CN103221824A - 用于在具有低特异性抗体水平的受试者体内检测感染的方法和试剂盒 - Google Patents

用于在具有低特异性抗体水平的受试者体内检测感染的方法和试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及能够检测抗潜伏性感染、慢性感染、再感染、和/或突破性感染的抗体；能够诊断潜伏性感染、慢性感染、再感染、和/或突破性感染；以及提高低抗病毒抗体水平的方法，并且涉及用于检测在低水平下表达的病毒特异性抗体的试剂盒。

Description

用于在具有低特异性抗体水平的受试者体内检测感染的方法和试剂盒
技术领域
本发明涉及能够检测抗潜伏性感染、慢性感染、再感染、和/或突破性感染的抗体；能够诊断潜伏性感染、慢性感染、再感染、和/或突破性感染；以及提高低抗病毒抗体水平的方法，并且涉及用于检测低水平表达的病毒特异性抗体的试剂盒。
背景技术
在某些病原体（包括病毒或逆转录病毒病原体）的慢性感染以后，抵抗病原体的抗体水平太低以致不能进行最终地检测或可能根本无法检测。在一些肺部感染（例如，肺炎和肺结核）中已观测到这种现象，其中病原体定位于将其隐藏以避免免疫系统作用的“包涵体”中，使得抗原刺激太低以致无法保持长期可测量的或可检测到的抗体产生。在逆转录病毒感染的情况下，低抗原刺激可以归因于感染的潜伏期，这时病毒主要保持为前病毒DNA。
在一些情况下，当感染或进入体内以后，存在可测量的体液免疫应答，这并不持续保持感染的整个持续时间。这个问题涉及诊断要求治疗的感染（例如，针对某些类型肺炎的特异性抗生素）以及检测感染（在慢性感染的情况下）。
嗜异性鼠白血病病毒（异嗜性鼠白血病病毒，XMRV）是从小鼠“跳跃”到人体上的病毒。最近它涉及前列腺癌以及潜在地涉及慢性疲劳综合征。在血液中，有时但并非总是检测到该病毒。甚至在目前可用的分子测定的检测限以下的水平，XMRV可以具有感染性。因此，目前可用的分子测试具有非常有限的诊断能力。
最近的研究已经表明，XMRV存在于大约2%-3%健康对照和10%免疫受损患者中。这个事实，与在血液中病毒的间歇性存在相结合，导致对于血液安全的高度关注，因而导致对于开发针对那些受感染者的诊断工具的增加的需要。抗体，诊断的金标准，也是在此的选择工具。然而，虽然在感染不久以后抗体水平上升，从而能够及时检测和诊断，但是它们的水平在几个月之内会下降。因此，任何未来诊断试剂盒的性能受阻于在大多数的感染中在受感染个体中非常低水平的抗XMRV抗体，这看起来是慢性的。
目前仅较小百分比的用XMRV慢性感染的患者在其血液中具有可检测水平的抗体。提高正在开发的测定的分析灵敏度将不会解决诊断问题，因为这也会提高噪声水平，这会阻碍检测的特异性。因此，对于开发基于抗体的测定以便能够检测XMRV和其他逆转录病毒和病原体感染（其中感染具有潜伏期，其中抗体水平低于或正好在检测水平）存在未满足的需要。在此提供的本发明通过提供提高逆转录病毒或病原体特异性抗体水平的方法来解决上述需要，从而增加信号，同时降低噪声并使测定的诊断敏感度达到实用水平，从而可用于诊断和用于引入血库以增加血液安全性。
发明内容
在一种实施方式中，本发明提供了用于在来自患有慢性病毒感染、潜伏性病毒感染、病毒再感染、病毒突破性感染、或它们的组合的受试者的样品中检测病毒特异性抗体的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵化全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而检测病毒特异性抗体的存在。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断受试者体内的慢性病毒感染、潜伏性病毒感染、病毒再感染、病毒突破性感染、或它们的组合的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，其中所述抗原-抗体免疫复合物的检测表明在所述受试者体内的病毒感染。
在另一种实施方式中，本发明提供了将全血样品中低抗病毒抗体水平提高至可检测水平的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而将低抗病毒抗体水平提高至可检测水平。
在一种实施方式中，在此提供的本发明涉及用于检测受试者体内低水平表达的病毒特异性抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体和b)病毒衍生肽。
由以下详细说明实施例和附图，可以清楚本发明的其他特点和优点。然而，应当理解的是这些详细描述和具体实施例（虽然表示本发明的优选实施方式）仅作为举例说明给出，因为本领域技术人员由这种详细描述可以清楚在本发明的精神和范围内的各种变化和改进。
附图说明
结合附图通过阅读以下详细描述，可以更好地理解本发明，其中：
图1示出在患有慢性XMRV感染的受试者体内的抗体浓度，“a”是来自XMRV抗体水平呈边界阳性的受试者的血清/血浆样品，而“b”则是来自XMRV抗体水平低于测定检测限（即，截止值◇）的受试者的样品。正方形和三角形表示来自未处理样品的XMRV抗体水平。星形表明当按照本发明方法使用时样品“a”和“b”的XMRV抗体水平。用活化剂孵育样品将两种样品中XMRV抗体水平提高至远远超过测定的检测水平的截止值，因此能够真阳性地检测/诊断XMRV感染。
具体实施方式
在一种实施方式中，本发明提供了用于在具有低特异性抗体水平的受试者体内检测病毒感染的方法和试剂盒。在一种实施方式中，慢性感染导致降低的特异性抗体水平。在一种实施方式中，潜伏性感染导致降低的特异性抗体水平。
在一种实施方式中，本发明提供了用于检测在来自感染受试者的样品中针对病原体的抗体的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病原体特异性抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而检测针对病原体的抗体的存在。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断受试者体内感染的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病原体特异性抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，其中所述抗原-抗体免疫复合物的检测表示在所述受试者体内的感染。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了将全血样品中低抗病原体抗体水平提高至可检测的或更高水平的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病原体特异性抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而将低抗病原体抗体水平提高至可检测的或更高水平。
在一种实施方式中，本发明提供了用于检测来自感染受试者的样品中针对病原体的抗体的方法，包括以下步骤：a)在包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育来自所述受试者的全血样品；b)将步骤a)产生的培养物暴露于病原体特异性抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及c)检测步骤b)的抗原-抗体免疫复合物，从而检测针对病原体的抗体的存在。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断受试者体内感染的方法，包括以下步骤：a)在包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育来自所述受试者的全血样品；b)将步骤a)产生的培养物暴露于病原体特异性抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及c)检测步骤b)的抗原-抗体免疫复合物，其中所述抗原-抗体免疫复合物的检测表明在所述受试者体内的感染。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了将全血样品中低抗病原体抗体水平提高至可检测的或更高水平的方法，包括以下步骤：a)在包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育来自所述受试者的全血样品；b)将步骤a)产生的培养物暴露于病原体特异性抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及c)检测步骤b)的抗原-抗体免疫复合物，从而将低抗病原体抗体水平提高至可检测的或更高水平。
在一种实施方式中，本发明提供了包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基用于制备用于检测来自患有慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者的全血样品中针对病原体的抗体的组合物的用途。在另一种实施方式中，感染是慢性潜伏性感染。
在一种实施方式中，本发明提供了包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基用于制备用于诊断患有慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者体内感染的组合物的用途。在另一种实施方式中，感染是慢性潜伏性感染。
在一种实施方式中，本发明提供了包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基用于制备用于在患有慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者中将全血样品中的低抗病原体抗体水平提高至可检测的或更高水平的组合物的用途。在另一种实施方式中，感染是慢性潜伏性感染。
在一种实施方式中，本发明提供了包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基用于检测来自患有慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者的全血样品中针对病原体的抗体的用途。在另一种实施方式中，感染是慢性潜伏性感染。
在一种实施方式中，本发明提供了包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基用于诊断患有慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者体内感染的用途。在另一种实施方式中，感染是慢性潜伏性感染。
在一种实施方式中，本发明提供了包含(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基用于在患有慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者中将全血样品中的低抗病原体抗体水平提高至可检测的或更高水平的用途。在另一种实施方式中，感染是慢性潜伏性感染。
在一种实施方式中，上文描述的培养基进一步包含病原体特异性抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物。在另一种实施方式中，培养基进一步包含用于检测抗原-抗体免疫复合物的方式。在一种实施方式中，病原体是病毒。在另一种实施方式中，病原体是逆转录病毒。在另一种实施方式中，病原体是细菌。
在一种实施方式中，病原体、或传染剂，是在其动物或植物宿主中引起疾病的微生物（microbe）或微生物体（microorganism）如病毒、细菌、朊病毒、或真菌。
在一种实施方式中，本发明提供了包括包含用于上文描述的应用的如上文描述的记忆细胞的活化剂的培养基的培养物。在另一种实施方式中，本发明提供了用于上文描述的应用的如上文描述的记忆细胞的活化剂。在另一种实施方式中，本发明提供了如本文描述的培养物或培养基或活化剂、病原体特异性抗原、以及用于检测抗原-抗体免疫复合物的方式，如，在一种实施方式中，ELISA试剂盒或本领域中已知的或本文描述的其他方式。
在一种实施方式中，本发明提供了用于增强受试者体内针对感染的抗体水平的试剂盒，包括用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体和b)病原体衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于检测受试者体内病原体特异性抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体和b)病原体衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断患有慢性感染、潜伏性感染、病原体再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者体内感染的试剂盒，包括用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)病原体衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于将全血样品中的低抗病原体抗体水平提高至可检测水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)病原体衍生肽。
在一种实施方式中，如本文描述的感染是慢性感染。在另一种实施方式中，感染是潜伏性感染。在另一种实施方式中，感染是慢性潜伏性感染。在另一种实施方式中，感染是再感染。在另一种实施方式中，感染是突破性感染。在另一种实施方式中，感染是慢性再感染。在另一种实施方式中，感染是潜在性再感染。在另一种实施方式中，感染是慢性突破性感染。在另一种实施方式中，感染是潜在性突破性感染。在另一种实施方式中，感染是突破性再感染。应当理解的是，来自患有感染（通过感染类型的任何组合）的受试者的血液样品被认为是本发明的一部分。
在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在一种实施方式中，本发明提供了用于检测来自患有病毒感染的受试者的样品中针对病毒的抗体的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含针对所述病毒特异性的记忆细胞和病毒特异性抗体的表达的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而检测病毒特异性抗体的存在。在一种实施方式中，感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断受试者体内病毒感染的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，其中所述抗原-抗体免疫复合物的检测表明在所述受试者体内的病毒感染。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了将全血样品中的低抗病毒抗体水平提高至可检测水平的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而将低抗病毒抗体水平提高至可检测水平。
在一种实施方式中，本发明提供了用于增强来自受试者的针对病毒感染的抗体水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)病毒衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于检测受试者体内病毒特异性抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)病毒衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断患有慢性病毒感染、潜伏性病毒感染、病毒再感染、病毒突破性感染、或它们的组合的受试者体内感染的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)病毒衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于将全血样品中的低抗病毒抗体水平提高至可检测水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)病毒衍生肽。
在一种实施方式中，本发明提供了用于检测来自患有逆转录病毒感染的受试者的样品中针对逆转录病毒的抗体的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)逆转录病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述逆转录病毒特异性的记忆细胞、(iii)逆转录病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于逆转录病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而检测逆转录病毒特异性抗体的存在。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断患有逆转录病毒感染的受试者体内逆转录病毒感染的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)逆转录病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述逆转录病毒特异性的记忆细胞、(iii)逆转录病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于逆转录病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，其中所述抗原-抗体免疫复合物的检测表明在所述受试者体内的逆转录病毒感染。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了将全血样品中的低抗逆转录病毒抗体水平提高至可检测水平的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)逆转录病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述逆转录病毒特异性的记忆细胞、(iii)逆转录病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于逆转录病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而将低抗逆转录病毒抗体水平提高至可检测水平。
在一种实施方式中，本发明提供了用于增强来自受试者的针对逆转录病毒感染的抗体水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自以下组成的组中的全血样品的(i)逆转录病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述逆转录病毒特异性的记忆细胞、(iii)逆转录病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)逆转录病毒衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于检测受试者体内逆转录病毒特异性抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)逆转录病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述逆转录病毒特异性的记忆细胞、(iii)逆转录病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)逆转录病毒衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断患有慢性逆转录病毒感染、潜伏性逆转录病毒感染、逆转录病毒再感染、突破性逆转录病毒感染、或它们的组合的受试者体内感染的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)逆转录病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述逆转录病毒特异性的记忆细胞、(iii)逆转录病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)逆转录病毒衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于将全血样品中的低抗逆转录病毒抗体水平提高至可检测水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)逆转录病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述逆转录病毒特异性的记忆细胞、(iii)逆转录病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)逆转录病毒衍生肽。
在一种实施方式中，本发明提供了用于检测来自患有XMRV感染的受试者的样品中针对嗜异性鼠白血病病毒（异嗜性鼠白血病病毒，XMRV）的抗体的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)XMRV活化的淋巴细胞、(ii)针对XMRV特异性的记忆细胞、(iii)XMRV特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于XMRV抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而检测XMRV特异性抗体的存在。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断患有XMRV感染的受试者体内XMRV感染的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)XMRV活化的淋巴细胞、(ii)针对XMRV特异性的记忆细胞、(iii)XMRV特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于XMRV抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，其中所述抗原-抗体免疫复合物的检测表明在所述受试者体内的XMRV感染。在一种实施方式中，所述感染是慢性感染、潜伏性感染、再感染、突破性感染、或它们的组合。
在另一种实施方式中，本发明提供了将全血样品中的低抗-XMRV抗体水平提高至可检测水平的方法，包括以下步骤：a)获得全血样品；b)在包含(i)XMRV活化的淋巴细胞、(ii)针对XMRV特异性的记忆细胞、(iii)XMRV特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育全血样品；c)将步骤b)产生的培养物暴露于XMRV抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及d)检测步骤c)的抗原-抗体免疫复合物，从而将低抗-XMRV抗体水平提高至可检测水平。
在一种实施方式中，本发明提供了用于提高来自受试者的针对XMRV感染的抗体水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)XMRV活化的淋巴细胞、(ii)针对XMRV特异性的记忆细胞、(iii)XMRV特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)XMRV衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于检测受试者体内XMRV特异性抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)XMRV活化的淋巴细胞、(ii)针对XMRV特异性的记忆细胞、(iii)XMRV特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)XMRV衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断患有慢性XMRV感染、潜伏性XMRV感染、XMRV再感染、突破性XMRV感染、或它们的组合的受试者体内感染的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)XMRV活化的淋巴细胞、(ii)针对XMRV特异性的记忆细胞、(iii)XMRV特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)XMRV衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于将全血样品中的低抗XMRV抗体水平提高至可检测水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)XMRV活化的淋巴细胞、(ii)针对XMRV特异性的记忆细胞、(iii)XMRV特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体；和b)XMRV衍生肽。
按照本发明，将血液样品引入试管，在一种实施方式中其是真空管、瓶、孔（作为多孔板或单孔/板的一部分）或烧瓶，包含有效浓度的有丝分裂原溶液，如在一种实施方式中，商陆有丝分裂原。在商陆有丝分裂原存在下，体外培养待测试的血液样品。代替商陆有丝分裂原或除此之外可以使用人B细胞的其他活化剂以实现同样的功能。在孵育以后，从流体顶部取等分部分，然后利用标准ELISA程序和/或蛋白质印迹分析和/或任何其他抗体检测系统（在一种实施方式中其是快速、化学发光、或芯片系统）来测定所期望抗体的存在。如果在稍后日期测定样品，则可以离心血液并可以收集上清液，冷冻和存储。可以采用聚合酶链反应（PCR）技术来证实结果。
在一种实施方式中，本发明将抗体水平提高至“可检测”水平。在一种实施方式中，抗体的可检测水平是可以利用本领域中标准的抗体测定加以检测的水平。在一种实施方式中，抗体的可检测水平高于测定的检测截止值。在另一种实施方式中，可检测水平是比特定测定的较低检测水平高5%以上的水平。在另一种实施方式中，可检测水平是比特定测定的较低检测水平高10%以上的水平。在另一种实施方式中，可检测水平是比特定测定的较低检测水平高20%以上的水平。在另一种实施方式中，可检测水平是其中测定可以特异性地检测抗体浓度而没有非特异性的、假阳性（即，噪声）的显著干扰的水平。在一种实施方式中，OD读数与本领域已知的测定结合使用，用来测量抗体水平和/或浓度。
据此，本发明的一个相关方面涉及诊断方法，在一种实施方式中，其是体外诊断获自受试者的生物样品中病毒的存在。在另一个相关方面，生物样品是由生物流体形成的，如全血，细胞，组织样品或活组织检查（源自人类）。术语“样品”包括存在于个体中的样品以及获自或源自个体的样品。
在一种实施方式中，本发明的病毒感染是潜伏性病毒感染。在另一种实施方式中，本发明的病毒感染是慢性病毒感染。在另一种实施方式中，本发明的病毒感染是突破性病毒感染。在另一种实施方式中，本发明的病毒感染是病毒再感染。在另一种实施方式中，本发明的病毒感染是上述感染的任何组合。在另一种实施方式中，本发明的病毒感染是慢性和潜伏性的。在一种实施方式中，本发明的病毒感染是慢性和/或潜伏性的。在一种实施方式中，“和/或”是指任何一种成分或它们的组合，使得慢性和/或潜伏性感染是慢性感染、潜伏性感染、或慢性和潜伏性感染。
在一种实施方式中，最初病毒感染导致引发原初B细胞以及生成针对病毒抗原特异性的浆细胞和记忆B淋巴细胞，所述病毒抗原保持休眠状态并且可以被重新激活以产生分泌抗体的浆细胞，所述分泌抗体的浆细胞分泌抗原特异性抗体。在另一个相关方面，抗体针对病毒抗原、蛋白、肽、或表位具有特异性。在另一个相关方面，抗原是肽、蛋白、糖、病毒的组分等。
在一种实施方式中，涉及本发明的方法和试剂盒的病毒感染可以是持续性感染。在一种实施方式中，持续性感染是其中病毒并没有被清除而是保留在受感染个体的特定细胞中的感染。持续性感染经常涉及沉默和生产感染的阶段而没有迅速杀死宿主细胞或甚至对其产生过度损伤。在一种实施方式中，持续性感染是潜伏性感染、慢性感染（chronic infection）、或慢感染（慢发性感染，slow infection）。在一种实施方式中，潜伏性感染的特征在于在复发性疾病的发作之间缺乏明显的传染性病毒。在一种实施方式中，慢性感染的特征在于在初次感染以后传染性病毒的持续存在并且可以包括慢性或复发性疾病。在一种实施方式中，慢感染的特征在于延长的潜伏期，接着是进行性疾病。不同于潜伏性和慢性感染，慢感染并不开始于病毒增殖的急性期。在持续性感染期间，病毒基因组可以稳定地整合到细胞DNA中或保持游离体状态（maintained episomally）。在一种实施方式中，持续性感染是人T细胞白血病病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、巨细胞病毒、疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、麻疹病毒、乳多空病毒、嗜异性小鼠白血病病毒相关病毒（XMRV）、朊病毒、肝炎病毒、腺病毒、细小病毒或乳头瘤病毒。
在一种实施方式中，涉及本发明的方法和试剂盒的病毒感染可以呈现病毒潜伏期。在一种实施方式中，病毒潜伏期是前病毒潜伏期并且在另一种实施方式中，病毒潜伏期是游离体潜伏期（episomal latency）。在一种实施方式中，病毒是疱疹病毒，在一种实施方式中，其是水痘带状疱疹病毒，并且，在另一种实施方式中，是单纯疱疹病毒（HSV），在一种实施方式中其是HSV-1，并且在另一种实施方式中则是HSV-2。在另一种实施方式中，病毒是丙型疱疹病毒亚科，在一种实施方式中其与在免疫系统的细胞中建立的游离体潜伏期有关。在一种实施方式中，病毒感染是爱泼斯坦-巴尔病毒，其在B细胞中建立游离体潜伏期。在另一种实施方式中，病毒感染是巨细胞病毒（CMV），在一种实施方式中，其在T淋巴细胞、内皮细胞、和巨噬细胞内建立潜伏期。
在一种实施方式中，本发明的病毒是逆转录病毒。在一种实施方式中，涉及本发明的方法和试剂盒的逆转录病毒是异嗜性鼠白血病病毒（XMRV）。在另一种实施方式中，逆转录病毒是甲型肝炎病毒（HAV)。在另一种实施方式中，逆转录病毒是乙型肝炎病毒（HBV）。在另一种实施方式中，逆转录病毒是丙型肝炎病毒（HCV）。在另一种实施方式中，逆转录病毒是丁型肝炎病毒（HDV）。在另一种实施方式中，逆转录病毒是戊型肝炎病毒（HEV）。在另一种实施方式中，逆转录病毒是人类嗜T淋巴细胞病毒-1（HTLV-1）。在另一种实施方式中，逆转录病毒是上文披露的逆转录病毒的任何组合。在另一种实施方式中，逆转录病毒是甲型肝炎病毒（HAV）、丙型肝炎病毒（HCV）、或戊型肝炎（HEV）病毒。
在一种实施方式中，逆转录病毒是α逆转录病毒，在一种实施方式中其是禽类白血病病毒或劳氏肉瘤病毒。在另一种实施方式中，逆转录病毒感染是β逆转录病毒感染，在一种实施方式中其是小鼠乳腺瘤病毒或它的人类似物。在另一种实施方式中，逆转录病毒感染是γ逆转录病毒感染，在一种实施方式中其是鼠白血病病毒、猫白血病病毒或它们的人类似物。在另一种实施方式中，逆转录病毒感染是δ逆转录病毒感染，在一种实施方式中其是牛白血病病毒或人T嗜淋巴细胞病毒。在另一种实施方式中，逆转录病毒感染是ε逆转录病毒感染，在一种实施方式中其是角膜白斑真皮肉瘤病毒。在另一种实施方式中，逆转录病毒感染是慢病毒感染，在一种实施方式中其是人免疫缺陷病毒1、猿猴免疫缺损病毒、或猫免疫缺陷病毒。在另一种实施方式中，逆转录病毒感染是泡沫病毒感染，在一种实施方式中其是猴泡沫病毒。
在另一种实施方式中，病毒感染是甲型肝炎病毒（HAV）感染、乙型肝炎病毒（HBV）感染、丙型肝炎病毒感染（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）感染、或戊型肝炎病毒（HEV）感染。在另一种实施方式中，病毒感染是甲型肝炎病毒（HAV）感染、丙型肝炎病毒感染（HCV）、或戊型肝炎病毒（HEV）感染。
在另一种实施方式中，病原体是本领域已知经历“隐藏”或潜伏期和/或慢性期的任何病原体，包括病毒或逆转录病毒。在一种实施方式中，病毒具有低免疫原性。在一种实施方式中，受感染的受试者是免疫抑制的，在一种实施方式中其是轻度免疫抑制。
在一种实施方式中，本发明的方法用于检测患有慢性病毒感染、潜伏性病毒感染、病毒再感染、病毒突破性感染、或它们的组合的受试者体内抗体以及用于诊断患有慢性病毒感染、潜伏性病毒感染、病毒再感染、病毒突破性感染、或它们的组合的受试者。在另一种实施方式中，本发明的方法用于检测对于病毒感染血清反应阳性的受试者体内的抗体以及用于诊断对于病毒感染血清反应阳性的受试者。在另一种实施方式中，本发明的方法用于检测经历血清转化的受试者体内的抗体以及用于诊断经历血清转化的受试者。
在一种实施方式中，病毒潜伏期（virus latency）（或病毒的潜伏期，viral latency）是致病性病毒在细胞内处于休眠状态的能力，表示为病毒生命周期的溶原性部分。潜伏性病毒感染是一种类型的持续性病毒感染。潜伏性感染是某些病毒的生命周期的一个阶段，其中在最初感染以后，病毒生产停止。然而，并没有完全去除病毒基因组。其结果是，病毒可以再活化并开始生产大量的病毒子代（病毒生命周期的溶解部分）而没有宿主被新病毒感染。病毒可以无限期地留在宿主内。在一种实施方式中，病毒潜伏期并不与临床潜伏期相同，其中病毒经历潜伏期而不处于休眠状态。
在一种实施方式中，慢性感染是指持续性和持久性感染。在一种实施方式中，感染持续3个月以上。在另一种实施方式中，感染持续6个月以上。在另一种实施方式中，感染持续9个月以上。在另一种实施方式中，感染持续1年以上。
在一种实施方式中，如本文描述的再感染是由与首次感染相同的试剂引起的二次或其后的感染。在一种实施方式中，再感染使用HIV。在另一种实施方式中，再感染使用HCV。在另一种实施方式中，再感染使用HBV。在一种实施方式中，再感染使用病原体或病毒的不同菌株。在一种实施方式中，传染剂是逆转录病毒，并且再感染使用相同逆转录病毒的突变株，并且在一种实施方式中，为逆转录病毒的耐药株。在一种实施方式中，感染是重复感染。
在一种实施方式中，如本文描述的突破性感染是在用抗传染剂的疫苗接种受试者以后在所述受试者体内发生的感染。在一种实施方式中，接种疫苗并不是活病毒疫苗。在一种实施方式中，接种疫苗是蛋白亚基疫苗。在一种实施方式中，接种疫苗是死疫苗。在一种实施方式中，接种疫苗是病毒突变体疫苗。在另一种实施方式中，接种疫苗是本领域已知的任何类型。在另一种实施方式中，突破性感染是通过由疫苗的活病毒脱落而引起的感染。在一种实施方式中，突破性感染是成熟的感染（full-blowninfection）。在另一种实施方式中，突破性感染是温和的。在一种实施方式中，突破性感染可以在具有受损的免疫系统的人体中引起显著的或严重的疾病，如，在一种实施方式中，被HIV感染的受试者。
在一个相关方面，由本文提供的方法产生的培养物产生上清，并且将上清暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物。在一种实施方式中，培养基是指可以用来实施本发明的任何培养基，包括但不限于RPMI1640，具有或不具有补充物如抗生素、谷氨酰胺、BSA、动物血清、细胞因子、和/或淋巴因子。可以用于实施本发明的其他培养基包括但不限于Eagle培养基、Dulbecco培养基、McCoy培养基、Media199和Waymouth培养基。
在一种实施方式中，本文中可互换地使用术语“抗体”和“免疫球蛋白”。这些术语是本领域技术人员良好地理解的，并且是指由特异性地结合抗原的一种或多种多肽组成的糖基化（包含糖部分）蛋白。抗体的基本结构单元是四聚体并且由两个相同对的抗体链组成，每对具有一个轻链和一个重链。在每对中，轻链和重链可变区一起负责结合抗原，并且恒定区负责抗体效应子功能。
术语“抗体”还包括任何包含蛋白或肽的分子，所述包含蛋白或肽的分子包括免疫球蛋白分子的至少一部分，例如但不限于，重链或轻链恒定区的一个互补决定区（CDR）、框架区、或其任何部分。取决于它们的重链的恒定域的氨基酸序列，可以将完整抗体指定为不同“类型”。存在五种主要类型的完整抗体：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，并且它们中的数种可以进一步分为“亚类”（同种型），例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、和IgA2。全长免疫球蛋白“轻链”（约25kDa或约214个氨基酸）包括在NH2端处的约110个氨基酸的可变区和在COOH端处的κ或λ恒定区。全长免疫球蛋白“重链”（约50kDa或约446个氨基酸）类似地包括可变区（约116个氨基酸）和上述重链恒定区或类型之一，例如，γ（约330个氨基酸）。不同类型的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
在一种实施方式中，本发明的方法和组合物包括抗IgD、抗IgG、抗IgA、抗IgE、或抗CD19抗体。制备这些抗体的方法在本领域中是众所周知的并且这些抗体可商购。
在一种实施方式中，用于本发明的组合物和方法的“活化剂”是诱导记忆细胞活化的物质。在另一种实施方式中，活化剂诱导活化特异性淋巴细胞。在另一种实施方式中，活化剂诱导特异性抗体表达。在另一种实施方式中，活化剂诱导上述的组合。在一种实施方式中，物质是蛋白质，而在另一种实施方式中，它是肽、核酸分子、糖蛋白等。在一种实施方式中，细胞的“活化”包括诱导细胞的增殖、细胞的分化、细胞活性的增强（在一种实施方式中，抗体生产）、各种淋巴因子和/或细胞因子的分泌、或它们的组合。
在一种实施方式中，活化剂是有丝分裂原。在一种实施方式中，“有丝分裂原”是化学物质、或物质的混合物，在一种实施方式中，为蛋白质，其促进细胞开始细胞分裂，从而触发有丝分裂。在一种实施方式中，有丝分裂原触发其中涉及有丝分裂原活化蛋白激酶的信号转导途径，从而导致有丝分裂。在一种实施方式中，本发明的有丝分裂原用来在记忆B细胞中诱导有丝分裂和/或活化。在一种实施方式中，本发明的有丝分裂原用来诱导由引发的（primed）分化B细胞和/或记忆B细胞来形成浆细胞。
在一种实施方式中，本发明的组合物和方法的有丝分裂原诱导针对感兴趣的病毒特异性的记忆细胞的活化。在另一种实施方式中，本发明的有丝分裂原诱导病毒特异性抗体的表达。在另一种实施方式中，本发明的有丝分裂原诱导从记忆细胞至浆细胞的转移。
在一种实施方式中，病毒抗原与有丝分裂原一起使用用来诱导记忆B细胞的活化。因此，在一种实施方式中，本发明的组合物，包括用于本发明方法的那些组合物，另外地包含对于感兴趣的病毒具有特异性的抗原，在一种实施方式中，其有助于或增强从记忆细胞至浆细胞的转移。类似地，本发明的方法可以包括在包含有丝分裂原和病毒抗原的培养基中孵育血液样品。
在一个相关方面，在本文中提供的用于本发明的有丝分裂原可以是T细胞依赖性的或T细胞非依赖性的。在一种实施方式中，在本发明的组合物和方法中使用的有丝分裂原作用于T细胞、B细胞、或T细胞和B细胞两者。在一个相关方面，用于诱导记忆B细胞的活化和病毒特异性抗体的表达的有丝分裂原是商陆有丝分裂原，在一种实施方式中其刺激B细胞和T细胞。其他有丝分裂原可以用于实施本发明并且包括但不限于植物凝集素，如，伴刀豆球蛋白A，在一种实施方式中其作用于T细胞；细菌内毒素，在一种实施方式中其是脂多糖(LPS)，在一种实施方式中其作用于B细胞。在另一种实施方式中，有丝分裂原是植物血凝素（PHA），在一种实施方式中其作用于T细胞。在另一种实施方式中，有丝分裂原是白细胞凝集素（PHA-L），而在另一种实施方式中，有丝分裂原是豌豆凝集素（PSA）。
在另一种实施方式中，在本发明的组合物和方法中所使用的活化剂是细胞因子，在一种实施方式中其是由免疫系统的特定细胞和神经胶质细胞分泌的信号分子。在一种实施方式中，所述细胞因子是白细胞介素或干扰素。在一种实施方式中，细胞因子是淋巴因子。在一种实施方式中，所述淋巴因子是白细胞介素1、白细胞介素2、白细胞介素3、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、干扰素γ、或它们的组合。
在一种实施方式中，细胞因子是适应性免疫的介质。在另一种实施方式中，细胞因子是天然免疫的介质。在另一种实施方式中，细胞因子是肿瘤坏死因子(TNF)-α，一种I型干扰素（IFN）（在一种实施方式中，其是IFN-α或IFN-β），或趋化因子。在另一种实施方式中，细胞因子是转化生长因子(TGF)-β。在另一种实施方式中，细胞因子是造血作用的刺激物，在一种实施方式中其是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、或粒细胞集落刺激因子（G-CSF）。在另一种实施方式中，细胞因子是白细胞介素-17。
在另一种实施方式中，在本发明的组合物和方法中使用的活化剂是细菌衍生的脂质A、病毒衍生的肽、病毒、生物剂、抗免疫球蛋白试剂、抗B淋巴细胞结构域的抗体、或它们的组合。
在一种实施方式中，脂质A是内毒素的脂质成分，其负责革兰氏阴性菌的毒性，并且是免疫系统非常有效的刺激物，在一种实施方式中，激活单核细胞或巨噬细胞。在一种实施方式中，脂质A具有6个酰基链。在一种实施方式中，脂质A是来自革兰氏阴性菌的类群，包括大肠杆菌（E.coli）、沙门氏菌属、志贺氏菌属、其他肠杆菌科、假单胞菌属、莫拉菌属、螺杆菌属、狭长平胞属、蛭弧菌属、乙酸菌、军团菌属、蓝细菌、螺旋菌、绿色硫磺细菌或绿色非硫磺细菌。
在一种实施方式中，在本发明的组合物和方法中使用的活化剂是植物凝集素。在一种实施方式中，植物凝集素是甘露糖结合植物凝集素，在一种实施方式中其是伴刀豆球蛋白A、小扁豆凝集素、或雪莲凝集素。在另一种实施方式中，植物凝集素是半乳糖/N-乙酰半乳糖胺结合凝集素，在一种实施方式中其是篦麻蛋白、蓖麻凝集素、RCA120；花生凝集素；榴莲凝素（榴莲凝集素，Jacalin）；或毛苕子凝集素（Hairy vetch lectin）。在另一种实施方式中，植物凝集素是N-乙酰葡糖胺结合凝集素，在一种实施方式中其是麦芽凝集素（Wheat Germ agglutintin）。在另一种实施方式中，植物凝集素是N-乙酰神经氨酸结合凝集素，在一种实施方式中其是接骨木凝集素、怀槐白细胞凝集素（Maackia amurensis leukoagglutintin）、或怀槐血凝结素（Maackia amurensis hemoagglutintin）。在另一种实施方式中，植物凝集素是海藻糖结合凝集素，在一种实施方式中，其是荆豆凝集素（Ulex europaeus agglutintin），并且在另一种实施方式中，则是橙黄网胞盘菌凝集素。
在另一种实施方式中，在本发明的组合物和方法中，包含活化剂的市售SMARTubeTM用作活化剂。
本领域技术人员无需过多实验可以容易地确定有丝分裂原或其他活化剂的最佳浓度。在一个相关方面，在本文中提供的方法中使用的有丝分裂原浓度范围为原液浓度的约1:100至1:1600稀释。在另一个方面，浓度范围为原液的1:200至1:400的稀释。在另一种实施方式中，有丝分裂原是植物凝集素、细菌内毒素、病毒、脂质A或淋巴因子。在另一个方面，有丝分裂原是影响有丝分裂原的记忆细胞，其中记忆细胞是B淋巴细胞或T淋巴细胞记忆细胞。
在一种实施方式中，本发明的组合物和用于本发明方法的组合物包含单活化剂，在一种实施方式中其是有丝分裂原，在一种实施方式中其是商陆有丝分裂原。在另一种实施方式中，本发明的组合物和用于本发明方法的组合物包含两种活化剂，在另一种实施方式中，为三种活化剂，在另一种实施方式中，为四种活化剂，并且在另一种实施方式中，为五种或更多种活化剂。在包括一种以上活化剂的情况下，每种活化剂可以来自不同种类，或每种活化剂可以来自相同种类。例如，组合物包含有丝分裂原、淋巴因子、和B淋巴细胞结构域抗体，在一种实施方式中其是商陆有丝分裂原、白细胞介素-6、和抗IgD抗体。在另一种实施方式中，组合物包含两种有丝分裂原，在一种实施方式中其是商陆有丝分裂原和脂多糖。应当理解的是，如本文描述的活化剂的任何组合都被认为是本发明的一部分。
在一个相关方面，通过使用抗细胞膜结构域的抗体来实现记忆细胞的刺激。在另一种实施方式中，通过利用抗B淋巴细胞结构域（在一种实施方式中其是B淋巴细胞膜结构域）的抗体来刺激记忆细胞。在一种实施方式中，抗体是抗IgD。在一种实施方式中，由原初B细胞、最初引发的B细胞、和记忆细胞来膜表达IgD。在一种实施方式中，浆细胞并不表达膜IgD。在一种实施方式中，可以通过使其与抗IgD接触来刺激或激活还没有完全分化成浆细胞的引发的B细胞。
在一种实施方式中，“抗体”是包含特异性地识别和结合表位（例如，抗原，如肿瘤或病毒抗原或其片段）的至少一个轻链或重链免疫球蛋白可变区的多肽配体。这包括完整免疫球蛋白以及它们的变体和部分（在本领域中众所周知的），如Fab'片段、F(ab)'.sub.2片段、单链Fv蛋白（"scFv"）、和二硫键稳定的Fv蛋白（"dsFv"）。scFv蛋白是融合蛋白，其中通过接头来结合免疫球蛋白的轻链可变区和免疫球蛋白的重链可变区，而在dsFv中，链已被突变以引入二硫键来稳定链的结合。该术语还包括基因工程形式如嵌合抗体（例如，人源化鼠抗体）、异源结合抗体（heteroconjugateantibody）（例如，双特异性抗体）。还参见，Pierce Catalog and Handbook,1994-1995(Pierce Chemical Co.,Rockford,111.);Kuby,J.,Immunology,3.sup.rd Ed.,W.H.Freeman&Co.,New York,1997。
通常，免疫球蛋白具有重链和轻链。每个重链和轻链包含恒定区和可变区（这些区还称作“结构域”）。结合在一起，重链和轻链可变区特异性地结合抗原。轻链和重链可变区包含由三个超变区（还称作“互补决定区”或“CDR”）间断的“框架”区。已定义框架区和CDR的范围（参见，Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1991，其以引用方式结合于本文）。Kabat数据库现在保持在线。在物种内，不同轻链或重链的框架区的序列是相对保守的。抗体的框架区，即组成型轻链和重链的合并框架区，用来在三维空间中定位和对齐CDR。
CDR主要负责结合于抗原的表位。每个链的CDR通常称作CDR1、CDR2、和CDR3（从N-端开始顺序地编号），并且还通常通过其中定位特定CDR的链来鉴定。因此，V.sub.H CDR3定位在其中发现它的抗体的重链的可变域中，而V.sub.L CDR1是来自其中发现它的抗体的轻链的可变域的CDR1。
提及“V.sub.H”或“VH”是指免疫球蛋白重链的可变区，包括Fv、scFv、dsFv或Fab的可变区。提及“V.sub.L”或“VL”是指免疫球蛋白轻链的可变区，包括Fv、scFv、dsFv或Fab的可变区。
“单克隆抗体”是通过B淋巴细胞的单克隆或通过其中已转染单抗体的轻链和重链基因的细胞所产生的抗体。通过本领域技术人员已知的方法来生产单克隆抗体，例如通过骨髓瘤细胞与免疫脾细胞融合来制备杂交抗体形成细胞。单克隆抗体包括人源化单克隆抗体。
“人源化”免疫球蛋白是包括人框架区和来自非人（如小鼠、大鼠、或合成的）免疫球蛋白的一个或多个CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白称为“供体”，并且提供框架的人免疫球蛋白称为“受体”。在一种实施方式中，所有CDR均来自人源化免疫球蛋白中的供体免疫球蛋白。不需要存在恒定区，但如果它们存在，则它们必须与人免疫球蛋白恒定区基本上一致，即，至少约85-90%，如约95%或以上一致。因此，人源化免疫球蛋白的所有部分，除了可能地CDR以外，与天然人免疫球蛋白序列的相应部分基本上一致。“人源化抗体”是包含人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。人源化抗体结合于相同抗原作为供体抗体，其提供CDR。人源化免疫球蛋白或抗体的受体框架可以具有被取自供体框架的氨基酸有限数目的取代。人源化或其他单克隆抗体可以具有另外的保守氨基酸替换，其基本上不影响抗原给合或其他免疫球蛋白功能。可以通过基因工程的方式来构建人源化免疫球蛋白（例如，参见美国专利号5,585,089）。
因此，在一种实施方式中，抗B淋巴细胞膜结构域的抗体可以是具有如上文描述的和本领域已知的特性的抗体。
在另一种实施方式中，抗体是抗IgM。在另一种实施方式中，抗体是针对B细胞细胞结构域（CD）。在另一种实施方式中，抗体是针对T细胞CD。
在一种实施方式中，B淋巴细胞膜结构域是IgG、IgA、IgE、CD19、或本领域已知的任何其他膜结构/结构域。在另一种实施方式中，B淋巴细胞膜结构域是CD21或CD81。
在一种实施方式中，用来刺激记忆细胞的抗体类型包括但不限于来自IgG、IgD、IgA、或IgE类型的抗体。在另一个方面，抗体是病毒特异性的。在另一个方面，抗体是XMRV特异性的。在另一个方面，记忆细胞的刺激导致记忆细胞转化为分泌抗体的浆细胞，由此浆细胞分泌抗原特异性抗体。
在一种实施方式中，本发明的病毒活化的淋巴细胞是B淋巴细胞。在另一种实施方式中，本发明的病毒活化的淋巴细胞是T淋巴细胞。在一种实施方式中，本发明的记忆细胞是B淋巴细胞。在另一种实施方式中，本发明的记忆细胞是T淋巴细胞。在一种实施方式中，本发明的记忆细胞是记忆B淋巴细胞。在另一种实施方式中，本发明的记忆细胞是记忆T淋巴细胞。
在一个相关方面，本文提供的方法的B淋巴细胞是记忆B淋巴细胞。在另一个相关方面，T淋巴细胞是记忆T淋巴细胞。在又一个相关方面，本文提供的活化剂激活记忆B淋巴细胞。在另一种实施方式中，活化剂激活记忆T淋巴细胞，并且在另一种实施方式中活化剂激活T细胞和B细胞两者。
在一种实施方式中，用于本发明的组合物和方法的病毒衍生肽是抗原。在另一种实施方式中，病毒衍生肽是表位，在一种实施方式中其是抗原决定簇。在另一种实施方式中，病毒衍生肽是免疫原性的。在另一种实施方式中，在本发明的组合物和方法中，可以使用病毒衍生多肽来代替病毒衍生肽。
在一种实施方式中，抗原是可以在受试者体内刺激抗体生产或T细胞应答的化合物、组合物、或物质，包括注射或吸收到受试者体内的组合物。抗原与特异性体液免疫或细胞免疫的产物反应，包括由异源免疫原诱导的那些。术语“抗原”包括所有相关的抗原表位。“表位”或“抗原决定簇”是指B细胞和/或T细胞对其应答的抗原上的部位。在一种实施方式中，当表位结合MHC分子呈递时，T细胞对表位应答。表位可以由连续氨基酸或通过蛋白的三级折叠而接近的不连续氨基酸形成。表位通常包括至少3个，并且更通常地，至少5个，约9个，或约8-10个氨基酸（处于独特的空间构象）。
在一种实施方式中，在NCBI Protein Database参考号ACY30455-ACY30462或ADF28703-ADF28719的氨基酸序列内发现XMRV衍生的表位。在一种实施方式中，XMRV特异性抗原是SU、TM、MA、CA、p12、NC、PR、RT、或IN。在一种实施方式中，XMRV特异性抗原是XMRV Gag多肽、Env多肽、Pol多肽、或其片段，或与其具有至少约80%序列一致性的多肽。在一种实施方式中，在本发明的方法和试剂盒中使用的XMRV抗体检测系统是如Hohn et al.In Vitro.PLoS ONE5(12):el5632.doi:10.137l/journal.pone.00l5632中描述的，其以引用方式结合于本文。
在一种实施方式中，本发明的方法确定肝炎感染。根据这个方面并在一种实施方式中，在本发明的方法和试剂盒中所用的抗原是肝炎表面抗原或肝炎核心抗原。
在一种实施方式中，病原体-或病毒-特异性抗原用于本发明的组合物和方法。在一种实施方式中，病原体特异性抗原是免疫原性肽，在一种实施方式中其是包含等位基因特异性基序或其他序列的一种肽，使得上述肽可以结合MHC分子并诱导对于由其获得免疫原性肽的抗原具有特异性的细胞毒性T淋巴细胞（“CTL”）应答、或B细胞应答（例如，抗体生产或记忆B细胞增殖）。
在一种实施方式中，利用序列基序或本领域已知的其他方法，如神经网络或多项式测定，来确定免疫原性肽。通常，算法用来确定肽的“结合阈值”以选择具有在一定亲和力下给予它们较高的结合概率并且将是免疫原性的得分的那些肽。算法是基于对特定位置处特定氨基酸的MHC结合的影响、对特定位置处特定氨基酸的抗体结合的影响、或对包含基序的肽中特定替代的结合的影响。在免疫原性肽的范围内，“保守残基”是在肽中的特定位置处出现的频率显着高于按照随机分布所预期的频率的残基。在一种实施方式中，保守残基是其中MHC结构可以提供与免疫原性肽的接触点的残基。
还可以通过测量它们结合于特定MHC蛋白（例如，HLA-A02.01）以及通过它们刺激CD4和/或CD8的能力（当在MHC蛋白的情况下出现时），来确定免疫原性肽。
在一个相关方面，本发明提供了能够提高抗病毒抗体水平的方法，从而增加信号，同时降低噪声。在另一种实施方式中，本发明的方法可以提高抗病毒抗体的水平而没有显著提高噪声水平。在另一种实施方式中，本发明的方法可以提高抗病毒抗体的水平而不影响诊断（或诊断特异性）。
在一种实施方式中，可以通过使用针对血清抗体的探针来检测样品XMRV抗体和提供的XMRV抗原之间的复合物。可以将反应混合物暴露于足以形成探针/抗体复合物的条件。然后可以检测探针、探针/抗体复合物、或探针/抗体/抗原复合物的存在、不存在或量。探针可以针对人免疫球蛋白。例如，针对人免疫球蛋白的探针包括但不限于抗体、其抗原结合片段、适体或avimer。在探针/抗体复合物或探针/抗体/抗原复合物之间的复合物的存在、不存在或量的检测可以按照本领域已知的任何适宜的方式（如本文讨论的）。用于样品XMRV抗体和提供的XMRV抗原的探针可以包括标记。探针标记及其检测是本领域中已知的。
在一种实施方式中，竞争性结合测定可以用来检测或量化样品中抗XMRV抗原或γ逆转录病毒抗原的抗体。
用于检测结合XMRV的抗体的XMRV抗原可以体外地被真核细胞包括，如体外地哺乳动物细胞或体外地昆虫细胞，或可以由多核苷酸编码并在微生物中表达，其可以是真核微生物如酵母，或原核微生物如大肠杆菌。体外表达本发明教导的多肽的真核细胞可以在细胞表面上或在细胞质中表达多肽，或可以分泌多肽。
一些方法包括提供至少一种体外细胞，其包含可以用来检测样品中抗XMRV的抗体的抗原。体外细胞可以是表达γ逆转录病毒抗原的哺乳动物细胞，如体外XMRV抗原或SFFV抗原。抗原可以是，例如，SFFV的Env抗原。示例性哺乳动物细胞包括前B细胞，如BaF3细胞、包含促红细胞生成素受体的BaF3ER细胞。例如，表达至少一种XMRV抗原的哺乳动物细胞可以是表达弗兰德形成脾脏病灶病毒的Env蛋白（SFFV Env抗原）的BaF3ER-SFFVEnV细胞。
在一种实施方式中，固体表面或底物可以与上述基于抗原的测定一起结合使用。本教导的一些方法包括提供包括可以用来检测样品中抗XMRV抗体的抗原的固体载体。可以将γ逆转录病毒抗原，如XMRV抗原，固定在固体载体上。固体载体可以是，例如，珠、颗粒、或ELISA板，并且可以例如通过共价连接将抗原吸附或连接到载体上。可以使用交联剂来将XMRV抗原连接于固体载体上。可以将受试者的样品引到底物，使得XMRV抗体（如果在样品中存在的话）结合于固体载体的XMRV抗原。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于增强受试者体内针对感染的抗体水平并因此检测所述抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的两种或更多种活化剂的培养基：a)有丝分裂原；b)抗淋巴细胞结构域的抗体；以及c)病原体衍生肽。在一种实施方式中，培养基包含有丝分裂原和抗淋巴细胞结构域的抗体。在另一种实施方式中，培养基包含有丝分裂原和病原体衍生肽。在一种实施方式中，培养基包含有丝分裂原和抗淋巴细胞结构域的抗体。在另一种实施方式中，培养基包含抗淋巴细胞结构域的抗体和病原体衍生肽。在另一种实施方式中，培养基包含有丝分裂原、抗淋巴细胞结构域的抗体、和病原体衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于增强受试者体内针对感染的抗体水平并且从而检测所述抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)有丝分裂原；b)抗淋巴细胞结构域的抗体；和c)病原体衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于增强受试者体内针对致病性感染的抗体水平并且从而检测所述抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体和b)病原体衍生肽。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于检测来自患有慢性感染、潜伏性感染、病原体再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者的全血样品中病原体特异性抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含所述全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基，及其使用说明。在一种实施方式中，活化剂是有丝分裂原。在一种实施方式中，活化剂是病原体衍生肽。在一种实施方式中，活化剂是抗淋巴细胞结构域的抗体。在一种实施方式中，感染是病毒感染。在一种实施方式中，病毒感染是逆转录病毒感染。在一种实施方式中，病毒感染是肝炎感染。在一种实施方式中，病毒感染是XMRV感染。在一种实施方式中，病毒感染是HIV感染。在另一种实施方式中，病毒感染是除了HIV以外的任何逆转录病毒感染。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断受试者体内慢性感染、潜伏性感染、病原体再感染、突破性感染、或它们的组合的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含所述全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基，及其使用说明。在一种实施方式中，活化剂是有丝分裂原。在一种实施方式中，活化剂是病原体衍生肽。在一种实施方式中，活化剂是抗淋巴细胞结构域的抗体。在一种实施方式中，感染是病毒感染。在一种实施方式中，病毒感染是逆转录病毒感染。在一种实施方式中，病毒感染是肝炎感染。在一种实施方式中，病毒感染是XMRV感染。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于将来自患有慢性感染、潜伏性感染、病原体再感染、突破性感染、或它们的组合的受试者的全血样品中低抗病毒抗体水平提高至可检测水平的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含所述全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的活化剂的培养基，及其使用说明。在一种实施方式中，活化剂是有丝分裂原。在一种实施方式中，活化剂是病原体衍生肽。在一种实施方式中，活化剂是抗淋巴细胞结构域的抗体。在一种实施方式中，感染是病毒感染。在一种实施方式中，病毒感染是逆转录病毒感染。在一种实施方式中，病毒感染是肝炎感染。在一种实施方式中，病毒感染是XMRV感染。
应当理解的是，本发明的其他试剂盒可以类似地包括这些成分。
在一个相关方面，试剂盒另外包括用于检测病原体特异性抗体的测定。在一种实施方式中，测定是在与包括包含一种或多种或两种或更多种活化剂的培养基的容器分开的试剂盒中，而在另一种实施方式中，测定是在包括包含一种或多种或两种或更多种活化剂的培养基的容器内。根据这个方面并在一种实施方式中，单容器可以方便地用于全血孵育（连同活化剂）以及抗体检测，在一种实施方式中，在孵育期结束时提供诊断。
因此，在一种实施方式中，本发明提供了用于检测受试者体内针对感染的抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包含：
1)包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的两种或更多种活化剂的培养基：a)有丝分裂原；b)抗淋巴细胞结构域的抗体；和c)病原体衍生肽；以及
2)用于检测病毒特异性抗体的测定。
在另一种实施方式中，本发明提供了用于检测受试者体内针对感染的抗体的试剂盒，包括：
1)用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的全血样品的(i)病原体活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病原体特异性的记忆细胞、(iii)病原体特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的两种或更多种活化剂的培养基：a)有丝分裂原；b)抗淋巴细胞结构域的抗体；和c)病原体衍生肽；以及
2)用于检测病毒特异性抗体的测定。
在一种实施方式中，本发明提供了用于增强受试者体内针对感染的抗体水平并且从而检测所述抗体的试剂盒。在另一种实施方式中，本发明提供了用于检测受试者体内针对感染的抗体的试剂盒。在另一种实施方式中，本发明提供了用于诊断患有慢性和/或潜伏性感染的受试者体内感染的试剂盒。
在一种实施方式中，在本发明的试剂盒中的培养基包含有丝分裂原和抗淋巴细胞结构域的抗体。在另一种实施方式中，培养基包含有丝分裂原和病原体衍生肽。在一种实施方式中，培养基包含有丝分裂原和抗淋巴细胞结构域的抗体。在另一种实施方式中，培养基包含抗淋巴细胞结构域的抗体和病原体衍生肽。在另一种实施方式中，培养基包含有丝分裂原、抗淋巴细胞结构域的抗体、和病原体衍生肽。
对于在诊断测定中的使用，抗体能够可选地与常规标记结合，这些常规标记能够单独地或与其他组合物或化合物一起提供可检测信号。当在诊断方法中采用一种以上抗体时，标记令人希望地互相作用以产生可检测信号。标记是可视地（例如，用比色法），或通过其他已知方法可检测的。在可以操作以揭示测定中的比色信号的领域中已描述了各种各样的酶和其他系统。作为一个实例，葡糖氧化酶（其使用葡萄糖作为底物）释放过氧化物作为产物。过氧化物酶，其与过氧化物和氢供体（如四甲基联苯胺（TMB））反应，产生氧化TMB，可见其为蓝色。其他实例包括辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）、以及己糖激酶连同葡糖-6-磷酸脱氢酶，它们与ATP、葡萄糖、和NAD+反应，从而产生（除了其他产物以外）NADH，其被检测为在340nm波长处的增加的吸光率。在本发明方法中可以采用的其他标记系统可以通过其他方式加以检测，例如，其中包埋染料的彩色乳胶微颗粒[Bangs Laboratories,Ind.]可以用来代替酶以与抗体形成结合物（轭合物）并提供在可适用的测定中存在产生的复合物的视觉信号指示。还有其他标记包括荧光化合物、放射性化合物或元素。用于连接于可用于本发明的诊断测定的抗体的可检测标记可以容易地选自诊断测定领域技术人员已知的和容易获得的许多组合物。本发明的方法和抗体并不限于所采用的特定的可检测标记或标记系统。适宜地，还可以连同由本发明的肽、蛋白、和抗体构成的诊断试剂一起来使用这些可检测系统。
可以使通过本文提供的方法收集的生物样品与固相支持物或载体接触、并且固定于其上，如硝化纤维素、聚合物“珠”、芯片、或其他固体载体或基质，它们能够固定细胞、细胞颗粒、膜、或可溶性蛋白。然后可以用适当的缓冲液洗涤载体，接着用可检测标记的抗人抗体加以处理。然后可以用缓冲液第二次洗涤固相载体以除去未结合的抗体。然后可以通过常规方式来检测在固体载体上的结合标记的量。
在一种实施方式中，包含全血和活化剂的容器可以进一步包含结合在固体载体上的非可溶形式的标记，在一种实施方式中其使得受试者能够在适当的孵育期间以后接受诊断。这类孵育期取决于标记以及取决于活化步骤所需要的时间并且是本领域已知的。在另一种实施方式中，标记具有可溶性形式。
在一个相关方面，确定通过本文提供的方法通过它们的结合亲和力或特异性产生的抗体的方法在本领域中是众所周知的并且包括多种方法如免疫沉淀或体外结合测定，如放射性免疫测定（RIA）或酶联免疫吸附测定（ELISA）。其他众所周知的方法可以用来确定抗体结合亲和力并且可以容易地使用这些方法（如技术人员应当理解的）。聚合酶链反应（PCR）技术也可以用来增强初步孵育样品的检测水平。应当理解的是，也可以使用在本领域中已知的用来获得或检测抗体相互作用的其他测定并且这些测定包括但不限于免疫（蛋白质）印迹、免疫荧光测定等。本领域技术人员应当理解的是，可以设计任何数目的常规蛋白质测定形式，尤其是免疫测定形式，以采用本发明的分离的抗原和抗体来检测抗病毒抗体以及用于检测受试者体内的病毒感染。因此本发明并不限于特定测定形式的选择并且包括本领域技术人员已知的测定形式。
为方便起见，预定量的试剂和用于进行诊断测定的用法说明的包装组合，例如，试剂盒，也在本发明的范围内。本发明包括试剂盒，包括其中包含有效浓度的有丝分裂原或其他活化剂的血液收集容器。容器可以可选地包含培养基。在另一个相关方面，容器是试管或烧瓶。在又一个相关方面，容器被真空密封。在一个相关方面，容器是真空管。血液收集容器可以是塑料、玻璃、硅,合成膜、或金属材料（有或没有内或外表面的特殊处理或涂层）、或与培养血液相容的任何其他材料。应当理解的是，本发明还包括除了血液收集管之外的含血液装置，包括但不限于微滴定板（包括其中可以孵育血液的孔）、组织培养烧瓶、玻璃烧瓶（如锥形瓶）、和其中可以培养血细胞的任何其他容器。
在一种实施方式中，本发明的试剂盒的容器用于保留全血样品，或在另一种实施方式中，用于保持、处理、存储、维持或收集全血样品。
在另一个相关方面，本发明的方法与本发明的试剂盒结合使得能够将联合测定的诊断敏感度达到实用水平，从而使得可用于诊断和用于引入血库以增加血液安全性。
还提供了试剂盒，其可用作诊断测定的阳性对照。为了抗病毒抗体的分离和纯化，试剂盒可以包含偶联于珠（例如，琼脂糖珠或纳米珠或其他纳米结构）的病毒蛋白/抗原。可以提供试剂盒，其包含用于体外检测和定量抗病毒抗体的抗体，例如，在ELISA或蛋白质印迹中。和制造的物品一样，试剂盒包括容器和在容器上或与容器结合的标签或包装说明书。容器保持包含由抗病毒抗体识别的至少一种抗原的组合物。可以包括另外的容器，其包含，例如，稀释剂和缓冲液、对照抗体。标签或包装说明书可以提供组合物的描述以及用于所期望的体外或诊断用途的说明。
在某些实施方式中，试剂盒可以提供有指导材料。说明可以印在纸上或其他底质上，和/或可以供给为电子可读介质，如软盘、小型CD-ROM、CD-ROM、DVD-ROM、Zip盘、录像带、录音磁带等。详细说明可以并非物理地与试剂盒结合；而是，用户可以被引导到由试剂盒的制造商或分销商指定的互联网网站。
本发明的方法包括从血液的流体部分中可选地分离血细胞，从而可以确定抗体的存在、或产生抗体细胞的存在。可以通过本领域技术人员众所周知的数种方法中任何一种（包括离心或过滤），来从血液的流体部分中分离血细胞。在一种实施方式中，血细胞并非物理地与流体分离。在另一种实施方式中，在培养和测定以前，可以从血液中分离外周血单核细胞（PBMC）、B淋巴细胞和T淋巴细胞。富集B细胞和T细胞的方法在本领域中是众所周知的并且可以通过多种方法来进行（所述方法包括但不限于细胞分选/FACS）。在用有丝分裂原孵育全血以后，可以容易地自血液的顶部提取流体并测试抗体。可选地，可以通过温和渗透休克或通过温和洗涤剂来溶解红细胞。以这种方式，白细胞保持活力。
通常地，能够以多种形式中任何一种来提供按照本发明的测试或测定的结果。能够以定性方式来提供结果。例如，测试报告可以仅表明是否检测到特定病毒，还可能指出检测极限。能够以半定量方式来提供结果。例如，可以定义各种范围，并且范围可以被指定提供一定程度的定量信息的得分（例如，1+至4+）。这样的得分可以反映各种因素，例如，检测到的病毒数，信号强度（其可以表明携带病毒细胞的表达水平）等。能够以定量方式来提供结果，例如，以其中检测到病毒的细胞百分比形式，以病毒蛋白浓度的形式（如通过抗体结合测定确定的）等。如本领域技术人员应当理解的，通过测试提供的输出类型将会变化，其取决于测试的技术限制以及与检测有关的生物显著性。
在一个相关方面，术语“约”是指正或负5%，或在另一种实施方式中正或负10%，或在另一种实施方式中正或负15%，或在另一种实施方式中正或负20%。
在一种实施方式中术语“受试者”是指哺乳动物，包括需要治疗病症或其后遗症、或对其敏感的人。受试者可以包括狗、猫、猪、牛、绵羊、山羊、马、大鼠、和小鼠以及人类。在一种实施方式中，受试者是雄性。在另一种实施方式中，受试者是雌性。在一种实施方式中，受试者是妊娠或哺乳期雌性。
在一种实施方式中，异嗜性鼠白血病病毒、异嗜性鼠白血病病毒相关病毒、XMRV、和XMLV是利用本发明的方法和组合物加以检测的病毒的替代名称。在一种实施方式中，XMRV属于病毒家族逆转录病毒科和γ逆转录病毒属。在一种实施方式中，XMRV具有单链RNA基因组，其通过DNA中间体进行复制。在一种实施方式中，XMRV的基因组的长度是大约8100个核苷酸，与小鼠的数个内源性逆转录病毒95%一致，以及与数种外源性小鼠病毒93-94%一致。在一种实施方式中，数种XMRV基因组序列的序列是几乎相同的，在一种实施方式中这是不寻常的，因为逆转录病毒通常以相对低保真度复制它们的基因组，从而导致在单宿主生物体中不同的病毒序列。因此，在一种实施方式中，在单宿主生物体中XMRV序列不太可能显著地不同。因此，在一种实施方式中，本发明的方法用于来自患有逆转录病毒感染的受试者的样品上，在一种实施方式中其高保真度地复制它的基因组。
应当理解的是，在本发明的方法和组合物的描述中，可以用“病毒”或“病原体”来代替“逆转录病毒”。
在一种实施方式中，“Stimmunology”是其中可以方便地进行本发明的方法，同时实验室工作人员最少地暴露于血液的装置。在另一种实施方式中，Stimmunology是一种技术，其克服低抗体水平并导致体外抗体生产（通过已体内引发的细胞）。在一种实施方式中，Stimmunology技术是预分析步骤，其中体外产生特异性抗体，从而能够通过可用的抗体测试来检测感染。
在一种实施方式中，本发明的方法用于除了全血之外来自受试者的组织上。在一些实施方式中，样品选自由以下组成的组中：血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊髓液样品、和固体组织样品。在一些实施方式中，样品包括选自由以下组成的组中的细胞：成纤维细胞、内皮细胞、外周血单核细胞、造血细胞、或它们的组合。在一种实施方式中，利用本发明的方法和组合物，可以测试淋巴液、乳汁、粘液、唾液、和眼泪的致病性感染的抗体。
在一种实施方式中，本发明提供了确定受试者发展前列腺癌的风险的方法，包括以下步骤：利用本发明的方法来确定所述受试者是否患有XMRV感染。在另一种实施方式中，本发明提供了治疗、抑制或阻止受试者体内前列腺癌的方法，包括以下步骤：利用本发明的方法来确定所述受试者是否患有XMRV感染，以及，如果受试者被感染，则用逆转录病毒整合酶抑制剂、拉替拉韦（raltegravir）（Merck & Co.，商标名称Isentress）、L-000870812（Merck & Co.）、核苷逆转录酶抑制剂、替诺福韦泰诺福韦富马酸盐（tenofovir disoproxil fumarate）(Gilead Sciences，商标名称Viread)、和齐多夫定（GlaxoSmithKline，叠氮胸苷（AZT））、或它们的组合来治疗所述受试者。
在另一种实施方式中，本发明提供了确定受试者发展慢性疲劳综合征的风险的方法，包括以下步骤：利用本发明的方法来确定所述受试者是否患有XMRV感染。在另一种实施方式中，本发明提供了治疗、抑制或阻止受试者体内慢性疲劳综合征的方法，包括以下步骤：利用本发明的方法来确定所述受试者是否患有XMRV感染，以及，如果受试者被感染，则用逆转录病毒整合酶抑制剂，拉替拉韦（raltegravir）（Merck & Co.，商标名称Isentress）、L-000870812（Merck & Co.）、核苷逆转录酶抑制剂、替诺福韦泰诺福韦富马酸盐（tenofovir disoproxil fumarate）（Gilead Sciences，商标名称Viread)、和齐多夫定（GlaxoSmithKline，叠氮胸苷(AZT））、或它们的组合来治疗所述受试者。
在一种实施方式中，本发明提供了确定受试者对宫颈癌易感性的方法，包括以下步骤：利用本发明的方法来确定所述受试者是否患有人乳头瘤病毒（HPV）感染。在另一种实施方式中，本发明提供了治疗、抑制或阻止受试者体内宫颈癌的方法，包括以下步骤：利用本发明的方法来确定所述受试者是否患有HPV感染，以及，如果受试者被感染，则利用本领域已知的方法来治疗所述受试者的HPV。
在一种实施方式中，治疗受试者包括给予用于治疗XMRV相关疾病或相关障碍的一种或多种抗逆转录病毒剂。例如，抗逆转录病毒剂可以用来治疗XMRV相关神经免疫疾病或XMRV相关淋巴瘤。抗逆转录病毒剂可以是抗逆转录病毒化合物或包括抗逆转录病毒化合物的药物组合物。可以用来管理或治疗XMRV相关神经免疫疾病或XMRV相关淋巴瘤的抗逆转录病毒剂的实例包括但不限于阿昔洛韦、喷昔洛韦（泛昔洛韦）、更昔洛韦（gancyclovir）（更昔洛韦（ganciclovir））、脱氧鸟苷、膦甲酸、碘苷、三氟胸苷、阿糖腺苷、索立夫定、齐多夫定（AZT，ZVD，叠氮胸苷，例如，立妥韦）、去羟肌苷（ddl，例如，Videx和Videx EC）、扎西他宾（ddC，双脱氧胞苷，例如，Hivid）、拉米夫定（lamivudine）（3TC，例如，拉米夫定（Epivir））、司他夫定（d4T，例如，Zerit和Zerit XR）、阿巴卡韦（ABC，例如，Ziagen）、恩曲他滨（emtricitabine）（FTC，例如，恩曲他滨（Emtriva）（以前的Coviracil））、恩替卡韦（INN，例如，Baraclude）、apricitabine（ATC）、替诺福韦（替诺福韦泰诺福韦富马酸盐（tenofovir disoproxilfumarate），例如，Viread）、阿德福韦（bis-POM PMPA，例如，Preveon和Hepsera）、耐多核苷A、耐多核苷B、奈韦拉平（例如，Viramune）、地拉夫定（例如，Rescriptor）、依法韦仑（例如，Sustiva and Stocrin）、依曲韦林（例如，Intelence）、阿德福韦二匹伏酯、印地那韦、利托那韦（例如，Norvir）、沙奎那韦（例如，Fortovase、Invirase）、那非那韦（例如，Viracept）、agenerase、洛匹那韦（例如，Kaletra）、阿扎那韦（例如，Reyataz）、福沙那韦（例如，Lexiva、Telzir）、替拉那韦（例如，Aptivus）、地瑞那韦（例如，Prezista）、安泼那韦、脱氧胞嘧啶三磷酸酯、拉米夫定三磷酸盐、恩曲他滨三磷酸盐、阿德福韦二磷酸盐、喷昔洛韦三磷酸盐、洛布卡韦三磷酸盐、金刚胺、金刚烷乙胺、扎那米韦和奥塞米韦、拉替拉韦（例如，Isentress）、埃替拉韦（例如，GS9137或JTK-303）、MK-2048、马拉韦罗（maraviroc）（例如，Celsentri）、恩夫韦地（例如，Fuzeon）、TNX-355、PRO140、BMS-488043、plerixafor、表没食子儿茶素没食子酸酯、vicriviroc、aplaviroc、bl2（在一些长期非进展者中发现的抗HIV抗体）、griffithsin、DCM205、bevirimat、和vivecon。例如，一种或多种的AZT和西多福韦可以用来管理或治疗XMRV相关神经免疫疾病或XMRV相关淋巴瘤。作为另一个实例，干扰素（例如，干扰素-β）可以用来管理或治疗XMRV相关神经免疫疾病或XMRV相关淋巴瘤。
作为另一个实例，用于治疗XMRV相关疾病或障碍的制剂可以将免疫应答靶向逆转录病毒，如靶向病毒感染细胞的NfkB抑制剂和单克隆抗体，包括但不限于Rituxan和Velcade。
在一种实施方式中，本发明提供了确定受试者发展慢性疲劳综合征（CFS）、纤维肌痛、多发性硬化（MS）、帕金森病、肌萎缩侧索硬化（ALS）、尼曼-皮克C型病、自闭症谱系障碍（ASD）、慢性莱姆病、或XMRV相关淋巴瘤（在一种实施方式中，其为XMRV相关套细胞淋巴瘤（MCL）或慢性淋巴细胞性白血病淋巴瘤（CLL））的风险的方法。在另一种实施方式中，本发明提供了治疗、抑制或阻止受试者体内上述疾病的方法。
在另一种实施方式中，本发明提供了确定受试者易患慢性疲劳综合征（CFS）、纤维肌痛、多发性硬化（MS）、帕金森病、肌萎缩侧索硬化（ALS）、尼曼-皮克C型病、自闭症谱系障碍（ASD）、慢性莱姆病、或XMRV相关淋巴瘤(在一种实施方式中，其为XMRV相关套细胞淋巴瘤（MCL）或慢性淋巴细胞性白血病淋巴瘤（CLL）)的方法。
按照本文描述的方法，给予可以是胃肠外给予、肺部给予、口服给予、局部给予、皮内给予、肌内给予、腹膜内给予、静脉内给予、皮下给予、鼻内给予、硬膜外给予、眼部给予、颊部给予、或直肠给予。
当用于本文描述的治疗时，能够以纯品形式来采用治疗有效量的抗逆转录病毒剂，或者，当存在这类形式时，以药用盐形式并且具有或没有药用赋形剂。例如，能够以适用于任何医学治疗的合理的受益/风险比率，以减少或消除XMRV复制或减少或消除神经免疫疾病或淋巴瘤的征兆或症状的足够量给予本发明的化合物。
能够与药用载体结合以产生单剂量形式的本文描述的组合物的量将会改变，这取决于所治疗的宿主以及给药的具体模式。本领域技术人员应当理解的是，在每种剂型的单个剂量中包含的制剂的单位含量本身并不需要构成治疗有效量，因为可以通过给予多个单个剂量来达到必要的治疗有效量。
可以通过在细胞培养物或实验动物中用于确定LD50（50%群体的致死剂量）和ED50（50%群体中治疗有效剂量）的标准制药程序来确定本文描述的组合物的毒性和疗效。在毒性和疗效之间的剂量比是治疗指数，其可以表示为比率LD50/ED50，其中较大的治疗指数是优选的。
针对任何具体受试者的特定的治疗有效剂量水平将取决于各种各样的因素，包括正在治疗的障碍和障碍的严重性；所采用的特定化合物的活性；所采用的特定组合物；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间；给药途径；所采用组合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所采用的特定化合物联合地或同时地使用的药物；以及在医学领域中众所周知的类似因素（参见例如，Koda-Kimble et al.(2004)AppliedTherapeutics:The Clinical Use of Drugs,Lippincott Williams & Wilkins,ISBN 0781748453;Winter(2003)Basic Clinical Pharmacokinetics,4th ed.,Lippincott Williams & Wilkins,ISBN 0781741475;Sharqel(2004)AppliedBiopharmaceutics & Pharmacokinetics,McGraw-Hill/Appleton & Lange,ISBN 0071375503）。例如，本领域技术人员完全已知的是以低于实现所期望的治疗效果所需要的水平开始组合物的剂量，并逐渐提高剂量，直到实现所期望的效果。如果希望的话，为了给予的目的，可以将有效日剂量分为多剂量。因此，单剂量组合物可以包含这样的量或其约数从而构成日剂量。然而，应当理解的是，本发明的化合物和组合物的总每日使用量可以由主治医师在合理的医学判断的范围内来决定。
抗逆转录病毒剂的给予可以发生为单个事件或经过治疗的时间过程。例如，可以每日、每周、每两周、或每月给予抗逆转录病毒剂。为了治疗急性病症，治疗的时间过程将通常是至少数天。某些病症可以从数天延长治疗至数周。例如，治疗可以延长超过一周、两周、或三周。对于更加慢性的病症，治疗可以从数周延长至数月或甚至1年或更长时间。
可以在用于XMRV相关神经免疫疾病或XMRV相关淋巴瘤的常规治疗形式之前、同时、或之后，进行按照本文描述的方法的治疗。
可以和其他制剂（如抗生素剂、抗炎剂、或其他制剂）一起同时地或顺序地给予抗逆转录病毒剂。例如，可以和其他制剂（如抗生素剂或抗炎剂）一起同时给予抗逆转录病毒剂。可以通过给予单独的组合物（各自包含一种或多种抗逆转录病毒剂、抗生素剂、抗炎剂、或其他制剂）来进行同时给予。可以通过给予包含两种或更多种抗病毒剂、抗生素剂、抗炎剂、或其他制剂的一种组合物来进行同时给予。可以和抗生素剂、抗炎剂、或其他制剂一起顺序地给予抗逆转录病毒剂。例如，可以在给予抗生素剂、抗炎剂、或其他制剂之前或之后给予抗逆转录病毒剂。
在一种实施方式中，“治疗”是指治疗性治疗或预防性或防止性措施，其中目的是防止或减轻目标病理病症或障碍（如上文描述的）。因此，在一种实施方式中，治疗可以包括直接影响或治愈、抑制、防止、阻止、降低疾病、紊乱或病症的严重性，延缓其发作，减少与其有关的症状，或它们的组合。因此，在一种实施方式中，“治疗”尤其是指延缓进展、加快缓解、诱导缓解、增强缓解、加快恢复、提高替代治疗的功效或减小对其的抗性、或它们的组合。在一种实施方式中，“预防”尤其是指延缓症状的发作、防止疾病的复发、降低复发事件的次数或频率、增加有症状事件之间的潜伏期、或它们的组合。在一种实施方式中，“抑制”或“防止”尤其是指降低症状的严重程度、降低急性事件的严重程度、减少症状的数目、降低疾病相关症状的发病率、减少症状的潜伏期、改善症状、减少继发性症状、减少继发性感染、延长患者存活期、或它们的组合。
在一些实施方式中，在如本文描述的任何形式或实施方式中，用于本发明的任何组合物可以包含病原体活化的淋巴细胞和记忆细胞的活化剂[活性组分]。在一些实施方式中，在如本文描述的任何形式或实施方式中，本发明的任何组合物可以由病原体活化的淋巴细胞和记忆细胞的活化剂[活性组分]构成。在一些实施方式中，在如本文描述的任何形式或实施方式中，本发明的组合物可以基本上由病原体活化的淋巴细胞和记忆细胞的活化剂[活性组分]构成。在一些实施方式中，术语“包含”是指包括指示的活性剂，如有丝分裂原、病毒衍生肽、植物凝集素、细菌内毒素、病毒、脂质A、细胞因子、或淋巴因子或有丝分裂原和抗IgD抗体，以及包括其他活性剂、和药用载体、赋形剂、软化剂、稳定剂等（如在制药工业中已知的）。在一些实施方式中，术语“基本上由…组成”是指一种组合物，其唯一的活性组分是指示的活性组分，然而，可以包括其他化合物，所述其他化合物用于配制品的稳定、保存等，但并不直接涉及指示的活性组分的治疗/诊断作用。在一些实施方式中，术语“基本上由…组成”可以指有助于活性组分释放的成分。在一些实施方式中，术语“由…组成”是指含有活性组分和药用载体或赋形剂的组合物。
在一些实施方式中，在如本文描述的任何实施方式中，本发明的方法可以包括一个步骤。在一些实施方式中，在如本文描述的任何形式或实施方式中，本发明的任何组合物可以由特定步骤组成。在一些实施方式中，在如本文描述的任何形式或实施方式中，本发明的组合物可以基本上由特定步骤组成。在一些实施方式中，术语“包含”是指包括指示的一个或多个步骤、以及包括如本领域中已知的其他步骤。在一些实施方式中，术语“基本上由…组成”是指方法，其仅有的步骤是指定的步骤，然而，可以包括并不直接涉及指定步骤的诊断作用的其他步骤。在一些实施方式中，术语“由…组成”是指方法，其仅包括指定的步骤。
提供以下实施例用来更充分地说明本发明的优选实施方式。然而，它们绝不应被理解为限制本发明的广泛范围。
实施例
实施例1：活化剂增加异嗜性鼠白血病病毒（XMRV）感染的血清反 应阳性的受试者体内的特异性抗体
将来自已知感染有XMRV的受试者的血液收集在抗凝血剂中，带到实验室，并在室温下24小时内，将1ml血液转移到包含有丝分裂原的试管中。测试血浆其余部分的XMRV抗体（图1，实线）并保持用于任何另外的未来的比较测试。在包含有丝分裂原的试管中孵育血液3-5天（5%CO2，37℃），然后收集经处理的血浆并利用用来测试未处理血浆的相同的试剂盒/测定法来测试XMRV抗体。
在有丝分裂原处理的血浆中的XMRV抗体浓度高于未处理的血浆（表1）。因此，可以更高灵敏度地诊断处理的血浆的XMRV感染。
表1.在来自XMRV感染受试者的未处理的和有丝分裂原处理的血 浆中的XMRV抗体浓度（OD）。
样品# 血浆（未处理） 有丝分裂原
1 0.110 0.300
2 0.200 0.550
3 0.101 0.200
4 0.090 0.140
5 0.087 0.170
6 0.130 0.560
7 0.400 0.450
8 0.070 0.095
截止值=0.100
通过相同实验方案来测试来自并未感染有XMRV的受试者的血液样品，作为对照组，表明利用本发明的试剂盒和方法还可以提高测定的诊断特异性。
表2.在来自非XMRV感染的对照受试者的未处理的和有丝分裂原 处理的血浆中的XMRV抗体浓度（OD）
样品# 血浆（未处理） 有丝分裂原
1 0.030 0.023
2 0.099 0.015
3 0.010 0.012
4 0.090 0.014
5 0.012 0.017
6 0.013 0.005
7 0.024 0.025
8 0.007 0.009
截止值=0.100
实施例2：抗IGD进一步增加异嗜性鼠白血病病毒（XMRV）感染 的血清反应阳性的受试者体内的活化剂提高的特异性抗体
由感染有XMRV的个体中收集血液样品，其血浆抗体水平已下降到等于或低于测定检测水平（例如，OD读数接近截止值）。在抗IgD、抗IgD和有丝分裂原、或单独地有丝分裂原中，孵育等分部分的1ml新鲜的、非凝固的全血（或PBMC）。
表3：在用抗IgD、有丝分裂原、或抗IgD和有丝分裂原孵育三天以 后，抗XMRV抗体的OD读数：
样品# 血浆（未处理） 抗-IgD 抗IgD和有丝分裂原 有丝分裂原
1 0.110 0.120 0.400 0.300
2 0.200 0.350 0.600 0.550
3 0.101 0.150 0.380 0.200
4 0.090 0.110 0.180 0.140
5 0.087 0.115 0.240 0.170
6 0.130 0.180 0.800 0.560
7 0.400 0.400 0.500 0.450
8 0.070 0.080 0.120 0.095
截止OD-0.100
在用有丝分裂原和/或抗IgD孵育以后，在测定的“灰色区”（即，接近检测限）内的血液样品给出正读数（表3）。虽然有丝分裂原单独地能够检测血浆中的XMRV特异性抗体，但是添加抗IgD会改善抗体检测，尤其是在具有非常低OD的样品中，并且将测定的特异性从84%提高到100%。抗IgD单独地证明是较差的刺激物，为测定提供仅84%的敏感度，其并不允许检测并未用有丝分裂原处理的许多样品。
实施例3：活化剂提高戊型肝炎病毒（HEV）感染的血清反应阳性的 受试者体内的特异性抗体
将来自北京当地人群的收集在抗凝血剂中的血液带到实验室（在RT下在24小时内）并将1ml血液转移到包含活化剂（SMARTubeTM，其可获自http://www.smartube-bio.com/?CategoryID=190，于2011年9月6日访问）的容器中。测试血浆（未处理的）其余部分的HEV抗体并且保持用于任何另外的未来的比较测试。将容器中的血液孵育3-5天（5%CO2，37℃），然后收集血浆并利用用于测试未处理血液样品的相同试剂盒/测定来测试HEV抗体。
表4：在用活化剂刺激全血以后HEV抗体水平（ELISA）
Figure BDA00003106115900411
表4示出7/15血清反应阳性样品的结果，其中在用活化剂刺激以后抗体水平提高。抗体提高的实际水平比在OD读数（按原样）中表达的高数倍，并且它可以仅仅是估计的（当以1:4稀释血浆时（1ml血液，其是在2ml的包含活化剂的介质中的～0.5ml血浆）），因此相等的OD读数表示抗体水平4倍提高。
样品1211是紧挨着截止值右侧的OD读数的良好实例，在用活化剂刺激以后其变成明显阳性。
实施例4：活化剂提高丙型肝炎病毒（HCV）感染的血清反应阳性受 试者体内的特异性抗体
将来自丙型肝炎病毒（HCV）高风险人群的收集在抗凝血剂中的血液带到实验室（在室温下，在24小时内），并将1ml血液转移到包含活化剂（SMARTubeTM）的容器中。测试血浆（未处理的）的其余部分的HCV抗体并保持用于任何另外的未来的比较测试。将容器中的血液孵育3-5天（5%CO2，37℃），然后收集血浆并利用用于测试未处理血液样品的相同试剂盒/测定来测试HCV抗体。
表5：在用活化剂刺激全血以后的HCV抗体水平（ELISA）
HCV Ab.Wantai血浆 HCV Ab Wantai SMART血浆
CO/0.140 CO/0.14
s2274 0.493 0.608
s2011 1.611 2.149
s2040 0.746 1.053
s2046 0.78 1.051
s2108 1.407 1.741
s2125 1.264 1.966
s2126 1.08 1.924
s2135 0.949 2.008
s2228 0.856 1.177
实施例5：活化剂提高甲型肝炎病毒（HAV）感染的血清反应阳性的 受试者体内的特异性抗体
在利用用于HAV抗体的市售测试试剂盒进行测试以前，用活化剂（SMARTubeTM）预处理来自健康成年供体的14个血液样品，重复5次。按照制造商的使用说明书，在相同孔板上，各自100μL，平行运行未处理的和处理的血浆。
存在OD接近截止值的两个血浆阳性样品，在用活化剂预处理以后，其也是阳性的，具有显著提高的抗体水平，从而使结果远离截止值。
来自相同供体的5份重复血液给出类似结果，表明系统的可重复性。结果表示为信号OD读数。在相同的ELISA板上，所有样品运行为未处理的和处理的血浆对，从而便于直接比较。
在用有丝分裂原预处理血液以后，在血液样品中具有非常低水平抗体的两个血浆抗体阳性结果具有高得多的HAV抗体水平，从而给出更明确的HAV抗体阳性结果。
表6：HAV抗体-结果表。（OD读数；截止值为1.140）
样品# 血浆 SMART血浆
a b c d e
6 1.362 2.468 2.480 2.332 2.387 2.504
18 1.297 2.062 2.196 2.149 2.132 2.117
在一些血清反应阳性的个体中，并且尤其是在具有较低范围抗体的那些个体中，在处理的血浆中的OD读数高于在未处理的血浆中的OD读数，从而能够以较高的诊断敏感度诊断感染。
实施例6：活化剂提高异嗜性鼠白血病病毒（XMRV）感染的血清反 应阳性的受试者体内的特异性抗体
以用如本文描述的活化剂进行孵育之前和之后，测试了在血浆中体外刺激XMRV抗体生产。通过实验使猴子感染有XMRV，然后在感染后的不同时间测试血清中的抗体。
从收集的新鲜血液，将1ml孵育在37℃，5%CO2培养箱中，在用于XMRV的实验SMARTubeTM中持续5天。收集血浆的其余部分并冷冻直到测试。在孵育以后，还收集和冷冻处理的血浆（上清液）。将冷冻成对的样品（未处理的血浆和处理的血浆）送去通过P15E抗原XMRV抗体试剂盒加以测试，同时利用p70抗原XMRV抗体试剂盒来测试单独成对样品。利用已知标准来计算抗体水平。
表7.在XMRV感染的猴子体内P15E和p70抗体水平
在来自所有4只猴子的血液样品中抗P15E的抗体水平提高。在两个（RWy2和PKd2）受试者中，甚至使用在SMART血浆中1:4稀释的血浆，可以看到刺激提高了抗P15E和p70的抗体水平。
实施例7：活化剂诱导增加免疫的受试者体内乙型肝炎病毒（HBV） 突破性感染的特异性抗体
利用用于HBV抗核心抗体的市售测试试剂盒，在测试以前，用活化剂预处理来自成年供体的血液样品。按照制造商的使用说明书，在相同孔板上，各自75μL，平行地运行未处理的和处理的血浆。
尽管先前进行HBV免疫（目前使用表面HBV抗原进行免疫），但一些血液供体仍然被HBV感染。在血浆中的抗HBV核心的OD读数低于测定的检测水平。然而，在用活化剂预处理以后，它们是明显阳性的，即，抗体水平的提高使OD读数高于检测截止值。（在真正感染以后，抗核心抗体缓慢上升至可检测和可测量水平）。
表8：在来自HBV感染血液供体的有丝分裂原处理的血浆和未处理 的血浆中HBV抗核心抗体的检测（OD读数；截止值为0.340）
血液供体 未处理的血浆 处理的血浆
样品编号 信号/CO 信号/CO
02237 1.02 1.48
04733 0.97 1.71
02039 1.10 2.59
09271 0.07 1.50
00489 0.27 1.85
02036 0.60 2.30
02220 0.17 1.47
尽管进行了免疫，在感染有HBV（=突破性感染）的个体中在处理的血浆中的OD读数，并且尤其是在未处理的血浆中具有较低范围（或检测不到的范围）的抗体的那些中，是较高的，从而能够以较高的诊断敏感度诊断感染。
已参照附图描述了本发明的优选实施方式，应当理解的是，本发明并不限于这些明确的实施方式，并且本领域技术人员可以在其中进行各种变化和改进而不偏离如在所附权利要求中所限定的本发明的范围或精神。

Claims (52)

1.一种用于在来自患有慢性病毒感染、潜伏性病毒感染、病毒再感染、病毒突破性感染、或它们的组合的受试者的样品中检测病毒特异性抗体的方法，包括：
a)在包含以下的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育来自所述受试者的全血样品：(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合；
b)将步骤a)产生的所述培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及
c)检测步骤b)的所述抗原-抗体免疫复合物；
从而检测病毒特异性抗体的存在。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤a)的所述培养物产生上清，并且将所述上清暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述病毒感染是嗜异性鼠白血病病毒（XMRV）感染。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述病毒感染是甲型肝炎病毒（HAV）感染、乙型肝炎病毒（HBV）感染、丙型肝炎病毒感染（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）感染、或戊型肝炎病毒（HEV）感染。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤a)的所述培养物进一步包含抗B淋巴细胞膜结构域的抗体。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述抗体是抗IgD。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述抗体是抗IgG、抗IgA或抗IgE、或抗CD19。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述活化剂是商陆有丝分裂原。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述活化剂是病毒衍生肽、植物凝集素、细菌内毒素、病毒、脂质A、细胞因子、或淋巴因子。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是B淋巴细胞。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是T淋巴细胞。
12.一种用于在受试者体内诊断慢性病毒感染、潜伏性病毒感染、病毒再感染、病毒突破性感染、或它们的组合的方法，包括以下步骤：
a)在包含以下的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育来自所述受试者的全血样品：(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合；
b)将步骤a)产生的所述培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及
c)检测步骤b)的所述抗原-抗体免疫复合物；
其中所述抗原-抗体免疫复合物的检测表明在所述受试者体内的病毒感染。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，步骤a)的所述培养物产生上清，并将所述上清暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物。
14.根据权利要求12所述的方法，其中，所述病毒感染是嗜异性鼠白血病病毒（XMRV）感染。
15.根据权利要求12所述的方法，为甲型肝炎（HAV）、乙型肝炎（HBV）、丙型肝炎（HCV）、丁型肝炎（HDV）或戊型肝炎（HEV）感染。
16.根据权利要求12所述的方法，其中，步骤a)的所述培养物进一步包含抗B淋巴细胞膜结构域的抗体。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述抗体是抗IgD。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述抗体是抗IgG、抗IgA或抗IgE、或抗CD19。
19.根据权利要求12所述的方法，其中，所述活化剂是商陆有丝分裂原。
20.根据权利要求12所述的方法，其中，所述活化剂是病毒衍生肽、植物凝集素、细菌内毒素、病毒、脂质A、细胞因子、或淋巴因子。
21.根据权利要求12所述的方法，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是B淋巴细胞。
22.根据权利要求12所述的方法，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是T淋巴细胞。
23.一种将来自受试者全血样品中低抗病毒抗体水平提高至可检测水平的方法，包括：
a)在包含以下的活化剂的培养基存在下，在培养物中孵育所述全血样品：(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合；
b)将步骤a)产生的所述培养物暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物；以及
c)检测步骤b)的所述抗原-抗体免疫复合物；
从而将低病毒抗体水平提高至可检测水平。
24.根据权利要求23所述的方法，其中步骤a)的所述培养物产生上清，并将所述上清暴露于病毒抗原，从而允许形成抗原-抗体免疫复合物。
25.根据权利要求23所述的方法，其中所述病毒感染是嗜异性鼠白血病病毒（XMRV）感染。
26.根据权利要求23所述的方法，其中所述病毒感染是甲型肝炎病毒（HAV）感染、乙型肝炎病毒（HBV）感染、丙型肝炎病毒感染（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）感染、或戊型肝炎病毒（HEV）感染。
27.根据权利要求23所述的方法，其中步骤a)的所述培养物进一步包含抗B淋巴细胞膜结构域的抗体。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述抗体是抗IgD。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述抗体是抗IgG、抗IgA或抗IgE、或抗CD19。
30.根据权利要求23所述的方法，其中所述活化剂是商陆有丝分裂原。
31.根据权利要求23所述的方法，其中，所述活化剂是病毒衍生肽、植物凝集素、细菌内毒素、病毒、脂质A、细胞因子、或淋巴因子。
32.根据权利要求23所述的方法，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是B淋巴细胞。
33.根据权利要求23所述的方法，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是T淋巴细胞。
34.一种用于检测在受试者体内低水平表达的病毒特异性抗体的试剂盒，包括：用于保留全血样品的容器，其中所述容器包括包含选自由以下组成的组中的所述全血样品的(i)病毒活化的淋巴细胞、(ii)针对所述病毒特异性的记忆细胞、(iii)病毒特异性抗体表达、或(iv)它们的组合的一种或多种活化剂的培养基：a)抗淋巴细胞结构域的抗体和b)病毒衍生肽。
35.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述病毒衍生肽是病毒抗原。
36.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述淋巴细胞结构域是T淋巴细胞结构域。
37.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述淋巴细胞结构域是B淋巴细胞结构域。
38.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述病毒感染是嗜异性鼠白血病病毒（XMRV）感染。
39.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述病毒感染是甲型肝炎病毒（HAV）感染、乙型肝炎病毒（HBV）感染、丙型肝炎病毒感染（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）感染、或戊型肝炎病毒（HEV）感染。
40.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述B淋巴细胞膜结构域是IgD。
41.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述B淋巴细胞膜结构域是IgG、IgA、或IgE、或CD19。
42.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述活化剂是商陆有丝分裂原。
43.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述活化剂是病毒衍生肽、植物凝集素、细菌内毒素、病毒、脂质A、细胞因子、或淋巴因子。
44.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是B淋巴细胞。
45.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述病毒活化的淋巴细胞或记忆细胞是T淋巴细胞。
46.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述试剂盒另外包括用于检测病毒特异性抗体的测定。
47.根据权利要求46所述的试剂盒，其中，所述测定是酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹、或免疫荧光测定。
48.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述容器由塑料、玻璃、硅、合成膜、或金属制造。
49.根据权利要求48所述的试剂盒，其中，所述容器具有内表面的涂层。
50.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述容器是试管、瓶、孔或烧瓶。
51.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述容器被真空密封。
52.根据权利要求34所述的试剂盒，其中，所述容器是真空管。
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