CN103283588A - 一种薄皮甜瓜四倍体诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种薄皮甜瓜四倍体诱导方法,包括选用二倍体薄皮甜瓜品种作为诱导材料,在薄皮甜瓜子叶展平期,生长点上放置脱脂棉球,选用浓度为30-40μmol/L的胺磺灵处理,每天上午8-9时,下午5-6时,各滴定一次,每次2ml,连续处理7d;再进行倍性鉴定。本发明利用胺磺灵替代秋水仙素,使操作者受到的毒害减少,诱导成本降低,诱导效率提高。用该方法获得的薄皮甜瓜四倍体,与二倍体相比,在根茎叶等营养器官及花器官、果实等生殖器官表现出巨大性,果实果肉变厚,耐贮运性提高,果实含糖量提高,品质提升。
Description
技术领域
本发明涉及一种薄皮甜瓜四倍体诱导方法,属于植物育种技术领域。
背景技术
三倍体无籽甜瓜是通过二倍体和四倍体杂交获得的。为了获得优良的三倍体无籽甜瓜,通过二倍体甜瓜诱导加倍获得四倍体材料是关键。目前四倍体甜瓜的诱导剂主要是秋水仙素,而秋水仙素对人畜有毒,滴入土壤中会污染环境,秋水仙素造价较高,提高了诱导成本,而且四倍体诱导率较低(≤5%)。
胺磺灵是近年来应用较多的染色体加倍剂,目前在西瓜(阎志红 等,2008)、黄瓜(韩毅科 等,2006)、芒草(Karen et al.,2003)、海芋(Nguyen et al.,2003)都成功诱导加倍。胺磺灵与秋水仙素相比,毒性小,价格低廉,成本比秋水仙素低,且诱导效果好,成功率高,是替代秋水仙素诱导四倍体的有效药剂。
截止到目前为止,还尚无利用胺磺灵诱导薄皮甜瓜四倍体的发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以安全、高效诱导薄皮甜瓜四倍体的薄皮甜瓜四倍体诱导方法。
本发明的技术解决方案是:
一种薄皮甜瓜四倍体诱导方法,其特征是:包括下列步骤:
(1)诱导处理:选用二倍体薄皮甜瓜品种作为诱导材料,在薄皮甜瓜子叶展平期,生长点上放置脱脂棉球,选用浓度为30-40 μmol/L的胺磺灵处理,每天上午8-9时,下午5-6时,各滴定一次,每次2ml,连续处理7d;
(2)倍性鉴定:早期通过观察真叶下表皮气孔保卫细胞内叶绿体数目初步判定多倍体,排除二倍体,初步鉴定的多倍体群体通过观察种子根尖染色体数目确定四倍体。
步骤(2)的具体步骤是:将处理植株真叶放置于载玻片,用镊子取真叶下表皮,滴1-2滴KI-I2,盖上盖玻片,在显微镜下观察气孔保卫细胞内的叶绿体数目,一对保卫细胞内叶绿体数目多于15个初步判断为多倍体。将多倍体严格自交授粉,收获种子后,催芽,取根尖1-2cm作为观察材料,先用0.002mol/L 8-羟基喹啉预处理90min,转入卡诺固定液,18℃黑暗条件下固定24h,冲洗后转入70%乙醇中,放在4℃冰箱中保存备用;观察时将根尖转入1mol/L HCl中,60℃水浴8-10min,冲洗后用卡宝品红染色,在显微镜下观察根尖染色体数目,染色体数目为48的确定为四倍体。
本发明的有益效果是:利用胺磺灵替代秋水仙素,使操作者受到的毒害减少,诱导成本降低,诱导效率提高。用该方法获得的薄皮甜瓜四倍体,与二倍体相比,在根茎叶等营养器官及花器官、果实等生殖器官表现出巨大性,果实果肉变厚,耐贮运性提高,果实含糖量提高,品质提升。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1为胺磺灵滴定薄皮甜瓜幼苗生长点示意图;
图2为四倍体薄皮甜瓜根尖染色体鉴定图。
具体实施方式
一种薄皮甜瓜四倍体诱导方法,包括下列步骤:
(1)诱导处理:选用常规二倍体薄皮甜瓜品种作为诱导材料,按照常规方法浸种催芽,播于穴盘内,待幼苗长至子叶平展期,在幼苗生长点上放一粒脱脂棉球,用5ml注射器在脱脂棉球上滴2ml浓度30-40 μmol/L 的胺磺灵,每天上午8-9时,下午5-6时,各滴定一次,连续处理7d。药剂处理期间注意遮荫,在处理群体上覆盖遮阳网,防治药剂挥发。处理完毕后将棉球取下,用清水浇淋,洗去处理液。
(2)倍性鉴定:将处理植株真叶放置于载玻片,用镊子取真叶下表皮,滴1-2滴KI-I2,盖上盖玻片,在显微镜下观察气孔保卫细胞内的叶绿体数目,一对保卫细胞内叶绿体数目多于15个初步判断为多倍体。将多倍体严格自交授粉,收获种子后,催芽,取根尖1-2cm作为观察材料,先用0.002mol/L 8-羟基喹啉预处理90min,转入卡诺固定液(乙醇:冰醋酸=3:1,体积比),18℃黑暗条件下固定24h,冲洗后转入70%乙醇中,放在4℃冰箱中保存备用,观察时将根尖转入1mol/L HCl中,60℃水浴8-10min,冲洗后用卡宝品红染色,在显微镜下观察根尖染色体数目,染色体数目为48的确定为四倍体。
Claims (2)
1.一种薄皮甜瓜四倍体诱导方法,其特征是:包括下列步骤:
(1)诱导处理:选用二倍体薄皮甜瓜品种作为诱导材料,在薄皮甜瓜子叶展平期,生长点上放置脱脂棉球,选用浓度为30-40 μmol/L的胺磺灵处理,每天上午8-9时,下午5-6时,各滴定一次,每次2ml,连续处理7d;
(2)倍性鉴定:早期通过观察真叶下表皮气孔保卫细胞内叶绿体数目初步判定多倍体,排除二倍体,初步鉴定的多倍体群体通过观察种子根尖染色体数目确定四倍体。
2.根据权利要求1所述的薄皮甜瓜四倍体诱导方法,其特征是:步骤(2)的具体步骤是:将处理植株真叶放置于载玻片,用镊子取真叶下表皮,滴1-2滴KI-I2,盖上盖玻片,在显微镜下观察气孔保卫细胞内的叶绿体数目,一对保卫细胞内叶绿体数目多于15个初步判断为多倍体。将多倍体严格自交授粉,收获种子后,催芽,取根尖1-2cm作为观察材料,先用0.002mol/L 8-羟基喹啉预处理90min,转入卡诺固定液,18℃黑暗条件下固定24h,冲洗后转入70%乙醇中,放在4℃冰箱中保存备用;观察时将根尖转入1mol/L HCl中,60℃水浴8-10min,冲洗后用卡宝品红染色,在显微镜下观察根尖染色体数目,染色体数目为48的确定为四倍体。
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