CN103257224A - 一种串联多重检测胶体金检测试纸条 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种串联多重检测胶体金试纸条。所属于疾病免疫检测领域，可以在同一试纸条上同时检测多种疾病的试纸条，它通过串联的处理办法来达到预期的效果。在猪、牛、羊、狗、猫、鸡等动物疾病防治市场上有很大的应用价值，较市场上存在的疾病检测试纸条有操作更简便、成本更低等诸多优点。
Description
技术领域
本发明串联多重疾病检测胶体金试纸条是一种可以单次单条检测一种及一种以上微生物、病毒、蛋白等抗原的试剂盒。可应用于生物学、医学等相关领域。
背景技术
胶体金免疫层析技术(Gold immune-chromatography assay，GICA)是一种将胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术等多种方法有机结合在一起的固相标记免疫检测技术。它是以胶体金为标记物，利用特殊的抗原抗体反应和固相膜系统进行免疫检测的一种新技术。它由胶体金标记技术和固相膜免疫测定系统组成。
胶体金标记技术是上世纪发展起来的四大免疫标记技术之一，被广泛应用于电镜、流式、分子生物学甚至是生物芯片中，在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。由于该技术操作简单方便、能在3-10分钟内完成检测，结果直观易懂，且其特异性、灵敏度和稳定性均与酶联免疫吸附法(ELISA)法不相上下，不仅在临床诊断和医学检验中得到广泛使用，更适合开发成方便快捷的临床筛查及家庭自检产品，如早孕试纸、乙肝检测、血糖检测、毒品检测、药物残留、食品安全检测等，具有极大的产业化前景，成为生物技术领域一大开发热点。
与传统的实验室诊断方法，如ELISA法、免疫比浊法、放免法相比，胶体金免疫层析技术具有其独特的优势：
1)操作简单，一步完成，无需专门技术人员操作；
2)检测快速，一般3到10分钟内即可完成检测；
3)结果直观，检测结果无需专业技术人员分析；
4)检测无需依赖仪器，携带方便，产品室温保存，无需冷藏；
5)成本低。
结合上述胶体金技术的特点，我们就可以发现该技术特别适用于犬、猫、牛、羊、猪、鸡等动物养殖疾病防治。
发明内容
将金颗粒标记到能够识别疾病marker的捕获抗体，成为金标抗体，并将金标抗体加到“胶金垫”上。而包被抗体则是能够识别疾病marker的另一表位的抗体，将包被抗体包被固定在T线位置。二抗是指能够识别金标抗体的抗体，将二抗包被固定在C线位置。当将待诊断样品滴加到样品垫上，样品就会沿着层析方向泳动，当经过胶金垫时，疾病marker就会被金标抗体识别并特异性结合，从而一起向前泳动。当经过T线时，就会被固定在此处的包被抗体捕获，从而被留在此处，随着金颗粒的累积从而变色。多余的金标抗体则继续向前泳动，被固定在C线位置的二抗捕获，被留下来，随着金颗粒的积累从而变色。所以当样本中含有疾病marker时，T线、C线都显色。如果样本中没有疾病marker时，则金标抗体不能被留在T线，而全部被C线处的二抗捕获留下来。从而T线不显色，C线显色(图1)。
而如果在T线区包被1种及1种以上的疾病诊断marker抗体，在胶金垫上添加对应的1种或1种以上的疾病诊断marker金标抗体，就能够实现在同一试纸条上同时检测1种或1种以上的疾病(图2)。
串联多重胶体金检测的难点在于抗体的特异性要高，这样才能避免相互干扰，所以要采用双抗抗体夹心法。
串联多重疾病检测相对于传统单一检测的优点
1、操作更简便。一条试纸条可以检测数种疾病，使用范围更广，真正的一物多用，简单明了；
2、更加科学。以往的单一疾病检测试纸条，一次仅能够检测一种疾病。看似更经济实用，但是检测时 往往不知道宠物感染的是哪一种疾病，所以单一疾病检测的试纸条往往要检测几次才能够检出结果，带来很大的浪费。特别是当当宠物同时感染几种疾病时，更能体现出串联多重检测试纸条的优势；
3、更加经济。串联多重疾病检测试纸条将几种疾病检测集成到一条上，省去了试纸条的各种垫和膜。单一疾病检测成本下降。
具体实施方式
将金颗粒标记到能够识别疾病marker的捕获抗体，成为金标抗体，并将金标抗体加到“胶金垫”上。而包被抗体则是能够识别疾病marker的另一表位的抗体，将包被抗体包被固定在T线位置。二抗是指能够识别金标抗体的抗体，将二抗包被固定在C线位置。当将待诊断样品滴加到样品垫上，样品就会沿着层析方向泳动，当经过胶金垫时，疾病marker就会被金标抗体识别并特异性结合，从而一起向前泳动。当经过T线时，就会被固定在此处的包被抗体捕获，从而被留在此处，随着金颗粒的累积从而变色。多余的金标抗体则继续向前泳动，被固定在C线位置的二抗捕获，被留下来，随着金颗粒的积累从而变色。所以当样本中含有疾病marker时，T线、C线都显色。如果样本中没有疾病marker时，则金标抗体不能被留在T线，而全部被C线处的二抗捕获留下来。从而T线不显色，C线显色(图1)。
而如果在T线区包被1种及1种以上的疾病诊断marker抗体，在胶金垫上添加对应的1种或1种以上的疾病诊断marker金标抗体，就能够实现在同一试纸条上同时检测1种或1种以上的疾病(图2)。
串联多重胶体金检测的难点在于抗体的特异性要高，这样才能避免相互干扰，所以要采用双抗抗体夹心法。
图1.胶体金试纸条检测原理示意图
图2.串联多重胶体金检测试纸条工作原理示意图 。
Claims (3)
1.权利要求一：一种串联多重检测微生物、病毒、蛋白等抗原的胶体金试纸条的制作方法，它包括底板、胶体金垫、样品垫、吸水垫、反应膜，其特征在于所述胶体金垫包被有已标记胶体金的用于捕获一种及一种以上待检微生物、病毒、蛋白的抗原(或抗体)；所述反应膜为硝酸纤维素膜(NC膜)，其上固定有一条或者一条以上的检测带(T带)和对照带(C带)，每条所述检测带上包被有能够识别并捕获一种待检微生物、病毒、蛋白等的抗原(或抗体)，对照带上固定有能够捕获金标抗体的抗体(二抗)。
2.权利要求二：基于权利要求一所述制作方法制作的可用于检测犬、猫、鸡、猪、牛、羊等动物可感染的微生物、病毒、蛋白等抗原的试纸条。其特征在于，可被检测的微生物可以是犬、猫、鸡、猪、牛、羊等动物感染的所有病毒及微生物。
3.权利要求三：基于权利要求一所述的方法制作的可用于食品安全检测的试纸条。其特征在于，可被检测的抗原包括细菌、酵母、病毒、食品添加剂等。
Priority Applications (1)
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| CN 201210033957 CN103257224A (zh) | 2012-02-15 | 2012-02-15 | 一种串联多重检测胶体金检测试纸条 |
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| CN 201210033957 CN103257224A (zh) | 2012-02-15 | 2012-02-15 | 一种串联多重检测胶体金检测试纸条 |
Publications (1)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN103954772A (zh) * | 2014-04-30 | 2014-07-30 | 广东海大畜牧兽医研究院有限公司 | 一种猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、伪狂犬病毒抗体的三联金标检测试纸条 |
| CN104237512A (zh) * | 2014-10-23 | 2014-12-24 | 武汉科前生物股份有限公司 | 一种免疫胶体金试纸条及制备方法及应用 |
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| CN104605832A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-05-13 | 房昕 | 一种智能宠物项圈 |
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2012
- 2012-02-15 CN CN 201210033957 patent/CN103257224A/zh active Pending
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Wu Hongqiang Document name: Notification of Passing Preliminary Examination of the Application for Invention |
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130821 |