CN102985823A - 带样本培育的检查系统 - Google Patents

带样本培育的检查系统 Download PDF

Info

Publication number
CN102985823A
CN102985823A CN2011800332020A CN201180033202A CN102985823A CN 102985823 A CN102985823 A CN 102985823A CN 2011800332020 A CN2011800332020 A CN 2011800332020A CN 201180033202 A CN201180033202 A CN 201180033202A CN 102985823 A CN102985823 A CN 102985823A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
reaction chamber
kit
entrance
filling
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011800332020A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102985823B (zh
Inventor
W·M·哈德曼
T·H·埃弗斯
T·P·H·G·扬森
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Koninklijke Philips NV
Original Assignee
Koninklijke Philips Electronics NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Koninklijke Philips Electronics NV filed Critical Koninklijke Philips Electronics NV
Publication of CN102985823A publication Critical patent/CN102985823A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102985823B publication Critical patent/CN102985823B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502715—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by interfacing components, e.g. fluidic, electrical, optical or mechanical interfaces
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/02—Adapting objects or devices to another
    • B01L2200/026—Fluid interfacing between devices or objects, e.g. connectors, inlet details
    • B01L2200/027—Fluid interfacing between devices or objects, e.g. connectors, inlet details for microfluidic devices
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/16—Reagents, handling or storing thereof
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/0867—Multiple inlets and one sample wells, e.g. mixing, dilution
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0403—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces
    • B01L2400/0406—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific forces capillary forces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
    • B01L2400/0487—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure fluid pressure, pneumatics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明涉及一种试剂盒（10）及其在检查设备（100）中的使用。可以向试剂盒（10）的入口（11）中引入样本（1）并通过通道（12）向反应室（13）传导。在反应室（13）中，例如通过受抑全内反射进行样本的检查。向入口（11）附近的样本施加试剂（21），其中所述试剂（21）优选存储于入口（11）处的储存器（16）中。通过这种方式，同时将反应室（13）的装填时间用于利用试剂（21）对样本的培育。此外，优选可以确定试剂盒和/或反应室的装填过程并在执行检查和/或对结果评估期间加以考虑。

Description

带样本培育的检查系统
技术领域
本发明涉及一种用于检查样本的试剂盒、设备和方法，所述检查包括利用试剂培育样本。
背景技术
WO 2009/115951A1公开了一种用于生物传感器的试剂盒，包括可以用要检查样本填充的样本室。在填充之后，将样本室的储存器中存储的磁性颗粒分散在液体样本中并特异性地结合到样本中的目标成分。然后能够通过样本室感测表面处的受抑全内反射检测标记的目标成分。
发明内容
基于这种状况，本发明的目的是提供用于检查样本流体的手段，该手段尤其适于实验室外的应用，例如用于路旁药物测试或床边临床测试中。为此，特别希望这种手段能够迅速而精确地进行检查。
这个目的是由根据权利要求1所述的方法、根据权利要求2所述的试剂盒、根据权利要求3或4所述的方法，以及根据权利要求5所述的设备实现的。在从属权利要求中公开了本发明的优选实施例。
根据其第一方面，本发明涉及一种检查样本，尤其是流体，例如血液、唾液或尿液的试剂盒。在当前语境中，术语“试剂盒”应当表示用于样本的较小容器，其中能够进行由独立传感器装置执行的检查。由于试剂盒会被样本污染，所以通常是一次性装置，例如由塑料，通过注射模制生产。试剂盒将包括以下部件：
a)入口，可以在其中引入要检查的样本。入口例如可以是漏斗形的孔，可以由用户向其施加样本的小滴。
b)反应室，可以在此检查样本。反应室是足够大以包含一部分样本并允许对其进行检查的腔。它可以是空腔或填充有像凝胶那样可以吸收样本物质的某种物质的腔。对于光学检查而言，反应室的至少一个表面通常将是透明的。此外，试剂盒可以一体地包括一些传感器，例如WO2005/010543A1或WO 2005/010542A2中所述种类的磁阻式传感器。
c)将入口与上述反应室连接的通道。该通道通常可以具有任何三维形状，但其通常是直且细长的。通道的截面优选将小于反应室的截面，因为通道应当仅实现样本的迅速运输而不保持大量样本。任选地，通道可以包括用于主动向反应室运输流体的器件，例如微流体泵。
d)用于将用于培育样本的试剂的储存器，其中所述储存器位于所述入口处。在当前语境中，“入口处的”位置应当表示距入口比距反应室更近的位置（或者更确切地说，距入口的最近点比距反应室的最近点更近）。储存器通常可以位于从入口到通道的一半距离的任何位置。最优选地，它位于尽可能接近入口处，例如在入口自身之内或在通道连接到入口的口之内。
通常，试剂盒的储存器应当仅能够保持试剂，尤其是可溶于样本的固体试剂。在优选实施例中，储存器应当已经预装填了这样的试剂，即试剂盒离厂准备好使用时。
所述试剂盒能够检查样本而无需特殊的实验室设备，因为其具有独立的入口，可以相对于，例如从注射器或移液管方便地人工引入样本，进行理想的设计。试剂盒还具有独立的反应室，其中用于样本的期望检查的最优条件占优，所述检查包括利用试剂培育样本。所述设计必然意味着要从入口向反应室传输样本将需要一些时间，这增加了总检查流程的持续时间。不过，检查时间对于实验室外的流程应当尽可能短。所述试剂盒通过在入口布置用于试剂的储存器将这个明显缺点转换成优点。这具有如下结果：试剂在样本中分散，因此培育样本可以在向试剂盒中引入样本期间立即开始。因此，用于从入口向反应室运输样本所需的时间未丢失，而是额外用于培育样本。
根据第二方面，本发明涉及一种用于检查试剂盒，尤其是上述种类试剂盒中样本的（第一）方法。该方法包括以下步骤：
a)向试剂盒的入口中引入样本。
b)在所述入口处向样本施加试剂。
c)令所述样本流经从所述入口到所述反应室的通道。这种流动可以被动地，例如由毛细力进行，或者可以通过泵浦样本辅助来主动进行。
d)检查所述反应室中的样本。这种检查例如可以包括检测样本中的特定目标成分，特别是与试剂起反应的目标成分。可以由光学、电气、磁性、超声或任何其他适当检测原理进行检测。
在一般形式中，该方法包括可以利用上述种类的试剂盒执行的步骤。因此参考以上描述获得关于所述方法的细节、优点和修改的更多信息。
根据第三方面，本发明涉及一种用于检查试剂盒（尤其是上述种类试剂盒）中样本的第二方法（尤其是上述种类的方法）。该方法包括以下步骤：
a)向试剂盒的入口中引入样本。
b)任选地向所述样本施加试剂。如在第一方法中那样，可以在入口处进行这种施加，但也可以在其它地方，例如在反应室中进行。
c)确定试剂盒和/或反应室的装填过程，其中按照定义，在所述装填的预定开始点和所述装填的预定结束点之间测量所述装填过程。通常一旦为整个反应室填充了样本就到达装填的结束点。对于装填的开始点，优选可以应用两个不同定义：在入口开始引入样本或样本进入反应室的时刻。在简单然而实际上重要的情况下，装填过程将对应于仅仅一个数字，在下文中称为“有效装填时间”，这是上述装填开始点和结束点之间的差异。在更精细的情况下，可以更详细地将装填过程描述为装填的时空过程，即在开始点和结束点之间的时间点，试剂盒或反应室的哪些部分已经装填。通常将根据实际考虑选择装填过程的定义，然后一贯地应用。
d)检查所述反应室中的样本。
已经提到，用样本装填反应室要花费一些时间，这增加了检查的总持续时间。装填过程典型地取决于试剂盒的几何形状和样本的连贯性。由于装填持续时间通常对检查结果有重要影响，所以装填过程的以上确定提供了关于检查流程及其边界条件的宝贵附加信息。例如，这可以用于估计检查的可靠性并丢弃在异常装填过程下获得的结果。
在本发明的语境中，有效装填时间（从入口处开始引入样本测量）典型地长于总检查时间的20%，常常长于总检查时间的50%（典型地，对应于从大约10秒到超过大约1分钟的绝对值）。
根据第四方面，本发明涉及一种用于检查样本的设备，所述设备包括以下部件：
a)具有入口和反应室的试剂盒。这优选可以是根据本发明第一方面的试剂盒，即具有入口、反应室、连接它们的通道以及入口处用于试剂的储存器的试剂盒。
b)装填检测器，用于确定试剂盒和/或反应室的装填过程，其中装填过程如上定义。
利用上述设备，可以实现装填过程的上述确定，从而允许改善检查结果的精确度。
施加于样本的试剂可以包括辅助预期检查的任何成分。在很多重要范例中，试剂包括特异性结合到样本中目标成分的标记颗粒。在当前语境中，术语“标记颗粒”应当表示具有可以检测的某种性质（例如光密度、磁化率、电荷、荧光作用、放射性等）的颗粒（原子、分子、复合物、纳米颗粒、微颗粒等），从而间接揭示出关联目标成分的存在。标记颗粒尤其可以是磁性颗粒，例如超顺磁性珠子。这样允许通过适当的磁场致动所述颗粒（以及结合的目标成分）和/或通过它们标记的磁矩检测已标记的目标成分。
在上述试剂盒和/或方法的进一步发展中，试剂盒包括过滤器，样本在从入口到反应室的途中可以通过过滤器。通常需要原始样本的过滤以避免污染或污物干扰检查。
例如，可以简单地使用装填过程的确定来确定检查结果的可靠性，如果有效装填时间超出某个给定范围，例如认为结果是无效的。在更精细的方式中，可以根据确定的装填过程调整检查流程。例如，可以延迟或提前测量的开始，以便实现大致恒定的培育时间，或者可以更强或更弱地致动反应室中的样本。
在实践中发现装填过程（因此还有培育时间）在样本和样本之间由于样本属性（粘滞性）不同而有很大变化。由于检查结果通常显著取决于培育时间，因此检查结果也将在样本间有所变化。在本发明的优选实施例中，从装填过程，尤其是从试剂盒或反应室的测量的时空装填过程确定用试剂对样本的有效培育。在当前语境中，术语“有效培育”将指试剂的不同部分通常在不同时间接触样本，因此将经历不同的各培育时间。“有效培育”可以考虑到这一点。例如，它可以包括试剂所有部分个体培育时间的平均值。
根据另一种方式，可以根据确定的装填过程调整检查结果的评估。参考上述实施例，尤其可以根据检查结果与用试剂对样本的有效培育的相关性来校正检查结果。如果检查结果与培育时间的相关性（大致）已知，这种方式是可能的。这种方式的优点是其基本能够在软件中实现。在设备中，必须要设计控制和/或评估模块，使得它们能够执行上述调整。
可以通过多种方式实现根据本发明的设备的装填检测器。在第一实现方式中，装填检测器包括成像装置（例如CCD芯片）和图像处理装置（例如具有适当软件的微型计算机），用于检测反应室中的流体弯液面（meniscus）。在很多应用中已经有像摄像机的成像装置用于对反应室中的过程进行光学观测。然后可以额外使用所述装置检测装填反应室的样本的流体弯液面，这样能够确定装填过程。
在另一实现方式中，装填检测器适于检测样本流体到达反应室中的多个研究区域。在很多应用中，在反应室中提供这样的多个研究区域以允许进行多个并行研究，例如利用不同的结合部位。装填检测器仅需要在二元意义上检测样本流体是否存在于研究区域中。那么，研究区域在反应室表面上的分布提供了样本流入室的空间画面。应当指出，如果将图像的像素视为研究区域，可以将上述成像方法看做这种方法的特定范例。
在本发明的另一种实现方式中，装填检测器适于处理多个研究区域的图像数据。本实施例基于反应室中多个特定区域的定义，“研究区域”或“感兴趣区域”，并使用来自这些研究区域的图像数据。然后处理这些图像数据，例如以便检测样本流体到达附近研究区域。通常，处理可能涉及应当检测的很多其他事件或特性，例如涉及可溶解层在反应室的被观测表面上的溶解（其中这种溶解可能发生得晚于流体弯液面的到达）。研究区域的图像数据通常将是代表研究区域的像素处的图像值（例如灰度值）集合。在实践中，通常将在图像传感器（摄像机）产生的单幅图像中表示反应室的完整检查区域，研究区域将是这一总体图像之内定义的不同子区域。
在上述实施例中，可以特别地调整研究区域的图像数据的处理以检测测定期间发生的（或更具体而言，试剂盒或反应室装填时间期间发生的）图像数据的过渡性和/或永久性改变。此外，该处理还特别可以包括针对单个研究区域和/或几个（或所有）研究区域的图像值的时域和/或空间滤波。例如，可以对一个研究区域的像素值进行空间平均，以产生针对这一研究区域的单个图像数据。此外，可以在时间上过滤研究区域的像素值或上述平均图像数据，例如，以便消除由于试剂盒相对于传感器装置的意外运动导致的伪影，例如变化。
根据另一实现方式，装填检测器包括试剂盒之内的至少一个润湿检测部位。这种润湿检测部位可以特别位于反应室之内的某个远处位置，在已经用样本装填反应室其余部分之前不会到达该位置。润湿检测部位的另一可能位置是在入口处；这个位置将允许精确确定有效装填时间的开始。
本发明还涉及将上述试剂盒和/或设备用于分子诊断、生物样品分析、化学样本分析、食物分析和/或法医分析。例如，可以借助于直接或间接附着于目标分子的磁珠或荧光颗粒完成分子诊断。
附图说明
本发明的这些和其他方面将从下文描述的实施例变得显而易见并参考其加以阐述。将借助于附图以举例方式描述这些实施例，附图中：
图1示意性示出了根据本发明具有试剂盒的检查设备的截面侧视图；
图2是示出了结合到磁珠的目标的运动学过程的图示；
图3示出了针对反应室中多个研究区域的测量光学FTIR信号；
图4在顶视图中示出了样本对反应室的不均匀装填；
图5示出了针对反应室中多个研究区域的测量光学FTIR信号，其中检查表面一开始是用蔗糖层覆盖的；
图6示出了在蔗糖层溶解之前（左）和之后（右）的反应室图像，一个ROI被放大；
图7示出了在发生（左）或不发生（右）润湿时几个研究区域的对应测量数据；
图8示出了针对两个研究区域的图像数据的示范性处理方案。
附图中相似的附图标记指代相同或相似的部件。
具体实施方式
图1中示意性示出了根据本发明的检查设备100。这种设备100包括两个基本部件，即试剂盒10和传感器装置50。
该试剂盒10通常是一次性装置，例如由玻璃或（透明）塑料，通过注射模制制造。试剂盒10的主要功能是提供容器，其中可以进行样本1，例如一滴血液的检查。为此，试剂盒10包括以下微流体部件：
-入口11，其中可以通过例如从移液管施加来引入样本1。为入口任选地提供过滤器15，用于过滤引入的样本。
-通道12，在其开口处连接到入口11。
-反应室13，其连接到通道12的另一端，并提供空间，其中可以检查样本。任选地，可以为反应室13的顶部提供一些试剂22，一旦其处于反应室13中就会溶解于样本中。
在图示的范例中，反应室13的底部提供至少一个研究区域14，在此可以进行样本的感测。如现在将更详细解释地，这种感测是由传感器装置50根据受抑全内折射（FTIR）原理执行的。
传感器装置50位于试剂盒10的底侧。它包括用于检测目标成分，尤其是用磁性颗粒（例如超顺磁性珠）标记的目标成分的器件，磁性颗粒特异性地结合到研究区域14中的结合部位。传感器装置50包括光源51，用于向试剂盒10和研究区域14中的样本之间的界面发射输入光束L1，在此它被全内反射成输出光束L2中。目标成分和/或结合在界面的磁性颗粒将导致受抑全内反射（FTIR），可以借助于光检测器52在输出光束L2中检测到它。光检测器52尤其可以是像CCD或CMOS摄像机的成像装置。由评价模块53评估并记录这个检测器52的测量信号。此外，附图示出了设置于试剂盒10下方的磁场发生器54，用于产生磁致动场，用于操控反应室13内部的磁性颗粒。例如，可以在WO 2008/155716、WO 2009/001276A1和WO 2008/142492A1中找到关于FTIR测量原理的更多细节。
在实践中，将把像图1所示的试剂盒用于如下护理点的情况：其中直接在路旁、在床边或在医生办公室甚至在家中进行检查。这样的医疗点测试需要具有快的总测定时间（放入样本到出来结果典型的总测定时间为五分钟）。
不过，为了在完全集成的试剂盒中进行测试，必须要实施若干处理步骤，例如过滤、填充、珠子的再分散、目标的培育、结合到传感器表面、冲洗、检测。根据（血浆）样本的流体性质，试剂盒的填充可能要花费多达一分钟。而且珠子的再分散和利用目标分子进行培育通常要花费1到1.5分钟。在能够开始表面反应（被认为是限制速率的步骤）之前，可能已经花费了多达一半的测定时间。
由于生物样本的变化，出现了第二个问题。来自不同人的生物样本将在流体行为、细胞量等方面表现出很大差异。因此，对于每个试剂盒/样本，装填时间将是不同的。典型的试验表现出介于不到1秒和44秒之间的装填时间分布。如果测定中使用的珠子是在反应室内部以干燥形式提供的（例如，作为图1中的试剂22），在珠子一旦接触到样本流体而再分散时，开始培育步骤。培育步骤是重要的，因为它决定了已经结合到珠子的目标分子的量，因此决定最后结合到传感器表面的总量。因此装填反应室花费时间的差异可能对检测到的目标量有影响，导致测定结果不精确。
下表例示了由于装填速度变化导致的培育时间变化，带来不同的测定结果。将包含心脏肌钙蛋白I（cTnI）的溶液注入包含反应室中的干燥磁性颗粒的试剂盒中，在0s、30s和60s之间改变致动期间的培育步骤。在珠子与表面反应结束时，测量信号变化。
培育时间（秒） 测量的测定信号变化(%) 信号变化的标准偏差(％)
0 8.9 2.4
30 14.4 2.7
60 21.1 0.8
此外，图2示出了结合到珠子的目标的运动学过程。针对不同的时间t（水平轴）利用1mg/mL的珠子培育100pM的心脏肌钙蛋白I（cTnI）。移除多余的未结合cTnI，将珠子注入（常规）试剂盒中。在珠子与表面反应结束时，测量信号变化ΔS（垂直轴）。
应当指出，第二个问题的程度取决于结合到磁珠的目标的运动学过程。如果该测定在完成样本室装填之后包括比结合所有目标所需的时间（其中图2中的曲线呈现平稳状态）更长的培育步骤，具有不同装填时间的样本之间当然没有差异。不过，这限制了测定设计的自由度，对于很多测定，在5分钟的期望总测定时间之内这是不可能的。
作为加快总测定时间的方案，提出组合不同的处理步骤。具体而言，提出在流体通道开始时施加磁珠。
在图1中所示的实施例中，这是通过在通道12和入口11之间的连接处提供储存器16来实现的，其中这个储存器16预先填充例如超顺磁性珠子21作为试剂，即试剂21设置于过滤器15下方或正后方。这样的优点是，在施加样本1时，珠子21将再分散，包含珠子的样本将向反应室13流入试剂盒中，培育已经开始。这意味着在一个步骤中组合了几个处理步骤，减少了总测定时间。组合的处理步骤包括：过滤样本，珠子的再分散，装填试剂盒并向珠子培育目标分子。这样节省了时间，总测定时间将减少。
不过，由于上述装填速度的差异，上述方法可能会增大误差，因为培育时间现在将直接与整个试剂盒的装填时间相关，而不是与仅仅反应室的装填时间相关。因此希望有适当的机制来校正这些偏差。作为优选实施例，因此这里提出测量“有效装填时间”和/或培育时间并为培育时间施加一些校正。在当前语境中，“有效装填时间”定义为从装填的预定开始点到预定终点的持续时间。在实践中，通常一旦为整个反应室填充了样本就到达所述终点。
开始点的第一个重要定义是在入口开始引入样本的时间点。如果未做出不同表述，在下文中将采用这种定义。
开始点的另一重要定义是样本首先进入反应室的时间点。根据实际考虑，即特定事件的可测量性，可以应用开始（或结束）点的其他定义。
可以通过不同方式进行有效装填时间或培育时间的校正：
-对培育时间对最终结果的效应进行数学校正（这需要关于测定结果如何取决于培育时间的先验知识，参考上表作为范例）。
-针对有效装填时间调节致动方案，例如应用更强或更弱的致动或更长或更短的培育/致动。
可以通过不同方式进行培育时间的测量，下面提到其中一些方式：
如果将珠子21放在过滤器15正下方，可以由适当的润湿检测器检测过滤器的润湿（因此，检测珠子再分散的开始）。本实施例应用了“有效装填时间”的概念，该概念以样本进入入口作为开始点。
可以利用例如现有的受抑全内反射（FTIR）检测方法监测反应室13的装填。然后，评估模块53中的适当软件能够监测在不同感兴趣区域（ROI）上到来的并在图像上分布的流体弯液面。利用该软件，可以在试剂盒的探查区域/传感器表面上定义几个ROI，其中可以进行观测。在装填期间，填充反应室的流体的弯液面在所界定的ROI上运行，并将给出光信号的变化。在装填之后，信号再次稳定。在沿给定方向，例如从右向左，装填反应室时，最右的ROI指示装填开始，而最左的ROI指示完全装填反应室的时候。
图3更详细地示出了一范例的所有（十个）ROI的测量信号变化。该曲线图示出了一测量结果，其开始时具有稳定的光信号，在装填期间光信号有很大变化，装填之后信号稳定。从这可以确定装填过程的开始时间t开始和结束时间t_结束。本实施例应用了“有效装填时间”的概念，该概念以样本进入反应室作为开始点。
也可以利用研究区域14表面上的润湿检测器结构执行反应室13中流体的检测。
在另一实施例中，由图像处理算法执行流体（弯液面）的检测以（在图像传感器52提供的图像中）检测流体弯液面的形状并得到针对每个时间点装填的反应室部分的非常精确的测量。如果干燥的珠子22位于反应室13上方，反应室被润湿的部分（如在FTIR图像中检测到的）与已经再分散且开始与目标分子反应的珠子成比例。本实施例应用了“有效装填时间”的概念，该概念以样本进入反应室作为开始点。此外，本实施例可以包括在入口处未添加试剂的情况。
如图4中所示，反应室13常常不是“径直”填充的。虽然如此，上述方法仍然提供了已经与样本流体相互作用的珠子量的精确度量。
通常，本发明的更精细实施例将因此利用用样本流体对反应室（甚至试剂盒）进行的装填过程，而不是单个值的“有效装填时间”。对流体弯液面的观测例如可以获得
-试剂的A部分在时间tA开始再分散，
-试剂的B部分在时间tB开始再分散，
-等等。可以从这种信息针对试剂的A、B、……部分确定不同的培育时间（tA-t_结束）、（tB-t_结束）、……，从其可以推导出“有效培育”。例如，这可以是试剂部分的各个培育时间的平均值（例如，利用各部分的量/面积加权）。
在传感器装置中润湿检测的以下范例中，一开始用施加于印刷抗体顶部的蔗糖层覆盖反应室的传感器表面以使抗体凸出。向这样的蔗糖层施加流体将会使其溶解。
如上所述，可以基于FTIR成像的时变润湿分布图（profile）评估试剂盒的适当润湿。可以通过如下方式分析所述润湿分布图：（1）将传感器表面的图像细分成多个区域（“研究区域”或“感兴趣区域”）并（2）检查每个区域的强度随时间的变化。通过FTIR，由摄像机对传感器表面成像。可以在整个图像之内定义几个感兴趣区域（ROI）以确定测定时间期间的信号变化。在蔗糖层溶解之后开始测定的相关部分。在蔗糖层溶解期间，指示蔗糖溶解的线在图像上移动（类似于图4中所示的流体弯液面）。
图5示出了感兴趣区域的被检测信号S在上述蔗糖溶解线通过ROI时如何变化。因此这种（中间）信号变化是检测室中存在流体的指示符。可以通过增大ROI的数量来提高这种检测的鲁棒性。
图6和7示出了这样的实施例：感兴趣区域界定于反应室边缘附近的FTIR图像上（图6中仅示出并放大了一个这样的ROI）。以25帧每秒的速率监测这种ROI内部像素的平均强度。这种平均强度是检测润湿的基础信号。
在润湿的过程期间，由于蔗糖层在室中溶解，被监测的ROI将从暗变亮。从图6可以看出这种情况，其中左侧图像在通过润湿溶解蔗糖层之前，右侧图像在溶解之后。
图7的图分别表示发生润湿（左图）和未发生润湿（右图）时几个ROI的对应平均图像值S。可以看出，蔗糖层的溶解导致信号斜变（因为是在样本室边界上选择的ROI，所以由于在溶解蔗糖层之后亮区域扩展，润湿之后信号水平显著增大）。这种斜变被用作要检测的性质以指示润湿。
除了由暗到亮过渡引起的信号之外，由于试剂盒的运动，通常还有噪声。可能通过操作员与试剂盒交互，以例如关闭试剂盒的盖，而导致试剂盒运动。通过放置ROI，使得预期的最大试剂盒运动不会导致ROI被定位在观测区域外部，可以使噪声对信号的影响最小化。可以滤除剩余噪声以防止错误检测。由于润湿本质上是一个缓慢的过程（若干秒），可以使用低通滤波器滤掉由于试剂盒更快运动导致的噪声。可以选择两阶滤波器以优化滤波器的截止，而不导致大的处理开销。
图8示出了用于处理感兴趣区域ROI 1和ROI 2两个区域的像素值的滤波器可能设计。这种滤波系统包括：
-抗混叠滤波器F1和F1'，防止后续的下采样步骤导致的混叠。
-下采样滤波器F2和F2'，减少处理开销。
-差分低通滤波器F3和F3'。应用差分来减小对漂移的敏感性，同时低通滤波器滤掉因试剂盒运动导致的噪声。
-存储最大值的元件F4和F4'。
为了进一步提高润湿检测过程的鲁棒性，可以通过对每个ROI的最大值求平均值来组合多个ROI的结果。在单元F5中进行这项操作。在单元F6中将所得值与预定义阈值比较。如果其高于阈值，单元F6的输出指示润湿，可以开始进一步的分析。
尽管上文参考特定实施例描述了本发明，但各种修改和扩展是可能的，例如：
-传感器可以是任何适当的传感器，以基于颗粒的任何性质检测传感器表面上或附近（磁性）颗粒的存在，例如，能够通过磁性方法（例如磁阻、霍尔、线圈）、光学方法（例如成像、荧光作用、化学发光、吸收、散射、渐逝场技术、表面等离子体共振、拉曼等）、声学检测（例如表面声波、体声波、悬臂、石英晶体等）、电检测（例如传导、阻抗、电流分析、氧化还原循环）、其组合等来检测。
-除了分子测定之外，还可以利用根据本发明的传感器装置检测更大的部分，例如细胞、病毒或细胞或病毒的部分、组织提取液等。
-可以进行检测而有或没有相对于传感器表面的传感器元件扫描。
-可以导出测量数据作为终点测量，以及通过动态或间歇地记录信号来推导。
-可以通过感测方法直接检测用作标记的颗粒。而且，在检测之前可以进一步处理颗粒。进一步处理的范例是增加材料或修改标记的（生物）化学或物理性质以便于检测。
-可以将该装置和方法用于若干生物化学测定类型，例如结合/分离测定、夹层结构测定、竞争测定、位移测定、酶催测定等。它尤其适于DNA检测，因为大规模复用容易成为可能，可以通过在衬底上进行喷墨印刷来形成不同寡核苷酸的斑点。
-该装置和方法适于传感器复用（即并行使用不同传感器和传感器表面）、标记复用（即并行使用不同类型的标记）和室复用（即并行使用不同的反应室）。
-可以将该装置和方法用作快速、鲁棒且易用的医疗点小样本体积生物传感器。反应室可以是用于紧凑读取器的一次性物品，包含一个或多个场发生器件和一个或多个检测器件。而且，本发明的装置、方法和系统可以用于自动化高处理量测试。在这种情况下，反应室例如是配合到自动化仪器中的井形板或小池。
最后要指出，在本申请中，术语“包括”不排除其他元件或步骤，“一”不排除多个，单个处理器或其他单元可以完成几个模块的功能。本发明体现于每个新颖特征和特征的每种组合中。此外，不应将权利要求中的附图标记理解为限制其范围。

Claims (15)

1.一种用于在具有入口（11）和反应室（13）的试剂盒（10）中检查样本（1）的方法，所述方法包括如下步骤：
a)向所述入口（11）中引入所述样本；
b)在所述入口（11）处向所述样本施加试剂（21）；
c)令所述样本流经从所述入口（11）到所述反应室（13）的通道（12）；
d)测量所述试剂盒（10）和/或所述反应室（13）的装填过程；
e)检查所述反应室（13）中的所述样本，其中，根据所确定的装填过程调整所述检查流程和/或其评估。
2.一种用于检查样本（1）的试剂盒（10），包括：
a)入口（11），其中可以引入样本；
b)反应室（13），能够在其中检查所述样本；
c)将所述入口（11）与所述反应室（13）连接的通道（12）；
d)用于试剂（21）的储存器（16），将用所述试剂培育所述样本，所述储存器位于所述入口（11）处。
3.一种用于在具有入口（11）和反应室（13）的试剂盒（10）中检查样本（1）的方法，所述方法包括如下步骤：
a)向所述入口（11）中引入所述样本；
b)在所述入口（11）处向所述样本施加试剂（21）；
c)令所述样本流经从所述入口（11）到所述反应室（13）的通道（12）；
d)检查所述反应室中的所述样本。
4.一种用于在具有入口（11）和反应室（13）的试剂盒（10）中检查样本（1）的方法，优选是根据权利要求3所述的方法，所述方法包括如下步骤：
a)向所述入口（11）中引入所述样本；
b)任选地向所述样本施加试剂（21）；
c)测量所述试剂盒（10）和/或所述反应室（13）的装填过程；
d)检查所述反应室（13）中的所述样本。
5.一种用于检查样本（1）的设备（100），包括
a)具有入口（11）和反应室（13）的试剂盒（10），其优选是根据权利要求2所述的试剂盒（10）；
b)装填检测器（52，53），其用于测量所述试剂盒（10）和/或所述反应室（13）的装填过程。
6.根据权利要求2所述的试剂盒（10）或根据权利要求1、3或4所述的方法，
其特征在于，所述试剂（21）包括特异性结合到所述样本（1）的目标成分的标记颗粒，尤其是磁性颗粒。
7.根据权利要求2所述的试剂盒（10）、根据权利要求1、3或4所述的方法或根据权利要求5所述的设备，
其特征在于，所述试剂盒（10）包括过滤器（15），所述样本（1）在从所述入口（11）到所述反应室（13）的途中通过所述过滤器。
8.根据权利要求4所述的方法或根据权利要求5所述的设备，
其特征在于，根据所确定的装填过程调整所述检查流程和/或其评估。
9.根据权利要求8所述的方法或设备，
其特征在于，所述检查流程的调整包括调整其开始和/或调整所述反应室中所述样本的致动。
10.根据权利要求4所述的方法或根据权利要求5所述的设备，
其特征在于，从所述装填过程，尤其是从测量的装填的时空过程确定用试剂对所述样本的有效培育。
11.根据权利要求8和10所述的方法或设备，
其特征在于，所述评估的调整包括根据检查结果与用所述试剂对所述样本的有效培育的相关性校正所述检查结果。
12.根据权利要求5所述的设备（100），
其特征在于，所述装填检测器包括成像装置（52）和图像处理装置（53），用于检测所述反应室（13）中的流体弯液面。
13.根据权利要求1或4所述的方法或根据权利要求5所述的设备（100），
其特征在于，在多个研究区域（13）处检测样本流体（1）的到达。
14.根据权利要求1或4所述的方法或根据权利要求5所述的设备（100），
其特征在于，处理多个研究区域（13）的图像数据。
15.根据权利要求2所述的试剂盒（10），
其特征在于，用所述试剂（21）预先装填所述储存器（16）。
CN201180033202.0A 2010-07-05 2011-07-04 带样本培育的检查系统 Expired - Fee Related CN102985823B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP10168389 2010-07-05
EP10168389.4 2010-07-05
PCT/IB2011/052945 WO2012004723A1 (en) 2010-07-05 2011-07-04 Examination system with sample incubation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102985823A true CN102985823A (zh) 2013-03-20
CN102985823B CN102985823B (zh) 2015-09-30

Family

ID=44504014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180033202.0A Expired - Fee Related CN102985823B (zh) 2010-07-05 2011-07-04 带样本培育的检查系统

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20130109030A1 (zh)
EP (1) EP2591358B1 (zh)
CN (1) CN102985823B (zh)
BR (1) BR112013000017A2 (zh)
WO (1) WO2012004723A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107206377A (zh) * 2014-12-09 2017-09-26 伯克利照明有限公司 微流体装置中测定阳性的区域的自动检测
CN108474743A (zh) * 2015-12-24 2018-08-31 皇家飞利浦有限公司 流体中的物质的光学探测

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2643836T3 (es) 2004-04-07 2017-11-24 Abbott Laboratories Cámara desechable para analizar fluidos biológicos
US7731901B2 (en) 2005-10-19 2010-06-08 Abbott Laboratories Apparatus and method for performing counts within a biologic fluid sample
US9086396B2 (en) 2008-11-28 2015-07-21 Roche Molecular Systems, Inc. System and method for the automated processing of fluids, method for determining the matching of objects
AU2010330825B2 (en) 2009-12-18 2014-03-06 Abbott Point Of Care, Inc. Biologic fluid analysis cartridge
US9873118B2 (en) 2010-12-30 2018-01-23 Abbott Point Of Care, Inc. Biologic fluid analysis cartridge with sample handling portion and analysis chamber portion
US8797527B2 (en) 2011-08-24 2014-08-05 Abbott Point Of Care, Inc. Biologic fluid sample analysis cartridge
EP3237112B1 (en) * 2015-01-30 2021-05-26 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Vented microfluidic reservoirs
CA3035577C (en) 2016-09-30 2023-08-29 Gen-Probe Incorporated Compositions on plasma-treated surfaces
CN110892247B (zh) 2017-08-17 2023-08-25 雅培医护站股份有限公司 用于执行光学和电化学测定的设备、系统和方法
KR102385554B1 (ko) * 2020-06-16 2022-04-13 재단법인 아산사회복지재단 나노구조체 기반의 표면증강라만 기판 및 그 제조 방법

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1407914A (zh) * 1999-12-06 2003-04-02 罗伊斯技术有限公司 用于结合靶分子的装置
US6736978B1 (en) * 2000-12-13 2004-05-18 Iowa State University Research Foundation, Inc. Method and apparatus for magnetoresistive monitoring of analytes in flow streams
US20070144976A1 (en) * 2004-12-24 2007-06-28 Matthias Franzreb Micro-reactor
WO2009060357A1 (en) * 2007-11-05 2009-05-14 Koninklijke Philips Electronics N. V. Biosensor cartridge
WO2009066236A1 (en) * 2007-11-22 2009-05-28 Koninklijke Philips Electronics N.V. Methods and systems for coupling a bio-cartridge with an optical reader
CN100533128C (zh) * 2002-10-28 2009-08-26 爱科来株式会社 试料分析时的校正方法、分析装置以及分析用具
WO2009115951A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-24 Koninklijke Philips Electronics N.V. Cartridge for assays with magnetic particles

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5856174A (en) * 1995-06-29 1999-01-05 Affymetrix, Inc. Integrated nucleic acid diagnostic device
EP1603674B1 (en) * 2003-02-05 2016-01-06 Iquum, Inc. Sample processing
EP1697755A1 (en) 2003-07-30 2006-09-06 Koninklijke Philips Electronics N.V. On-chip magnetic sensor device with suppressed cross-talk
WO2005010542A2 (en) 2003-07-30 2005-02-03 Koninklijke Philips Electronics N.V. On-chip magnetic particle sensor with improved snr
GB2436616A (en) * 2006-03-29 2007-10-03 Inverness Medical Switzerland Assay device and method
GB0617035D0 (en) * 2006-08-30 2006-10-11 Inverness Medical Switzerland Fluidic indicator device
JP5004577B2 (ja) * 2006-12-27 2012-08-22 ローム株式会社 液体試薬内蔵型マイクロチップにおける液体試薬の液量および／または品質が正常であるかを判定する方法、および液体試薬内蔵型マイクロチップ
WO2008142492A1 (en) 2007-05-22 2008-11-27 Koninklijke Philips Electronics N.V. Method for detecting label particles
WO2008155716A1 (en) 2007-06-21 2008-12-24 Koninklijke Philips Electronics N. V. Microelectronic sensor device for detecting label particles
WO2009001276A1 (en) 2007-06-25 2008-12-31 Koninklijke Philips Electronics N.V. Microelectronic sensor device for detecting label particles
EP2017619A1 (en) * 2007-07-20 2009-01-21 Koninklijke Philips Electronics N.V. Magnetic sensor device
EP2220478A2 (en) * 2007-09-24 2010-08-25 Koninklijke Philips Electronics N.V. Microelectronic sensor device with an array of detection cells
CN101965225B (zh) * 2008-03-11 2014-04-30 皇家飞利浦电子股份有限公司 用于过滤流体的过滤装置
CN102362183B (zh) * 2009-03-23 2014-11-05 皇家飞利浦电子股份有限公司 生物样本中磁性颗粒的操控
WO2011027262A1 (en) * 2009-09-01 2011-03-10 Koninklijke Philips Electronics N.V. Fluid filtering device
GB2479139A (en) * 2010-03-29 2011-10-05 Biosurfit Sa A liquid distribution and metering device

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1407914A (zh) * 1999-12-06 2003-04-02 罗伊斯技术有限公司 用于结合靶分子的装置
US6736978B1 (en) * 2000-12-13 2004-05-18 Iowa State University Research Foundation, Inc. Method and apparatus for magnetoresistive monitoring of analytes in flow streams
CN100533128C (zh) * 2002-10-28 2009-08-26 爱科来株式会社 试料分析时的校正方法、分析装置以及分析用具
US20070144976A1 (en) * 2004-12-24 2007-06-28 Matthias Franzreb Micro-reactor
WO2009060357A1 (en) * 2007-11-05 2009-05-14 Koninklijke Philips Electronics N. V. Biosensor cartridge
WO2009066236A1 (en) * 2007-11-22 2009-05-28 Koninklijke Philips Electronics N.V. Methods and systems for coupling a bio-cartridge with an optical reader
WO2009115951A1 (en) * 2008-03-17 2009-09-24 Koninklijke Philips Electronics N.V. Cartridge for assays with magnetic particles

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107206377A (zh) * 2014-12-09 2017-09-26 伯克利照明有限公司 微流体装置中测定阳性的区域的自动检测
CN107206377B (zh) * 2014-12-09 2020-02-11 伯克利之光生命科技公司 微流体装置中测定阳性的区域的自动检测
CN108474743A (zh) * 2015-12-24 2018-08-31 皇家飞利浦有限公司 流体中的物质的光学探测

Also Published As

Publication number Publication date
EP2591358A1 (en) 2013-05-15
EP2591358B1 (en) 2016-09-07
WO2012004723A1 (en) 2012-01-12
US20130109030A1 (en) 2013-05-02
CN102985823B (zh) 2015-09-30
BR112013000017A2 (pt) 2016-05-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102985823B (zh) 带样本培育的检查系统
CN102713578B (zh) 液体样品中的分析物的检测方法
RU2476858C2 (ru) Устройство датчика для целевых частиц в пробе
JP6625519B2 (ja) アッセイシステムおよびカートリッジデバイス
EP2171431B1 (en) Microelectronic sensor device for optical examinations on a wetted surface
CN110799830B (zh) 正交多生物感测和成像系统
CN103502795B (zh) 选择性功能化的纳米流体生物传感器中的生物分子的快速定量及其方法
US9222870B2 (en) Method and device for multi-parameter imaging within a single fluorescent channel
CN103229056A (zh) 用于磁致动粒子的传感器装置
WO2008142492A1 (en) Method for detecting label particles
JP4685691B2 (ja) 検査チップ及び検査チップシステム
CN108956994B (zh) 用于测量生物学样本的生理特性的方法和装置
CN102713571B (zh) 具有成像光学元件的传感器设备
CN101198866A (zh) 化验装置
US20240159672A1 (en) System and Method For Analyzing Biological Material
US9612239B2 (en) Substance determining apparatus
JP2019533816A (ja) 生体分子標的の光検知システム及び方法
EP2542900B1 (en) Apparatus and method for detecting and measuring biomolecular interactions
US20180372732A1 (en) Method for Detecting Particles in a Sample, Detection Device, and Microfluidic System for Examining a Sample
CN107735685B (zh) 传感器设备
JP2023539473A (ja) 粒子運動を用いたバイオセンサ
JP5706300B2 (ja) 測定チップ、センサシステムおよび測定方法
US20240210317A1 (en) Devices for biological analysis
AU2021399749A1 (en) System and method for signal calibration in a sensor system
Seger et al. Single cell sensing and manipulation by scanning nanopore microscopy

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150930

Termination date: 20170704