CN103217322A - 适用于白细胞分类的试剂及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，包括：缓冲剂,阳离子表面活性剂或非离子表面活性剂或者二者的组合；上述阳离子表面活性剂为：(CH3)3N-(CH2)n-CH3，X-=Cl-或者Br-，优选n=11、X-=Cl-；上述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂；上述表面活性剂、缓冲剂溶解后，溶液的pH值为6.0-8.0。本发明的有益之处在于：采用本发明的试剂，可快速溶解红细胞，并提高淋巴细胞与单核细胞的聚集性，增强了白细胞的分类效果，使分类结果更准确；另外，本发明的试剂其成本比原装试剂更加低廉，市场前景很好。

Description

适用于白细胞分类的试剂及方法
技术领域
本发明涉及一种试剂及方法，具体涉及一种适用于白细胞分类的试剂及方法。
背景技术
现有的用于对白细胞进行分类的方法，主要采用阻抗法、散射法、侧向散射法，或者采用以上两种或者两种以上的方法进行组合使用。对白细胞进行分类的原理是：首先采用试剂对样本进行处理，处理后的样本中的红细胞被溶解，一部分白细胞膜被损伤，损伤后的白细胞收缩，产生不同程度的聚集，经激光照射后散射光的强度产生差异，从而将白细胞分类。但是，在采用现有的处理试剂和现有的方法对白细胞进行分类的过程中发现，单核细胞与淋巴细胞、中性粒细胞的分界不够明显，淋巴细胞与单核细胞的散点不够聚集，在图谱上相距很近，这样就导致检测结果与实际情况出现一定的偏差，严重影响对实际情况的正确判断。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种在白细胞分类的通道内快速溶解红细胞、增强白细胞的分类效果的试剂和方法。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，包括：
用于溶解红细胞、损伤部分白细胞的表面活性剂，
用于稳定溶液pH值的缓冲剂；
前述表面活性剂为阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂或者二者的组合，前述阳离子表面活性剂为：
Figure BDA00002745631100021
X-=Cl-或者Br-；
前述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂；
前述表面活性剂、缓冲剂溶解后，溶液的pH值为6.0-8.0。
前述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，前述n=7-15。
优选的，前述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，前述n=11。
更为优选的，前述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，前述n=11、X-=Cl-。
更为优选的，前述十二烷基三甲基氯化铵的使用浓度为200-1000mg/L。
前述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，前述非离子表面活性剂为：脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯醚、脂肪胺聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚或者蓖麻油聚氧乙烯醚。
前述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，前述非离子表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚，优选的，其使用浓度为1000-5000mg/L。
前述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，前述缓冲剂为：邻苯二甲酸盐、磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、HCL-Tris、MES、PIPES或者MOPS。
利用前述的白细胞分类试剂对白细胞进行分类的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、将血液样本与白细胞分类试剂混合，装入血细胞检测仪；
（2）、在41℃时加入荧光染料；
（3）、孵育反应22秒；
（4）、在激光照射下经鞘流，得到侧向荧光和多角度的散射光信息；
（5）、对前述光信息进行处理，得到各细胞的信息。
本发明的有益之处在于：采用本发明的试剂，可快速溶解红细胞，并提高淋巴细胞与单核细胞的聚集性，增强了白细胞的分类效果，使分类结果更准确；另外，本发明的试剂其成本比原装试剂更加低廉；采用本发明的方法，可快速、准确的对白细胞进行分类，不仅能保证工作质量，而且可提高工作效率。
附图说明
图1是实施例1所对应的白细胞分类检测结果图；
图2是实施例2所对应的白细胞分类检测结果图；
图3是实施例3所对应的白细胞分类检测结果图；
图4是实施例4所对应的白细胞分类检测结果图；
图5是实施例5所对应的白细胞分类检测结果图；
图6是实施例6所对应的白细胞分类检测结果图；
图7是实施例7所对应的白细胞分类检测结果图；
图8是实施例8所对应的白细胞分类检测结果图；
图9是实施例9所对应的白细胞分类检测结果图；
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
首先，按照表1所示，准备各相应原料。
表1试剂配比
DTAC（mg/L） Brij30（mg/L） 缓冲体系 最终pH
实施例1 200 —— 磷酸盐 7.5
实施例2 600 —— 磷酸盐 7.5
实施例3 1000 —— 磷酸盐 7.5
实施例4 —— 1000 磷酸盐 7.5
实施例5 —— 3000 磷酸盐 7.5
实施例6 —— 5000 磷酸盐 7.5
实施例7 200 1000 磷酸盐 7.5
实施例8 400 3000 磷酸盐 7.5
实施例9 700 5000 磷酸盐 7.5
实施例10 400 3000 磷酸盐 6.0
实施例11 400 3000 磷酸盐 8.0
实施例12 400 3000 邻苯二甲酸盐 7.5
实施例13 400 3000 硼酸盐 7.5
实施例14 400 3000 HCL-Tris 7.5
以实施例7为例，具体介绍本发明分类试剂的制备方法：
首先，称取一定量的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，溶于一定量的去离子水中，得到pH值在7.5左右的磷酸盐缓冲溶液；
然后，称取200mg DTAC、1000mg Brij30，溶于上述1L磷酸盐缓冲液中；
最后，将混合溶液的pH值调整到7.5，即可。
其他实施例的配制方法相同，不再赘述。
在本发明中，DTAC是十二烷基三甲基氯化铵的缩写，其结构式为：
Figure BDA00002745631100051
可以写成如下的通式：
Figure BDA00002745631100052
X-=Cl-；当n=7-10、12-15时，同样可以实现本发明的技术方案，用Br-取代Cl-也同样可以实现本发明的技术方案，在此均不再赘述。
在本发明中，Brij30是脂肪醇聚氧乙烯醚的缩写，其可以用脂肪酸聚氧乙烯醚、脂肪胺聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、蓖麻油聚氧乙烯醚等聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂代替，同样也可以实现本发明的技术方案，在此也不再赘述。
在各实施例中，DTAC等阳离子表面活性剂、Brij30等聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂均溶于缓冲溶液中，由于缓冲溶液的作用是将pH值稳定在一定的范围内，采用何种缓冲剂对本发明分类试剂的性能指标不会有大的影响，所以，本发明的缓冲体系不局限于表1所示的磷酸盐、邻苯二甲酸盐、硼酸盐、HCL-Tris，其还可以是柠檬酸盐、MES、PIPES、MOPS等。
利用上述14份不同的分类试剂对同一样本进行检测。
检测方法如下：
将血液样本与本发明试剂混合，装入血细胞检测仪，然后在41℃时加入荧光染料，孵育反应22秒，最后在激光照射下经鞘流，即得到侧向荧光和多角度的散射光信息，处理上述光信息后即得到各细胞的信息。
采用上述方法对同一样本进行检测后，检测结果见图1至图9，由附图中所示的图谱可以看出：
1、DTAC单独使用，在200-1000mg/L的浓度范围内，pH7.5左右，均可将白细胞有效分类（参见图1、2、3）；
2、Brij30单独使用，在1000-5000mg/L的浓度范围内，pH7.5左右，均可将白细胞有效分类（参见图4、5、6）；
3、DTAC与Brij30混合使用，DTAC400mg/L、Brij303000mg/L、pH7.5左右时，对白细胞分类的效果最好（参见图7、8、9）。
另外，经检测还发现：
1、缓冲溶液的pH值在6.0-8.0的范围内，对白细胞分类效果无明显影响（实施例8、10、11）；
2、缓冲剂的种类对白细胞分类效果无明显影响（实施例8、12、13、14）。
由以上各实施例可以看出，采用本发明的试剂，可提高淋巴细胞与单核细胞的聚集性，增强了白细胞的分类效果，使分类结果更准确；采用本发明的方法，可快速、准确的对白细胞进行分类，不仅能保证工作质量，而且可提高工作效率。另外，本发明的试剂其成本比原装试剂更加低廉，市场前景很好。
需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，包括：
用于溶解红细胞、损伤部分白细胞的表面活性剂，
用于稳定溶液pH值的缓冲剂；
上述表面活性剂为阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂或者二者的组合，上述阳离子表面活性剂为：
Figure FDA00002745631000011
X-=Cl-或者Br-；
上述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚型非离子表面活性剂；
上述表面活性剂、缓冲剂溶解后，溶液的pH值为6.0-8.0。
2.根据权利要求1所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述n=7-15。
3.根据权利要求2所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述n=11。
4.根据权利要求3所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述X-=Cl-。
5.根据权利要求4所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述十二烷基三甲基氯化铵的使用浓度为200-1000mg/L。
6.根据权利要求1所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述非离子表面活性剂为：脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯醚、脂肪胺聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚或者蓖麻油聚氧乙烯醚。
7.根据权利要求6所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述非离子表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚。
8.根据权利要求7所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述脂肪醇聚氧乙烯醚的使用浓度为1000-5000mg/L。
9.根据权利要求1所述的适用于白细胞分类的试剂，其特征在于，上述缓冲剂为：邻苯二甲酸盐、磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、HCL-Tris、MES、PIPES或者MOPS。
10.利用权利要求1至9任意一项所述的白细胞分类试剂对白细胞进行分类的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、将血液样本与白细胞分类试剂混合，装入血细胞检测仪；
（2）、在41℃时加入荧光染料；
（3）、孵育反应22秒；
（4）、在激光照射下经鞘流，得到侧向荧光和多角度的散射光信息；
（5）、对上述光信息进行处理，得到各细胞的信息。
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