CN103149296A - 一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，包括以下步骤：a）提供复方南星止痛膏待测样品；b）采用顶空进样的方式对所述步骤a）的待测样品进行气相色谱检测；c）根据所述步骤b）得到的气相色谱与复方南星止痛膏的标准气相指纹图谱，得到待测样品的检测结果；所述步骤b）中的检测温度为200℃~250℃；所述步骤b）中检测的分流比为（3~15）:1。本发明提供的方法得到了复方南星止痛膏中挥发性成分的特征色谱峰，并且各色谱峰的分离度较高，从而可以通过得到的特征色谱峰判断复方南星止痛膏的品质，本发明提供的方法具有较高的准确度、稳定性和重复性，从而有利于指导复方南星止痛膏的研发和生产。
Description
技术领域
本发明涉及药品监测技术领域，尤其涉及一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法。
背景技术
中医认为，组织损伤引起的疼痛是因为损伤后，局部气滞血瘀造成，不通则痛。复方南星止痛膏由江苏南星药业有限责任公司生产，药品批准文号为：国药准字Z10970019。复方南星止痛膏是由诸多芳香行气和活血化瘀药组成，具有散寒除湿、活血止痛之功效。复方南星止痛膏是由天南星、川乌、丁香、肉桂、白芷、细辛、川芎、徐长卿、乳香、没药、樟脑、冰片等12味中药，再辅以松香、石蜡、凡士林、水杨酸甲酯制成，具有散寒除湿、活血止痛的功效，可显著扩张用药部位的微血管，促进局部血液循环，使新陈代谢旺盛。现代药理研究表明，复方南星止痛膏能使炎性细胞释放的致痛物质减少，从而降低或取消了对外周痛觉神经的刺激而发挥止痛效应（胡晨,陈荣明,殷书梅,等.复方南星止痛膏的镇痛作用观察及机理探讨,南京中医药大学学报,2009,25(2):140~142.）。因其作用明显、疗效确切、使用方便，复方南星止痛膏在临床上得到了广泛的应用（陈永强,吴军豪,姚宏明,吕建元,孙彦林,殷书梅.复方南星止痛膏治疗寒湿瘀阻型骨关节炎249例临床研究,上海中医药杂志,2010,44(12):59~61.徐峰,潘立群,等.复方南星止痛膏对膝骨关节炎止痛效果的临床研究,江苏中医药,2011,43(12):22~23.）。
根据上述研究结果，复方南星止痛膏具有较好的临床抗炎、镇痛的效果。而且，近年来有不少研究报道，复方南星止痛膏具有抗炎、镇痛作用是由于其处方中大多数药物含有挥发油类物质，如丁香含丁香酚，肉桂含桂皮醛，乳香、没药为油胶树脂，白芷、细辛、川穹也含有挥发油，樟脑、冰片均为挥发性物质。这些挥发油都有很强的生物活性，有镇痛、抗过敏等作用（陈荣民,姜淼,殷书梅.复方南星止痛膏对甲醛等致炎性疼痛模型大鼠止痛作用及c-fos表达的影响,世界中西医结合杂质,2008,3(8):454~456.）。卞慧敏等研究发现（卞慧敏,俞晶华,姜淼,等.复方南星止痛膏抗炎作用研究,中药药理与临床,2007,23(5):164~165.）复方南星止痛膏中的挥发性成分可以抑制大鼠慢性肉芽肿的形成，降低急性炎症大鼠足肿胀，降低炎症组织中IL-1、TNF-α、PGE2水平，从而起到抗炎的作用。复方南星止痛膏中的可挥发性组分可提高小鼠对电、热刺激的通阈值；对蟾蜍坐骨神经有局部麻醉作用，可阻断疼痛的神经传导冲动；并可显著扩张用药部位的微血管，使血流加快，促进局部血液循环，使新陈代谢旺盛；而且还能够能提高大鼠足跖肿胀压痛的通阈值，减少醋酸致小鼠的扭体次数，增加外周血中β-EP，减少PGE2的含量，有一定的镇痛作用。
因此，在复方南星止痛膏中，具有抗炎和止痛作用的主要是其中的挥发性组分，对其中挥发性组分的检测对于复方南星止痛膏的质量评价和控制具有重要指导意义，从而能够更好地控制其质量，保证临床用药的安全性和有效性，有关复方南星止痛膏中挥发性组分的检测方法在国内外尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，本发明提供的方法能够准确地测定复方南星止痛膏中的挥发性成分，有利于对研发和生产过程的指导。
本发明提供了一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，包括以下步骤：
a）提供复方南星止痛膏待测样品；
b）采用顶空进样的方式对所述步骤a）的待测样品进行气相色谱检测；
c）根据所述步骤b）得到的气相色谱与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱，得到待测样品的检测结果；
所述步骤b）中的检测温度为200℃~250℃；
所述步骤b）中检测的分流比为（3~15）:1。
优选的，所述步骤a）中待测样品中复方南星止痛膏的质量分数为1%~10%。
优选的，所述步骤a）为：
将复方南星止痛膏与分散基质混合，得到混合物；
将所述混合物进行加热，得到复方南星止痛膏待测样品。
优选的，所述分散基质为甲基硅油或硅胶。
优选的，所述加热的温度为70℃~90℃；
所述加热的时间为5min~20min。
优选的，所述检测温度采用程序升温的方式达到；
所述程序升温为：
以第一升温速率从初始温度升温至中间温度；
再以第二升温速率从中间温度升温至检测温度；
所述程序升温的初始温度为80℃~120℃；
所述中间温度为120℃~150℃。
优选的，所述程序升温的初始温度为80℃~120℃。
优选的，所述第一升温速率为1℃/min~5℃/min；
所述第二升温速率为20℃/min~40℃/min。
优选的，所述步骤b）中顶空进样过程中对待测样品加热温度为100℃~140℃；
所述顶空进样中定量环的温度为120℃~150℃；
所述顶空进样中传输线的温度为140℃~160℃；
所述顶空进样中待测样品的加热时间为30min~50min；
所述顶空进样中的加压时间为0.1min~0.5min；
所述顶空进样中定量环的填充时间为0.3min~1min；
所述顶空进样中定量环的平衡时间为0.02min~0.08min；
所述顶空进样中的进样时间为0.5min~3min。
优选的，所述步骤c）中的标准指纹图谱按照以下方法获得：
将多个批次的复方南星止痛膏进行气相色谱检测，分别得到多个批次复方南星止痛膏的气相色谱图；
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所述多个批次复方南星止痛膏的气相色谱图进行分析，得到气相标准指纹图谱。
优选的，所述复方南星止痛膏的批次数为至少10个批次。
本发明提供一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，包括以下步骤：a）提供复方南星止痛膏待测样品；b）采用顶空进样的方式对所述步骤a）的待测样品进行气相色谱检测；c）根据所述步骤b）得到的气相色谱与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱，得到待测样品的检测结果；所述步骤b）中的检测温度为200℃~250℃；所述步骤b）中检测的分流比为（3~15）:1。本发明提供的方法得到了复方南星止痛膏中挥发性成分的特征色谱峰，即指纹谱图，并且各色谱峰的分离度较高，从而可以通过得到的特征色谱峰判断复方南星止痛膏的品质；在上述检测条件下，避免了其他物质对复方南星止痛膏中特征组分的干扰，能够减少色谱峰的干扰，使得本发明提供的方法具有较高的准确度，从而有利于指导对复方南星止痛膏的研发和生产。
附图说明
图1为本发明实施例1得到的复方南星止痛膏的气相色谱图；
图2为本发明实施例2得到的复方南星止痛膏的气相色谱图；
图3为本发明实施例3得到的复方南星止痛膏的气相色谱图；
图4为本发明实施例4得到的复方南星止痛膏的气相色谱图；
图5为本发明实施例5得到的气相色谱图；
图6为本发明实施例9~18得到的复方南星止痛膏的气相色谱图；
图7为本发明实施例9~18得到的复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱；
图8为本发明实施例29得到的复方南星止痛膏的气相色谱图；
图9为本发明实施例30得到的待测样品的气相色谱图；
图10为本发明实施例31得到的待测样品的气相色谱图；
图11为本发明实施例32得到的待测样品的气相色谱图；
图12为本发明实施例33得到的待测样品的气相色谱图；
图13为本发明实施例34得到的待测样品的气相色谱图；
图14为本发明实施例35得到的待测样品的气相色谱图；
图15为本发明实施例36得到的待测样品的气相色谱图；
图16为本发明实施例37得到的待测样品的气相色谱图；
图17为本发明实施例38得到的待测样品的气相色谱图；
图18为本发明实施例39得到的待测样品的气相色谱图；
图19为本发明比较例1得到的甲基硅油的气相色谱图；
图20为本发明比较例2得到的阴性样品的气相色谱图；
图21为本发明比较例3得到的樟脑的气相色谱图；
图22为本发明比较例4得到的冰片的气相色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，包括以下步骤：
a）提供复方南星止痛膏待测样品；
b）采用顶空进样的方式对所述步骤a）的待测样品进行气相色谱检测；
c）根据所述步骤b）得到的气相色谱与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱，得到待测样品的检测结果；
所述步骤b）中的检测温度为200℃~250℃；
所述步骤b）中检测的分流比为（3~15）:1。
本发明提供一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，本发明提供的方法将复方南星止痛膏的待测样品进行气相色谱图检测，将得到的气相色谱图与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱进行比较，得到待测样品的检测结果。本发明提供的检测方法得到了复方南星止痛膏中挥发性成分的特征色谱峰，并且各色谱峰的分离度较高，实现了对复方南星止痛膏中挥发性成分的准确测定，有利于指导复方南星止痛膏的研发和生产；而且能够更好的保证复方南星止痛膏的质量，从而保证了临床使用的安全性和有效性。
本发明首先提供复方南星止痛膏的待测样品，优选先将复方南星止痛膏与分散基质混合，得到混合物；将所述混合物进行加热，得到复方南星止痛膏待测样品。本发明对所述复方南星止痛膏与分散基质混合的容器没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的制备待测样品的技术方案即可。本发明优选将所述复方南星止痛膏与分散基质在顶空进样瓶中混合；在本发明中，为了能够充分地检测到复方南星止痛膏中的挥发性组分，所述待测样品中复方南星止痛膏的质量分数优选为1%~10%，更优选为2.5%~7.5%；所述分散基质优选为甲基硅油或硅胶，更优选为甲基硅油；所述将所述混合物进行加热的温度优选为70℃~90℃，更优选为75℃~85℃；所述将所述混合物进行加热的时间优选为5min~20min，更优选为8min~15min；本发明为了得到分散均匀的待测样品，将所述复方南星止痛膏与分散基质混合后，优选将得到的混合物进行超声，本发明对所述超声的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的超声的技术方案即可。
得到待测样品后，本发明采用顶空进样的方式对所述待测样品进行气相色谱检测。本发明对所述顶空进样的仪器没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的顶空进样的设备即可；在本发明中，所述顶空进样中，对待测样品加热温度优选为100℃~140℃，更优选为110℃~130℃，最优选为115℃~125℃；所述顶空进样中定量环的温度优选为120℃~150℃，更优选为125℃~145℃，最优选为130℃~140℃；所述顶空进样中传输线的温度优选为140℃~160℃，更优选为145℃~155℃；所述顶空进样中待测样品的加热时间优选为30min~50min，更优选为35min~45min；所述顶空进样中加压的时间优选为0.1min~0.5min，更优选为0.2min~0.35min；所述顶空进样中定量环的填充时间优选为0.3min~1min，更优选为0.4min~0.8min；所述顶空进样中定量环的平衡时间优选为0.02min~0.08min，更优选为0.04min~0.06min；所述顶空进样中进样时间优选为0.5min~3min，更优选为1min~2min；
本发明对所述气相色谱检测的仪器没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的气相色谱仪即可，如美国安捷伦（Aglient）公司生产的型号为Aglient6890的气相色谱仪；在本发明中，所述气相色谱检测中的检测器优选为氢火焰离子化检测器；本发明对所述气相色谱检测中的载气没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的用于气相色谱检测中的载气即可，如氮气，氮气的纯度优选为99.999%；本发明对待测样品进样前的静置时间没有特殊的限制，可以在得到待测样品后直接进样，也可以静置一段时间后再进样，所述静置的时间优选为0h~10h，更优选为0h~8h；所述检测温度为200℃~250℃，优选为210℃~240℃，更优选为220℃~235℃，所述气相色谱检测的柱温优选采用程序升温的方式达到，所述程序升温的初始温度优选为80℃~120℃，更优选为85℃~115℃，最优选为95℃~105℃；所述程序升温的具体过程优选为：
以第一升温速率从初始温度升温至中间温度；
再以第二升温速率从中间温度升温至检测温度；
所述中间温度为120℃~150℃。
本发明首先以第一升温速率将柱温从初始温度升温至中间温度，所述中间温度优选为120℃~150℃，更优选为125℃~140℃；所述第一升温速率优选为1℃/min~5℃/min，更优选为2℃/min~4℃/min；在将柱温升至中间温度后，本发明优选在中间温度条件下，保温1min~8min，更优选为3min~5min；
将柱温升至中间温度后，本发明再以第二升温速率将柱温升至检测温度，所述第二升温速率优选为20℃/min~40℃/min，更优选为25℃/min~35℃/min；将柱温升至检测温度后，本发明优选将其在检测温度下保温1min~5min，更优选为2min~4min。
在本发明中，为了得到复方南星止痛膏中更多挥发性组分的色谱峰，且使得到的色谱峰之间具有较高的分离度，提高对复方南星止痛中挥发性成分检测的准确度，所述气相色谱检测中待测样品的体积流量优选为0.5mL/min~5mL/min，更优选为1mL/min~3mL/min；所述气相色谱检测中的分流比为（3~15）:1，优选为（5~10）:1，更优选为5:1；所述气相色谱检测中进样口的温度优选为230℃~270℃，更优选为240℃~260℃，最优选为245℃~255℃。
按照上述技术方案所述的过程完成对待测样品的气相色谱检测后，得到待测样品的气相色谱，本发明将所述待测样品的气相色谱与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱进行比较，得到待测样品的检测结果。在本发明中，所述复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱优选按照以下方法获得：
将多个批次的复方南星止痛膏进行气相色谱检测，分别得到多个批次复方南星止痛膏的气相色谱图；
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所述多个批次复方南星止痛膏的气相色谱图进行分析，得到气相标准指纹图谱。
本发明为了得到复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱，本发明提供多个批次复方南星止痛膏，本发明对所述复方南星止痛膏的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的复方南星止痛膏即可。本发明对所述复方南星止痛膏的批次数没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的复方南星止痛膏的批次数即可；在本发明中，所述复方南星止痛膏的批次数优选为至少10个，更优选为10个~15个。
本发明将得到的复方南星止痛膏进行气相色谱检测，分别得到多个复方南星止痛膏的气相色谱图，所述检测过程参见上述技术方案所述的对复方南星止痛膏待测样品的气相色谱检测过程，在此不再赘述。
得到所述多个批次复方南星止痛膏的气相色谱后，本发明将所述多个批次复方南星止痛膏的气相色谱采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，得到气相标准指纹图谱。本发明对中药色谱指纹图谱相似度评价系统的分析没有特殊限制，将得到的气相色谱的测定结果导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，按照系统自带的分析程序进行分析即可。
得到气相标准指纹图谱后，本发明将上述技术方案得到的待测样品的气相色谱图与所述气相标准指纹图谱进行比较，得到待测样品的检测结果。为了能够得到准确的检测结果，本发明对比待测样品气相色谱图与所述气相标准指纹图谱中的共有色谱峰。在本发明中，所述共有指纹峰优选按照以下方法获得：：
以气相色谱图中的一个色谱峰为参照峰，计算得到其他色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；
以所述相对保留时间和相对峰面积在多个气相色谱图中稳定的色谱峰为共有指纹峰。
本发明选择得到的气相色谱图中其中一个色谱峰为参照峰，计算得到其他色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，本发明对参照峰的选择没有特殊的限制，可以选择任意一个色谱峰作为参照峰，如在本发明图5中所示的2号色谱峰，其大小、位置适中，分离度较好且较稳定，以2号色谱峰为参照峰，计算得到其他色谱峰的相对保留时间和相对峰面积；
得到各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积后，本发明比较得到的各个气相色谱图中每个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，得到在各个气相色谱图中相对保留时间和相对峰面积稳定的色谱峰，即其相对峰面积和相对保留时间均没有明显的变化，将所述相对保留时间和相对峰面积稳定的色谱峰标定为共有指纹峰；
得到所述共有指纹峰后，本发明将上述技术方案得到的待测样品的气相色谱图与所述气相标准指纹图谱进行比较，比较其共有指纹峰的相对峰面积和相对保留时间，得出待测样品中挥发性组分的种类，从而可以根据得到的结果对待测样品的品质进行评价，有利于对科研和工业生产的指导。
本发明还对得到的共有指纹峰进行成分鉴定，本发明对所述成分鉴定的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的成分鉴定的技术方案即可，如可以采用气相-质谱联用法对成分进行鉴定，结果表明，复方南星止痛膏中的挥发性组分包括樟脑、异龙脑和龙脑等。
本发明考察了本发明提供的方法的精密度、稳定性和重复性，所述精密度考察的具体过程如下：
将同一来源的待测样品按照上述技术方案所述的待测样品的检测方法连续检测5次，将得到的气相色谱图按照上述相似度评价的过程计算各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，然后计算相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差，结果表明，本发明提供的方法得到待测样品的共有指纹峰的相对保留时间的RSD均小于1%，相对峰面积的RSD均小于4.88%，这说明，本发明提供的方法具有较高的精密度；
所述稳定性考察的具体过程如下：
将同一待测样品，按照上述技术方案所述的检测方法，分别在0h、2h、4h、6h和8h进样，将得到的气相色谱图按照上述相似度评价的过程计算得到各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，然后计算相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差，结果表明，本发明提供的方法得到待测样品的共有指纹峰的相对保留时间的RSD均小于0.12%，相对峰面积的RSD均小于4.06%，这说明，本发明提供的方法具有较高的稳定性；
所述重复性考察的具体过程如下：
制备6份同一来源的复方南星止痛膏的待测样品，将其按照上述技术方案所述的检测方法进行检测，将得到的气相色谱图按照上述相似度评价的过程计算得到各共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积，然后计算相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差，结果表明，本发明提供的方法得到待测样品的共有指纹峰的相对保留时间的RSD均小于1%，相对峰面积的RSD均小于4.24%，这说明，本发明提供的方法具有较高的重复性。
本发明提供一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，包括以下步骤：a）提供复方南星止痛膏待测样品；b）采用顶空进样的方式将所述步骤a）的待测样品进行气相色谱检测；c）根据所述步骤b）得到的气相色谱与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱，得到待测样品的检测结果；所述步骤b）中的检测温度为200℃~250℃；所述步骤b）中检测的分流比为（3~15）:1。本发明提供的方法得到了复方南星止痛膏中挥发性成分的特征色谱峰，并且各色谱峰的分离度较高，从而可以通过得到的特征色谱峰判断复方南星止痛膏的品质；在上述检测条件下，避免了其他物质对复方南星止痛膏中特征组分的干扰，能够减少色谱峰的干扰，使得本发明提供的方法具有较高的准确度，从而有利于指导对复方南星止痛膏的研发和生产。
另外，本发明提供的方法具有较高的精密度、稳定性和重复性，有利于其推广应用。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
本发明在以下实施例中采用美国安捷伦（Agilent）公司生产的型号为Aglient6890的气相色谱仪，配氢火焰离子化检测器，美国Agilent公司生产的型号为Aglient6890-5973的GC-MS联用仪；法国Millipore公司生产的Milli-Q超纯水系统；甲醇为分析纯；甲基硅油为工业级；批号为：100425、100424、100423、100422、100421、100420、100419、100418、100417和100416，依次标记为S1～S10的复方南星止痛膏，由江苏南星药业股份有限公司提供；缺天南星、川乌、丁香、肉桂、白芷、细辛、川芎、徐长卿、乳香、没药、樟脑、冰片12味中药的复方南星止痛膏阴性制剂，由江苏南星药业股份有限公司提供；樟脑对照品的批号为110747-200507，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；冰片对照品的批号为110743-200504，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。
实施例1~2
分别精密称取10mg复方南星止痛膏，分别将其置于20mL顶空进样瓶中，分别向其中加入50mg硅胶研匀、1mL甲基硅油混匀，压盖密封，将顶空进样瓶在80℃下加热10min，超声混匀后，得到待测样品；
将得到的待测样品采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件如下：
顶空条件：样品加热温度为120℃，定量环温度为140℃，传输线温度为160℃；样品加热时间为30min，加压时间为0.2min，定量环填充时间为0.5min，定量环平衡时间为0.05min，进样时间为0.5min；
气相条件：程序升温起始温度为100℃，保持7min，以2℃/min的速率升温至130℃，再以20℃/min的速率升至250℃，保持2min；流速为1ml/min；分流比为10:1；进样口温度为250℃；FID检测，检测器温度：250℃，检测得到复方南星止痛膏的气相色谱图。
检测结果如图1~2所示，图1~2分别为本发明实施例1~2得到的复方南星止痛膏的气相色谱图，由图1和图2比较可以看出，图2中出峰较多，因此，在实施例中采用甲基硅油为分散基质。
实施例3~4
准确称取20mg复方南星止痛膏，将其置于5mL试管中，向其中加入1.5mL甲基硅油，混匀得到混悬液；
将得到的混悬液采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件如下：
顶空条件：样品加热温度为120℃，定量环温度为135℃，传输线温度为150℃；样品加热时间为30min，加压时间为0.2min，定量环填充时间为0.5min，定量环平衡时间为0.05min，进样时间为1min。
气相条件：程序升温起始温度为100℃，保持7min，以20℃/min的速率升至250℃，保持2min；流速为1mL/min；进样口温度为250℃；FID检测，检测器温度为300℃；分流比分别为10:1及5:1，检测得到复方南星止痛膏的气相色谱图。
结果如图3~4所示，图3~4分别为本发明实施例3~4得到的复方南星止痛膏的气相色谱图，比较图3和图4可以看出，实施例4得到的气相色谱图中的色谱峰峰面积大，也就是说分流比为5:1得到的检测结果要好于分流比为10:1得到的检测结果，在下述实施例中采用分流比为5:1。
实施例5
分别精密称定5.0mg复方南星止痛膏和复方南星止痛膏的阴性制剂，将其分别置于体积为20mL顶空进样瓶中，向其中加入200mg甲基硅油，压盖密封，将得到的混合溶液在80℃下加热10min，超声混匀后，得到待测样品和阴性制剂样品；
将得到的待测样品和阴性制剂样品采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件为：
顶空条件：样品加热温度为120℃，定量环温度为135℃，传输线温度为150℃；样品加热时间为40min，加压时间为0.2min，定量环填充时间为0.5min，定量环平衡时间为0.05min，进样时间为1.0min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度100℃，保持3min，以2℃/min的升至130℃，再以30℃/min升至230℃，保持2min。体积流量为1mL/min；分流比为5:1；进样口温度为250℃，检测得到待测样品和阴性制剂的气相色谱图。
结果如图5所示，图5为本发明实施例5得到的气相色谱图，其中图A为复方南星止痛膏的气相色谱图，图B为复方南星止痛膏阴性制剂的气相色谱图，通过比较图A和图B可以看出，本发明提供的方法得到的复方南星止痛膏的气相色谱图中，6个主要色谱峰的分离度良好，本发明提供的方法具有较强的专属性，适用于复方南星止痛膏中挥发性成分的检测。
实施例6
按照实施例5所述的待测样品的制备方法，将批号为100425的复方南星止痛膏制备得到待测样品；
将得到的待测样品按照实施例5所述的对待测样品的检测方法进行检测，连续进样5次，得到待测样品的气相色谱图。
本发明得到气相色谱图后，以2号色谱峰为参照峰，计算得到各主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明，各主要共有峰的相对保留时间RSD均小于1%；相对峰面积RSD均小于4.88%，这说明本发明提供的方法精密度良好。
实施例7
按照实施例5所述的待测样品的制备方法，将批号为100425的复方南星止痛膏制备得到待测样品；
将得到的待测样品按照实施例5所述的对待测样品的检测方法进行检测，唯一不同为将待测样品分别于0h、2h、4h、6h、8h进样，得到待测样品的气相色谱图。
本发明得到气相色谱图后，以2号色谱峰为参照峰，计算得到各主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明，各主要共有峰的相对保留时间RSD均小于0.12%；相对峰面积RSD均小于4.06%，这说明本发明提供的方法在8h内对待测样品进行检测，具有较好的稳定性。
实施例8
按照实施例5所述的待测样品的制备方法，将批号为100425的复方南星止痛膏制备得到待测样品；
分别取6份上述待测样品，将其按照实施例5所述的对待测样品的检测方法进行检测，得到待测样品的气相色谱图。
本发明得到气相色谱图后，以2号色谱峰为参照峰，计算得到各主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明，各主要共有峰的相对保留时间RSD均小于0.12%；相对峰面积RSD均小于4.24%，这说明本发明提供的方法具有较好的重复性。
实施例9~18
按照实施例5所述的检测方法，分别得到10个批号为100425、100424、100423、100422、100421、100420、100419、100418、100417和100416的复方南星止痛膏的气相色谱图；
本发明将得到的气相色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，以2号色谱峰为参照峰，结果如图6所示，图6为本发明实施例9~18得到的复方南星止痛膏的气相色谱图，图7为本发明得到的复方南星止痛膏气相标准指纹图谱；
本发明计算得到10批样品中6个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值，结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例9~18得到的色谱峰的相对保留时间，表2为本发明实施例9~18得到的色谱峰的相对峰面积。
表1本发明实施例9~18得到的色谱峰的相对保留时间
表2本发明实施例9~18得到的色谱峰的相对峰面积
由表1和表2可以看出，实施例9~18得到的十个批次样品中，6个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的值较固定，将其标定为共有指纹峰，参见图7中的1~6号色谱峰，从而得到了复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱。
实施例19~28
本发明采用中国药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价》软件（2004年A版），分别对十个批次的复方南星止痛膏的气相色谱图进行相似度计算。结果如表3所示，表3为本发明实施例19~28得到的相似度计算结果。
表3本发明实施例19~28得到的相似度计算结果
由表3可以看出，实施例19~28得到的10批复方南星止痛膏制剂的相似度均在0.95以上，这表明本发明提供的方法稳定、重现性好。
实施例29
精密称取5.0mg复方南星止痛膏，将其置于20mL顶空进样瓶中，向其中加入200mg甲基硅油，混匀后得到待测样品；
将得到的待测样品采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件如下：
顶空条件：样品加热温度为120℃，定量环温度为135℃，传输线温度为150℃；样品加热时间为30min，加压时间为0.2min，定量环填充时间为0.5min，定量环平衡时间为0.05min，进样时间为1min；
气相条件：程序升温起始温度为100℃，保持4min，以5℃/min的速率升至150℃，以20℃/min的速率升至230℃，保持2min；流速为1ml/min；分流比为5:1；进样口温度为250℃；FID检测，检测器温度为300℃，检测得到复方南星止痛膏的气相色谱图。
结果如图8所示，图8为本发明实施例29得到的复方南星止痛膏的气相色谱图，由图8可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏中挥发性组分的测定，得到的检测结果的分离度较高，有利于对复方南星止痛膏质量的控制。
本发明对得到的复方南星止痛膏气相色谱图中的三个共有峰的化学成分进行气相-质谱（GC-MS）鉴定，结果如表4所示，表4为本发明实施例29得到的气相色谱峰的定性检测结果。
表4本发明实施例29得到的气相色谱峰的定性检测结果
实施例30
精密称定5.0mg批号为110505的复方南星止痛膏待测样品，将其置于体积为20mL顶空进样瓶中，向其中加入200mg甲基硅油，压盖密封，将得到的混合溶液在80℃下加热10min，超声混匀后，得到待测样品和阴性制剂样品；
将得到的待测样品和阴性制剂样品采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件为：
顶空条件：样品加热温度为120℃，定量环温度为135℃，传输线温度为150℃；样品加热时间为40min，加压时间为0.2min，定量环填充时间为0.5min，定量环平衡时间为0.05min，进样时间为1.0min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度80℃，保持3min，以3℃/min的升至140℃，再以35℃/min升至250℃，保持2min。体积流量为1mL/min；分流比为5:1；进样口温度为250℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图9所示，图9为本发明实施例30得到的待测样品的气相色谱图，由图9可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例31
按照实施例30所述的技术方案对批号为110505的复方南星止痛膏进行测定，不同的是，本实施例中的顶空条件为：样品加热温度为140℃，定量环温度为150℃，传输线温度为160℃；样品加热时间为50min，加压时间为0.5min，定量环填充时间为1min，定量环平衡时间为0.08min，进样时间为1.5min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度110℃，保持3min，以5℃/min的升至120℃，再以40℃/min升至240℃，保持2min。体积流量为1mL/min；分流比为10:1；进样口温度为250℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图10所示，图10为本发明实施例31得到的待测样品的气相色谱图，由图10可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例32
按照实施例30所述的技术方案对批号为110506的复方南星止痛膏进行测定，得到待测样品的气相色谱图。
结果如图11所示，图11为本发明实施例32得到的待测样品的气相色谱图，由图11可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例33
按照实施例30所述的技术方案对批号为110506的复方南星止痛膏进行测定，不同的是，本实施例中的顶空条件为：样品加热温度为100℃，定量环温度为120℃，传输线温度为140℃；样品加热时间为30min，加压时间为0.1min，定量环填充时间为0.3min，定量环平衡时间为0.02min，进样时间为0.5min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度80℃，保持5min，以3℃/min的升至120℃，再以30℃/min升至200℃，保持5min。体积流量为1mL/min；分流比为3:1；进样口温度为250℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图12所示，图12为本发明实施例33得到的待测样品的气相色谱图，由图12可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例34
按照实施例30所述的技术方案对批号为110507的复方南星止痛膏进行测定，得到待测样品的气相色谱图。
结果如图13所示，图13为本发明实施例34得到的待测样品的气相色谱图，由图13可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例35
按照实施例30所述的技术方案对批号为110507的复方南星止痛膏进行测定，不同的是，本实施例中的顶空条件为：样品加热温度为110℃，定量环温度为130℃，传输线温度为150℃；样品加热时间为35min，加压时间为0.2min，定量环填充时间为0.5min，定量环平衡时间为0.03min，进样时间为2min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度90℃，保持5min，以4℃/min的升至130℃，再以25℃/min升至210℃，保持5min。体积流量为1mL/min；分流比为8:1；进样口温度为250℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图14所示，图14为本发明实施例35得到的待测样品的气相色谱图，由图14可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例36
按照实施例30所述的技术方案对批号为110506的复方南星止痛膏进行测定，不同的是，本实施例中的顶空条件为：样品加热温度为115℃，定量环温度为135℃，传输线温度为155℃；样品加热时间为40min，加压时间为0.3min，定量环填充时间为0.6min，定量环平衡时间为0.04min，进样时间为1.5min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度95℃，保持5min，以4.5℃/min的升至135℃，再以30℃/min升至215℃，保持5min。体积流量为1mL/min；分流比为9:1；进样口温度为240℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图15所示，图15为本发明实施例36得到的待测样品的气相色谱图，由图15可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例37
按照实施例30所述的技术方案对批号为110506的复方南星止痛膏进行测定，不同的是，本实施例中的顶空条件为：样品加热温度为120℃，定量环温度为140℃，传输线温度为160℃；样品加热时间为45min，加压时间为0.4min，定量环填充时间为0.7min，定量环平衡时间为0.05min，进样时间为1.8min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度100℃，保持5min，以5℃/min的升至140℃，再以35℃/min升至220℃，保持5min。体积流量为1mL/min；分流比为7:1；进样口温度为230℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图16所示，图16为本发明实施例37得到的待测样品的气相色谱图，由图16可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例38
按照实施例30所述的技术方案对批号为110506的复方南星止痛膏进行测定，不同的是，本实施例中的顶空条件为：样品加热温度为125℃，定量环温度为145℃，传输线温度为145℃；样品加热时间为50min，加压时间为0.5min，定量环填充时间为0.8min，定量环平衡时间为0.06min，进样时间为2.0min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度115℃，保持5min，以1℃/min的升至145℃，再以40℃/min升至230℃，保持5min。体积流量为1mL/min；分流比为6:1；进样口温度为250℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图17所示，图17为本发明实施例38得到的待测样品的气相色谱图，由图17可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
实施例39
按照实施例30所述的技术方案对批号为110506的复方南星止痛膏进行测定，不同的是，本实施例中的顶空条件为：样品加热温度为130℃，定量环温度为150℃，传输线温度为150℃；样品加热时间为30min，加压时间为0.2min，定量环填充时间为0.9min，定量环平衡时间为0.07min，进样时间为2.5min；
色谱柱为HP-5MS柱（30m×0.25mm×0.25μm）；柱温为初始温度120℃，保持5min，以5℃/min的升至150℃，再以40℃/min升至240℃，保持5min。体积流量为1mL/min；分流比为3:1；进样口温度为250℃，检测得到待测样品的气相色谱图。
结果如图18所示，图18为本发明实施例39得到的待测样品的气相色谱图，由图18可以看出，本发明提供的方法能够实现对复方南星止痛膏的准确测定。
比较例1
将200mg甲基硅油置于体积为20mL的顶空进样瓶中，得到空白对照样品；
将得到的空白对照样品采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件与实施例29中的检测条件相同，结果如图9所示，图9为比较例1得到的甲基硅油的气相色谱图，比较图8和图9得到的检测结果可以看出，本发明提供的方法能够避免基质的干扰，实现对复方南星止痛膏的准确测定。
比较例2
精密称量5.0mg阴性样品，将其置于体积为20mL的顶空进样瓶中，向其中加入200mg甲基硅油，混匀后得到阴性样品的待测样品；
将得到的待测样品采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件与实施例29中的检测条件相同，结果如图10所示，图10为本发明比较例2得到的阴性样品的气相色谱图，通过比较图8和图10的结果可以看出，阴性样品的存在不会对复方南星止痛膏的检测产生干扰，说明本发明提供的方法能够准确的实现对复方南星止痛膏的测定。
比较例3~4
分别精密称量5.0mg樟脑和冰片，将其分别置于体积为20mL的顶空进样瓶中，向其中加入200mg甲基硅油，混匀后得到待测样品；
将得到的待测样品采用顶空进样的方式置于气相色谱仪中进行检测，检测条件与实施例29中的检测条件相同，结果如图11~12所示，图11~12分别为本发明比较例3~4得到的樟脑和冰片的气相色谱图，通过将图11和12与图8的检测结果进行比较，可以看出，本发明提供的方法检测得到复方南星止痛膏中的挥发性成分包括樟脑和冰片。
由以上实施例可知，本发明提供一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，包括以下步骤：a）提供复方南星止痛膏待测样品；b）采用顶空进样的方式将所述步骤a）的待测样品进行气相色谱检测；c）根据所述步骤b）得到的气相色谱与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱，得到待测样品的检测结果；所述步骤b）中的检测温度为200℃~250℃；所述步骤b）中检测的分流比为（3~15）:1。本发明提供的方法得到了复方南星止痛膏中挥发性成分的特征色谱峰，并且各色谱峰的分离度较高，从而可以通过得到的特征色谱峰判断复方南星止痛膏的品质；在上述检测条件下，避免了其他物质对复方南星止痛膏中特征组分的干扰，能够减少色谱峰的干扰，使得本发明提供的方法具有较高的准确度，从而有利于指导对复方南星止痛膏的研发和生产。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法，包括以下步骤：
a）提供复方南星止痛膏待测样品；
b）采用顶空进样的方式对所述步骤a）的待测样品进行气相色谱检测；
c）根据所述步骤b）得到的气相色谱与复方南星止痛膏的气相标准指纹图谱，得到待测样品的检测结果；
所述步骤b）中的检测温度为200℃~250℃；
所述步骤b）中检测的分流比为（3~15）:1。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a）中待测样品中复方南星止痛膏的质量分数为1%~10%。
3.根据权利要求1~2任意一项所述的检测方法，其特征在于，所述步骤a）为：
将复方南星止痛膏与分散基质混合，得到混合物；
将所述混合物进行加热，得到复方南星止痛膏待测样品。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述分散基质为甲基硅油或硅胶。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述加热的温度为70℃~90℃；
所述加热的时间为5min~20min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测温度采用程序升温的方式达到；
所述程序升温为：
以第一升温速率从初始温度升温至中间温度；
再以第二升温速率从中间温度升温至检测温度；
所述程序升温的初始温度为80℃~120℃；
所述中间温度为120℃~150℃。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述第一升温速率为1℃/min~5℃/min；
所述第二升温速率为20℃/min~40℃/min。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤b）中顶空进样过程中对待测样品加热温度为100℃~140℃；
所述顶空进样中定量环的温度为120℃~150℃；
所述顶空进样中传输线的温度为140℃~160℃；
所述顶空进样中待测样品的加热时间为30min~50min；
所述顶空进样中的加压时间为0.1min~0.5min；
所述顶空进样中定量环的填充时间为0.3min~1min；
所述顶空进样中定量环的平衡时间为0.02min~0.08min；
所述顶空进样中的进样时间为0.5min~3min。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤c）中的气相标准指纹图谱按照以下方法获得：
将多个批次的复方南星止痛膏进行气相色谱检测，分别得到多个批次复方南星止痛膏的气相色谱图；
采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所述多个批次复方南星止痛膏的气相色谱图进行分析，得到标准指纹图谱。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述复方南星止痛膏的批次数为至少10个批次。
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| CN2013100633423A CN103149296A (zh) | 2013-02-27 | 2013-02-27 | 一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法 |
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| CN2013100633423A CN103149296A (zh) | 2013-02-27 | 2013-02-27 | 一种复方南星止痛膏中挥发性成分的检测方法 |
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Country Status (1)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108548885A (zh) * | 2018-06-21 | 2018-09-18 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 二维液相色谱检测复方南星止痛膏的方法 |
| CN106124654B (zh) * | 2016-06-17 | 2019-04-19 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱检测方法 |
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2013
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|---|
| 李永辉等: "复方南星止痛膏的顶空气相色谱指纹图谱研究", 《中国现代中药》 * |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130612 |