CN103157139A - 一种组织工程化食道 - Google Patents
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Abstract
本发明公布了一种组织工程化食道及其制备方法，由支架材料和种子细胞构成含上皮层和真皮层双层结构的组织工程化食道，所述的支架材料是脱细胞基质，所述的种子细胞包含成纤维细胞、血管内皮细胞、表皮角朊细胞。本发明真皮层中的血管内皮细胞直接参与毛细血管网的建立，同时利用两种再血管化方法，短时间内与受体血供再通，从而为组织工程化食道上皮提供血供。
Description
技术领域
本发明属于组织工程学技术领域，具体涉及一种组织工程化食道及其制备方法。
背景技术
组织工程学应用生命科学和工程学的原理和方法，研究、开发用 于修复、增进或改善人体各种组织或器官损伤后功能和形态的生物替 代品。所述生物替代品的基本制备方法是将细胞经体外扩增后与可降 解生物材料相结合形成细胞-可降解生物材料复合体，用以替代受损组织器官。它具有形成具有生命力的活体组织，少量细胞修复大块缺损，并可按组织、器官缺损情况任意塑型等特点。就组织工程化心食道而言，目前尚存在血管内皮细胞来源及寻找合适的可降解支架材料两大技术难点。目前认为，组织工程支架材料有如下作用：1）维持组织结构的完 整性并防止变形，2）作为屏障抑制周围组织的过度再生，3）作为细胞迁移和增殖的支架，4）通过与细胞表面细胞受体的相互作用促进细胞增殖和分化。理想的支架材料应具备良好的细胞相容性、组织相容性、与细胞生长速率相匹配的降解速率及一定的强度和可塑性。既往多利用聚羟基乙酸等合成高分子降解材料，但其生物相容性和细胞亲和性不甚理想。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供了一种组织工程化食道的制备方法。
本发明所采用的技术方案是：
一种组织工程化食道，其特征在于：由支架材料和种子细胞构成含上皮层和真皮层双层结构的组织工程化食道，所述的支架材料是脱细胞基质，所述的种子细胞包含成纤维细胞、血管内皮细胞、表皮角朊细胞。
所述的支架材料是猪真皮脱细胞基质。
所述的表皮角朊细胞替代了食道上皮细胞用于食道上皮的构建。
所述的血管内皮细胞提取自骨髓，或静脉血管、或脂肪组织。
所述真皮层包含血管内皮细胞。
所述血管内皮细胞用于黏膜下毛细血管网的重建。
本发明组织工程化食道，具有以下优点：
1）可自我更新，自我修复活组织，无抗原性，不会引起排斥反应。
2）具备良好的细胞相容性、组织相容性、与细胞生长速率相匹配的降解速率及较好的强度和可塑性。
具体实施方式:
下面通过实施例进一步描述本发明，但本发明并不仅限于此。
实施例1
分离与培养表皮角朊细胞
取患者表皮修剪成宽1-2胃的条状，无钙镁PBS漂洗两次，表皮面朝上浸于0.5%中性蛋白酶中过夜。将表皮从真皮上撕下后，剪碎，用0.05%胰酶-0.53mMEDTA在37℃消化20分钟，10ml胰酶抑制剂终止消化。经150目不锈钢滤网过滤、离心（1200转，10分钟）计数后制成单细胞悬液，按105/m2密度接种培养，无血清表皮细胞培养基，另加牛垂体提取物和重组表皮细胞生长因子，在37℃，5%CO2饱和湿度的培养箱中培养，培养液3天换一次。 当细胞达到60%-70%密度融合时，经0.05%胰酶37℃消化10分钟，按1：3的比例传代培养。
实施例2
真皮成纤维细胞分离与培养分离消化
将实施例1中真皮碎块，在2%的胶原酶37℃消化2小时，经150目不锈钢滤网过滤，以1200转离心5分钟，弃去上清，加入无钙镁PBS清洗3次。加入含10%胎牛血清的培养液10ml，混勻，台盼蓝染色计数。
原代培养计数后制成单细胞悬液，按105/cm2密度接种培养，含10%胎牛血清的DMEM培养液，在37℃，10%相对湿度的培养箱中培养，培养液3天换一次。当细胞融合到60%-75%密度时，用1%无钙镁PBS冲洗，经0.25%胰酶37℃消化5分钟，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液，混匀，计数，按1:3的比例传代培养。2-3日换一次培养液，直到细胞融合至60%-75%密度时，再传代培养。
实施例3
构建组织工程化食道
收集体外培养的血管内皮细胞和真皮成纤维细胞，将其接种于组织工程化皮肤支架材料上，构建成血管内皮细胞、纤维细胞-脱细胞真皮复合物。接种密度为105-108。培养液3天换一次，培养时间为7-10天。
形成双层结构：收集表皮细胞，将其接种在血管内皮细胞、成纤维细胞-可降解支架材料复合物表面。一周后在复合物表面形成气-液界面，促进血管内皮细胞的进一步分化。
Claims (6)
1.一种组织工程化食道，其特征在于：由支架材料和种子细胞构成含上皮层和真皮层双层结构的组织工程化食道，所述的支架材料是脱细胞基质，所述的种子细胞包含成纤维细胞、血管内皮细胞、表皮角朊细胞。
2.根据权利要求1所述的组织工程化食道，其特征在于：所述的支架材料是猪真皮脱细胞基质。
3.根据权利要求1所述的组织工程化食道，其特征在于：所述的表皮角朊细胞替代了食道上皮细胞用于食道上皮的构建。
4.根据权利要求1所述的组织工程化食道，其特征在于：所述的血管内皮细胞提取自骨髓，或静脉血管、或脂肪组织。
5.根据权利要求1所述的组织工程化食道，其特征在于：所述真皮层包含血管内皮细胞。
6.根据权利要求1所述的组织工程化食道，其特征在于：所述血管内皮细胞用于黏膜下毛细血管网的重建。
Priority Applications (1)
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| CN 201110414694 CN103157139A (zh) | 2011-12-13 | 2011-12-13 | 一种组织工程化食道 |
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| CN 201110414694 CN103157139A (zh) | 2011-12-13 | 2011-12-13 | 一种组织工程化食道 |
Publications (1)
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| CN103157139A true CN103157139A (zh) | 2013-06-19 |
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| CN 201110414694 Withdrawn CN103157139A (zh) | 2011-12-13 | 2011-12-13 | 一种组织工程化食道 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103157139A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20200163326A1 (en) * | 2017-06-01 | 2020-05-28 | Ucl Business Ltd | Cryopreservation |
-
2011
- 2011-12-13 CN CN 201110414694 patent/CN103157139A/zh not_active Withdrawn
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|---|---|---|---|---|
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
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| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20130619 |