CN103204812A - 一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用 - Google Patents
一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103204812A CN103204812A CN2013101440767A CN201310144076A CN103204812A CN 103204812 A CN103204812 A CN 103204812A CN 2013101440767 A CN2013101440767 A CN 2013101440767A CN 201310144076 A CN201310144076 A CN 201310144076A CN 103204812 A CN103204812 A CN 103204812A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- alkylation
- peptide
- solution
- peptides
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 title claims abstract description 39
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 title 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 134
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 37
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical group NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 77
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 18
- -1 1-(3-aminopropyl)-3-butyl bromide imidazole Chemical compound 0.000 claims description 10
- PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-carboxyethyl)phosphanyl]propanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 claims description 5
- MCMFEZDRQOJKMN-UHFFFAOYSA-N 1-butylimidazole Chemical compound CCCCN1C=CN=C1 MCMFEZDRQOJKMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PQIYSSSTRHVOBW-UHFFFAOYSA-N 3-bromopropan-1-amine;hydron;bromide Chemical compound Br.NCCCBr PQIYSSSTRHVOBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical group C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 4
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 abstract description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 abstract description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 15
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 9
- 108010056384 CDPGYIGSR Proteins 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- SRSAMLMFVUJPSR-UHFFFAOYSA-N 2-carboxyethylphosphanium;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)CCP SRSAMLMFVUJPSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 5
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 3
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000001254 matrix assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- YXNAWCUIZOCJNG-UHFFFAOYSA-N 2-iodo-n-phenylacetamide Chemical compound ICC(=O)NC1=CC=CC=C1 YXNAWCUIZOCJNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAFOVYBEPLSVNJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3-butyl-2h-imidazol-1-yl)propan-1-amine Chemical compound CCCCN1CN(CCCN)C=C1 UAFOVYBEPLSVNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- 238000001077 electron transfer detection Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000143 2-carboxyethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- QNYFTMCGNXDUQP-UHFFFAOYSA-N 2-iodo-N-octylacetamide Chemical compound CCCCCCCCNC(=O)CI QNYFTMCGNXDUQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABFYEILPZWAIBN-UHFFFAOYSA-N 3-(iminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;hydrochloride Chemical compound Cl.CN(C)CCCN=C=N ABFYEILPZWAIBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 238000010847 SEQUEST Methods 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 108091007999 druggable proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000038037 druggable proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000000119 electrospray ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- DCPMPXBYPZGNDC-UHFFFAOYSA-N hydron;methanediimine;chloride Chemical compound Cl.N=C=N DCPMPXBYPZGNDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- XPAMOMHSMMPECG-UHFFFAOYSA-N n-benzyl-2-iodoacetamide Chemical compound ICC(=O)NCC1=CC=CC=C1 XPAMOMHSMMPECG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- REJGOFYVRVIODZ-UHFFFAOYSA-N phosphanium;chloride Chemical compound P.Cl REJGOFYVRVIODZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000005956 quaternization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- OEIXGLMQZVLOQX-UHFFFAOYSA-N trimethyl-[3-(prop-2-enoylamino)propyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCCNC(=O)C=C OEIXGLMQZVLOQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用。所述烷基化衍生试剂为：溴化1-[3-[(2-碘-1-氧乙基)氨基]丙基]-3-丁基咪唑（IPBI），其结构如式（Ⅰ）所示。本发明所提供的烷基化衍生试剂以碘乙酰胺基为活性功能团，同时具有强疏水性、强气相碱性且具有包含永久性正电荷的结构特征，可实现多肽/蛋白质中活性巯基的选择性衍生和高效标记，可显著地提高质谱分析中肽段的带电荷数、离子化效率和检测灵敏度，从而显著提高含半胱氨酸肽段的检出率。同时，本发明所提供的烷基化衍生试剂合成过程简单、成本较低、反应重现性好，宜于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物大分子的标记，具体地说是一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用。
背景技术
在后基因组学时代，蛋白质组分析受到越来越广泛的关注。然而，蛋白质样品组成的极端复杂性、宽动态范围分布特别是翻译后修饰的存在，使得其分析仍旧面临着巨大的挑战。以鸟枪法（Shotgun）为代表的bottom-up策略是复杂蛋白质组样品分离鉴定最常采用的策略，这一策略首先将蛋白质样品经蛋白质酶酶切，产生的多肽混合物经色谱分离后再通过质谱进行多肽鉴定。可见，质谱技术是蛋白质组研究必不可少的工具。
然而，基于质谱技术的多肽分析策略其主要缺陷在于不同的肽段其离子化程度具有显著的差异，此外，肽段还存在不充分离子化的问题，其主要原因在于不同的肽段具有不同的二级结构、分子量大小，带电荷状态以及亲疏水性的差异，使得不同肽段的质谱检测灵敏度具有显著的差异。特别是对于复杂蛋白质样品的分析，其宽动态范围分布使得低丰度肽段，特别是一些药物靶点蛋白质或生物标记物的酶切肽段受到高丰度肽段的抑制，其质谱检测仍旧存在较大的困难。因此，改进肽段，特别是低丰度肽段的质谱检测灵敏度具有重要意义。
为了提高肽段特别是低丰度肽段的质谱离子化效率，近年来，通过化学衍生技术在多肽中引入易于离子化标签的方法获得了广泛关注。Williams等合成了一系列疏水性的烷基化标签（如：2-碘-N-辛烷基乙酰胺和2-碘-N-苄基乙酰胺）以改善半胱氨酸肽段的质谱离子化效率（Williams D.K.,Meadows C.W.,Bori I.D.,Hawkridge A.M.,Comins D.L.,Muddiman D.C.,J.Am.Chem.Soc.2008,130:2122-2123），B型利钠肽经2-碘-N-辛烷基乙酰胺衍生后，其质谱检测限可降低约3.5倍（Shuford C.M.,Comins D.L.,WhittenJ.L.,Burnett J.C.,Muddiman D.C.,Analyst,2010,135:36-41）。Zabet-Moghaddam等将疏水性标签，碘乙酰苯胺，用于含半胱氨酸肽段的烷基化衍生，与碘乙酰胺（IAA）修饰相比，模式肽段经碘乙酰苯胺衍生后其峰强度可提高4.6-6倍（Zabet-Moghaddam M.,Shaikh A.L.,Niwayama S.,J.Mass Spectrom.2012,47,1546-1553）。Vasicek等将季铵化标签，(3-丙烯酰胺丙基)三甲基氯化胺，用于增强含半胱氨酸肽段在电子转移裂解（ETD）质谱中的分析鉴定能力，牛血清白蛋白酶切产物经衍生后其SEQUEST得分值可提高6倍，实现了高可信度的蛋白质鉴定（Vasicek L.,Brodbelt J.S.,Anal.Chem.2009,81,7876-7884）。
尽管目前已有多种烷基化衍生试剂报道并应用于了半胱氨酸肽段的烷基化衍生，然而，多肽的质谱检测灵敏度改善比较有限，目前仅限应用于合成肽段或标准蛋白质酶解产物的分析。因此，发展新型高效的烷基化衍生化试剂对于深入的蛋白质组研究具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够增强含半胱氨酸肽段质谱分析的烷基化衍生试剂，以实现多肽/蛋白质中巯基的选择性衍生、高效标记，显著地提高衍生肽段的质谱带电荷数、离子化效率和检测灵敏度，显著提高含半胱氨酸肽段的质谱检测能力。
本发明进一步的目的是提供所述烷基化衍生试剂在肽段标记、质谱检测中的应用。
本发明所提供的烷基化衍生试剂1-[3-[(2-碘-1-氧乙基)氨基]丙基]-3-丁基咪唑（IPBI），如式（Ⅰ）所示结构，
所述的烷基化衍生试剂的制备方法，是以芳香季铵化咪唑为母体结构，通过缩合反应引入和肽段反应的活性碘乙酰胺功能基团。
具体来说，所述的烷基化衍生试剂的制备方法包括以下步骤：
①以1-丁基咪唑和3-溴丙胺氢溴酸盐为原料，于80～90℃回流反应16-24小时即得中间产物溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑；
②以乙腈水为溶剂，制备溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑溶液，加入碘乙酸，在0-10℃条件下加入缩合剂进行缩合反应1-1.5小时，即得所述烷基化衍生试剂。
所述制备方法第①步按如下工艺条件进行：
以乙醇为溶剂，在氮气氛围下以1-丁基咪唑和3-溴丙胺氢溴酸盐为原料，控制二者的摩尔比为1.5-1.6:1，于80-90℃回流反应16-24小时，反应完毕后挥干溶剂，残余物用适量的水溶解，并用氢氧化钾调节溶液pH值为中性，冷冻干燥。粗产物用乙醇/四氢呋喃溶解、过滤后挥干溶剂。粗产物再用二氯甲烷洗涤3-5次，溶剂挥干后即得到中间产物：溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑。
所述制备方法的第②步按如下工艺条件进行：
将溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑溶于乙腈水溶液中至浓度为60-70mg/mL，在0-10℃条件下分别加入碘乙酸和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，所述1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑和碘乙酸以及1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比为1︰0.6-0.7︰1.2-1.3，继续反应1-1.5小时。反应完毕，采用色谱纯化即得终产物IPBI。
所述缩合剂可以是N,N'-羰基二咪唑、1-羟基-苯并-三氮唑或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。
本发明的烷基化衍生试剂可以按本发明记载的方法制备，也可按现有技术中已知的类似方法制备而成。
本发明所述的烷基化衍生试剂在肽段的标记及质谱检测中应用，可提高衍生肽段的质谱带电荷数、离子化效率和检测灵敏度，显著提高含半胱氨酸肽段的质谱检测能力。
本发明所述的烷基化衍生试剂在肽段的标记及质谱检测中应用时，所述烷基化衍生试剂与肽段/蛋白质中的半胱氨酸专一发生标记反应。
本发明中，肽段衍生方法及质谱分析：
①将肽段用pH介于8.0-8.5的缓冲液溶解制成浓度为0.1-0.4mg/mL的溶液，然后加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液，于50℃反应1小时，冷却至室温；
②向上述溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，产物可直接进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）或电喷雾质谱（ESI MS）分析。
本发明中蛋白质衍生过程及质谱分析：
①将尿素变性后的蛋白质加入pH为8.0-8.5的缓冲溶液中，配置成3-6mg/mL的蛋白质溶液，加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液，于50℃反应1小时。
②冷却至室温，向上述溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，反相除盐，冷冻干燥后用胰蛋白酶酶切即可进行MALDI-TOF MS或ESI MS分析。
本发明中的肽段/蛋白质的衍生方法均可按现有技术中已有的方法完成。
本发明所提供的烷基化衍生试剂以碘乙酰胺基为活性功能团，同时具有强疏水性、强气相碱性且具有包含永久性正电荷的结构特征，可实现多肽/蛋白质中活性巯基的选择性衍生和高效标记，可显著地提高质谱分析中肽段的带电荷数、离子化效率和检测灵敏度，从而显著提高含半胱氨酸肽段的检出率。同时，本发明所提供的烷基化衍生试剂合成过程简单、成本较低、反应重现性好且肽段衍生产物具有良好的稳定性，例如肽段ALVCEQEAR经衍生后，于室温放置一周仍可稳定存在，宜于推广应用。
附图说明
图1为肽段ALVCEQEAR、CDPGYIGSR和CKDECSLDG经IPBI衍生后的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）谱图。
图2为肽段ALVCEQEAR经IPBI衍生后，室温放置1、6、24、72及168小时的MALDI-TOF MS谱图。
图3为肽段ALVCEQEAR、CDPGYIGSR、MECFG和KEEPPHHEVPESETC分别经IAA烷基化和IPBI衍生，再将各自肽段的不同衍生物等摩尔混合后进行测试所得的MALDI-TOF MS谱图。
图4为肽段ALVCEQEAR、CDPGYIGSR、MECFG和KEEPPHHEVPESETC分别经IAA烷基化和IPBI衍生后测试所得ESI MS谱图。
图5为蛋白质过氧化氢酶分别经IAA烷基化和IPBI衍生后经胰蛋白酶酶切肽段再以等摩尔混合后测试所得MALDI-TOF MS谱图。
具体实施例
本实施例中烷基化衍生试剂IPBI按如下方法制备：
1)以乙醇为溶剂，在氮气保护下以1-丁基咪唑和3-溴丙胺氢溴酸盐为原料，控制二者的摩尔比为1.5:1，于80℃回流反应20小时。反应完毕后挥干溶剂，残余物用2mL蒸馏水溶解，并用氢氧化钾调节溶液pH值为中性，冷冻干燥。粗产物用15mL的乙醇/四氢呋喃溶解、过滤后挥干溶剂。粗产物再用18mL的二氯甲烷洗涤4次，溶剂挥发干后即得到中间产物：溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑。
2)取中间产物溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑溶解于200μL的乙腈水配置成63mg/mL的溶液，在0℃条件下加入碘乙酸，搅拌均匀后加入的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，所述1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑和碘乙酸以及1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比为1︰0.63︰1.2，继续反应1小时即可。反应完毕，采用色谱纯化即得终产物IPBI。
本实施例中的多肽/蛋白质衍生过程及质谱分析：
1)肽段衍生过程如下：将肽段用pH为8.4的缓冲液溶解制成浓度为0.33mg/mL的溶液。取15μL肽段溶液，加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时，冷却至室温，向上述溶液中加入50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，产物可直接进行MALDI-TOF MS或ESI MS分析。
2)蛋白质衍生过程如下：称取1.0mg的蛋白质用浓度为8mol/L的尿素溶液70μL溶解，然后于56℃变性1小时，冷至室温，将变性后的蛋白质用pH为8.4的缓冲溶液稀释至浓度为4.8mg/mL。取15μL蛋白质溶液，加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，于50℃反应1小时。冷却至室温，向上述溶液中加入50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，反相除盐，冷冻干燥后用胰蛋白酶酶切即可进行MALDI-TOF MS或ESI MS分析。
通过下述实施例，说明本发明提出的烷基化衍生试剂可对多肽或蛋白质中的半胱氨酸进行高效衍生，并提高肽段质谱带电荷数、离子化效率和质谱检测灵敏度。
实施例1
向肽段ALVCEQEAR中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成浓度为0.33mg/mL的肽段溶液。取15μL肽段溶液，加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向上述溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，直接点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，肽段ALVCEQEAR的衍生效率为100%（图1中A图）。
实施例2
向肽段CDPGYIGSR中加入50mmol/L pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液。取15μL肽段溶液，加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向上述溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，直接点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，肽段CDPGYIGSR的衍生效率为99.4%（图1中B图）。
实施例3
向肽段CKDECSLDG中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液。取15μL肽段溶液，加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向上述溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，直接点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，肽段CKDECSLDG的衍生效率为100%（图1中C图）。
实施例4
向肽段ALVCEQEAR中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液。取15μL肽段溶液，加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向上述溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，分别于1小时、6小时、24小时、72小时和168小时点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，肽段ALVCEQEAR的衍生产物既使于室温放置一周，其MALDI-TOF MS谱型没有发生变化（图2所示），显示了肽段衍生产物具有高稳定性。
实施例5
向肽段ALVCEQEAR中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段溶液2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，取等摩尔IAA烷基化和IPBI衍生的肽段混合点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，肽段ALVCEQEAR经IPBI衍生后与IAA烷基化相比其检测灵敏度提高了97倍（图3中A图）。
实施例6
向肽段CDPGYIGSR中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段溶液2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，取等摩尔IAA烷基化和IPBI衍生的肽段混合点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，肽段CDPGYIGSR经IPBI衍生后与IAA烷基化相比其检测灵敏度提高了62倍（图3中B图）。
实施例7
向肽段MECFG中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段溶液2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，取等摩尔IAA烷基化和IPBI衍生的肽段混合点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，当肽段MECFG经IPBI衍生后信噪比为278时，仍旧观察不到肽段经IAA烷基化的谱峰，显示肽段经IPBI衍生后检测灵敏度显著提高（图3中C图）。
实施例8
向肽段KEEPPHHEVPESETC中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，取等摩尔IAA烷基化和IPBI衍生的肽段混合点样进行MALDI-TOF MS分析，结果显示，当肽段KEEPPHHEVPESETC经IPBI衍生后信噪比达1250时，仍旧观察不到肽段经IAA烷基化后的谱峰，显示肽段经IPBI衍生后检测灵敏度极大提高（图3中D图）。
实施例9
向肽段ALVCEQEAR中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段溶液2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，直接进样进行ESI MS分析，结果显示，肽段经IAA烷基化后主要带+2价电荷，此外尚有少部分带+1价电荷；而肽段经IPBI衍生后，带+1价电荷的肽段完全消失，此时肽段主要带+3价电荷，显著提高了肽段的质谱带电荷数（图4中A图）。
实施例10
向肽段CDPGYIGSR中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段溶液2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，直接进样进行ESI MS分析，结果显示，肽段经IAA烷基化后主要带+2价电荷，此外尚有少部分带+1价电荷；而肽段经IPBI衍生后，尽管肽段仍以带+2价电荷为主，但带+1价电荷的肽段完全消失，出现带+3价电荷的肽段谱峰，提高了肽段的质谱带电荷数（图4中B图）。
实施例11
向肽段MECFG中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段溶液2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，直接进样进行ESI MS分析，结果显示，肽段MECFG经IAA烷基化后仅带+1价电荷；而肽段经IPBI衍生后，肽段主要带+2价电荷，显著提高了肽段的质谱带电荷数（图4中C图）。
实施例12
向肽段KEEPPHHEVPESETC中加入浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液配置成0.33mg/mL的肽段溶液，平行取15μL肽段溶液2份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，直接进样进行ESI MS分析，结果显示，肽段KEEPPHHEVPESETC经IAA烷基化主要带+3价电荷；而肽段经IPBI衍生后，主要带+4价电荷，并且出现带+5价电荷的肽段谱峰，显著提高了肽段的质谱带电荷数（图4中D图）。
实施例13
称取1.0mg的过氧化氢酶用浓度为8mol/L的尿素溶液70μL溶解，然后于56℃变性1小时，冷至室温，将变性后的蛋白质用浓度为50mmol/L、pH为8.4的Tris-HCl缓冲溶液稀释成4.8mg/mL，平行取15μL蛋白质溶液两份，分别加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液10μL，然后于50℃反应1小时。冷至室温，向一溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，向另一溶液中加入浓度为50mmol/L的IAA50μL，继续于37℃反应2小时。反应完毕，采用反相色谱除盐，冷冻干燥后加入浓度为60mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液（pH8.3）300μL和3μg的胰蛋白酶，于37℃酶解过夜。取等摩尔IAA烷基化和IPBI衍生的肽段混合点样进行MALDI-TOFMS分析，结果显示，过氧化氢酶经IAA烷基化后只能检测到半胱氨酸肽段LGPNYLQIPVNCPYR；而蛋白质经IPBI衍生后可检测到半胱氨酸肽段LCENIAGHLK和LGPNYLQIPVNCPYR，且肽段LCENIAGHLK为强度最高的一条肽段（图5）。
Claims (7)
1.一种如式（Ⅰ）所示的烷基化衍生试剂，
2.权利要求1所述的烷基化衍生试剂的制备方法，其特征在于，以芳香季铵化咪唑为母体结构，通过缩合反应引入和肽段反应的活性碘乙酰胺功能基团。
3.根据权利要求2所述的烷基化衍生试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
①以1-丁基咪唑和3-溴丙胺氢溴酸盐为原料，于80～90℃回流反应16-24小时即得中间产物溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑；
②以乙腈水为溶剂，制备溴化1-(3-氨丙基)-3-丁基咪唑溶液，加入碘乙酸，在0-10℃条件下加入缩合剂进行缩合反应1-1.5小时，即得所述烷基化衍生试剂。
4.根据权利要求3所述的烷基化衍生试剂的制备方法，其特征在于，所述缩合剂为N,N'-羰基二咪唑、1-羟基-苯并-三氮唑或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。
5.权利要求1所述的烷基化衍生试剂在肽段的标记及质谱检测中的应用。
6.根据权利要求5所述的烷基化衍生试剂在肽段的标记及质谱检测中的应用，其特征在于，所述烷基化衍生试剂与肽段/蛋白质中的半胱氨酸发生标记反应。
7.根据权利要求5所述的烷基化衍生试剂在肽段的标记及质谱检测中的应用，其特征在于，肽段衍生方法包括以下步骤：
①将浓度为0.1-0.4mg/mL的肽段用pH介于8.0-8.5的缓冲液溶解，然后加入浓度为20mmol/L的三(2-羧乙基)膦盐酸盐溶液，于50℃反应1小时，冷却至室温；
②向上述溶液中加入浓度为50mmol/L的IPBI50μL，继续于37℃反应2小时即可。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310144076.7A CN103204812B (zh) | 2013-04-23 | 2013-04-23 | 一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310144076.7A CN103204812B (zh) | 2013-04-23 | 2013-04-23 | 一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103204812A true CN103204812A (zh) | 2013-07-17 |
| CN103204812B CN103204812B (zh) | 2015-04-08 |
Family
ID=48752245
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310144076.7A Expired - Fee Related CN103204812B (zh) | 2013-04-23 | 2013-04-23 | 一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103204812B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105949129A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-09-21 | 辽宁大学 | 一种带有氨基的咪唑溴盐离子液体及其制备方法和应用 |
| CN107311910A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-11-03 | 广州辉骏生物科技有限公司 | 一种用于质谱检测过程中标记多肽的化合物及其应用 |
| CN108508125A (zh) * | 2017-02-24 | 2018-09-07 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种活性蛋白质与小分子相互作用的质谱检测方法 |
| CN111208237A (zh) * | 2018-11-21 | 2020-05-29 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于肽段c末端化学衍生提高质谱碎裂效率和响应的方法 |
| CN112326852A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-02-05 | 吉林大学 | 一种1-芘甲醛的应用及生物小分子的检测方法 |
| CN117417405A (zh) * | 2023-12-15 | 2024-01-19 | 上海快序生物科技有限公司 | 一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101363779A (zh) * | 2008-06-26 | 2009-02-11 | 复旦大学 | 一种提高肽段离子化效率的方法 |
| WO2011028863A1 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | University Of Virginia Patent Foundation | Reagents for electron transfer dissociation in mass spectrometry analysis |
| JP4775714B2 (ja) * | 2006-11-27 | 2011-09-21 | 株式会社島津製作所 | タンパク質同定方法、およびタンパク質同定装置 |
| CN102590413A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-18 | 浙江省疾病预防控制中心 | 一种牛α-乳白蛋白的定量检测方法 |
-
2013
- 2013-04-23 CN CN201310144076.7A patent/CN103204812B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4775714B2 (ja) * | 2006-11-27 | 2011-09-21 | 株式会社島津製作所 | タンパク質同定方法、およびタンパク質同定装置 |
| CN101363779A (zh) * | 2008-06-26 | 2009-02-11 | 复旦大学 | 一种提高肽段离子化效率的方法 |
| WO2011028863A1 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | University Of Virginia Patent Foundation | Reagents for electron transfer dissociation in mass spectrometry analysis |
| CN102590413A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-18 | 浙江省疾病预防控制中心 | 一种牛α-乳白蛋白的定量检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHRISTOPHER M.SHUFORD等: "Improving limits of detection for B-type natriuretic peptide using PC-IDMS: An application of the ALiPHAT strategy", 《ANALYST》 * |
| ELEANOR D.BATES等: "CO2 Capture by a Task-Specific Ionic Liquid", 《J.AM.CHEM.SOC.》 * |
| JENNIFER L.FRAHM等: "Achieving Augmented Limits of Detection for Peptides with Hydrophobic Alkyl Tags", 《ANAL.CHEM.》 * |
| TAKASHI SHIMADA等: "Development of iodoacetic acid-based cysteine mass tags: Detection enhancement for cysteine-containing peptide by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105949129A (zh) * | 2016-06-06 | 2016-09-21 | 辽宁大学 | 一种带有氨基的咪唑溴盐离子液体及其制备方法和应用 |
| CN105949129B (zh) * | 2016-06-06 | 2019-02-19 | 辽宁大学 | 一种带有氨基的咪唑溴盐离子液体及其制备方法和应用 |
| CN108508125A (zh) * | 2017-02-24 | 2018-09-07 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种活性蛋白质与小分子相互作用的质谱检测方法 |
| CN108508125B (zh) * | 2017-02-24 | 2021-06-11 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种活性蛋白质与小分子相互作用的质谱检测方法 |
| CN107311910A (zh) * | 2017-06-27 | 2017-11-03 | 广州辉骏生物科技有限公司 | 一种用于质谱检测过程中标记多肽的化合物及其应用 |
| CN111208237A (zh) * | 2018-11-21 | 2020-05-29 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于肽段c末端化学衍生提高质谱碎裂效率和响应的方法 |
| CN111208237B (zh) * | 2018-11-21 | 2021-12-24 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于肽段c末端化学衍生提高质谱碎裂效率和响应的方法 |
| CN112326852A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-02-05 | 吉林大学 | 一种1-芘甲醛的应用及生物小分子的检测方法 |
| CN117417405A (zh) * | 2023-12-15 | 2024-01-19 | 上海快序生物科技有限公司 | 一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用 |
| CN117417405B (zh) * | 2023-12-15 | 2024-03-19 | 上海快序生物科技有限公司 | 一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103204812B (zh) | 2015-04-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103204812B (zh) | 一种烷基化衍生试剂及其在肽段标记、质谱检测中的应用 | |
| Reid et al. | ‘Top down’protein characterization via tandem mass spectrometry | |
| Steen et al. | A new derivatization strategy for the analysis of phosphopeptides by precursor ion scanning in positive ion mode | |
| Mädler et al. | Chemical cross‐linking with NHS esters: a systematic study on amino acid reactivities | |
| Ashcroft | Protein and peptide identification: the role of mass spectrometry in proteomics | |
| US11396527B2 (en) | Dual mass spectrometry-cleavable crosslinking reagents for protein-protein interactions | |
| CN106483236B (zh) | 一种基于等重二甲基化标记的多重蛋白质定量方法 | |
| Qin et al. | Isobaric cross-sequence labeling of peptides by using site-selective N-terminus dimethylation | |
| Kang et al. | Synthesis of biotin‐tagged chemical cross‐linkers and their applications for mass spectrometry | |
| Bąchor et al. | Sensitive detection of charge derivatized peptides at the attomole level using nano-LC-ESI–MRM analysis | |
| Moini et al. | Application of capillary electrophoresis/electrospray ionization‐mass spectrometry to subcellular proteomics of Escherichia coli ribosomal proteins | |
| US8642744B2 (en) | Crosslinking reagent for analysis of protein-protein interaction | |
| Qiao et al. | Mass spectrometry-based tag and its application to high efficient peptide analysis–A review | |
| Krusemark et al. | Complete chemical modification of amine and acid functional groups of peptides and small proteins | |
| Qiao et al. | Imidazolium-based iodoacetamide functional tags: design, synthesis, and property study for cysteinyl-peptide analysis by mass spectrometry | |
| Asakawa et al. | Mass spectrometric characterization of phosphorylated peptides using MALDI in‐source decay via redox reactions | |
| Pan et al. | N-terminal labeling of peptides by trypsin-catalyzed ligation for quantitative proteomics. | |
| Qiao et al. | Development of a novel imidazolium‐based aromatic quaternary ammonium tag: Synthesis and application to the efficient analysis of cysteinyl‐peptides by mass spectrometry | |
| CN106053199B (zh) | 一种两性亲水富集糖基化肽段并质谱分析的方法 | |
| US20070015233A1 (en) | Analysis of molecules | |
| CN113508298A (zh) | 区分同量异序氨基酸和氨基酸组合的标记方法 | |
| Chiappetta et al. | Dansyl‐peptides matrix‐assisted laser desorption/ionization mass spectrometric (MALDI‐MS) and tandem mass spectrometric (MS/MS) features improve the liquid chromatography/MALDI‐MS/MS analysis of the proteome | |
| Nakajima et al. | Mass spectrometry-based sequencing of protein C-terminal peptide using α-carboxyl group-specific derivatization and COOH capturing | |
| Zeng et al. | Revival of deuterium-labeled reagents for protein quantitation | |
| CN117417405B (zh) | 一种基于酪氨酸衍生化的肽段标记方法及其在蛋白质检测中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150408 Termination date: 20190423 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |