CN103115907B - 一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法 - Google Patents
一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103115907B CN103115907B CN201310031926.2A CN201310031926A CN103115907B CN 103115907 B CN103115907 B CN 103115907B CN 201310031926 A CN201310031926 A CN 201310031926A CN 103115907 B CN103115907 B CN 103115907B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- spots
- spot
- microtubule
- light chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 12
- 108010020004 Microtubule-Associated Proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 12
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 238000002376 fluorescence recovery after photobleaching Methods 0.000 claims description 22
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 11
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 8
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 claims description 4
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 claims description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 18
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 14
- 230000002886 autophagic effect Effects 0.000 description 12
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 11
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 8
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 8
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 6
- QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N wortmannin Chemical compound C1([C@]2(C)C3=C(C4=O)OC=C3C(=O)O[C@@H]2COC)=C4[C@@H]2CCC(=O)[C@@]2(C)C[C@H]1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-QAIWCSMKSA-N 0.000 description 6
- QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N wortmannin Natural products COCC1OC(=O)C2=COC(C3=O)=C2C1(C)C1=C3C2CCC(=O)C2(C)CC1OC(C)=O QDLHCMPXEPAAMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100164201 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) apg-4 gene Proteins 0.000 description 4
- 101150096483 atg5 gene Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 3
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 2
- 101100117236 Drosophila melanogaster speck gene Proteins 0.000 description 2
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000004957 autophagosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法，属于细胞成像技术领域。该方法是观测荧光蛋白偶联的微管相关蛋白1轻链3蛋白（FP-LC3）斑点，与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3是否存在完全、快速的交换行为。如果存在，则表明FP-LC3斑点的类型为蛋白聚集体；若FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3存在少量或者不存在交换行为，则表明FP-LC3斑点的类型为自吞噬结构。利用该方法可以准确、快速判定LC3斑点类型。
Description
技术领域
本发明属于细胞成像技术领域，具体涉及一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法。
背景技术
在自吞噬研究领域，经常需要表征细胞内自吞噬结构。微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白被认为是一种自吞噬结构的标记性蛋白。通常将荧光（FP）蛋白与LC3融合表达于哺乳动物细胞，以便应用荧光显微镜动态观察自吞噬结构的形成与动态变化。在荧光显微成像中，可见均匀分布于胞浆和细胞核的荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3蛋白（FP-LC3）分子或分布于胞浆中的斑点状的结构，后者主要代表自吞噬结构。
但是，近5年的最新研究结果表明，这些FP-LC3斑点结构并不一定代表自吞噬囊泡结构，也可能代表LC3分子参与的蛋白聚集体（不含膜成分）。有研究表明，LC3的突变体LC3G120A(LC3□G)可以仅标记蛋白聚集体而不标记自吞噬囊泡结构，因此发展出了利用FP-LC3G120A(FP-LC3□G)来作为自吞噬结构的一个阴性对照。然而，现有的研究结果显示，虽然在特定条件下FP-LC3G120A(FP-LC3□G)确实主要标记蛋白聚集体而不标记自吞噬结构，但是在某些情况下FP-LC3G120A(FP-LC3□G)仍然会进入自吞噬囊泡，从而标记自吞噬结构。这表明，FP-LC3G120A(FP-LC3□G)并非一个完美的区分自吞噬结构或者蛋白聚集体的工具。
因此，发展出一种判定LC3斑点类型的方法，在活细胞内快速鉴别自吞噬结构与蛋白聚集体，对于提升生物学研究的准确性具有重要的应用价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种准确、快速判定LC3斑点类型的方法。
本发明所采用的技术方案是：
一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法，包括以下步骤：
（1）将荧光蛋白（FP）与微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白融合，转染并表达于哺乳动物细胞中；
（2）对步骤（1）得到的哺乳动物细胞进行处理，使哺乳动物细胞内形成荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3蛋白（FP-LC3）斑点；
（3）对步骤（2）得到的FP-LC3斑点进行分析，若FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3存在完全、快速的交换行为，则FP-LC3斑点的类型为蛋白聚集体；若FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3存在少量或者不存在交换行为，则FP-LC3斑点的类型为自吞噬结构。
优选地，所述步骤（3）中，分析方法为荧光漂白后恢复（FRAP）方法。
进一步地，所述FRAP方法为：对FP-LC3斑点进行FRAP分析，如果检测FP-LC3斑点的荧光信号的半恢复时间<1s，恢复程度>80%，则表明该FP-LC3斑点是蛋白聚集体。
优选地，所述步骤（3）中，分析方法为荧光激活后重分布（FRAPa）方法。
进一步地，所述FRAPa方法为：对FP-LC3斑点进行FRAPa分析，如果检测FP-LC3斑点的荧光信号的半衰减时间<2s，衰减程度>60%，则表明该FP-LC3斑点是蛋白聚集体。
优选地，所述步骤（3）是利用荧光显微镜进行观察。
本发明具有以下优点：
本发明是一种判定LC3斑点类型的方法，该方法的关键在于，观测FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3是否存在完全、快速的交换行为，如果存在，则表明FP-LC3斑点的类型为蛋白聚集体；若FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3存在少量或者不存在交换行为，则表明FP-LC3斑点的类型为自吞噬结构。利用本方法可以准确、快速地在活细胞内判定LC3斑点是自吞噬结构还是蛋白聚集体，判定的准确率达到100%，对提升生物学研究的准确性具有重要的应用价值。
附图说明
图1为本发明实施例1中用FRAPa技术判定puromcyin诱导的dendra2-LC3斑点类型的图；
图2为本发明实施例2中阴性对照组(未处理组)的图；
图3为本发明实施例2中CQ诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图；
图4为本发明实施例2中rapamycin诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图；
图5为本发明实施例2中阴性对照组中细胞内平均GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的统计的图；
图6为本发明实施例2中CQ处理组中细胞内平均GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的统计的图；
图7为本发明实施例2中rapamycin处理组中细胞内平均GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的统计的图；
图8为本发明实施例2中FRAP技术检测CQ诱导的GFP-LC3斑点的类型的图；
图9为本发明实施例2中FRAP技术检测rapamycin诱导的GFP-LC3斑点的类型的图；
图10为本发明实施例3中LY294002诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图；
图11为本发明实施例3中wortmannin诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图；
图12为本发明实施例3中MG-132诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图；
图13为本发明实施例3中FRAP技术检测LY294002诱导GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图；
图14为本发明实施例3中FRAP技术检测wortmannin诱导GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图；
图15为本发明实施例3中FRAP技术检测MG-132诱导GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图；
图16为本发明实施例4中atg5-/-MEFs中瞬时表达24小时的GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图；
图17为本发明实施例4中FRAP技术检测atg5-/-MEFs中GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图。
具体实施方式
下面结合附图和实施方式对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
在本实施例中，首先将dendra2光转化蛋白融合的LC3蛋白（dendra2-LC3）转染到HeLa细胞中，过24小时。接着用嘌呤霉素（puromycin）处理细胞2.5小时,均诱导形成了dendra2-LC3斑点。Puromycin是广泛使用的诱导自吞噬斑点形成的试剂。最后用FRAPa方法进行分析。图1是FRAPa技术判定puromcyin诱导的dendra2-LC3斑点类型的图，从图中可以看出，dendra2-LC3标记的蛋白聚集体被光激活后，斑点处荧光有快速的和明显程度的降低。
实施例2
本实施例中，首先将GFP融合的LC3蛋白（GFP-LC3）和mCherry融合的LC3蛋白（mCherry-LC3G120A）共转染到HeLa细胞，过24小时。接着用嘌呤霉素（Rapamycin）和氯喹（chloroquine，简写为CQ）处理细胞6小时。Rapamycin和CQ是广泛使用的诱导自吞噬斑点形成的试剂。最后利用FRAP方法进行分析，图2为阴性未处理组对照组图，图3为CQ诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图，图4为rapamycin诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图，图5为阴性对照组中细胞内平均GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的统计的图，图6为CQ处理组中细胞内平均GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的统计的图，图7为rapamycin处理组中细胞内平均GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的统计的图，图8为FRAP技术检测CQ诱导的GFP-LC3斑点的类型的图，图9为FRAP技术检测rapamycin诱导的GFP-LC3斑点的类型的图。从图2至图9中可以看出，诱导形成了大量的GFP-LC3斑点而非mCherry-LC3G120A斑点，GFP-LC3斑点均没有展示出荧光漂白后恢复的特性，表明这些斑点结构为自噬体结构。图2至图7中，R-LC3-G120A代表mCherry-LC3G120A。
实施例3
本实施例中，首先将GFP-LC3和mCherry-LC3G120A共转染到HeLa细胞，过24小时。接着用LY294002、渥曼青霉素（wortmannin）和MG132处理细胞6小时。LY294002、wortmannin和MG132是被报道的可以诱导蛋白聚集体的化学试剂。最后利用FRAP方法进行分析，图10为LY294002诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图，图11为wortmannin诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图，图12为MG-132诱导GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图，图13为FRAP技术检测LY294002诱导GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图；图14为中FRAP技术检测wortmannin诱导GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图；图15为FRAP技术检测MG-132诱导GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图。从图10至图15可以看出，诱导形成了一定量的蛋白聚集体。这些荧光蛋白标记的蛋白聚集体斑点，均展示出快速且几乎完全的荧光漂白后恢复特性，表明这些斑点结构为蛋白聚集体结构。图10至图12中，R-LC3-G120A代表mCherry-LC3G120A。
实施例4
有报道指出，FP-LC3表达于自吞噬缺陷细胞株永生化的atg5基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞（atg5/MEFs）中，可形成非自吞噬的斑点。本实施例中，将GFP-LC3和mCherry-LC3G120A共转染到atg5/MEFs，24小时后用共聚焦显微镜观察，可见形成了一定量的蛋白聚集体。利用FRAP方法进行分析，图16为atg5/-MEFs中瞬时表达24小时的GFP-LC3/mCherry-LC3G120A斑点的图，图17为FRAP技术检测atg5/-MEFs中GFP-LC3+/mCherry-LC3G120A+斑点的GFP-LC3的动力学的图。从图16和图17中可以看出，这些蛋白聚集体斑点均展示出快速且几乎完全的荧光漂白后恢复特性，表明这些斑点结构为蛋白聚集体结构。图16和图17中R-LC3-G120A代表mCherry-LC3G120A。
本发明是一种判定LC3斑点类型的方法，该方法的关键在于，观测若FP-LC3与哺乳动物细胞中胞浆中FP-LC3是否存在完全、快速的交换行为，如果存在，则表明FP-LC3斑点的类型为蛋白聚集体；若FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3存在少量或者不存在交换行为，则表明FP-LC3斑点的类型为自吞噬结构。利用本方法可以准确、快速在活细胞内快速判定LC3斑点是自吞噬结构还是蛋白聚集体，判定的准确率达到100%，对提升生物学研究的准确性具有重要的应用价值。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (4)
1.一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将荧光蛋白(FP)与微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白融合，转染并表达于哺乳动物细胞中；
(2)对步骤(1)得到的哺乳动物细胞进行处理，使哺乳动物细胞内形成荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(FP-LC3)蛋白斑点；
(3)对步骤(2)得到的FP-LC3斑点进行分析，若FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3存在完全、快速的交换行为，则FP-LC3斑点的类型为蛋白聚集体；若FP-LC3与哺乳动物细胞胞浆中的FP-LC3存在少量或者不存在交换行为，则FP-LC3斑点的类型为自吞噬结构;
所述步骤(3)中，分析方法为荧光漂白后恢复(FRAP)方法或为荧光激活后重分布(FRAPa)方法。
2.根据权利要求1所述的判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法，其特征在于，所述FRAP方法为：对FP-LC3斑点进行FRAP分析，如果检测FP-LC3斑点的荧光信号的半恢复时间<1s，恢复程度>80％，则表明该FP-LC3斑点是蛋白聚集体。
3.根据权利要求1所述的判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法，其特征在于，所述FRAPa方法为：对FP-LC3斑点进行FRAPa分析，如果检测FP-LC3斑点的荧光信号的半衰减时间<2s，衰减程度>60％，则表明该FP-LC3斑点是蛋白聚集体。
4.根据权利要求1所述的判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法，其特征在于，所述步骤(3)是利用荧光显微镜进行观察。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310031926.2A CN103115907B (zh) | 2013-01-29 | 2013-01-29 | 一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310031926.2A CN103115907B (zh) | 2013-01-29 | 2013-01-29 | 一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103115907A CN103115907A (zh) | 2013-05-22 |
| CN103115907B true CN103115907B (zh) | 2015-03-18 |
Family
ID=48414333
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310031926.2A Active CN103115907B (zh) | 2013-01-29 | 2013-01-29 | 一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103115907B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102014004529A1 (de) * | 2014-03-27 | 2015-10-15 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Die automatische Sortierung von Polymermaterialien anhand der Fluoreszenzabklingzeit der Eigenfluoreszenz und der Fluoreszenz von Markierungsstoffen |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101224207A (zh) * | 2007-10-12 | 2008-07-23 | 中国科学院上海有机化学研究所 | 具有诱导自吞噬治疗错误折叠蛋白聚集所致疾病的药物及其筛选方法 |
| US20100233730A1 (en) * | 2008-11-19 | 2010-09-16 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Therapeutic modulation of autophagy |
| WO2011019636A2 (en) * | 2009-08-11 | 2011-02-17 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancers and pathogenic infections |
| CN102115730A (zh) * | 2010-09-29 | 2011-07-06 | 复旦大学附属中山医院 | 稳定指示自噬的高转移潜能肝癌细胞株及其建立和应用方法 |
| CN102382194A (zh) * | 2011-11-02 | 2012-03-21 | 北京大学 | 自噬串联荧光探针mTagRFP-mWasabi-LC3及其应用 |
| WO2012154944A2 (en) * | 2011-05-10 | 2012-11-15 | Stc.Unm | Methods of treating autophagy-associated disorders and related pharmaceutical compositions, diagnostics, screening techniques and kits |
-
2013
- 2013-01-29 CN CN201310031926.2A patent/CN103115907B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101224207A (zh) * | 2007-10-12 | 2008-07-23 | 中国科学院上海有机化学研究所 | 具有诱导自吞噬治疗错误折叠蛋白聚集所致疾病的药物及其筛选方法 |
| US20100233730A1 (en) * | 2008-11-19 | 2010-09-16 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Therapeutic modulation of autophagy |
| WO2011019636A2 (en) * | 2009-08-11 | 2011-02-17 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancers and pathogenic infections |
| CN102115730A (zh) * | 2010-09-29 | 2011-07-06 | 复旦大学附属中山医院 | 稳定指示自噬的高转移潜能肝癌细胞株及其建立和应用方法 |
| WO2012154944A2 (en) * | 2011-05-10 | 2012-11-15 | Stc.Unm | Methods of treating autophagy-associated disorders and related pharmaceutical compositions, diagnostics, screening techniques and kits |
| CN102382194A (zh) * | 2011-11-02 | 2012-03-21 | 北京大学 | 自噬串联荧光探针mTagRFP-mWasabi-LC3及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| monitoring autophagic flux by an improved tandem fluorescent-tagged LC3(mTagRFP-mWasabi-LC3) reveals that high-dose rapamycin impairs sutophagic flux in cancer cells;CuihongZhou等;<autophagy>;20120831;第8卷(第8期);1215-1226 * |
| 肿瘤细胞中表达的GFP蛋白的荧光漂白特性的研究;金鹰等;《光谱学与光谱分析》;20041231;第24卷(第12期);1626-1629 * |
| 郭焱.组蛋白H2A与染色质的动态结合.《北京大学学报(自然科学版)》.2003,第39卷(第2期),182-186. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103115907A (zh) | 2013-05-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| An et al. | Systematic analysis of ribophagy in human cells reveals bystander flux during selective autophagy | |
| Long et al. | A conserved ankyrin repeat-containing protein regulates conoid stability, motility and cell invasion in Toxoplasma gondii | |
| Etoc et al. | Non-specific interactions govern cytosolic diffusion of nanosized objects in mammalian cells | |
| Bauckman et al. | Selective autophagy: xenophagy | |
| Koritzinsky et al. | Quantification of exosomes | |
| Cottam et al. | Coronavirus NSP6 restricts autophagosome expansion | |
| Mitchison et al. | Roles of polymerization dynamics, opposed motors, and a tensile element in governing the length of Xenopus extract meiotic spindles | |
| JP2019165741A (ja) | 標的分子のマルチプレックス検出のための方法、キット、およびシステム、ならびにそれらの使用 | |
| CN103901034B (zh) | 一种检测尿液中微量白蛋白的检测试剂条及其制备方法 | |
| Zainol et al. | Introducing a true internal standard for the Comet assay to minimize intra-and inter-experiment variability in measures of DNA damage and repair | |
| Janssen et al. | Probing aggrephagy using chemically-induced protein aggregates | |
| Titus et al. | High-throughput multiplexed quantitation of protein aggregation and cytotoxicity in a Huntington’s disease model | |
| Wu et al. | Uncovering the Rab5‐Independent Autophagic Trafficking of Influenza A Virus by Quantum‐Dot‐Based Single‐Virus Tracking | |
| Ray et al. | Computational sensing of herpes simplex virus using a cost-effective on-chip microscope | |
| Albrecht et al. | Protocol for probing regulated lysosomal activity and function in living cells | |
| US20180040120A1 (en) | Methods for quantitative assessment of mononuclear cells in muscle tissue sections | |
| JP5482057B2 (ja) | 細胞核を構成する構造体の解析方法 | |
| CN103115907B (zh) | 一种判定微管相关蛋白1轻链3蛋白斑点类型的方法 | |
| CN107505304A (zh) | 一种快速判定耐药型白色念珠菌的方法 | |
| CN103276042B (zh) | 一种检测水中有机污染物遗传毒性的方法 | |
| Liddle et al. | dSTORM microscopy evidences in HeLa cells clustered and scattered γH2AX nanofoci sensitive to ATM, DNA-PK, and ATR kinase inhibitors | |
| CN110836972A (zh) | 一种基于γ-H2AX的生物标志物遗传毒性检测方法 | |
| Chau et al. | Cooperative electrolyte-PEG interactions drive the signal amplification in a solid-state nanopore | |
| Elmaci et al. | Paradoxical results obtained with Ki67-labeling and PHH3-mitosis index in glial tumors: a literature analysis | |
| Kosuge et al. | Nuclear features of infiltrating urothelial carcinoma are distinguished from low-grade noninvasive papillary urothelial carcinoma by image analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |