CN103007253B

CN103007253B - 一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物及其制备方法

Info

Publication number: CN103007253B
Application number: CN201210537215.8A
Authority: CN
Inventors: 陈畅; 姬金丽; 邓玲玲; 张会萍; 田婕
Original assignee: Beijing University of Chemical Technology
Current assignee: Beijing University of Chemical Technology
Priority date: 2012-12-12
Filing date: 2012-12-12
Publication date: 2015-06-17
Anticipated expiration: 2032-12-12
Also published as: CN103007253A

Abstract

本发明属于医学制药工程技术领域，涉及一种含NO供体的组合药物及其制备方法，尤其是一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物及其制备方法。本发明所述的组合药物由含有β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的NO供体药物、滑爪蟾素、蒙脱石、防潮剂组成，其制备方法具体如下：取滑爪蟾素，溶于醇溶液中，加入蒙脱石，充分搅拌，滤取蒙脱石，烘干；取含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的NO供体药物溶于醇中，然后加入蒙脱石，充分搅拌，滤取蒙脱石，挥干醇后加入防潮剂，拌匀，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物。本发明所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物防水、抗酸，而且能延长NO供体的释放时间，达到稳定、可控。

Description

一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物及其制备方法

技术领域

本发明属于医学制药工程技术领域，涉及一种含NO供体的组合药物及其制备方法，尤其是一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物及其制备方法。

背景技术

一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种具有多种生物活性的气体小分子物质。在体内由NO前体物质L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的催化下与氧分子作用产生NO和L-胍氨酸。NO普遍存在于脊椎动物的各种细胞，如内皮细胞、巨噬细胞、神经细胞中，是细胞间和细胞内信息传递的重要调节因子，同时还是宿主免疫反应中一种细胞毒性因子。它被证实具有多种生物学活性，这包括调节血管扩张和血流、神经信号传递、信号转导、免疫调制、细胞的氧化还原状态、肝细胞的凋亡及防御微生物等。

一氧化氮供体(NO donor)是指一类能在体内经酶促反应或非酶促反应引入并释放外源性NO的一类前体药物。NO在病理生理过程中具有广泛且重要的作用，随着对NO认识的不断深入，人们对NO供体的研究兴趣也越来越高。在近十几年，许多具有不同生物学特性和治疗潜力的NO供体都已被合成，按其结构类型，常用的大致包括有机硝酸酯类如硝酸甘油(NG)、斯德酮亚胺类如吗多明、亚硝基硫醇类如S-亚硝基卡托普利、NO-供体复合类如NO-阿司匹林(NCX-4061)以及金属-NO配合物类如硝普钠等。但这些传统的NO供体在使用时，一方面，它只在溶液中释放NO，因NO的生物半衰期极短，只有10s左右，一旦生成就会被迅速氧化，导致细胞内的NO很难达到有效浓度；另一方面，NO释放缺乏特异性使其在攻击目的细胞的同时，也可杀伤正常细胞，如促进肝细胞纤维化等。因此，NO供体的组织特异性在NO控释中越来越受到重视。

有文献报道，设计并合成了一个新型的糖基化NO供体化合物β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇，其利用半乳糖连接偶氮烯翁二醇末端氧来保护在水溶液中易自发分解产生NO的偶氮烯翁二醇，此外，更主要的是，由于分子中引入了半乳糖，使其对高表达β-半乳糖苷酶的病菌及肿瘤细胞具有了特异性[李松,陈畅,史艳秋,等.新型NO供体β-Gal-NONOate对C6细胞的抗肿瘤作用.中国生化药物杂志,2007,28(4):217-220]。然而，β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇对环境温度和湿度敏感，仅可于4℃保存10d左右，H⁺也会加速其的降解。若采用单一药物的形式，β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇在外环境存放或在体内的转运时易提前释放出NO，影响所有的器官，有时会产生严重的副作用和并发症，而在NO缺乏的器官却没有达到有效的药物剂量。

现于以上缺陷，合成选择性高、稳定性好的靶向释放NO的供体药物或通过添加其它辅料制成能达到同样目的的NO供体组合药物已经成为当今制药工程领域的热点。

发明内容

基于上述现有技术，本发明提供了一种选择性高、稳定性好的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物及其制备方法。该组合药物中的β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇由于分子中引入了β-半乳糖，不仅阻滞了偶氮烯翁二醇遇水溶液易自发分解产生NO，而且使其对高表达β-半乳糖苷酶的病菌及肿瘤细胞具有了较好的组织特异性。滑爪蟾素是含21-27个氨基酸残基的碱性阳离子肽，除了自身具有抗菌及抗肿瘤作用之外，还可以作为酸碱缓冲对，减少H⁺对NO供体的影响。蒙脱石是由颗粒极细的含水铝硅酸盐构成的层状矿物，具有很强的吸附力及阳离子交换性能，因此，对呈阳性的β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇及滑爪蟾素有一定吸附能力，从而能够延缓β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的释放。防潮剂的加入，则使得蒙脱石多吸附了一隔水层，避免了NO供体及滑爪蟾素等药物层及直接与水接触，增加组合药物的稳定性。

本发明所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物由NO供体药物、滑爪蟾素、蒙脱石、防潮剂组成。

本发明所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物中各组份含量为：5-40质量份的NO供体药物、4-9质量份的滑爪蟾素、35-70质量份的蒙脱石、5-30质量份的防潮剂。

所述的蒙脱石为钠蒙脱石或/和钙蒙脱石；所述的防潮剂为硬脂酰聚甘油酯、乙基纤维素及聚二甲基硅氧烷中的一种或几种。

所述的NO供体药物为β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇，或者质量比为（0.1-0.3）:1的化合物A与β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇。

所述化合物A结构式如下：

所述化合物A的制备方法为：

（1）在反应瓶中加入30mL氯仿和240mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸，搅拌下用2wt％的氢氧化钠水溶液调pH为9，加入0.6g Bu₄NBr，加热至42℃，滴加30mL含240mmol四乙酰基-β-D-溴代半乳糖的氯仿溶液并反应4.5h，其间以2wt％的氢氧化钠溶液维持体系pH=9，反应完毕后，分出有机层，用5wt％的氢氧化钠溶液和水洗涤，干燥有机层后除去溶剂，然后加入丙酮，滤去不溶物，将滤液浓缩过柱，用乙酸乙酯洗脱，收集最先流出的色带，得N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯；

（2）将240mg Bu₂SnO和190mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯加入50ml无水甲醇中，90℃回流2h，得N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯；

（3）取110mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯，悬浮于含有3.6g甲醇钠的100ml甲醇溶液中，置于高压反应釜中，先通氮气后抽真空，除去体系中的氧气，再通入NO气体，维持压力0.6Mpa，室温反应5天，反应完成后通氮气吹去未反应的NO，过滤，用无水甲醇和乙醚洗涤3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，得N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯；

（4）取90mmol N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯，悬浮于50ml DMF的密闭玻璃瓶中，冰水浴搅拌并用针通氮气2小时，以除去反应体系中的氧气，在氮气的保护氛围中，用注射器加入6ml三(2-氯乙基)胺，反应3小时；撤除冰水浴及氮气，升至室温，继续密封搅拌48小时，过滤，用乙醚洗3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，即得化合物A。

所述的N-邻羟基苄基-氨乙酸的制备方法为：在1000mL单口瓶中，加入300mmol乙氨酸，450mL无水乙醇，搅拌使其溶解，然后加入300mmol氢氧化钠，搅拌10min后，分批加入300mmol水杨醛，搅拌2h，TLC跟踪反应，原料消失为反应终点；反应结束后，用冰水浴冷却至6℃，用稀盐酸调pH=6，然后分批加入300mmol四氢硼钠，TLC跟踪反应；反应完全后，用稀盐酸调pH为4，使白色沉淀充分析出，静置，过滤，滤饼分别用水、乙醚洗涤得粗产品，粗产品用100ml乙醇溶解，后加500ml水调极性，进行重结晶，抽滤得N-邻羟基苄基-氨乙酸。

所述的四乙酰基-β-D-溴代半乳糖的制备方法为：在装有120mL乙酸酐的三口瓶中，滴加0.4mL高氯酸，35℃并在搅拌下，0.5h内加入300mmol β-D-半乳糖，继续搅拌2h，改为冰水浴冷至5℃后加入5g红磷，然后在20℃并搅拌下滴加9ml溴，反应0.5h后加入8mL冰水，继续反应2h后加入50mL氯仿，然后将此混合物倒入160mL冰水中，抽滤，除去红磷，分出有机层，用饱和碳酸钠溶液洗至pH为6，有机层用无水氯化钙干燥及活性炭脱色，除去溶剂后得白色固体，即为四乙酰基-β-D-溴代半乳糖。

所述的一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物的制备方法如下：

1）取4-20g滑爪蟾素溶于20-40ml醇水混合溶液中，醇与水的体积比为（1:20）-（1:3），然后加入35-70g蒙脱石，搅拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇后，放入烘箱中烘干；

2）取5-80g的NO供体药物溶于20-80ml醇中，然后加入步骤1）得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脱石，搅拌，使NO供体药物充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇；

3）将步骤2）得到的吸附有滑爪蟾素和NO供体药物的蒙脱石加入5-30g防潮剂，充分拌匀，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物。

步骤1）和步骤2）中所述的醇为甲醇或乙醇。

如上所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物在抗菌、抗病毒药物制备中的应用。

本发明所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物以含有β-半乳糖基的NO供体为主导药物，使其较有较好的组织特异性，加入滑爪蟾素，除了取其抗菌、抗肿瘤活性，还可作为缓冲对，而蒙脱石的加入，则使NO供体药物延长了NO释放时间。与现有技术相比，本发明所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物相对来说，防水、抗酸，而且能延长NO供体的释放时间，做到稳定、可控。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步的描述，而不是限制本发明的范围。

实施例1：

组合药物组份：7g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇、5g滑爪蟾素、70g钠蒙脱石、18g聚合度为6-14的单硬脂酰聚甘油酯。

组合药物制备：

1）取8g滑爪蟾素溶于20ml乙醇水溶液中，乙醇与水的体积比为1:4，然后加入70g蒙脱石，搅拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇后，放入烘箱中烘干；

2）取10g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇溶于25ml乙醇中，然后加入步骤1）得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脱石，搅拌，使NO供体药物充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇；

3）将步骤2）得到的吸附有滑爪蟾素和NO供体药物的蒙脱石加入18g单硬脂酰聚甘油酯，充分拌匀，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物。

实施例2：

组合药物组份：12g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇、7g滑爪蟾素、60g钠蒙脱石、21g比重为0.96-0.97的聚二甲基硅氧烷。

组合药物制备：

1）取10g滑爪蟾素溶于35ml乙醇水溶液中，乙醇与水的体积比为3:7，然后加入60g蒙脱石，搅拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇后，放入烘箱中烘干；

2）取16g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇溶于30ml乙醇中，然后加入步骤1）得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脱石，搅拌，使NO供体药物充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇；

3）将步骤2）得到的吸附有滑爪蟾素和NO供体药物的蒙脱石加入21g硬脂酰聚甘油酯，充分拌匀，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物。

实施例3：

组合药物组份：30g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇、4g滑爪蟾素、50g钙蒙脱石、16g分子量为2000的乙基纤维素。

组合药物制备：

1）取6g滑爪蟾素溶于30ml乙醇水溶液中，乙醇与水的体积比为1:4，然后加入50g钙蒙脱石，搅拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇后，放入烘箱中烘干；

2）取30g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇溶于80ml乙醇中，然后加入步骤1）得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脱石，搅拌，使NO供体药物充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇；

3）将步骤2）得到的吸附有滑爪蟾素和NO供体药物的蒙脱石加入16g乙基纤维素，充分拌匀，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物。

实施例4：

组合药物组份：10g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇、2g化合物A、5g滑爪蟾素、60g钙蒙脱石、23g分子量为2000的乙基纤维素。

化合物A制备：

1）在1000mL单口瓶中，加入300mmol乙氨酸，450mL无水乙醇，搅拌使其溶解，然后加入300mmol氢氧化钠，搅拌10min后，分批加入300mmol水杨醛，搅拌2h，TLC跟踪反应，原料消失为反应终点；反应结束后，用冰水浴冷却至6℃，用稀盐酸调pH=6，然后分批加入300mmol四氢硼钠，TLC跟踪反应；反应完全后，用稀盐酸调pH为4，使白色沉淀充分析出，静置，过滤，滤饼分别用水、乙醚洗涤得粗产品，粗产品用100ml乙醇溶解，后加500ml水调极性，进行重结晶，抽滤得N-邻羟基苄基-氨乙酸；

2）在装有120mL乙酸酐的三口瓶中，滴加0.4mL高氯酸，35℃并在搅拌下，0.5h内加入300mmol β-D-半乳糖，继续搅拌2h，改为冰水浴冷至5℃后加入5g红磷，然后在20℃并搅拌下滴加9ml溴，反应0.5h后加入8mL冰水，继续反应2h后加入50mL氯仿，然后将此混合物倒至160mL冰水中，抽滤，除去红磷，分出有机层，用饱和碳酸钠溶液洗至pH为6，有机层用无水氯化钙干燥及活性炭脱色，除去溶剂后得白色固体，即为四乙酰基-β-D-溴代半乳糖；

3）在反应瓶中加入30mL氯仿和240mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸，搅拌下用2wt％的氢氧化钠水溶液调pH为9，加入0.6g Bu₄NBr，加热至42℃，滴加30mL含240mmol四乙酰基-β-D-溴代半乳糖的氯仿溶液并反应4.5h，其间以2wt％的氢氧化钠溶液维持体系pH=9，反应完毕后，分出有机层，用5wt％的氢氧化钠溶液和水洗涤，干燥有机层后除去溶剂，然后加入丙酮，滤去不溶物，将滤液浓缩过柱，用乙酸乙酯洗脱，收集最先流出的色带，得N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯，进行元素分析，确证结构，化合物组成为：C₂₃H₂₉NO ₁₂；

4）将240mg Bu₂SnO和190mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯加入50ml无水甲醇中，90℃回流2h，得N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯，进行元素分析，确证结构，化合物组成为：C₁₅H₂₅NO₈；

5）取110mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯，悬浮于含有3.6g甲醇钠的100ml甲醇溶液中，置于高压反应釜中，先通氮气后抽真空，除去体系中的氧气，再通入NO气体，维持压力0.6Mpa，室温反应5天，反应完成后通氮气吹去未反应的NO，过滤，用无水甲醇和乙醚洗涤3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，得N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯，进行元素分析，确证结构，化合物组成为：C₁₅H₂₄N₃NaO₁₀；

6）取90mmol N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯，悬浮于50ml DMF的密闭玻璃瓶中，冰水浴搅拌并用针通氮气2小时，以除去反应体系中的氧气，在氮气的保护氛围中，用注射器加入6ml三(2-氯乙基)胺，反应3小时；撤除冰水浴及氮气，升至室温，继续密封搅拌48小时，过滤，用乙醚洗3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，即得化合物A，元素分析、¹H-NMR、¹³C-NMR确证化合物A结构为

组合药物制备：

1）取8g滑爪蟾素溶于30ml甲醇水溶液中，甲醇与水的体积比为1:4，然后加入60g钙蒙脱石，搅拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇后，放入115℃的烘箱中烘干；

2）取13g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇及2.5g化合物A溶于35ml乙醇中，然后加入步骤1）得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脱石，搅拌，使NO供体药物充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇；

3）将步骤2）得到的吸附有滑爪蟾素和NO供体药物的蒙脱石加入23g乙基纤维素，充分拌匀，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物。

实施例5：

组合药物组份：20g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇、5g化合物A、7g滑爪蟾素、55g钙蒙脱石、13g取代度为2.3-2.6、乙氧基含量为42-50%的乙基纤维素。

化合物A制备：

1）在反应瓶中加入30mL氯仿和240mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸，搅拌下用2wt％的氢氧化钠水溶液调pH为9，加入0.6g Bu₄NBr，加热至42℃，滴加30mL含240mmol四乙酰基-β-D-溴代半乳糖的氯仿溶液并反应4.5h，其间以2wt％的氢氧化钠溶液维持体系pH=9，反应完毕后，分出有机层，用5wt％的氢氧化钠溶液和水洗涤，干燥有机层后除去溶剂，然后加入丙酮，滤去不溶物，将滤液浓缩过柱，用乙酸乙酯洗脱，收集最先流出的色带，得N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯，进行元素分析，确证结构，化合物组成为：C₂₃H₂₉NO₁₂；

2）将240mg Bu₂SnO和190mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯加入50ml无水甲醇中，90℃回流2h，得N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯，进行元素分析，确证结构，化合物组成为：C₁₅H₂₅NO₈；

3）取110mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯，悬浮于含有3.6g甲醇钠的100ml甲醇溶液中，置于高压反应釜中，先通氮气后抽真空，除去体系中的氧气，再通入NO气体，维持压力0.6Mpa，室温反应5天，反应完成后通氮气吹去未反应的NO，过滤，用无水甲醇和乙醚洗涤3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，得N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯，进行元素分析，确证结构，化合物组成为：C₁₅H₂₄N₃NaO₁₀；

4）取90mmol N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯，悬浮于50ml DMF的密闭玻璃瓶中，冰水浴搅拌并用针通氮气2小时，以除去反应体系中的氧气，在氮气的保护氛围中，用注射器加入6ml三(2-氯乙基)胺，反应3小时；撤除冰水浴及氮气，升至室温，继续密封搅拌48小时，过滤，用乙醚洗3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，即得化合物A，元素分析、¹H-NMR、¹³C-NMR确证化合物A结构为

组合药物制备：

1）取10g滑爪蟾素溶于30ml甲醇水溶液中，甲醇与水的体积比为1:4，然后加55g钙蒙脱石，搅拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇后，放入200℃的烘箱中烘；

2）取25g β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇及7g化合物A溶于60ml乙醇中，然后加入步骤1）得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脱石，搅拌，使NO供体药物充分吸附于蒙脱石中，过滤，取蒙脱石，挥干醇；

3）将步骤2）得到的吸附有滑爪蟾素和NO供体药物的蒙脱石加入13g乙基纤维素，充分拌匀，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物。

取本发明实施例1-5所得的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物，以半衰期及对大肠杆菌K-12/lacZ抑制率、C6/LacZ细胞死亡率为指标，与现在技术的NO供体药物进行比较，结果见下表：

NO供体药物	半衰期	大肠杆菌K-12/lacZ抑制率	C6/LacZ细胞死亡率
				实施例1	91min	75%	81%
实施例2	73min	78%	83%
				实施例3	52min	83%	85%
实施例4	75min	81%	88%
				实施例5	68min	89%	92%
二醇二氮烯翁	32min	62%	67%

Claims

1.一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物，其特征在于，所述的组合药物由NO供体药物、滑爪蟾素、蒙脱石、防潮剂组成，所述的NO供体药物为β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇和化合物A，化合物A与β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的质量比为(0.1-0.3):1，化合物A结构式如下：

所述的组合药物中各组份含量为：5-40质量份的NO供体药物、4-9质量份的滑爪蟾素、35-70质量份的蒙脱石、5-30质量份的防潮剂；

所述的蒙脱石为钠蒙脱石或/和钙蒙脱石；所述的防潮剂为硬脂酰聚甘油酯、乙基纤维素及聚二甲基硅氧烷中的一种或几种；

所述化合物A的制备方法为：

(1)在反应瓶中加入30mL氯仿和240mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸，搅拌下用2wt％的氢氧化钠水溶液调pH为9，加入0.6g Bu₄NBr，加热至42℃，滴加30mL含240mmol四乙酰基-β-D-溴代半乳糖的氯仿溶液并反应4.5h，其间以2wt％的氢氧化钠溶液维持体系pH＝9，反应完毕后，分出有机层，用5wt％的氢氧化钠溶液和水洗涤，干燥有机层后除去溶剂，然后加入丙酮，滤去不溶物，将滤液浓缩过柱，用乙酸乙酯洗脱，收集最先流出的色带，得N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯；

(2)将240mg Bu₂SnO和190mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸四乙酰基-β-D-半乳糖酯加入50ml无水甲醇中，90℃回流2h，得N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯；

(3)取110mmol N-邻羟基苄基-氨乙酸-β-D-半乳糖酯，悬浮于含有3.6g甲醇钠的100ml甲醇溶液中，置于高压反应釜中，先通氮气后抽真空，除去体系中的氧气，再通入NO气体，维持压力0.6Mpa，室温反应5天，反应完成后通氮气吹去未反应的NO，过滤，用无水甲醇和乙醚洗涤3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，得N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯；

(4)取90mmol N-邻羟基苄基-N-(二氮烯-1-鎓氧-2-醇钠)-氨乙酸β-D-半乳糖酯，悬浮于50ml DMF的密闭玻璃瓶中，冰水浴搅拌并用针通氮气2小时，以除去反应体系中的氧气，在氮气的保护氛围中，用注射器加入6ml三(2-氯乙基)胺，反应3小时；撤除冰水浴及氮气，升至室温，继续密封搅拌48小时，过滤，用乙醚洗3次，在真空烘箱中室温真空干燥24小时，即得化合物A。

2.如权利要求1所述的一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物，其特征在于，所述的N-邻羟基苄基-氨乙酸的制备方法为：在1000mL单口瓶中，加入300mmol乙氨酸，450mL无水乙醇，搅拌使其溶解，然后加入300mmol氢氧化钠，搅拌10min后，分批加入300mmol水杨醛，搅拌2h，TLC跟踪反应，原料消失为反应终点；反应结束后，用冰水浴冷却至6℃，用稀盐酸调pH＝6，然后分批加入300mmol四氢硼钠，TLC跟踪反应；反应完全后，用稀盐酸调pH为4，使白色沉淀充分析出，静置，过滤，滤饼分别用水、乙醚洗涤得粗产品，粗产品用100ml乙醇溶解，后加500ml水调极性，进行重结晶，抽滤得N-邻羟基苄基-氨乙酸。

3.如权利要求1所述的一种含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的组合药物，其特征在于，所述的四乙酰基-β-D-溴代半乳糖的制备方法为：在装有120mL乙酸酐的三口瓶中，滴加0.4mL高氯酸，35℃并在搅拌下，0.5h内加入300mmolβ-D-半乳糖，继续搅拌2h，改为冰水浴冷至5℃后加入5g红磷，然后在20℃并搅拌下滴加9ml溴，反应0.5h后加入8mL冰水，继续反应2h后加入50mL氯仿，然后将此混合物倒入160mL冰水中，抽滤，除去红磷，分出有机层，用饱和碳酸钠溶液洗至pH为6，有机层用无水氯化钙干燥及活性炭脱色，除去溶剂后得白色固体，即为四乙酰基-β-D-溴代半乳糖。