CN103119068A - 透明质酸的杂化协同复合物 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了透明质酸的协同杂化复合物，其简单经济的制备方法以及其在医药、化妆品和食品领域中的用途。

Description

透明质酸的杂化协同复合物
发明领域
本发明涉及基于透明质酸的产品领域。
现有技术
下文通常所述的透明质酸，连同它的盐称为透明质酸化合物HA，是负电荷直链多糖，由n个二糖单元(-4GlcUAβ1-3GlcNAcβ1-)的重复组成，其中D-葡糖醛酸(GlcUA)和N-乙酰基-D-葡糖胺(GlcNAc)是用交替的β-1,3和β-1,4糖苷键连接的。
HA是高水溶性多糖，并且HA溶液表现出非牛顿型粘弹性性能。这些性质取决于分子量(由于HA是线性聚合物，因此，分子量取决于链的长度)、浓度、pH和离子强度。
由于它的生物学性质和功能，HA具有很高的附加值(它的商业价值大大超过了其它天然多糖)，应用范围从医药方面到药用化妆品和营养食品。它的粘弹性连同完全没有毒性或免疫原性(HA的结构在其存在的所有活的有机体中通常是一样的)产生多种且广泛的应用。
在很多这些应用中，性能取决于HA的分子量。对于这一点，当开发HA的制备方法和应用策略时，HA的平均分子量和多分散性指数Mw/Mn(其测量分子量分布曲线的宽度，其中Mn是数量-平均分子量，定义为样品中所有聚合物分子的总重量除以分子总数，并且Mw是重量-平均分子量，其考虑存在的分子的变化质量)必须是考虑的金标准。
特别地，目前与其分子量相关的HA的多种生物学响应意味着在文中必须使用低分子量HA(L-HA)和高分子量HA(H-HA)。
发明描述
本发明描述了L-HA与H-HA之间的协同杂化复合物(cooperativehybrid complexes)(命名为简称L/H-HA)、它们的特性、其制备方法以及其在医药、化妆品和食品领域的用途。弱作用力(例如氢键或疏水相互作用)能在分子间产生非常稳定的相互作用，如果这些是协同类型。当在分子间可能形成多重键时，产生协同性，并且很弱，随后它们随机断裂，但是由于存在完整的邻位键，多重键能立即重新形成，所述的邻位键在可用于重新形成的距离处维持键的结构组成。
溶液中HA分子的特征在于基于形成疏水键和链间氢键的相互作用的协同现象，并且这些相互作用的协同性取决于链的长度，并且因此取决于链的分子量。H-HA的长链提供它们之间稳定的相互作用，其涉及溶液中存在的所有分子，其产生三维网络，然而L-HA分子提供不太稳定的相互作用，导致聚集的体系，其没有同时涉及存在的所有分子，其替代聚簇中的相互作用。溶液中H-HA和L-HA的这种不同方式的聚集引起流变学性能的很大差异，例如HA溶液的粘度，对于很多应用(特别是在医药领域中)，这是非常重要的性质。
事实上，作为分子量函数的HA溶液的粘度快速下降实际上取决于分子间相互作用的这种不同能力，因此，在相同浓度下，分子量大于1·106Da的H-HA溶液比分子量在5·103至5·105Da之间的L-HA溶液具有更高数量级的粘度。由于H-HA长链之间相互作用的强的协同性，当L-HA溶于H-HA的粘稠溶液中时，短期内没有观察到产生的溶液的粘度的显著差异，这表明两种分子群体独立表现，并且L/H-HA协同杂化聚集体的形成是热力学不利的过程。只有经过一段时间(数天至数周)，才能观察到粘度缓慢但持续下降，这不能归因于水解过程，并且如果L-HA的分子量小于105Da，这些效应更明显。这些溶液理化性质(特别是粘度)的不断变化使得它们不适合实际应用，其需要不变的流变学特征。
因此，鉴于以上描述，很清楚目前还没有获得低分子量透明质酸和高分子量透明质酸之间的协同杂化复合物，所述的复合物具有使得它们能用于所需目的的性质。
现在，令人惊讶地发现通过将含有H-HA和L-HA的水溶液一起经过合适配置的热循环来产生稳定的L/H-HA协同杂化物是可能的。
本发明的稳定的L/H-HA协同杂化物溶液的特征在于粘度不随时间变化并且显著低于热循环之前。
这些性能不能仅仅归因于HA的热解聚过程。
存在四个精密决定L/H-HA复合物形成和它们流变学性质的参数：
a)在相同溶液中同时存在两种类型的HA(L-HA和H-HA)；
b)在形成L/H-HA杂化物体系的过程中所用的两种HA的分子量；
c)所用的两种HA的相对比例；
d)溶液所暴露的热循环的分布。
在相同溶液中同时存在两种类型HA(L-HA和H-HA)是一个必要条件，因为当进行热循环，溶液达到足够高温度时，产生的能量条件能同时破裂H-HA链间的所有相互作用以及L-HA链间的所有相互作用，并且在这些条件中不再存在必要条件，因为溶液中分子间产生的弱相互作用是协同型，并且聚合物链以独立的实体表现。接着，当溶液在热处理循环范围内冷却时，链间相互作用开始逐渐重新形成，在这种情况下其在溶液中存在的所有HA分子间(高分子量和低分子量)随机产生，引起杂化物体系，随着弱分子间键数量的增加，杂化物体系是稳定的，它们的协同性意味着不同分子量的聚合物链间产生的相互作用方式不随时间变化。确认这种机制有效性实际上是，当两种溶液(一种L-HA和一种H-HA)分别进行热循环，然后冷却后将它们以相同浓度在溶液中一起混合时，我们没有观察到由杂化物系形成引起的粘度的显著且快速降低，只有在热循环过程中同时存在两种分子时才能形成杂化物体系。
在构建L/H-HA杂化物体系中所用的HA的分子量精密地决定了它们的流变学特性；所用的L-HA和H-HA之间分子量差异越大，相同浓度时，相比H-HA的粘度，杂化物体系的粘度降低越多。
如果L-HA的分子量在1·104至1·106Da之间并且H-HA的分子量是以公式MWH-HA≥MWL-HA/0.9给定时，可以获得具有粘度降低特征的协同杂化L/H-HA复合物。
L-HA和H-HA的相对比例(决定杂化物的化学计量)相比它们之间杂化的种类引起它们流变学性质的修饰；由于复合物的形成引起的粘度降低随着所用的L-HA/H-HA化学计量比的增加而增加。通常所述的比值在0.1至10之间，优选0.5至2。
本发明的复合物的粘度通常比单独含有用于形成复合物的H-HA透明质酸的溶液的粘度小1.1至200倍。
引起由含有L-HA和H-HA的溶液开始形成协同杂化L/H-HA体系的热分布发现，首先将溶液加热至温度为80至160℃、优选100至120℃，然后快速冷却至室温。从而获得的L/H-HA杂化物体系随时间稳定，证明能维持它们的流变学特征。
如已经提及的，本发明的L/H-HA杂化复合物溶液可以易于通过将所需分子量的H-HA和L-HA水溶液混合并且将产生的溶液进行上面所示的热循环而获得，优选L-HA溶液的浓度为0.01至50%w/w，而H-HA溶液的浓度为0.01至10%w/w。
固态协同杂化L/H-HA复合物可以从含有它们的溶液以多种方式获得：
a)沉淀含有它们的溶液，加入水可混溶的有机溶剂，例如低分子量醇、丙酮等；
b)溶剂蒸发；
c)喷雾干燥；
d)冻干。
此外，类似于上述那些具有低值动态粘度特征的协同杂化复合物可以通过高温热处理含有低分子量多糖(例如软骨素、硫酸软骨素、糊精、环糊精、葡聚糖)的H-HA水溶液而获得。
由于它们流变学特性，协同杂化L/H-HA复合物在某些生物医学应用中具有很多益处，例如：通过皮内注射HA生物再生皮肤；用于消退与关节炎性障碍相关的病理学状况的粘度补充技术；膀胱内治疗膀胱炎；治疗阴道炎性疾病；治疗肺泡疾病；治疗口腔疾病。
与使用协同杂化L/H-HA复合物相关的最重要的优势是它们的低粘度，在医学实践中其允许使用更高浓度的溶液，但在用小口径针和导管注射或喷雾时仍能充分流动。
一旦接触生物环境，协同杂化L/H-HA复合物作为体系表现出缓慢释放L-HA和H-HA，因为微环境的化学复杂性(特征在于溶液中存在其它种类和细胞结构的巨大表面)容许逐渐分解分子间相互作用，其表现为所述的复合物使得本文从头开始可获得L-HA和H-HA，它们是在体内具有不同作用的分子种类，L-HA通过与细胞表面存在的受体相互作用传递信号，H-HA作为细胞外基质的重要组成。
下面给出了非限制性实施例，描述了协同杂化L/H-HA复合物的制备、特性和用途。
实施例1-在不同温度下制备协同杂化L/H-HA复合物
H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)和L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)的两种水溶液是以2%w/v在蒸馏水中制备的，其用于制备表1中给出的多种溶液。
将同时含有L-HA和H-HA的这些溶液在高压釜中进行热循环，其设定为：a)加热相在10分钟内由25℃升至最高温度；b)维持该温度特定一段时间(10分钟或40分钟)；c)在10分钟内冷却溶液至25℃。
测定MW和多分散性指数Mw/Mn，使用装有多检测器的尺寸排阻色谱系统，所述的多检测器包括四桥粘度计、折射计、直角光散射检测器(RALS)和低角光散射检测器(LALS)，专利权归American group Viscotek(www.viscotek.com)所有。用LALS测量的信号与分子量和浓度成比例，用粘度检测器测量的信号与样品浓度和固有粘度成比例，而折射计提供浓度的测量。Viscotek装置不仅能测量HA的分子量，而且能评价存在的分子群体中分子量的不均一度，通过多分散性指数Mw/Mn描述，通过Viscotek装置自动计算，并且定义为平均分子量(Mw=ΣimiMi/Σimi，其中mi是分子量Mi的聚合物的质量，并且Σimi是聚合物的总质量，设定mi=niMi，表达式还可以为Mw=ΣiniMi 2/ΣiniMi)和重量-平均分子量(Mn=ΣiniMi/Σini，其中niMi是分子量Mi的聚合物的质量，并且Σini是存在的聚合物的总摩尔数)的比。动态粘度η的测量是在Anton Paar Physica MCR301流变仪上进行的，使用具有同轴圆筒的几何图。η是在25℃下以恒定剪切率(γ’=2s-1)测定的，其在聚合物溶液的牛顿粘度范围内(相对于γ’，η是常数，并且仅取决于溶液中聚合物的构象)。
表1
Figure BDA00002892371200061
*2%w/v的两种溶液首先在高温下处理，然后以体积比1:1混合。
表1-测量浓度为1%w/v的L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)和H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)的溶液的动态粘度和浓度为1%w/v和L-HA/H-HA比例为1:1w/w的相应稳定的协同L/H-HA复合物的动态粘度。高压釜中热处理循环设定为加热相在10分钟内由25℃至Tmax，在Tmax维持特定时间，并且冷却相在10分钟内由Tmax至25℃。在热处理后立即测量η。
表1中的数据表明：a)在所述的条件下加热H-HA溶液导致长聚合物链的轻微水解(120℃，10分钟，MW9.51·105Da；110℃，10分钟，MW1.04·106Da；100℃，10分钟，MW1.20·106Da；100℃，40分钟，MW9.10·105Da)并且η成比例降低；b)在所述的条件下加热L-HA溶液导致聚合物链的轻微水解(120℃，10分钟，MW2.96·104Da；110℃，10分钟，MW3.12·104Da；100℃，10分钟，MW3.25·104Da；100℃，40分钟，MW2.88·104Da)并且η成比例降低，加热后其不再可测；c)在L-HA和H-HA溶液中简单混合，混合后立即导致η的轻微降低，因为对于非常低分子量(3.3·104Da)的L-HA，甚至在室温下，基于短链和长链之间的氢键的部分相互作用开始活化；d)加热同时含有H-HA和L-HA的溶液导致氢键的定量破裂，导致长链间和短链间先前存在的协同性条件的丧失；e)在随后的冷却相中，如果溶液中存在短链和长链，在短链和长链间能随机恢复具有氢桥的协同相互作用，引起通过协同相互作用稳定的杂化物体系；f)分别加热H-HA和L-HA溶液，冷却相后它们的混合不能形成协同杂化物，但性能类似于字母c)下描述的性能；g)没有与其它分子或表面的相互作用的L/H-HA杂化物在室温下保持稳定，因为即使氢键随机打开，随链存在的多重此类相互作用也能维持结构元件在适合的距离内引起键合用于重新形成；h)H-HA+L-HA混合物经历的温度越高或暴露的时间越长，协同杂化物形成越有效。
实施例2-用不同组合物制备协同杂化L/H-HA复合物
不同组合物的协同杂化L/H-HA复合物是通过将H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)和L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)溶于100mL水中制备的，如表2所示。将产生的溶液在高压釜中进行下列热循环：10分钟内从25℃至120℃，120℃10分钟，10分钟内从120℃至25℃。如实施例1所描述的那样测定样品的动态粘度，L-HA、H-HA和L/H-HA的MW和多分散性指数Mw/Mn。表2中的数据表明L/H-HA协同复合物的粘度取决于L-HA/H-HA比例：比例越高，粘度越低。
表2
Figure BDA00002892371200071
*混合后立即测量η。
表2-测量不同L-HA/H-HA比例的协同杂化L/H-HA复合物的动态粘度浓度η。H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)的浓度维持在1%w/v不变，而L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)的浓度从0变化至1.5w/v。高压釜中热处理循环设定为10分钟加热相由25℃至Tmax，在Tmax维持特定时间，并且冷却相在10分钟内由Tmax至25℃。在热处理后立即测量η。
实施例3-使用不同分子量的L-HA制备协同杂化L/H-HA复合物
H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)、L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)和L-HA(MW2.2·105Da；Mw/Mn1.7)的水溶液是以2%w/v在蒸馏水中制备的，所述的溶液用于制备表3中给出的多种溶液。将产生的溶液在高压釜中进行下列热循环：10分钟内从25℃至120℃，120℃10分钟，10分钟内从120℃至25℃。如实施例1所描述的那样测定样品的动态粘度η，L-HA、H-HA和L/H-HA的MW和多分散性指数Mw/Mn。
表3中的数据表明协同杂化物中L-HA的MW越低，η降低得越多，
所有其它参数是相同的。比较使用MW3.3·104Da或MW2.20·105Da的L-HA的L/H-HA杂化复合物的η值，ηH-HA/ηL/H-HA的比值增加约50倍。
表3
Figure BDA00002892371200081
表3-测量由不同MW的L-HA构建的且L-HA/H-HA比例为1w/w的协同杂化L/H-HA复合物的动态粘度η。H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)、L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)和L-HA(MW2.2·105Da；Mw/Mn1.7)的水溶液是以2%w/v在蒸馏水中制备的，所述的溶液用于制备表中给出的多种溶液。将产生的溶液在高压釜中进行下列热循环：10分钟内从25℃至120℃，120℃10分钟，10分钟内从120℃至25℃。
实施例4-经历和未经历热循环形成的协同杂化L/H-HA复合物的动力学分析
H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)、L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)和L-HA(MW2.2·105Da；Mw/Mn1.7)的水溶液是以2%w/v在蒸馏水中制备的，所述的溶液用于制备表4中给出的多种溶液。将一半产生的溶液维持在该温度，并且另一半先在高压釜中进行下列热循环：10分钟内从25℃至120℃，120℃10分钟，10分钟内从120℃至25℃，然后保持在室温。随时间测量两个系列样品的动态粘度η。如实施例1所描述的那样测定L-HA、H-HA和L/H-HA的MW、多分散性指数Mw/Mn和样品的动态粘度η。
表4的数据表明：a)当L-HA的MW是104Da数量级时，开始形成L/H-HA协同复合物，即使是缓慢的，甚至在室温，因为L-HA短链间存在的较低的协同性使得这些链竞争H-HA长链间存在的协同相互作用，从而引起形成杂化物体系；b)对于这个原因，在室温下通过混合H-HA和MW为104Da数量级的L-HA获得的溶液表现出动态粘度随时间而变化；c)相反，热处理在数分钟内产生协同杂化复合物，一旦它们达到平衡条件，所述的复合物的动态粘度不随时间而变化；d)当L-HA的MW是105Da数量级时，没有热处理，简单混合两种溶液不会随时间而显著改变它们的动态粘度，因为L-HA链间预先存在很强的协同性，其阻止它们与H-HA链相互作用。
表4
Figure BDA00002892371200091
表4-不同MW的L-HA构建的且L-HA/H-HA比例为1w/w的协同杂化L/H-HA复合物的动态粘度η动力学。H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)、L-HA(MW3.3·104Da；Mw/Mn1.8)和L-HA(MW2.2·105Da；Mw/Mn1.7)的水溶液是以2%w/v在蒸馏水中制备的，所述的溶液用于制备表中给出的多种溶液。将一半产生的溶液维持在该温度，并且另一半先在高压釜中进行下列热循环：10分钟内从25℃至120℃，120℃10分钟，10分钟内从120℃至25℃，然后保持在室温。
实施例5-通过从包含它们的溶液中沉淀来制备固态协同杂化L/H-HA复合物
将如实施例1所描述的那样获得的协同杂化L/H-HA复合物的水溶液(热循环设定为暴露于Tmax为120℃10分钟)用2倍体积的无水乙醇处理，缓慢加入并且搅拌。获得白色粉状沉淀，其快速沉淀，并且可以在真空下加热干燥。该处理导致形成白色干燥的粉末，相对于理论值，产率为99%。如果以浓度为1%w/w溶于水中，粉末状的协同杂化L/H-HA复合物得到具有与最初沉淀的溶液相同动态粘度η值的溶液。
实施例6-通过冻干包含它们的溶液来制备固态协同杂化L/H-HA复合物
将如实施例1所描述的那样获得的协同杂化L/H-HA复合物的水溶液(热循环设定为暴露于Tmax为120℃10分钟)冻干。获得海绵状团块，通过机械处理其易于转变成白色粉末。冻干的粉末的产率与理论值相同。如果以浓度为1%w/w溶于水中，粉末状冻干的协同杂化L/H-HA复合物得到具有与最初沉淀的溶液相同动态粘度η值的溶液。
实施例7-制备协同杂化C/H-HA和CS/H-HA复合物
H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)、软骨素(C；MW6.6·104Da；Mw/Mn1.4)和硫酸软骨素(CS；MW3.8·104Da；Mw/Mn1.4)的水溶液是以2%w/v在蒸馏水中制备的，所述的溶液用于制备表5中给出的多种溶液。将产生的溶液在高压釜中进行下列热循环：10分钟内从25℃至120℃，120℃10分钟，10分钟内从120℃至25℃。如实施例1所描述的那样测定样品的动态粘度η，L-HA、H-HA和L/H-HA的MW和多分散性指数Mw/Mn。
表5的数据表明：a)MW数量级为104Da的软骨素和硫酸软骨素通过热处理引起形成稳定的协同杂化C/H-HA和CS/H-HA复合物，其特征在于低动态粘度η值；b)C和CS溶液与H-HA溶液简单混合在动态粘度η中没有产生显著变化；c)C/H-HA复合物的ηpre/ηpost比值约为CS/H-HA复合物的两倍。
表5
Figure BDA00002892371200111
表5-测量协同杂化C/H-HA和CS/H-HA复合物的动态粘度η。H-HA(MW1.4·106Da；Mw/Mn1.5)、C(MW6.6·104Da；Mw/Mn1.4)和CS(MW3.8·104Da；Mw/Mn1.4)的水溶液是以2%w/v在蒸馏水中制备的，所述的溶液用于制备表中给出的多种溶液。将产生的溶液在高压釜中进行下列热循环：10分钟内从25至120℃，120℃10分钟，10分钟内从120至25℃。
实施例8-协同杂化L/H-HA复合物在生物再生领域中的用途
将如实施例1所描述的那样获得的4g协同杂化复合物溶于100mL盐水中，在120℃下加热10分钟，然后如实施例5所描述的通过冻干干燥复合物。所用的透明质酸是注射用药物级的，并且所有操作是在保证无菌和无致热原溶液的条件下进行的。将含有40mg/mL L/H-HA复合物的溶液引入安装30号针的1mL注射器中。面部生物再生治疗是在10名被告知的志愿者上进行，所述的志愿者面部存在明显的皮肤老化体征。实验设计设定为每位个体进行相同的生物再生治疗，在面部右侧皮下微注射本发明的制剂(1mL)并且在左侧注射已经上市的早期产品(1mL)。仪器客观化获得的结果表明稳定的协同L/H-HA复合物治疗在治疗的质量和持续时间上均有优势。
实施例9-协同杂化L/H-HA复合物在粘度补充领域中的用途
将如实施例1所描述的那样获得的4g协同杂化复合物溶于100mL盐水中，在120℃下加热10分钟，然后如实施例5所描述的通过冻干干燥复合物。所用的透明质酸是注射用药物级的，并且所有操作是在保证无菌和无致热原溶液的条件下进行的。将含有40mg/mL L/H-HA复合物的溶液引入安装30号针的1mL注射器中。粘度补充治疗是在5名被告知的志愿者上进行的，所述的志愿者患有双侧膝盖障碍，治疗适应证是透明质酸渗入关节中。实验设计设定为每位个体接受相同的粘度补充治疗，在右侧关节用本发明的制剂(1mL)并且在左侧关节用已经上市的早期产品(1mL)。仪器客观化获得的结果表明稳定的协同L/H-HA复合物治疗在疼痛快速减少和病理学病症消退功效上均有优势。

Claims (23)

1.通过在温度为80℃至160℃进行热处理同时含有L-HA透明质酸或透明质酸化合物和H-HA透明质酸或透明质酸化合物的溶液制备的稳定的杂化协同L/H-HA复合物，其中L-HA的分子量为1·104至1·106Da，并且H-HA的分子量是通过公式MWH-HA≥MWL-HA/0.9得到的。
2.权利要求1的稳定的复合物，其中所述的温度为100℃至120℃。
3.权利要求1和2的杂化协同复合物，其中H-HA和L-HA是以相对量为0.1至10、优选0.5至2存在的。
4.权利要求1-3的L/H-HA复合物，其粘度比单独含有用于形成复合物的H-HA透明质酸的溶液的粘度小1.1至200倍。
5.权利要求4的L/H-HA复合物，其中除了溶剂和透明质酸之外的其它化学物质也存在于该溶液中。
6.权利要求1-4的L/H-HA复合物，其中所用的溶剂是水。
7.权利要求1的L/H-HA复合物，其中热处理是在高压釜中进行的。
8.权利要求1和7的L/H-HA复合物，其中热处理包括将样品在最高温度保持一段时间，所述的时间从10秒至2小时、优选10至30分钟。
9.权利要求1、7和8的L/H-HA复合物，其中热处理包括历经1分钟至1小时、优选2至10分钟的时间达到最高温度。
10.权利要求1、7和8的L/H-HA复合物，其中热处理包括在最高温度暴露后历经1分钟至1小时、优选2至10分钟的时间冷却溶液。
11.权利要求1至10的L/H-HA复合物，其通过沉淀包含它们的溶液制备为固态。
12.权利要求11的L/H-HA复合物，其中沉淀是通过加入与溶液可混溶的化合物并且用作复合物的非溶剂来获得的。
13.权利要求12的L/H-HA复合物，其中复合物的非溶剂化合物是水可混溶的有机溶剂，优选丙酮、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇。
14.权利要求1至10的L/H-HA复合物，其通过真空蒸发、喷雾干燥或冻干的方式除去溶剂制备为干燥状态。
15.权利要求1至14的杂化协同复合物，其中低分子量透明质酸被其它低分子量多糖代替，所述的其它低分子量多糖例如软骨素、硫酸软骨素、糊精、环糊精、葡聚糖。
16.权利要求15的杂化协同复合物，其中低分子量多糖表示小于1百万Da。
17.权利要求1至16的杂化协同复合物作为基于应用该多糖的所有临床治疗中高分子量透明质酸的替代物的用途。
18.权利要求1至16的杂化协同复合物在真皮内生物再生治疗中的用途。
19.权利要求1至16的杂化协同复合物在关节内粘性补充治疗中的用途。
20.权利要求1至16的杂化协同复合物在膀胱内治疗膀胱炎中的用途。
21.权利要求1至16的杂化协同复合物在治疗阴道炎性疾病中的用途。
22.权利要求1至16的杂化协同复合物在治疗肺泡疾病中的用途。
23.权利要求1至16的杂化协同复合物在治疗口腔疾病中的用途。
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