，加入冰冷溶剂，将所得之溶液冰冻，在零下10°至0℃的温度下存放1夜。后将溶液过滤(滤孔尺寸自16-0.5微米)，分量包装，灭菌消毒。按上述方法制提的保护质，特点是甲基纤维素溶液浓度高，因而在手术之后难以从眼中取出，致使长时间的过度紧张(24小时以上)，引发虹膜睫状体炎，就象残余药物长时间(6昼夜以上)驻留在眼前房所引起的后果，因而必须在手术之后洗净。

此外，上述保护质的粒子尺寸大于生理毛细孔的尺寸(0.67微米)，所以很难通过自然途径排出。

本发明的基础是从质和量两方面改变保护质的主要成分而制取可以减轻角膜损伤，减少手术中和手术后麻烦，并能通过自然途径迅速排出眼外的角膜保护质。

解决这个问题的办法是，按照本发明提出的包括纤维素衍生物溶液制备及其过滤在内的角膜保护质制取方法，纤维素的衍生物采用甲基纤维，用0.85％氯化钠水溶液和pH值7.2-7.4缓冲溶液的混和液制备0.7-0.8％甲基纤维溶液，将制得的甲基纤维溶液经离心作用而分离出上层溶液，上层溶液经过滤而分离出含粒径不大于0.4微米的甲基纤维的馏分。

按照所提出的方法制得的保护质，其甲基纤维素(甲基纤维)衍生物的浓度低于已知的保护质，因而它在手术之后可迅速排出眼外。此外，其粒径(不大于0.4微米)小于生理毛细孔的尺寸，也有助于自然过滤，并通过自然途径迅速排出眼外。利用所提出的保护质可以减轻角膜损伤，减少手术中和手术后的麻烦。

所提出的保护质作过动物试验和人体临床试验。

此种保护质的主要成份是纤维素衍生物—甲基纤维。纤维素醚和纤维素酯做过详细的毒理学研究，并已广泛应用于制药实践。所提出的保护质在假定的临床应用条件下对眼组织的可能影响作了研究，以确定它的毒物卫生学特性数据。同时，这种保护质的局部影响和致免疫性应予特别注意，因为它可能以无毒剂量出现。

根据以眼内使用的聚合材料毒物卫生学条例制定标准为基础的大纲作了一些试验研究。

用25只兔进行研究(其中的5只供检验使用)。分9组进行实验。

所提出的保护质经指标(pH值，可溴化性和红外线傅立叶光谱)测定证明，此种保护质没有毒性。它具有氧化度提高不多的特点，这与此种药物的理化性能有关，它在眼前房短暂驻留和接着就冲洗干净的条件下，不可能引起中毒作用。

“活细胞”检测结果：所提出的保护质对公牛精液细胞的新陈代谢没有影响，证明没有毒性。试验中的细胞存活时间与校核的没有差别。

在3只家兔身上滴注未经稀释的该种保护质，1日3次，每次1滴，连滴3天，这与一次用药三研究的要求相应。没有发生炎症反应或任何刺激征兆。不注入结膜囊(Me-wok)和上巩膜血管，结膜仍然稳定。角膜透明，晶亮，光滑如境，前房较深的部分无变化。

家兔眼晴作了活体显微镜检查。研究了7只家兔的12只眼睛。

研究期限：1小时，1昼夜，2昼夜，3昼夜，7天，1个月。

活体显微镜检查图片根据我们制定的反应程度分级法进行评估：

0级—无反应：视力稳定，介质透明，虹膜明显可见，植入片无

     损；

I级—轻度反应：前房区角膜上皮流痕，植入片上有纤维素或

     沉积物，水肿，虹膜瞳孔四周充血或整个虹膜轻度发

     炎；

II级—中度反应：一半角膜上皮流痕，后弹性层少数皱纹，前

      房润湿液中有纤维朊，晶体中有渗出物，明显的水肿，

      虹膜血管扩张；

III级—重度反应：整个角膜流痕，基质增厚，后弹性层粗糙(炎

       症)，渗出物，眼前房积脓，前房有[Mφma，植入片上有

       明显的渗出现象，虹膜粘连直至“焊住”，虹膜上有渗出

       物，新生血管。

在无一例外的一切情况下，从活体显微镜检查图片上看，角膜包括内皮、前房润湿液(房水)和虹膜在内无反应，这充分说明本品进入前房的剂量为0.1毫升时是没有毒性的，这个剂量正好是临床应用时的剂量。

斯莫林法镀银后，用我们前面制定的分级法对角膜内皮进行了研究：

1-2级—细胞染色不均匀，形状、尺寸和排列完好，存在区域性损伤，中心和周缘细胞密度完好，细胞间结合状况—这些参数的变化面达到50％。

3-4级—类坏死细胞粗损伤(细胞质渗透性剧烈提高，细胞质扩散染色，组织破坏)和坏死(起皱，解体，细胞核消散和整个细胞的分解)，面积在20％以上，或者是1-2级面积在50％以上。

在所有被研究的情况下，在检验中有低于1级的反应，在包括1个月的所有期限的试验中，显示1-2级的反应，面积低于15％的细胞，这证明本品根据此检测并无毒性。

对4只试验眼晴和4只检验眼睛作了病理组织学研究，期限是2、3和7天。检验采用缓冲溶液和亨克斯溶液。

所有的试验期限内，眼睛状况均相同。除了注射保护质的注射针刺破的地方之外，没有发现角膜和虹膜有任何破损现象。前房润湿液仍是透明的，早期嗜伊红血球比检验时增加更多。深层介质也是透明的，脉络膜、视网膜和视神经均无变化。对所提出的保护质免疫能力的研究得出否定的结果。

因此，总体和局部损伤作用及免疫力方面的研究证明，在眼球前半部分作眼外科手术时，此种保护质不起化学作用，可以短时间使用。

万余名患者在眼科诊疗所做各种病因白内障剥除，注射人工晶体和角膜成形手术时，对此种保护质进行了临床研究。

所提出的保护质按如下方式使用。

在剥除白内障时，在根部巩膜(KopHeockлepaлb)作一3毫米的切口，放出眼前房液。然后用注射器向前房注入粒径不大于0.4微米的0.7-0.8％甲基纤维溶液。用膀胱刀剖开前晶囊，然后取出晶核，排出晶体。前房中的保护质不予抽出。缝合根部巩膜的切口。

在术前角膜软化时，先在眼睛角膜中心区滴涂粒径不大于0.5微米的0.7-0.8％甲基纤维溶液，然后进行手术。

临床研究表明，手术中和手术后的任何时间(24小时到6昼夜)里，患者眼内压均未发现升高，未有麻烦发生。

所提出的角膜保护质制取方法实施如下。

甲基纤维溶解于0.85％氯化钠溶液和pH值7.2-7.4的缓冲溶液的混合液中，配制出0.7-0.8％的甲基纤维溶液。甲基纤维的浓度不可低于0.7，因为低于0.7时，溶液的溶液将低于1000厘沲，从而在眼内手术过程中失去机械深入前房的可能性。浓度值高于0.8％，可引起溶液粘度增大和眼内压升高。

缓冲溶液的pH值在7.2-7.4时，对保持人眼前房正常的缓冲系统和内皮发挥作用而言是至关重要的。pH值低于7.2，会引起房水过酸和内皮酸中毒，pH值高于7.4，则会引起碱中毒和细胞新陈代谢的变化。甲基纤维的溶解和以后的一切操作均在4℃温度下进行。因为温度再高会降低保护质的质量。甲基纤维溶解24小时之后补加搅拌，时间不少于10分钟，以使全部物料转化到溶解状态。然后将溶液离心分离，以使甲基纤维的粗粒沉淀下去。离心分离之后，将上层溶液倒出，并加以搅拌，以使全部溶液的粒料浓度均匀。搅拌时间不少于1小时。此后使溶液经滤膜连续过滤，波膜孔径不大于0.4微米，因为大于0.4微米的粒子将会导致眼前房施莱姆氏管的阻塞。制成的溶液进行消毒灭菌处理。为了更好地理解本发明，下面举几个此种保护质制取方法及其临床试验的例子。

例1

取0.85％氯化钠水溶液和pH值7.2-7.4磷酸缓冲溶液的混和液100毫升，加入1克甲基纤维干粉。在温度为+4℃的冰箱中溶解24小时，之后将甲基纤维溶液搅拌1小时，使之浓缩到0.7％(重量)的浓度。制得的甲基纤维溶液放到离心机中离心分离1小时，转速28000转/分。在温度+4℃的寒冷状态下，将上层溶液倒出，搅拌10-15分钟。将甲基纤维溶液收到注射器中，并经孔径0.4微米的滤膜过滤。

制得的保护质作过临床试验。

患者A，34岁，因左眼久患白内障而求医，他在手术前视觉清晰，视觉反应正常。他做了植入内镜的白内障外囊剥除手术。角膜保护质是粒径0.2-0.4微米的0.7％甲基纤维溶液。手术后的视觉清晰度为0.7。没有出现手术中和手术后的麻烦。

例2

取0.85％氯化钠水溶液和pH值7.2-7.4磷酸缓冲液的混和液100毫升，加入1克甲基纤维干粉。在温度为+4℃的冰箱中溶解24小时，之后将甲基纤维溶液搅拌1小时，使之浓缩到0.75％(重量)的浓度。制得的甲基纤维溶液放到离心机中离心分离1小时，转速28000转/分。然后将上层甲基纤维溶液倒出，在冷态(4℃)下，搅拌10-15分钟。制得的甲基纤维溶液收入注射器中，并经孔径0.4微米的滤膜过滤。

制得的保护质作过临床试验。

患者ш，60岁，因久患不断加剧的白内障(右眼)而求医，他在手术前视觉清晰度即视觉反应正常。他做了植入内镜的白内障外囊剥除手术。角膜保护质是粒径0.2-0.4微米的0.75％甲基纤维溶液。保护质留在前房内。手术后的右眼视觉内清晰度为0.5。未有手术中和手术后的麻烦发生。

例3

取0.85％氯化钠水溶液和pH值7.2-7.4磷酸缓冲溶液的混和液100毫升，加入1克甲基纤维干粉。甲基纤维在冰箱(温度4℃)中溶解24小时后，所得的甲基纤维溶液搅拌1小时，使之浓缩到0.8％(重量)的浓度。制得的甲基纤维溶液放到离心机中离心分离1小时，转速28000转/分。然后在冷态(4℃)下将上层溶液倒出，搅拌10-15分钟。将甲基纤维溶液收到注射器中，并经孔径0.4微米的滤膜过滤。

制成的保护质做过临床试验。

患者B，59岁，因左眼久患加剧白内障而求医，其视觉清晰度即光感反应正常。他做了植入内镜的白内障外囊剥除手术。角膜保护质是粒径0.2-0.4微米的0.8％甲基纤维溶液。保护质留在前房中。左眼手术之后的视觉清晰度为0.2。未有手术中和手术之后的麻烦发生。

Claims (1)

1.包括纤维素衍生物溶液的配制及其过滤在内的角膜保护质制取方法，其特征在于采用甲基纤维作为纤维素的衍生物，将甲基纤维溶解于0.85％氯化钠水溶液与pH值7.2-7.4的缓冲溶液的混和液中而配制出0.7-0.8％甲基纤维溶液，制得的甲基纤维溶液进行离心分离而滗出上层溶液，将其过滤，以除去粒径大于0.4微米的那部分甲基纤维。