CN102905720A - 催产素样分子的新用途及相关的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂的衍生物，该衍生物用于治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病，本发明还涉及相关的方法和药物制剂。特别地，本发明涉及一种用于治疗代谢综合征的选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂的衍生物。

Description

催产素样分子的新用途及相关的方法
技术领域
本发明涉及一种物质及其组合物在治疗肥胖和/或胰岛素抵抗方面的用途。特别地，本发明涉及一种物质及其组合物在治疗代谢综合征方面的用途。
背景技术
根据2005年世界卫生组织（WHO）在全球范围内的估计，成年人中至少有4亿人表现出体重超标，且他们中的大多数患有与超重相关的疾病。WHO估计到2015年将有23亿成年人超重并且有7亿成年人为过度肥胖。肥胖症与增加的游离脂肪酸和甘油三酯的循环血浆水平有关，这会在如骨骼肌的周缘组织中产生胰岛素抵抗。与健康个体相比，在肥胖症患者中，脂肪组织是增大的并且表现出激素例如瘦素（leptin）和脂连素（adiponectin）的脂肪因子分泌类型的改变，而瘦素和脂连素在控制体重、胰岛素敏感度、炎症、血管发生和脂质代谢方面发挥着作用。
已知的是，体重超标特别是肥胖病与降低的胰岛素敏感性直接相关，胰岛素敏感性通常通过进一步刺激胰脏胰岛素分泌防止血糖水平的增长来进行补偿。因此，已知增长的过剩脂肪，特别是在腹部区域增长的过剩脂肪为能够发展成为2型糖尿病的胰岛素抵抗发展的重要危险因子。增长的外周胰岛素抵抗定义为：在葡萄糖摄入和抑制肝脏葡萄糖产生方面，组织对胰岛素的有效反应减少，首先导致β细胞开始试图忽略增长的胰岛素需求并导致其功能作用的改变以及数量的减少，引起高血糖症的功能性障碍并表现为2型糖尿病。
进一步的，肥胖症是代谢综合征主要组成成员之一，特征为一组包括躯干性肥胖症并伴有选自升高的血清甘油三酯、低水平的高密度胆固醇（HDL）、升高的血压以及由胰岛素抵抗引起的升高的空腹血糖中的至少两个其他的病症的综合征。死于心脏病发作或中风（stroke）的代谢综合征的患者是没有综合征的人群的约两倍，患有心脏病发作或中风的代谢综合征患者是未患综合征的人群的约三倍。另外，患有代谢综合征的人具有五倍的高风险发展为2型糖尿病。60%以上的代谢综合征患者将发展成为2型糖尿病患者，50%的将发展为心血管疾病患者，35%以上将患有急性的心肌梗塞，并且接近20%的将患中风。预计世界上20-25%的成年人患有代谢综合征。
进一步地，肥胖症是发展成为例如某些癌症的进一步紊乱的重要危险因子。
因此，对开发新的应对肥胖症和/或胰岛素抵抗的治疗方法有巨大的健康和经济需求。由于目前没有对这种多要素的综合征的有效治疗方法并且这种综合征为进一步的疾病如严重的心血管疾病和糖尿病并发症的根源，因此同样有开发代谢综合征治疗方法的需求。
催产素（OT）是垂体后叶激素九肽（Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly(SEQ ID NO:1)），在中央和外周形成并发挥多种生理作用。在中枢神经系统（CNS）内，OT基因在下丘脑室旁核（PVN）和视上核(SON)的神经元中表达。这些核中的大细胞OT神经元投射于神经垂体并且为系统性释放OT的主要来源，然而PVN的小细胞OT神经元为中枢投射（project centrally）。OT在若干器官中进行外周合成，例如卵巢，睾丸，胸腺，肾脏和心脏。截至目前为止，已克隆了单独的OT受体（OTR），其在包括脂肪组织的多种组织中表达。与其产生和结合位点的广泛的分布一致，OT被证实参与多种中枢和末梢过程（Gimpl等，2001,Pysiol.Rev.,81,629-683）。OT目前被用于刺激子宫收缩而诱导分娩，控制胎盘娩出后的产后出血并催乳(
Figure BDA00002417854000021
Parke-Davis,Morris Plains,N.J.和
Figure BDA00002417854000022
Novatis Pharmaceuticals,EastHanover,N.J.)。OT的使用被报道同样能够增加雌性的性反应并且利于治疗雄性性功能障碍（Pfaus,2009,J.Sex Med.Jun.,6，1506-33）。
发明内容
本发明涉及意料不到的发现用OT对高脂肪饮食导致的肥胖症模型进行给药会导致剂量依赖性的体重增加的降低，由于脂肪代谢的改善，特别是脂肪组织中脂解作用和脂肪酸β氧化的增加，并伴随葡萄糖耐受性和胰岛素抵抗的改善，而这些改变不依赖于食物摄入。
本发明的第一方面提供了一种衍生物，该衍生物选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂（oxytocin agonist），所述衍生物用于抑制或治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病。
本发明的第二方面涉及一种衍生物在制备用于治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗疾病的药物制剂中的用途，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂。
本发明的第三方面涉及一种治疗或改善选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病或紊乱的方法，所述方法包括用治疗有效量的衍生物对有需要的受试者进行给药，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂或它们的药物制剂。
根据本发明的第四方面涉及一种药物制剂，该药物制剂含有选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂的衍生物与至少一种有利于治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病或紊乱的辅助药剂（co-agent）的组合，以及至少一种药学上可接受的载体。
附图说明
图1显示了如实施例1所述的在高脂肪饮食诱导的肥胖症的大鼠模型中进行中枢OT给药对体重增加的作用。A：生理盐水输注的对照组(●)和OT输注大鼠（◇）14天治疗期的累积体重增加（5-7周高脂肪饮食，45%）。B：体重增加差值以及C：生理盐水输注的对照组(黑色柱)和OT输注大鼠（1.6nmol/d）（白色柱）14天治疗期的累积食物摄入量。D：食物效能（14天实验期中体重增加与累积食物摄入量的比值）。
图2显示了如实施例1所述的在高脂肪饮食诱导的肥胖症的大鼠模型中进行中枢OT给药对脂质代谢的作用。A：生理盐水输注的对照组(黑色柱)和OT输注大鼠（1.6nmol/d）（白色柱）的附睾白脂肪组织（eWAT）中参与甘油三脂摄入、脂肪生成和脂解作用的酶的mRNA表达。B：生理盐水输注对照组(黑色柱)和OT输注大鼠（1.6nmol/d）（白色柱）的附睾白脂肪组织(eWAT)中参与脂肪酸β氧化的PPAR-α和酶的mRNA表达。
图3显示了如实施例1所述的在高脂肪饮食诱导的肥胖症的大鼠模型中进行中枢OT给药对胰岛素抵抗的作用。A：葡萄糖差值以及B：处理前（▲）（3周高脂肪饮食，45%；n=16只大鼠），处理结束（7周高脂肪饮食，45%；每个处理的n=6），生理盐水输注的对照组(●)和OT输注大鼠（◇）（1.6nmol/d）在腹膜内GTT（1.5g/kg）过程中测量的胰岛素水平差值。C：HFD诱导的过度肥胖生理盐水输注的对照组(黑色柱)和OT输注大鼠（白色柱）（14天的脑室内（i.c.v.）OT输注（1.6nmol/d））的正常血糖-高胰岛素钳夹（euglycemic hyperinsulinemic clamp）过程中葡萄糖输注率（GIR）。D&E：HFD诱导的过度肥胖生理盐水输注的对照组(黑色柱)和OT输注大鼠（白色柱）在不同类型的肌肉（D）：红四头肌（QR）、白四头肌（QW）、红腓肠肌（GR）、白腓肠肌（GW）、比目鱼肌（S）、胫骨肌（Tib）（14天i.c.v.OT输注（1.6nmol/d））中正常血糖-高胰岛素钳夹过程测量的胰岛素刺激的葡萄糖利用指数，以及在不同类型的脂肪组织库（E）：腹股沟WAT（iWAT）和附睾WAT（eWAT）中正常血糖-高胰岛素钳夹过程测量的胰岛素刺激的葡萄糖利用指数。
图1-3：数值为每组6-7只动物的平均值±SEM。与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01。
图4显示了如实施例2所述的体外脂肪细胞中OT对脂质代谢的直接作用。A：用生理盐水(黑色柱)或5μM OT(白色柱)温育24小时后，分化的3T3-L1脂肪细胞中脂质代谢相关的酶的mRNA表达(不同系列培养的3T3L1脂肪细胞进行3次独立的实验)B：用生理盐水(黑色柱)或5μM OT(白色柱)温育24小时后，分化的3T 3L1脂肪细胞中的OEA含量(不同系列培养的3T3L1脂肪细胞进行2次独立的实验)。
图5显示了如实施例3所描述的对高脂肪饮食诱导的肥胖症大鼠模型进行外周OT给药的影响。A：生理盐水输注对照组(●)、OT输注大鼠(◇)(50nmol/d)和(▲)成对饲养（pair-fed）(PF)对照组14天治疗期的累积体重增加(5-7周高脂肪饮食，45%)。B：生理盐水输注对照组(黑色柱)，OT-输注大鼠(50nmol/d，白色柱)和PF对照组(灰色柱)在14天处理期中的累积食物摄入量。C：生理盐水输注对照组(黑色柱)，OT输注大鼠(50nmol/d，白色柱)和PF对照组(灰色柱)在10天（D10）处理期中身体成分参数（脂肪和除去脂肪的身体质量（lean body masses））。D：在10天处理期开始(D0)和结束(D10)之间的身体成分参数的差值。E：生理盐水输注对照组(黑色柱)、OT-输注大鼠(50nmol/d，白色柱)和PF对照组(灰色柱)中不同脂肪垫重量(腹股沟WAT、iWAT、附睾WAT、eWAT)与体重的比值。数值为每组7-8只动物的平均值±SEM。与对照组相比，*P<0.05。F：生理盐水输注对照组、OT输注大鼠(50nmol/d)和PF对照组新分离的附睾(eWAT)和肠系膜(mWAT)脂肪垫的照片。
图6显示了进行外周OT给药对如实施例4所描述的高脂肪饮食（HFD）诱导的胰岛素抵抗的作用。A：生理盐水输注对照组(黑色柱)、OT输注大鼠(50nmol/天)(白色柱)和成对饲养(PF)对照组(灰色柱)中胰岛素抵抗的激素模型分析(HOMA-IR)。B：在正常血糖-高胰岛素钳夹过程中，HFD诱导的过度肥胖的生理盐水输注对照组(黑色柱)、OT输注大鼠(50nmol/天)(白色柱)和成对饲养(PF)对照组(灰色柱)的葡萄糖输注率(GIR)。数值为每组7-9只动物的平均值±SEM。与对照组相比，*P<0.05。
图7显示了进行(A)中枢和(B)外周OT给药对如实施例1和5所描述的高脂肪饮食（HFD）诱导的肥胖症大鼠模型的血浆甘油水平的作用。A：生理盐水输注对照组(黑色柱)和OT输注大鼠(1.6nmol/天)(白色柱)的血浆甘油水平。B：生理盐水输注对照组(黑色柱)、OT输注大鼠(50nmol/天)(白色柱)和PF对照组(灰色柱)的血浆甘油水平。数值为每组6-8只动物的平均值±SEM。
图8显示了进行外周卡贝催产素给药对如实施例6所描述的高脂肪饮食（HFD）诱导的肥胖症的作用。A：生理盐水输注对照组(●)、卡贝催产素输注大鼠(5nmol/d)(Δ)和相关的成对饲养(PF)对照组(▲)、卡贝催产素输注大鼠(50nmol/d)(◇)和相关的PF对照组(◆)的14天治疗期的累积体重增加(5-7周高脂肪饮食，45%)。B：生理盐水输注对照组(黑色柱)、卡贝催产素输注大鼠(5nmol/d，白色柱)以及相关的PF对照组(灰色柱)、卡贝催产素输注大鼠(50nmol/d，有斜线的白色柱)和相关的PF对照组(有斜线的灰色柱)的14天实验期中累积食物摄入量。C：生理盐水输注对照组(黑色柱)、卡贝催产素输注大鼠(5nmol/d，白色柱)及相关的PF对照组(灰色柱)、卡贝催产素输注大鼠(50nmol/d，有斜线的白色柱)以及相关PF对照组(有斜线的灰色柱)的10天处理期的身体脂肪比例的变化。数值为每组7-8只动物的平均值±SEM。与对照组相比，*P<0.05。
图9表示了用于实施例1所描述的qPCR的引物序列。
具体实施方式
本文涉及的术语“催产素衍生物”包括天然的或合成的，治疗性的或预防性的，肽片段，肽的类似物，以及化学修饰的衍生物或与催产素的亲本分子表现出相似的活性或基本上保持了催产素的亲本分子的活性的活性肽的盐。例如，催产素衍生物包括催产素或化学修饰的催产素肽类似物，例如，通过羧基端的酰胺化作用（-NH2），在肽序列中D氨基酸的使用，小非肽基部分的整合，以及氨基酸自身的修饰（例如侧链R-基团的烷基化作用或酯化作用）（模拟肽(peptidomimetics)）。特别地，术语催产素衍生物包括“催产素类似物”，催产素类似物表示多肽与天然的人催产素基本上同源，但由于一个或更多的缺失、插入或置换，催产素类似物具有不同于天然的人催产素的氨基酸序列。基本上同源意指与如上所述的天然氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性的变体氨基酸序列。两个氨基酸序列或两个核酸序列的百分比一致性可以通过目测和/或数学计算确定，或更简单的通过利用已知的用于序列比对的计算机程序比对序列信息，例如Clustal package version 1.83。催产素类似物可以含有至少有一个保守取代氨基酸的序列，表示给定氨基酸残基被有相似生化特征的残基所取代。催产素衍生物可以包括，但并不限于WO 2008/042452或EP 1928484中所描述的衍生物，将这些内容通过整体引用的方式合并入本文，例如4-苏氨酸-1-羟基脱氨催产素（4-threonine-1-hydroxydeaminooxytocin）、4-丝氨酸,8-异亮氨酸-催产素、9-脱氨催产素、7-D-脯氨酸-催产素及其脱氨类似物、(2,4-二异亮氨酸)-催产素、脱氨催产素类似物、长效催产素类似物、1-脱氨-1-单氧甲酰基-E12-Tyr(OMe)]-OT(dCOMOT)（1-deamino-1-monocarba-E12-Tyr(OMe)]-OT(dCOMOT)）、卡贝催产素（carbetocin）（SEQ ID NO:2:丁酰-Tyr(Me)-lle-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2）、4-苏氨酸,7-甘氨酸-催产素（TG-OT）、1-丁酸-2-(O-甲基-L-酪氨酸)-1-氧甲酰基催产素（1-butanoicacid-2-(O-methyl-L-tyrosine)-l-carbaoxytocin）、Ile-海螺紧张素（Ile-conopressin）、阿托西班（atosiban）、加压素（oxypressin）、脱氨-6-氧甲酰基-催产素（dC60）、脱氨加压素（desmopressin），以及其中残基1和6之间的二硫键被硫醚取代的1-脱氨催产素。
术语“催产素激动剂”包括能够与催产素受体（OTR）相互作用的物质和/或显著的通过与OTR相互作用模拟催产素生物活性的物质。例如，催产素激动剂包括WO 2007/050353、WO 2005/023812、WO 2004072083和WO03/016316中描述的物质，将这些内容通过整体引用的方式合并入本文。催产素激动剂包括肽、模拟肽和小分子。特别地，它们包括WAY-267、464(4-(3,5-二羟基苯甲基)-N-(2-甲基-4-[(1-甲基-4,10-二氢吡唑啉酮[3,4-b][1,5]苯并二氮杂卓-5(1H)-基)羰基]苯甲基)哌嗪-1-羧胺基)（464(4-(3,5-dihydroxybenzyl)-N-(2-methyl-4-[(1-methyl-4,10-dihydropyrazolo[3,4-b][1,5]benzodiazepin-5(1H)-yl)carbonyl]benzyl)piperazine-1-carboxamide)）、代可莫顿（decomoton）和4,-(3,5-二羟基-苯甲基)-哌嗪-1-羧酸2-甲基-4-(3-甲基-4,10-二氢-3H-2,3,4,9-四-氮杂-苯并[f]甘菊环-9-羰基)-苯甲胺基（4,-(3,5-Dihydroxy-benzyl)-piperazine-1-carboxylic acid2-methyl-4-(3-methyl-4,10-dihydro-3H-2,3,4,9-tetra-aza-benzo[f]azulene-9-carbonyl)-benzylamide）。
术语“模拟肽”定义为含有非肽结构元件的肽的类似物，这种肽能够模拟或干扰（agonizing）天然亲本肽的生物学活性。
本发明背景下的催产素衍生物、催产素类似物或催产素激动剂的其他有效形式包括其他药学上可接受的所述化合物的活性盐，以及活性同分异构体、对映异构体、同质多象变体、溶剂化物、水合物和/或所述化合物的药物前体。
术语“药学上可接受的”指的是含有并非为生物学上或并非其他方面不适宜的物质的载体。
术语“载体”指的是存在于药物制剂中的并非活性剂的任何成分，并因此包括稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、填料、着色剂、湿润或乳化剂、pH缓冲剂、防腐剂等。
术语“肥胖症”包括含有大量体脂（body fat）的疾病或紊乱。典型地，肥胖的人具有约30kg/m2以上的人体质量指数（body mass index）(BMI)(个体体重除以他或她的身高的平方)。已知肥胖症伴随有多种并发症高发的风险，例如2型糖尿病、高血压、心血管疾病和关节炎。
术语“胰岛素抵抗”指的是升高的血糖水平（空腹血糖水平为110-126mg/dL；在服用75g葡萄糖2小时后血糖水平高于140mg/dL）。
术语“代谢综合征”指的是一组包括中心性肥胖症（通过测量腰围的腹部过度肥胖，典型的为女性等于或高于80cm和男性等于或高于90cm）加上至少两个选自于紊乱脂肪血症（特别是升高的血清甘油三酯，典型的等于或高于150mg/dL以及低水平的高密度脂蛋白（HDL），典型的男性低于40mg/dL和女性低于50mg/dL）、升高的血压（BP）（典型的心脏收缩BP等于或高于130mmHg且心脏舒张BP等于或高于85mmHg）或胰岛素抵抗的其他病症的综合征。
本文所使用的“治疗”和“处理（treating）”等通常指获得需要的药理上或生理上的作用。所述作用可以以预防或局部预防疾病、症状或其病症的方式预防和/或可以以局部或完全治愈疾病、病症、症状或由疾病引起的不良反应的方式治疗。本文所用的术语“治疗”涵盖任何哺乳动物特别是人类的治疗，并且包括：（a）预防疾病在受试者中的发生，受试者可能易患疾病但还没有诊断患有该疾病的对象；（b）抑制疾病，即阻碍其发展；或缓解疾病，即疾病和/或其症状或病症的复原如改善或修复损伤。
特别地，肥胖症的治疗包括体重的标准化或改善过重的体重且特别是中心性脂肪沉积（central fat deposit）。肥胖症的治疗同样包括发生与以上所述的肥胖症相关的并发症风险的降低。
特别地，胰岛素抵抗的治疗包括标准化或改善对外源性或内源性胰岛素的正常生理响应的损伤，特别是通过控制血糖水平或胰岛素生成。胰岛素抵抗的治疗包括预防或减缓综合征转向2型糖尿病的进程。
特别地，代谢综合征的治疗包括标准化或改善综合征中的至少一个部分，而不依赖于体重降低。在特别的方面，代谢综合征的治疗包括预防2型糖尿病的发展。
本文使用的术语“受试者”指的是哺乳动物。例如，本发明关注的哺乳动物包括人、灵长类、驯养动物例如牛、羊、猪、马、实验室啮齿动物等。
根据本发明，术语治疗的“有效性”可以基于疾病对根据本发明的使用的应答过程中的改变进行测量。例如，根据本发明的治疗的有效性可以通过中心性脂肪（例如，腰围减小，脂肪量减少）的减少或胰岛素抵抗的降低来进行测量，胰岛素抵抗通过口服葡萄糖耐受试验（OGTT）、空腹血糖测试（FPG）或正常血糖高胰岛素钳夹方法而获得。另一个例子是，肥胖症治疗的有效性包括血浆甘油三酯的减少等。
制备方法
催产素、催产素衍生物、催产素激动剂以及催产素类似物均可商购获得(例如NeoMPS，斯特拉斯堡，法国）或如US 2,938,891和US 3,076,797中所描述的可以被本领域技术人员很容易地制备并根据已知的方法测试生物活性。本文描述和/或关注的全部肽催产素衍生物或类似物可以通过利用自动化的或手工固相合成的技术的化学合成方法或利用分子重组技术进行制备，所用技术为本领域所公知。
组合物
本发明提供了组合物形式的药剂或治疗剂以及治疗患者的方法，所述患者优选为哺乳动物患者，最优选为患有医学上的疾病，特别是患有选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病的人类患者。
在特定的实施方式中，本发明提供了组合物形式的药剂或治疗剂以及治疗患者的方法，所述患者优选为哺乳动物患者，最优选为患有医学上疾病的人类患者，其中所述疾病为代谢综合征。
在特定的实施方式中，本发明提供了组合物形式的药剂或治疗剂以及治疗患者的方法，所述患者优选为哺乳动物患者，最优选为患有医学上疾病的人类患者，其中所述疾病为2型糖尿病。
在特定的实施方式中，本发明提供了根据本发明的作为药物使用的药物制剂。
本发明的药物成分可以含有选自根据本发明描述的任何形式的催产素、催产素衍生物以及催产素激动剂中的至少一种物质。本发明的组合物可以进一步包括一种或多种药学上可接受的添加成分例如明矾、稳定剂、抗微生物剂、缓冲剂、着色剂、调味剂、佐剂等。
根据本发明的组合物与常规使用的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂一起添加到药物组合物的形式中并且可以作为固体，例如片剂或填充胶囊，或液体如药水，悬浮液，药膏，乳剂，酏剂，或填充有它们的胶囊、膜片（films）或凝胶（gels），所有均用于口服，或以无菌可注射药水形式通过注射或持续静脉输注用于肠胃外途径（包括皮下）。如果需要，可以容易地制备缓释组合物，例如缓释凝胶、膜片以及皮肤贴片（transdermal patches）。所述组合物也可以配制成干燥产品，用于在使用前与水或其他合适的载体重新组合。
本发明液体形式的组合物包括，但并不限于水性或油性的悬浮液、药水、乳剂、糖浆剂以及酏剂，可以用于点滴（drops），用于注射，在鼻腔中喷射或浸透。
可注射的组合物典型的基于可注射的无菌盐水或磷酸盐缓冲液或其他本领域已知的可注射载体。这种药物组合物及其单位剂型（unit dosage forms）可以包括常规比例的成分，有或没有额外的活性组分或成分，并且这种单位剂型可以含有与预期使用的每日剂量范围相当的任何适当有效量的活性成分。根据特定的实施方式，根据本发明的组合物为可注射的或可吸入的（inhalable）。
这种液体制剂可以包括添加物，所述添加物包括但不限于，悬浮剂、乳化剂、非水性赋形剂以及防腐剂。悬浮剂包括但不限于，山梨醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶以及氢化可食用脂肪。乳化剂包括但不限于，卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯以及阿拉伯胶（acacia）。防腐剂包括但不限于，甲基或对羟基苯甲酸丙酯（propyl p-hydroxybenzoate）以及山梨酸。分散剂或湿润剂包括但不限于聚（乙烯乙二醇）、甘油、牛血清白蛋白、
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其他的材料以及剂型处理技术等如Remington’s PharmaceuticalSciences，第21版，2005,University of the Sciences in Philadelphia,LippincottWilliams&Wilkins第5部分中所描述，将这些内容通过引用的方式合并入本文。
本发明的组合物也可以配制为缓释制剂（depot preparation），可以通过植入或肌肉注射的方式进行给药。所述组合物可以与适当的多聚体或疏水材料（例如在可接受的油中的乳剂）、离子交换树脂或微溶的衍生物进行配制（例如微溶的盐）。
本发明的固体组合物可以以普通方式的片剂或锭剂的形式进行配制。例如，用于口服给药的片剂和胶囊可以含有常规的赋形剂，所述赋形剂包括但不限于粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂以及湿润剂。粘合剂包括但不限于，糖浆剂、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶（tragacanth）、淀粉和聚乙烯吡咯烷酮的胶浆剂（mucilage）。填充剂包括但不限于乳糖、糖、微晶纤维素、玉米淀粉、磷酸钙和山梨醇。润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、聚乙二醇和二氧化硅。崩解剂包括但不限于，马铃薯淀粉和淀粉乙醇酸钠。湿润剂包括但不限于十二烷基硫酸钠。片剂可以根据本领域已知的方法进行包覆。
本发明的组合物也可以配制为鼻腔给药，其形式可以包括但不限于粉剂或液体鼻腔喷雾、悬浮液、滴鼻液、凝胶、膜片或药膏，通过管道或导管，通过输注器，通过塞尾（packtail），通过脱脂棉（小的扁平吸水垫），通过鼻腔或通过粘膜下层输注。鼻腔给药可以按照EP 1928484或WO 2008/042452中描述的方法进行，例如通过利用装置，所述装置包括但不限于单位计量容器、泵型喷雾（pump sprays）、滴管、挤压瓶、无空气和无防腐剂喷雾、喷雾器、定量雾化吸入器和加压定量雾化吸入器。鼻腔给药装置为本领域所公知并且有一些可商购获得。气雾喷雾剂可以通过利用增压组件或喷雾器及合适的推进剂（propellant）进行分配给药，所述推进剂包括但不限于二氟二氯甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、烃、压缩空气、氮气或二氧化碳。气雾剂系统需要对药物组合物为惰性的推进剂。在加压气雾剂的情况下，可以通过设置阀门以给药精确计量而控制药剂单元。粉末状鼻腔喷雾可以配制成通过鼻吸入装置（nasal insufflator device）（用于将气体、粉末或蒸汽吹入体腔的装置）或加压气雾罐（pressurized aerosol canister）而给药的微球体的形式。
本发明的化合物也可以以缓释形式或通过持续释放给药系统进行给药（WO 2004178147）。对代表性的持续释放材料的描述也可以在并入材料Remington的Pharmaceutical Sciences中找到。
给药方式
本发明的组合物可以以任何形式进行给药，包括静脉注射、口服途径、粘膜给药（施用于鼻粘膜表面、鼻道、鼻腔；施用于口腔粘膜表面包括齿龈、口腔底部、面颊、唇、舌、牙齿；并且施用于眼或眼周粘膜表面包括结膜、泪腺、鼻泪管、上眼睑或下眼睑粘膜以及眼）、鼻内投药（例如通过喷雾、滴剂、粉剂、凝胶、膜片、吸入剂或其他方式）、皮肤或经皮肤给药（例如，通过皮肤给药包括面、颈、头皮、身体或其组合）例如通过真皮内或皮下注射或其组合。
组合
根据本发明，催产素、催产素衍生物和催产素激动剂及其药物制剂可以单独进行给药或与有利于肥胖症和/或胰岛素抵抗治疗的辅助药剂组合使用，例如用于治疗、稳定、预防和/或延迟肥胖症和/或胰岛素抵抗的物质，例如辅助药剂选自De Fronzo,2010,Am.J.Med.3(1),S38-48中所描述的双胍类、格列酮类（glitazones）、磺酰脲类、DPPIV抑制剂或GLP-1激动剂。
本发明围绕在同时或按顺序与有利于治疗肥胖症和/或胰岛素抵抗（例如，多药物服药法）的其他治疗方案或辅助药剂进行给药之前，用选自催产素、催产素衍生物以及催产素激动剂的衍生物及其药物制剂以治疗上有效的剂量对个体进行给药。与所述辅助药剂同时给药的选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂的衍生物或其药物制剂可以以相同或不同的组合物进行给药并采用相同或不同的给药途径进行给药。
根据一个实施方式，提供了一种药物制剂，所述药物制剂含有选自催产素、催产素衍生物以及催产素激动剂的衍生物，结合有至少一种有利于治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病或紊乱的辅助药剂，以及至少一种药学上可接受的载体。
根据另一个实施方式，提供了根据本发明的药物制剂，其中所述衍生物为催产素。
以单倍或多倍剂量对个体的给药量会根据多种因素而改变，包括药物代谢动力学性能、患者状态以及特征（性别、年龄、体重、健康状况、体型（size））、症状的程度、同时进行的治疗、治疗的频率及希望达到的效果。
在特定的实施方式中，催产素、催产素衍生物或催产素激动剂的有效量取决于用于给药的形式及组合物。典型地，经粘膜或经皮肤进行给药的催产素、催产素衍生物或催产素激动剂的有效量通常低于通过其他途径给药时使用的药剂剂量（例如，口服、静脉注射、肌肉注射或皮下注射）。
在特定的实施方式中，用催产素、催产素衍生物或催产素激动剂进行给药使用的剂量包括但不限于在约10至约1500μg剂量范围内的有效量，典型的从约20至约1000μg，例如从约25至约750μg。
在其他特定的实施方式中，用催产素、催产素衍生物或催产素激动剂进行给药使用的剂量包括EP 1928484或WO 2008/042452中所描述的经鼻给药的剂量。
患者
在实施方式中，根据本发明的患者为患有选自肥胖症和胰岛素抵抗疾病的患者。
在进一步的实施方式中，根据本发明的患者患有肥胖症。
在另一个进一步的实施方式中，根据本发明的患者患有胰岛素抵抗。
在另一个进一步的实施方式中，患者患有代谢综合征。
在另一个进一步的实施方式中，患者患有2型糖尿病。
根据本发明的应用
在本发明的另一个实施方式提供了一种衍生物在制备用于抑制或治疗肥胖症和/或胰岛素抵抗的药物组合物中的用途，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物以及催产素激动剂。
在进一步的实施方式中，提供了一种衍生物在制备用于预防或治疗代谢综合征的药物组合物中的用途，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物以及催产素激动剂。
在进一步的实施方式中，提供了一种衍生物在制备用于预防或治疗2型糖尿病的药物组合物中的用途，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物以及催产素激动剂。
在另一个实施方式中，本发明提供了一种预防和/或治疗疾病的方法，该方法包括用治疗有效量的衍生物对有需要的哺乳动物进行给药，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物以及催产素激动剂，其中，所述疾病选自肥胖症和/或胰岛素抵抗。
在另一个实施方式中，提供了根据本发明的化合物、用途或方法，其中所述疾病为肥胖症。
在另一个实施方式中，提供了根据本发明的化合物、用途或方法，其中所述疾病为胰岛素抵抗。
在另一个实施方式中，提供了根据本发明的化合物、用途或方法，其中所述衍生物为催产素。
在另一个实施方式中，提供了根据本发明的化合物、用途或方法，其中所述衍生物为催产素类似物。
在另一个实施方式中，提供了根据本发明的化合物、用途或方法，其中所述催产素类似物为卡贝催产素。
在另一个实施方式中，提供了根据本发明的化合物、用途或方法，其中所述衍生物为催产素激动剂。
根据本发明的化合物和组合物可以用于抑制或治疗肥胖症和/或胰岛素抵抗。在特定的实施方式中，根据本发明的化合物和组合物可以用于抑制或治疗代谢综合征，在另一个特定的实施方式中，根据本发明的化合物和组合物可以用于抑制或预防或治疗2型糖尿病。
以下描述的实施例将以更加详细的方式并参考附图中代表的实施方式来说明本发明。
实施例
后续缩写分别定义如下：
Acadm (介质链酰基辅酶a脱氢酶（medium chain acyl-CoAdehydrogenase）)，Acox1(酰基辅酶a氧化酶1（acyl-CoA oxidase 1）)，BAT(棕色脂肪组织（brown adipose tissue)），Ci(居里（Curie）)，d(天)，h(小时)，μg(微克)，mg(毫克)，min(分钟)，mM(毫摩尔)，nm(纳米)，ACACA(乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-coenzyme A carboxylase alpha))，AEA(花生四烯乙醇胺(Anandamide))，BW(体重)，cDNA(互补DNA)，DGAT1(二酰甘油O-酰基转移酶同系物1(diacylglycerol O-acyltransferase homolog 1))，Ehhadh(烯酰辅酶A水合酶/3-羟酰基辅酶A脱氢酶(enoyl-CoAhydratase/3-hydroxyacyl-CoA dehydrogenase))，ELISA(酶联免疫吸附试验)，eWAT(附睾白脂肪组织(epididymal white adipose tissue))，FASN(脂肪酸合酶)，GIR(葡萄糖输注率(glucose infusion rate))，GR(红腓肠肌(redgastrocnemius))，GW(白腓肠肌(white gastrocnemius))，HFD(高脂肪饮食(high-fat diet))，HSL(激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive lipase))，iWAT(腹股沟白脂肪组织(inguinal WAT))，Lpl(脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase))，M-MLV-RT(莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(Moloney Murine Leukemia VirusReverse Transcriptase))，NEFA(非酯化脂肪酸(Non-esterified fatty acids))，OEA(油酰乙醇胺(Oleoylethanolamide))，OT(催产素)，PCR(聚合酶链式反应)，PEA(十六酰胺乙醇(Palmitoylethanolamide))，PNPLA2(含有patatin样磷脂酶结构域2(patatin-like phospholipase domain containing 2))，QR(红四头肌(red quadriceps))，QW(白四头肌(white quadriceps))，RNA(核糖核酸)，RT(逆转录酶)，S(比目鱼肌)，SCD1(硬脂酰辅酶A脱氢酶1(stearoyl-CoenzymeA desaturase 1))，TG(甘油三脂)，TIB(胫骨肌)，UCP3(解耦连蛋白3(uncoupling protein 3))，2-AG(2-花生四烯酸甘油酯(2-Arachidonoylglycerol))。
实施例1：中枢或外周OT输注对体重增加、脂质代谢和胰岛素抵抗的 积极影响。
用以下高脂肪饮食导致的肥胖症鼠模型分析给药OT的有益代谢作用。
动物和饮食
将购买自查尔斯河(L’Arbresle，法国)的雄性Wistar大鼠（300-325g）在控制温度（22℃）和照明（在07:00-19:00时进行光照）的单独笼子中饲养。允许自由饮水和食用45%的高脂肪饮食（HFD）（代谢能，4.56kcal/g）（
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EF R/M acc.D12451(I)mod.,ssniff
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 GmbH,Soest，德国）7周。每天（08：30-09:30时）记录体重、摄食和摄水。所有过程均获得了本大学伦理委员会的批准并且依据瑞士动物实验指南（Swiss guidelines for animalexperimentation）进行。
脑室内(i.c.v.）输注
为研究OT在代谢内稳态中的作用，上述雄性Wistar大鼠用HFD 45%饲喂7周致过度肥胖并且在实验的最后2周进行脑室内（i.c.v.）输注OT（1.6nmol/d）或生理盐水。
在饲喂HFD 3周后，对大鼠进行外科手术。分别肌肉注射40和9mg/kg的氯胺酮-甲苯噻嗪（ketamine-xylasine）(
Figure BDA00002417854000191
Parke-Davis andBayer，Leverkusen，瑞士)将它们麻醉，并且在右侧脑室植入插管，用牙粘固粉固定于头盖骨上，如先前在(Rohner-Jeanrenaud等，1989，Endocrinology124,733-9)中所述。在恢复一周后，测量对i.cv.注射血管收缩素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ）（5ng/μl）(Novabiochem,Laüfelfingen，瑞士)的饮水响应（drinking response），以确认插管的正确放置。在高脂肪饮食饲喂的第5周末，给药催产素(
Figure BDA00002417854000192
斯特拉斯堡，法国)或其介质（NaCl 0.9%）的渗透微型真空泵（
Figure BDA00002417854000193
model 2001,Alza公司,Cupertino,CA）被皮下植入并且经由聚乙烯导管连接于所述i.c.v.插管，方法如先前(Rohner-Jeanrenaud等,1989，如上)中所描述的。以1.6nmol/天/大鼠或16nmol/天/大鼠的剂量持续14天给药OT。输注介质的组的大鼠与输注OT动物的食物消耗量成对饲养，以在不依赖于食物摄入的前提下来评价OT的作用。成对饲养方案为在早晨给每日食物总量的三分之一且在黑暗之前给余下的三份之二。在09:00和13:00之间用异氟醚麻醉(Halocarbon Laboratories,RiverEdge,NJ)并且迅速断头处死大鼠。将血样收集于EDTA-包覆的管中，离心并在-20℃下保存。迅速移取组织，冷冻-夹紧（freeze-clamped），并在-80℃下保存。
皮下(s.c.）输注
上述雄性Wistar大鼠的另一组用以上所述的方法致过度肥胖并皮下输注生理盐水或OT(
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斯特拉斯堡，法国)（50nmol/天/大鼠）持续14天。
葡萄糖耐受实验
OT引起的外周脂质代谢中对葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性的变化的影响用葡萄糖耐受实验（GTT）进行测定。在移除食物4小时后腹腔内给药葡萄糖（75mg/kg体重）。在输注葡萄糖后0、15、30、60、90分钟后用葡萄糖计(One Touch II;LifeScan)测量取自尾部的血液样品的血糖水平。
正常血糖-高胰岛素钳夹
通过进行正常血糖-高胰岛素钳夹结合先前在(Vettor等，1994,Diabetologia,37,1202-1208)中描述的标记的2-脱氧葡萄糖技术来测量整体和组织特异性葡萄糖利用率。HFD引起的过度肥胖大鼠被禁食过夜并且用戊巴比妥(75mg/kg戊巴比妥钠，Abbott实验室，芝加哥，IL)进行腹腔内麻醉。在正常血糖-高胰岛素钳夹过程中测量总的葡萄糖利用率，如之前在(Vettor等，1994，如上)中所描述的。在钳夹结束时，体内各个组织中胰岛素刺激的葡萄糖利用指数通过以快速输注方式注射经标记的2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖（30μCi;Amersham Biosciences UK,Little Chalfont,英国）来确定，如之前在(Vettor等，1994，如上)中所描述的。用快速断头术处死大鼠，并且迅速移取组织，冷冻-夹紧，并且在-80℃下保存。对2-脱氧-d-[1-3H]葡萄糖-6-磷酸盐组织浓度的测量使得能够对各个组织的体内葡萄糖利用率指数进行计算（Vettor等，1994，如上)并且以ng/mg.min表达。
血浆测量
为了确认OT对次级代谢的作用，测定了血糖、胰岛素、瘦素、FFA、甘油以及TG的水平。血糖用葡萄糖氧化酶法(Glu,Roche Diagnostics GmbH,Rotkreuz，瑞士)进行测量。血浆非酯化脂肪酸（NEFA）以及甘油三酯（TG）水平分别用来自于Wako Chemicals GmbH（诺伊斯，德国）和Biomérieux(Marcy l’Etoile，法国)的NEFA C和TG酶法PAP150商品化试剂盒进行测定。如先前(Pequeux等，2001,Scand.J.Clin.Lab.Invest.,61,407-415)中所描述的，血浆OT水平利用ELISA进行测定。血浆甘油水平利用游离甘油试剂（Sigma）进行测量。中枢OT输注促进了升高的血浆OT水平，说明了OT对脂肪组织潜在的指导作用。
组织加工及实时RT-PCR
为了描述能够对次级代谢产生作用的机制，在脂肪的组织中分析了参与脂质代谢的酶的表达（附睾白脂肪组织和肩胛棕色脂肪组织）。以Trizzol试剂（Sigma-Aldrich,Buchs,瑞士）利用单步提取法从冻存的组织中提取总RNAs。用1%的琼脂糖凝胶电泳分析RNA的完整性并且用分光光度法测量浓度。量为2.5μg的总RNAs用于采用随机六聚体(Microsynth，日内瓦，瑞士)，dNTPs（Promega公司，Madisson，WI，美国），作为RNase抑制剂的RNasin（Promega公司）以及Moloney小鼠白血病病毒反转录（M-MLV-RT）酶试剂盒（(Invitrogen，巴塞尔，瑞士）的RT。为了进行定量PCR(qPCR)，利用
Figure BDA00002417854000211
绿色PCR Master Mix(Applied Biosystems，沃灵顿，英国)以及ABI7500设备(Applied Biosystems，福斯特市，加拿大)将6.25或12.5ng的cDNA进行基因扩增。用PrimerExpress软件(http://phym.unige.ch/)设计所有引物（图9，表1），并且以200-300nM的浓度用于qPCR。结果用持家基因、核蛋白体蛋白S29（PRS29）的表达水平进行标准化。
OT给药对不依赖于食物摄入的体重增加的作用。
与生理盐水的作用相比，长期i.c.v.OT输注减缓了累积体重增加的50%以上(图1A&1B；P<0.05)，排除了食物摄入的影响（图1C）。这导致与生理盐水输注对照相比，OT处理的大鼠的食物效能显著降低，采用在14天实验期中体重增加与累积食物摄入的比值来计算指数（图1D；P<0.05）。
OT给药在脂质代谢中的作用
除血浆甘油三酯浓度降低外，与输注生理盐水相比，中枢OT给药的所有测量的次级代谢参数（即，血糖、胰岛素、瘦素和FFA水平）均没有改变，如下表2所示。
表2
Figure BDA00002417854000221
数值表示每组6-7只动物的平均值±SEM。与对照相比*P<0.05。所有其他对照的P＝NS。油酰乙醇胺(OEA)、十六酰胺乙醇(PEA)、花生四烯乙醇胺(AEA）和2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)。
另外，中枢（图7A）和外周（图7B）OT给药均增加了血浆甘油水平，表明了长期OT给药能够增强脂解作用。
在被认为是腹内脂肪库的附睾白脂肪组织（eWAT）中，中枢OT输注促进了负责上调TG循环的酶Lp1的mRNA表达水平的升高（图2A；P<0.01）,中枢OT输注不改变参与脂肪生成和TG储存的酶[例如乙酰辅酶A羧化酶α(Acaca，也称为ACC-α)、脂肪酸合酶(Fasn)以及二酰甘油O-酰基转移酶同系物1(Dgat1)]的mRNA表达(图2A)，然而却增强了参与脂肪代谢的两个酶的mRNA表达，即含有patatin样磷脂酶结构域2（Pnpla2）（图2A；P<0.05）以及激素敏感性脂肪酶（HSL）(图2A；P<0.01)。OT对HSL的刺激作用在蛋白水平上同样可以检测到。
与对照组相比，可以预期的是，作为脂肪细胞中FFA细胞内升高的可利用率为OT输注大鼠中这种增强的TG上调和脂解作用（1.6nmol/d）的结果，OT输注大鼠中实际未改变的血浆FFA水平的观察（表2）表明了由给药OT诱导的对这些底物的内源性利用。
通过以上所述的实时RT-PCR测量参与脂肪酸β-氧化的酶的mRNA表达，显示出OT输注增强了酰基辅酶A氧化酶1（Acox1,图2B,P<0.05）、烯酰辅酶A水合酶/3-羟酰基辅酶A脱氢酶(Ehhadh,图2B,P<0.05)和介质链酰基辅酶a脱氢酶(Acadm,也称为MCAD,图2B,P<0.05)的eWAT表达，并且还加强了脂肪酸感知蛋白、解耦连蛋白3（Ucp3，图2B，P<0.05）的表达。为了进行对比，也在肩胛间棕色脂肪组织（BAT）中分析了以上大部分基因的mRNA表达，且观察到的是OT输注显著增强了参与脂肪酸β-氧化的主要酶的表达以及该组织中PPAR-α的表达。相反的是，中枢OT输注不会改变肝脏和骨骼肌中参与脂肪酸β-氧化的基因的表达。
另外，中枢OT输注促进了显著的硬脂酰辅酶A脱氢酶1（Scd1）mRNA表达的增强，Scd1分别将不饱和脂肪酸棕榈酸（16:0）以及硬脂酸（18:0）转化为单不饱和脂肪酸棕榈油酸（16:1）和油酸（18:1）(图2A；P<0.05)。已知的是，这些获得的脂肪酸可以以磷脂的方式整合到膜中，也可以贮存为TG。由于未从OT输注动物的eWAT中观察到参与TG贮存的酶的mRNA的表达发生变化（图2A），观察到了OT引起的棕榈油酸或油酸合成并以磷脂（PL）整合入膜的增加。油酰乙醇胺（OEA）为内源性大麻素家族成员，由N-酰基-磷脂酰乙醇胺磷脂酶D(NAPE-PLD)切割N-油酰基-磷脂酰乙醇胺（NOPE）获得，NOPE由油酸从磷脂酰胆碱（PC）的sn-1位转移至磷脂酰乙醇胺（PE）的游离氨基而产生。可以看出，与生理盐水的作用相比，长期i.c.v.OT输注增加了eWAT OEA的含量，但没有改变其他内源性大麻素的eWAT含量，例如OEA饱和类似物、衍生自棕榈油酸的十六酰胺乙醇（PEA）、花生四烯乙醇胺（AEA）或2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)，也没有改变OEA和其他内源性大麻素的血浆水平（表2）。
为了证明中枢OT输注通过促进脂肪组织中OEA的合成来调整外周脂质代谢的假说，用10倍高剂量的OT(16nmol/d)i.c.v.输注HFD诱导的过度肥胖大鼠，持续14天。在这个剂量下，与i.c.v.生理盐水输注对照组相比，中枢OT输注降低了累积食物摄入量。因此，为确定OT引起的代谢作用是不依赖于改变的食物摄入的，以与OT处理大鼠相同的食物消耗量成对饲养（PF）了第二个生理盐水输注对照组。i.c.v.OT输注大鼠的体重增加显著低于生理盐水输注对照组，该作用是不依赖于食物摄入的改变的，而在PF对照组中未观察到。这个剂量的OT对Scd1mRNA表达以及OEA含量的刺激作用比其他的低剂量(5.6和2倍对4.2和1.3倍)的OT要显著得多，并且与食物摄入的改变不相关，进一步支持了中枢OT在脂肪组织中的脂质代谢的作用涉及OT促进的OEA合成。
与用十分之一的低剂量获得的结果一致的是，输注16nmol/d的OT并没有改变eWAT PPAR-αmRNA，但是导致了不依赖于食物摄入的PPAR-α靶基因(例如Acadm、Acox1、Ehhadh、Ucp3)表达的增加。OT输注显著增加了在BAT中PPAR-α及其靶基因的mRNA表达。OT对BAT活性的潜在作用包括增加的产热作用（thermogenesis），但并不能因此而排除其他作用。
OT给药在高脂脂饮食诱导的胰岛素抵抗中的作用
进行了两次葡萄糖耐受实验（GTT），第一次在3周HFD后（即，在分别进行生理盐水和OT处理之前）且第二次在两周生理盐水或OT输注后（即，HFD的7周之后）。与饲喂HFD的3周后进行的GTT相比，在HFD的7周之后，生理盐水输注和OT输注大鼠表现出葡萄糖耐受的损伤(图3A；P<0.05)。在生理盐水输注组中这种损伤伴随有胰岛素分泌过多（图3B；P<0.05），表明了胰岛素敏感性降低的发生，而这在OT-输注动物中没有观察到，说明OT具有抵御HFD诱导的葡萄糖耐受性和胰岛素抵抗的防护作用。正常血糖-高胰岛素钳夹实验证实了相较于生理盐水组，OT输注能够促进显著增加的葡萄糖输注率（GIR）(图3C；P<0.05)以及红骨骼肌(图3D；P<0.01)，如红四头肌(图3D；P<0.01)、红腓肠肌(图3D；P<0.05)以及比目鱼肌(图3D；P<0.05)中的葡萄糖利用指数。在用OT中枢输注的大鼠中，同样观察到了腹股沟(图3E；P<0.05)和附睾WAT中(图3E；P<0.05)葡萄糖摄入的显著增加。
总而言之，这些结果支持了不依赖于食物摄入改变的情况下，长期中枢OT输注降低了高脂肪饮食（HFD）诱导的过度肥胖大鼠的体重增加，改善了HFD诱导的胰岛素抵抗（改善了葡萄糖耐受性，伴随有GTT过程中显著的胰岛素分泌减少，即改善的胰岛素敏感性，增加的GIR以及红骨骼肌、iWAT和eWAT中葡萄糖利用指数），降低了血浆甘油三酯水平和增强了负责TG摄入的酶Lp1的附睾白脂肪组织（eWAT）的表达，并参与了脂解作用和脂肪酸β氧化的酶的表达。鉴于长期中枢OT输注对骨骼肌或肝脏中的脂质代谢没有影响，这个作用选择性的靶向于白脂肪组织。更进一步地，OT引起的eWAT OEA含量的增加以及为PPAR-α靶基因(Jeong等，2009,.Exp.Mol.Med.,41,397-405)的编码参与脂肪酸β氧化的酶的基因(例如Acadm、Acox1、Ehhadh、Ucp3)的上调支持了OT在加强PPAR-α活性中的作用。
实施例2：体外OT对脂肪细胞中脂质代谢的直接作用
OT对分化的3T3-L1脂肪细胞中脂质代谢的体外作用采用以下方法进行分析。小鼠3T3-L1成纤维细胞按照之前所描述的（Olson等，1997，Mol.Cell.Biol.,2425-2435）向前脂肪细胞表型分化。简而言之，细胞在添加有4.5g/l葡萄糖和10%热灭活贫化的牛血清的达尔伯克改良伊戈尔培养基（DMEM）中，在37℃/8%CO2下培养。诱导细胞分化，细胞覆盖后两天，继续用4.5g/l葡萄糖、10%含有1μg/ml胰岛素的胎牛血清（FCS）、0.25μM地塞米松和0.5mM异丁基甲基黄嘌呤（isobutylmethylxanthane，IBMX）的DMEM温育4天；仅有4.5g/l葡萄糖、含有胰岛素的10%FCS的DMEM再温育四天；4.5g/l葡萄糖、10%FCS的DMEM温育3-4天。当90%以上的细胞表现出其细胞质中有大的脂肪颗粒积累时，认为细胞已经分化。
OT能够增强受中枢OT输注影响的所有脂质代谢相关基因的mRNA表达。这包括OT对PPAR-α的刺激作用（图4A）。另外，尽管OT对Scd1mRNA表达的影响没有在中枢输注大鼠中获得的显著，将3T3-L1脂肪细胞暴露于OT导致了OEA含量的增加（图4B）。为了进一步支持OEA可能是OT诱导的脂肪组织中脂质代谢的调节剂，3T3-L1脂肪细胞在OEA存在的情况下进行温育，并且OEA表现出诱导PPAR-α和多数PPAR-α相关基因(Acadm、Acox1、Ehhadh、Ucp3)的mRNA表达。
实施例3：外周OT给药对体重增加和脂质代谢的积极影响
OT给药的有益代谢作用采用与实施例1相同的高脂肪饮食诱导的肥胖症模型大鼠和PPAR-α敲除鼠(Lee等，1995,Mol.Cell.Biol.,15(6):3012-22)进行分析。HFD诱导的过度肥胖动物、生理盐水或OT组（参见实施例1的条件）经由微型真空泵(如上)进行皮下输注。OT以50nmol/天/大鼠的剂量给药14天。
身体成分参数
利用EchoMRI-700定量核磁共振（QMR）分析仪（Echo Medical Systems，休斯顿，德克萨斯州）在处理的开始和结束时测量大鼠的总脂肪质量和除去脂肪的身体质量。
在该剂量下，OT给药降低了食物摄入量（图5B；P<0.05）及体重增加（图5A；P<0.05）。鉴于在PF组中没有观察到体重降低，所以OT处理大鼠的体重降低仍然与激素的减食欲作用无关（图5A）。用QMR分析仪分析身体成分显示：在处理10天后，不依赖于食物摄入的变化（图5C和D；P<0.05），外周OT给药促进了脂肪质量的显著减少，同时诱导了除去脂肪的身体质量百分比的增加。通过测试和称量不同脂肪组织库也证实了这种不依赖食物摄入的脂肪质量的减少(图5E和F)。
PPAR-α敲除鼠和野生型鼠
在PPAR-α敲除(KO)鼠和同类野生型鼠中进行外周OT给药（50nmol/天）至少3天。而野生型动物中外周OT输注诱导了显著的体重增加的降低，可是在PPAR-αKO鼠中该参数没有变化。一致的是，OT外周输注促进了野生型鼠中PPAR-α靶基因(Acadm、Acox1、Ehhadh、Ucp3)的mRNA表达，但在PPAR-α敲除鼠中没有作用。
统计分析
对于实施例1-3，结果以平均值±SEM表示。采用Levene测试用于检查各组之间的平均变化（SPSS有限公司，芝加哥，IL）。为评价处理的效果，当常规的和平均变化测试不适用时，用参数(学生t检验)和非参数（Mann-Whitney检验）测试进行各组的比对。统计显著性确定为*P<0.05,**P<0.01。
这些结果支持了通过直接活化PPAR-α途径、刺激内源性大麻素、油酰乙醇胺（OEA）在脂肪组织中的合成，并且进而刺激脂解作用和局部脂肪酸氧化而发挥OT诱导脂肪组织的脂质代谢的作用。
所有观察到的代谢作用支持了OT给药的效果和/或用于抑制或治疗肥胖症或胰岛素抵抗的OT样分子（例如，OT衍生物、OTR激动剂或OT类似物）对OT受体通路的活化作用。特别地，这些多个成分的影响支持了OT给药的效果和/或用于治疗多个成员的综合征例如代谢综合征以及预防、抑制、缓解或治疗由增加的外周胰岛素抵抗例如2型糖尿病引起的疾病的OT样分子对OT受体通路的活化作用。
实施例4：外周OT给药对高脂肪饮食诱导的胰岛素抵抗的积极影响用与实施例1中相同的高脂肪饮食诱导的大鼠模型评价OT给药的有益作用。HFD诱导的过度肥胖动物经由微型真空泵(
Figure BDA00002417854000281
如上)皮下输注生理盐水或OT(
Figure BDA00002417854000282
斯特拉斯堡，法国)(50nmol/d天/大鼠)持续14天。
胰岛素抵抗的内稳态模型评估
在空腹过夜后测量胰岛素血症和糖血症（即在正常血糖-高胰岛素钳夹前）并用于计算“胰岛素抵抗的内稳态模型”(HOMA-IR)。HOMA-IR用以下方式计算：（空腹血清胰岛素mU/l）×(空腹血糖mM)/22.5。
如实施例1中所述的方法测定外周OT给药对高脂肪饮食诱导的胰岛素抵抗的影响。
在HFD的7周后，OT输注大鼠与生理盐水输注对照组相比显示出更低的HOMA-IR（图6A）。鉴于在PF组中没有观察到这种降低，所以该作用与激素的减食欲作用无关（图6A）。正常血糖-高胰岛素钳夹证实了如显著增加的葡萄糖输注率（GIR）所显示的，OT输注促进了胰岛素敏感性的增加（图6B）。总而言之，这些结果显示了长期外周OT输注改善了HFD诱导的胰岛素抵抗（降低的HOMA-IR和增加的GIR）。
实施例5：外周卡贝催产素给药对体重增加和脂质代谢的积极影响
用与实施例1中相同的高脂肪饮食诱导的肥胖症大鼠模型分析用根据本发明的催产素衍生物（卡贝催产素）进行给药的有益代谢作用。HFD诱导的过度肥胖动物经由微型真空泵(
Figure BDA00002417854000291
如上)皮下输注生理盐水或卡贝催产素(Bachem)(5nmol/天/大鼠或50nmol/天/大鼠)持续14天。
在处理的开始和第10天用实施例3中所述的定量核磁共振测量身体成分参数。
在5nmol/天和50nmol/天的剂量中，卡贝催产素给药均能够减少食物摄入量（图8B；P<0.05）和降低体重增加(图8A；P<0.05)。鉴于在两个PF组（图8A）中没有观察到这样的作用，所以卡贝催产素处理的大鼠的体重减少仍与肽的减食欲作用无关。用QMR分析仪确定体重成分显示在处理10天后，进行外周卡贝催产素给药促进了不依赖于食物摄入变化的脂肪质量的显著下降(图8C；P<0.05)。
综上所述，所有的观察到的作用支持了OT给药的效果和/或用于抑制或治疗肥胖症或胰岛素抵抗的OT样分子（例如，OT衍生物、OTR激动剂或OT类似物）对OT受体通路的活化作用。
Figure IDA00002417854500011
Figure IDA00002417854500021
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Figure IDA00002417854500101
Figure IDA00002417854500121

Claims (20)

1.一种衍生物，该衍生物选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂，所述衍生物用于治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病。
2.根据权利要求1所述的衍生物，其中，所述疾病为胰岛素抵抗。
3.根据权利要求1所述的衍生物，其中，所述疾病为肥胖症。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的衍生物，其中，所述疾病为代谢综合征。
5.根据权利要求1或2所述的衍生物，其中，所述疾病为2型糖尿病。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的衍生物，其中，所述衍生物为催产素类似物。
7.根据权利要求1-5中任意一项所述的衍生物，其中，所述衍生物为催产素。
8.根据权利要求1-6中任意一项所述的衍生物，其中，所述衍生物为卡贝催产素。
9.一种药物制剂，该药物制剂含有选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂的衍生物与至少一种有利于治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病或紊乱的辅助药剂的组合，以及至少一种药学上可接受的载体。
10.根据权利要求9所述的药物制剂，其中，所述衍生物为催产素类似物。
11.根据权利要求9所述的药物制剂，其中，所述衍生物为催产素。
12.根据权利要求9或10所述的药物制剂，其中，所述衍生物为卡贝催产素。
13.衍生物在制备用于治疗选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病的药物组合物中的用途，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂。
14.根据权利要求13所述的用途，其中，所述衍生物为催产素类似物。
15.根据权利要求13所述的用途，其中，所述衍生物为催产素。
16.根据权利要求13或14所述的用途，其中，所述衍生物为卡贝催产素。
17.一种在受试者中治疗或改善选自肥胖症和胰岛素抵抗的疾病或紊乱的方法，该方法包括用治疗有效量的衍生物对有需要的受试者进行给药，所述衍生物选自催产素、催产素衍生物和催产素激动剂，或它们的药物制剂。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述药物制剂为根据权利要求9-12中任意一项所述的药物制剂。
19.根据权利要求17所述的方法，其中，所述衍生物为催产素。
20.根据权利要求17所述的方法，其中，所述衍生物为卡贝催产素。
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