CN102850208B - 溴化烯炔类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种结构通式如下所示的溴化烯炔类化合物及其制备方法和用途。该类化合物经体外生物活性测试表明对胰脂肪酶具有明显的抑制活性，可作为一类研制新的预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病药物的先导化合物，也可用于制备治疗临床常见多发的肥胖症及相关代谢性疾病的药物。

Description

溴化烯炔类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一类溴化烯炔类化合物及其制备方法和用途。该类化合物对胰脂肪酶具有明显的抑制活性，可作为一类研制新的预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病药物的先导化合物，也可用于制备治疗临床常见多发的肥胖症及与其相关的代谢性疾病的药物。

背景技术

在近20年中，全世界尤其是发达国家人群中肥胖的发病率日益升高。肥胖发生的原因有多方面，如遗传因素、环境因素、饮食习惯等，其中高脂饮食是导致肥胖的重要原因。由于经济的发展和生活水平的提高，运动不足和摄食能量相对过剩逐渐成为现代人生活方式中的主要问题，代步工具的发达等导致现代人的能量消耗减少，而人类背离传统饮食模式的速度越来越快，新的饮食模式和西方化的食物特点是具有高饱和脂肪含量和较低纤维含量，以致食品能量密度过大。这导致了众多现代人能量摄入过多，且能量摄入远超过能量消耗。过剩的能量作为脂肪主要贮存在脂肪组织中，其次沉积于肝脏、骨骼肌等其它组织，导致脂肪组织分泌过多脂肪细胞因子，直接或间接地引起肥胖以及肥胖相关疾病的发生，比如糖尿病、癌症、心脏病、高脂血症和脂肪肝等。

如何合理有效地解决肥胖给人类健康带来的影响是医药界面临的重要研究课题。治疗肥胖症的药理方法集中于开发增加能量消耗的药物或减少能量摄取的药物。而减少能量摄取的主要方法就是减少身体消化和吸收食品，尤其是脂肪。胰脂肪酶是肠道中脂肪消化吸收所必需的酶。食物中的脂肪在胰脂肪酶作用下被水解为单酰甘油和游离脂肪酸后，在肠道被吸收，然后在体内重新合成脂肪，造成脂肪堆积，最终可导致肥胖以及相伴的高脂血症、糖尿病等代谢性疾病的发生。应用脂肪酶抑制剂可有效抑制肠道中脂肪酶对脂肪的分解催化作用，达到减少脂肪吸收、控制和治疗肥胖的目的。因而开发和应用有效的脂肪酶抑制剂受到人们的关注。目前用于治疗肥胖的脂肪酶抑制剂主要来源于植物提取物和化学合成。从植物中提取抑制脂肪酶活性成分的报道较多，但效果并不充分，即使某植物的提取物有效果，但其中的活性成分以及其量也并不确定。目前市场畅销的脂肪酶抑制剂是赛尼可，赛尼可具有活性强，稳定性好等特点，但是其存在着包括难以控制的肠道症状、油便和呕吐腹涨等缺点。因此寻找新的胰脂肪酶抑制剂对治疗肥胖、糖尿病等代谢性疾病具有重要的意义。

在开发利用我国的海洋生物资源，从中寻找具有生物活性及药用前景的海洋天然产物的过程中，我们发现，中国广西涠洲岛海绵(Xestospongiatestudinaria)的乙醚粗提物在体外筛选实验中对胰脂肪酶具有明显的抑制活性。进一步的生物活性跟踪研究，导致了一种溴化烯炔类化合物的发现。体外胰脂肪酶抑制活性筛选实验表明，溴化烯炔类化合物对胰脂肪酶具有显著的抑制作用，体内试验表明其具有明显的抑制脂肪吸收、降低血清甘油三酯水平的作用。经文献检索，未见该类化合物在此方面的生物活性研究报道。

发明内容

因此，本发明的目的在于提供一种溴化烯炔类化合物及其药物学上可接受的盐。

本发明的另一目的是提供上述溴化烯炔类化合物的制备方法。

本发明的另一目的是提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的溴化烯炔类化合物和/或其药物学上可接受的盐，以及任选的药用辅料。

本发明的另一目的是提供本发明的溴化烯炔类化合物和/或其药物学上可接受的盐作为胰脂肪酶抑制剂的用途。

本发明的又一目的是提供一种预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病的方法，该方法包括给予患有上述疾病的患者服用治疗有效量的根据本发明的溴化烯炔类化合物和/或其药物学上可接受的盐。

本发明的再一目的是提供上述溴化烯炔类化合物和/或其药物学上可接受的盐在制备用于预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病的药物中的应用或作为用于预防或治疗肥胖症及相关代谢性疾病的药物的先导化合物的应用。

本发明的溴化烯炔类化合物具有如下的化学结构通式：

其中，

X为OR₁或NR₂R₃；

其中，

R₁、R₂和R₃各自独立地选自氢，C1～C6烷基，和用卤素、羟基或苯基取代的C1～C6烷基；优选选自氢、C1～C4烷基和用卤素、羟基或苯基取代的C1～C4烷基；更优选为氢、甲基、乙基、丙基、丁基或苄基。

所述卤素指的是氟、氯、溴或碘。本发明溴化烯炔类化合物的药学上可接受的盐为所述溴化烯炔类化合物的碱金属、碱土金属或铵盐。

更优选地，所述的溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐选自以下化合物中：

本发明提供了制备根据本发明的溴化烯炔类化合物的方法。作为一个实例，其可以从中国广西涠洲岛海绵(Xestospongia testudinaria)中提取并分离根据本发明的溴化烯炔类化合物的游离酸而得到，或者经进一步制备其衍生物而得到。本发明的化合物通过如下步骤制备：

步骤1：将中国广西涠洲岛海绵(Xestospongia testudinaria)切碎后用丙酮溶剂提取，所得提取液浓缩后得粗浸膏；将该粗浸膏溶于NaCl的水溶液，混悬均匀后用乙醚萃取，将所得萃取液浓缩后得到乙醚浸膏；

步骤2：将步骤1中得到的乙醚浸膏进行层析，以石油醚/乙醚体积比100∶0→90∶10→80∶20→50∶50→20∶80→10∶90→0∶100梯度洗脱，收集石油醚/乙醚体积比50∶50洗脱部分；

步骤3：将步骤2中得到的石油醚/乙醚体积比50∶50洗脱部分经过硅胶柱层析以石油醚/乙醚进行梯度洗脱得到溴化烯炔类化合物X1、X2和X3；或

步骤4：将步骤3中的石油醚/乙醚体积比50∶50洗脱部分，经过重氮甲烷甲基化，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析洗脱并纯化，接着通过硅胶柱层析得到溴化烯炔类化合物X11，X21，X31；或

步骤5：将步骤3中得到的溴化烯炔类化合物X1、X2和X3在二氯甲烷溶液中与草酰氯反应，然后加入过量的R₄OH获得化合物X1、X2和X3的酯类化合物，其中，R₄为C1～C6烷基，或者用卤素、羟基或苯基取代的C1～C6烷基；优选为C1～C4烷基，或者用卤素、羟基或苯基取代的C1～C4烷基；进一步优选为甲基、乙基、正丙基、异丙基或正丁基；或

步骤6：将步骤3中得到的溴化烯炔类化合物X1、X2和X3分别与碱反应即得到相应的溴化烯炔类化合物的碱金属盐、碱土金属盐或铵盐；所述碱优选为氢氧化钠、氢氧化钾、NH₃、叔丁醇钠或叔丁醇钾；进一步优选为叔丁醇钠或叔丁醇钾；或

步骤7：将步骤3中得到的溴化烯炔类化合物X1、X2和X3在二氯甲烷溶液中与草酰氯反应，然后加入过量的HNR₂R₃，获得化合物X1、X2和X3的的酰胺化合物，其中，R₂和R₃与前述限定相同，所述HNR₂R₃优选为NH₃、甲胺、乙胺、二乙胺、丙胺、正丁胺或苄胺等。

在步骤1中，所述的NaCl溶液优选为0.7～1.5N NaCl的水溶液。

所述步骤3～4中，所述的石油醚/乙醚梯度洗脱是以石油醚/乙醚体积比80∶20→70∶30→60∶40→50∶50进行梯度洗脱。

对根据本发明的溴化烯炔类化合物进行了胰脂肪酶抑制活性测试，结果表明这些化合物具有明显的胰脂肪酶抑制作用，可用于制备预防和/或治疗肥胖症及相关代谢性疾病的药物，所述相关代谢性疾病包括与肥胖相关的糖尿病、高脂血症、脂肪肝等代谢失调性疾病。

附图说明

图1为胰脂肪酶抑制剂溴化烯炔类化合物X11、X21在动物体内药效学评价结果。

具体实施方式

下面结合具体实施实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

¹H、¹³C NMR用Varian Inova 400型核磁共振仪测定；MS(ESIMS及HRESIMS)用Q-TOF Micro LC-MS-MS型质谱仪测定；所使用的硅胶均为青岛海洋化工厂生产；各种溶剂均由国药集团试剂有限公司生产，均为分析纯。

如无特殊说明，以下实施例中涉及到的液/液之间比值均为体积百分比。

实施例1

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸(化合物X1)、(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸(化合物X2)和(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸(化合物X3)的制备

步骤1：提取：中国广西涠洲岛海绵(Xestospongia testudinaria)干重4kg，用丙酮3L反复超声提取3次，提取液合并后减压浓缩，所得粗浸膏混悬于1500ml 1N NaCl溶液中，以乙醚1500ml反复萃取该混悬液3次，所得萃取液合并后减压浓缩得到乙醚浸膏40g。

步骤2：化合物X1、X2和X3的制备：将步骤1中得到的乙醚浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚/乙醚梯度洗脱(100∶0→90∶10→80∶20→50∶50→20∶80→10∶90→0∶100)；其中，石油醚/乙醚体积比50∶50洗脱部分，经过硅胶柱层析(以石油醚/乙醚80∶20→70∶30→60∶40→50∶50梯度洗脱)得到化合物X1，X2和X3；

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸(化合物X1)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₂H₂₇BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5).

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸(化合物X2)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₈H₂₁BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12).

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸(化合物X3)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₈H₁₉BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H  6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11).

实施例2

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸甲酯(化合物X11)、(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸甲酯(化合物X21)和(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸甲酯(化合物X31)的制备

步骤3：化合物X31的制备：乙醚浸膏40g经200-300目硅胶柱层析，以石油醚/乙醚100∶0→90∶10→80∶20→50∶50→20∶80→10∶90→0∶100梯度洗脱，每个梯度用量5000ml；其中，石油醚/乙醚50∶50洗脱液浓缩物得2.0g，该部分首先经过重氮甲烷甲基化，再以石油醚/氯仿/甲醇2∶1∶1洗脱，然后经过硅胶柱层析(以石油醚/乙醚100∶0→90∶10→80∶20→70∶30)得到(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸甲酯X11 11.3mg；(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸甲酯X21500mg，(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸甲酯X31100mg。

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸甲酯(化合物X11)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₃H₂₉BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5)，3.66(s，H-Me).

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸甲酯(化合物X21)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₉H₂₃BrO₂，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)，3.66(s，H-Me).

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸甲酯(化合物X31)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₉H₂₁BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11)，3.67(s，H-Me).

实施例3

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸钠(化合物X1N)的制备

步骤4：将实施例1中得到的化合物X1溶于叔丁醇与叔丁醇钠反应得到(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸钠；

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸钠(化合物X1N)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₂H₂₆BrO₂Na；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5).

实施例4

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸钾(化合物X1K)的制备

除了使用叔丁醇钾代替叔丁醇钠之外，以与实施例3相同的方式制备(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸钾。

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸钾(化合物X1K)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₂H₂₆BrO₂K；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5).

实施例5

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸钠(化合物X2N)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1之外，以与实施例3相同的方式制备(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸钠。

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸钠(化合物X2N)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₈H₂₀BrO₂Na；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12).

实施例6

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸钾(化合物X2K)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1之外，以与实施例4相同的方式制备(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸钾。

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸钾(化合物X2K)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₈H₂₀BrO₂K；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)。

实施例7

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸钠(化合物X3N)的制备

除了使用化合物X3代替化合物X1之外，以与实施例3相同的方式制备(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸钠。

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸钠(化合物X3N)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₈H₁₈BrO₂Na；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11).

实施例8

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸钾(化合物X3K)的制备

除了使用化合物X3代替化合物X1之外，以与实施例4相同的方式制备(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸钠。

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸钾(化合物X3K)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₈H₁₈BrO₂K；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11).

实施例9

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸乙酯(化合物X12)的制备

将实施例1中得到的化合物X1在二氯甲烷溶液中与等摩尔比的草酰氯反应，然后加入过量的乙醇反应得到(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸乙酯。

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸乙酯(化合物X12)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₄H₃₁BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5)，4.42(m)，1.43(t，H-Me).

实施例10

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸丙酯(化合物X13)的制备

除了使用丙醇代替乙醇之外，以与实施例9相同的方式反应得到(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸丙酯。

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸丙酯(化合物X13)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₅H₃₃BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5)，0.67(t，H-Me)，1.44(m)，3.92(t).

实施例11

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸异丙酯(化合物X14)的制备

除了使用异丙醇代替乙醇之外，以与实施例9相同的方式反应得到(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸异丙酯。

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸异丙酯(化合物X14)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₅H₃₃BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5)，1.00(d，H-Me)，4.85(m).

实施例12

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸丁酯(化合物X15)的制备

除了使用丁醇代替乙醇之外，以与实施例9相同的方式反应得到(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸丁酯。

(17E，21E)-22-溴-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酸丁酯(化合物X15)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₆H₃₅BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5)，0.59(t，H-Me)，1.08(m)，1.38(m)，3.93(t).

实施例13

(17E，21E)-22-溴-N-甲基-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酰胺(化合物X16)的制备

将实施例1中得到的化合物X1在二氯甲烷溶液中与草酰氯反应，然后加入过量的甲胺反应得到N-甲基桶状海绵酰胺X16。

(17E，21E)-22-溴-N-甲基-二十二碳-17，21-二烯-9，11，19-三炔酰胺(化合物X16)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₃H₃₀BrNO；¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.0Hz，H-22)，6.30(dd，J＝14.0，2Hz，H-21)，6.17(dt，J＝15.5，7.0Hz，H-17)，5.55(dd，J＝15.5，2.0Hz，H-18)，2.35(t，J＝7.0Hz，H-2)，2.25(t，J＝7.0Hz H-8，H-13)，2.14(m，H-16)，1.63(m，H-3)，1.51(m，H-7，H-14，H-15)，1.45(m，H-4)，1.39(m，H-6)，1.35(m，H-5)，2.71(s，H-Me)，8.00(s).

实施例14

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸乙酯(化合物X22)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1之外，以与实施例9相同的方式反应得到(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸乙酯(化合物X22)。

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸乙酯(化合物X22)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₀H₂₅BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)，4.42(m)，1.43(t，H-Me).

实施例15

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸丙酯(化合物X23)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1之外，以与实施例10相同的方式反应得到(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸丙酯。

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸丙酯(化合物X23)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₁H₂₇BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)，0.67(t，H-Me)，1.44(m)，3.92(t).

实施例16

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸异丙酯(化合物X24)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1之外，以与实施例11相同的方式反应得到(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸异丙酯。

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸异丙酯(化合物X24)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₁H₂₇BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)，1.00(d，H-Me)，4.85(m).

实施例17

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸正丁酯(化合物X25)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1之外，以与实施例12相同的方式反应得到(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸正丁酯。

(E)-18-溴-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酸正丁酯(化合物X25)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₂H₂₉BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)，0.59(t，H-Me)，1.08(m)，1.38(m)，3.93(t).

实施例18

(E)-18-溴-N-甲基-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔甲酰胺(化合物X26)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1之外，以与实施例13相同的方式反应得到(E)-18-溴-N-甲基-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酰胺。

(E)-18-溴-N-甲基-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酰胺(化合物X26)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₁₈H₂₂BrNO；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)，7.21(s，H-N).

实施例19

(E)-18-溴-N-正丙基-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酰胺(化合物X27)的制备

除了使用化合物X2代替化合物X1，丙胺代替甲胺之外，以与实施例13相同的方式反应得到(E)-18-溴-N-正丙基-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酰胺。

(E)-18-溴-N-正丙基-十八碳-17-烯-5，7，15-三炔酰胺(化合物X27)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₁H₂₈BrNO；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.57(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.16(dt，J＝14.1，2.4，H-17)，2.50(t，J＝7.2Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.6Hz，H-4)，2.25(m，H-9，H-14)，1.84(m，H-3)，1.53(m，H-10，H-13)，1.38(H-11，H-12)，0.96(t，H-Me)，1.59(m)，3.20(t).

实施例20

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸乙酯(化合物X32)的制备

除了使用化合物X3代替化合物X1之外，以与实施例9相同的方式反应得到(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸乙酯。

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸乙酯(化合物X32)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₀H₂₃BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11)，4.42(m)，1.43(t，H-Me).

实施例21

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸丙酯(化合物X33)的制备

除了使用化合物X3代替化合物X1之外，以与实施例10相同的方式反应得到(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸丙酯。

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸丙酯(化合物X33)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₁H₂₅BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11)，0.67(t，H-Me)，1.44(m)，3.92(t).

实施例22

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸异丙酯(化合物X34)的制备

除了使用化合物X3代替化合物X1之外，以与实施例11相同的方式反应得到(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸异丙酯。

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸异丙酯(化合物X34)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₁H₂₅BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H 6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11)，1.00(d，H-Me)，4.85(m).

实施例23

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸正丁酯(化合物X35)的制备

除了使用化合物X3代替化合物X1之外，以与实施例12相同的方式反应得到(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸正丁酯。

(13E，17E)-18-溴-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酸正丁酯(化合物X35)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₂H₂₇BrO₂；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H  6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11)，0.59(t，H-Me)，1.08(m)，1.38(m)，3.93(t).

实施例24

(13E，17E)-18-溴-N-苄基-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酰胺(化合物X36)的制备

除了使用化合物X3代替化合物X1，用苯甲胺代替甲胺之外，以与实施例13相同的方式反应得到(13E，17E)-18-溴-N-苄基-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酰胺。

(13E，17E)-18-溴-N-苄基-十八碳-13，17-二烯-5，7，15-三炔酰胺(化合物X36)的理化性状如下：无色胶状物，波谱数据如下：C₂₅H₂₆BrNO；¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ_H  6.63(d，J＝14.1Hz，H-18)，6.29(dd，J＝14.1，2.1Hz，H-17)，6.16(dt，J＝15.9，7.5，H-13)，5.55(d，J＝15.9，H-14)，2.50(t，J＝7.5Hz，H-2)，2.35(t，J＝6.9Hz，H-4)，2.26(m，H-9)，2.12(m，H-12)，1.85(m，H-3)，1.52(m，H-10，H-11)，4.24(s)，7.27(d)，7.31(dd)，7.25(ddd).

实验实施例1：

溴化烯炔类化合物的胰脂肪酶抑制活性测定

胰脂肪酶抑制活性的测定以赛尼可(xenical)作为阳性对照，方法如下：

首先底物对硝基苯乙酸(p-Nitrophenyl acetate)(sigma公司)用磷酸缓冲液(25mM，pH 6.8)配成1.35mM；猪胰脂肪酶(sigma公司)用磷酸缓冲液配成10mg/ml；受试化合物用磷酸缓冲液配制成不同浓度的溶液。然后在96孔板中依次加入50μl底物溶液以及10μl不同浓度的受试样品，预先在37℃孵育5分钟。最后同时加入50μl酶溶液、混匀。37℃下反应20分钟，在492nm下检测每孔的吸光度。

根据在492nm下的吸光度计算受试样品对胰脂肪酶的抑制率(％)，并将酶活性抑制率(％)达到50％时抑制剂的浓度测定为IC₅₀值。抑制率(％)可以根据下式进行：

抑制率(％)＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100

上式中，A表示反应后空白孔在492nm下的吸光度，

B表示反应前空白孔在492nm下的吸光度，

C表示反应后样品孔在492nm下的吸光度，

D表示反应前样品孔在492nm下的吸光度。

部分产品的抑制结果如表1所示。

表1胰脂肪酶抑制作用

结论：从表1可以看出，化合物X11对胰脂肪酶具有十分显著的抑制作用，其IC₅₀仅为0.61μM，略优于阳性对照药物赛尼可。此外，化合物X12、X21、X22和X31对胰脂肪酶也表现出强的抑制作用，其IC₅₀分别为2.88、3.11、5.04和7.65μM。

抑制胰脂肪酶可以抑制脂肪在小肠的分解，从而抑制脂肪的吸收。由于脂肪摄入过多可能导致肥胖，以及与肥胖相关的糖尿病、高脂血症、脂肪肝等代谢失调性疾病。所以作为胰脂肪酶抑制剂，溴化烯炔类化合物可能用于预防或治疗胖症、糖尿病、高脂血症和脂肪肝等疾病。

实验实施例2：

溴化烯炔类化合物的体内胰脂肪酶抑制活性测定

雄性6周龄C57BL/KSJ小鼠，SPF级标准操作规程饲养。随机分为对照、模型、受试化合物X11、X21、阳性药(赛尼可)组，每组6只。实验前一天禁食过夜(12小时)。受试化合物X11、X21先以10％乙醇溶解，再以0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)混悬；阳性对照药赛尼可做同样处理。将受试化合物X11、X21、赛尼可(Xenical)分别以50mg/kg的剂量灌胃给药，对照组给予溶媒，给药1小时后模型组和给药组急性灌胃给予橄榄油(5mg/kg)造小鼠急性高脂血症模型，对照组给予生理盐水。造模1小时后眼眦静脉取血，离心后取血清按照试剂盒测定血清甘油三酯的含量。

结果：见图1

结论：从图1可以看出，模型组与空白组有显著性差异(p＜0.01)；化合物X11和X21，显著降低了高血脂模型小鼠血浆甘油三脂水平(p＜0.05)，与等剂量的赛尼可药效基本相近。

Claims (11)

1.一种溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐，所述溴化烯炔类化合物具有如下的通式所示的结构：

X为OR₁或NR₂R₃；

其中，

R₁、R₂和R₃各自独立地选自氢，C1～C6烷基和用卤素、羟基或苯基取代的C1～C6烷基，

条件是不包括下列化合物：

2.根据权利要求1所述的溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐，其中，R₁、R₂和R₃各自独立地选自氢、C1～C4烷基和用卤素、羟基或苯基取代的C1～C4烷基。

3.根据权利要求1所述的溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐，其中，R₁、R₂和R₃各自独立地为氢、甲基、乙基、丙基、丁基或苄基。

4.根据权利要求1所述的溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐，其中，所述溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐选自如下的化合物中：

5.一种制备具有如下的通式所示的结构的溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐的方法，

X为OR₁或NR₂R₃；

其中，

R₁、R₂和R₃各自独立地选自氢，C1～C6烷基和用卤素、羟基或苯基取代的C1～C6烷基，

所述溴化烯炔类化合物或其药物学上可接受的盐通过如下步骤制备：

步骤1：将中国广西涠洲岛海绵切碎后用丙酮溶剂提取，所得提取液浓缩后得粗浸膏；将该粗浸膏溶于NaCl的水溶液，混悬均匀后用乙醚萃取，将所得萃取液浓缩后得到乙醚浸膏；

步骤2：将步骤1中得到的乙醚浸膏进行层析，以石油醚/乙醚梯度洗脱，所述的石油醚/乙醚梯度洗脱是以石油醚/乙醚体积比100:0→90:10→80:20→50:50→20:80→10:90→0:100进行梯度洗脱，收集其中石油醚/乙醚体积比50:50洗脱部分；

步骤3：将步骤2中得到的石油醚/乙醚体积比50:50洗脱部分，经过硅胶柱层析以石油醚/乙醚进行梯度洗脱得到溴化烯炔类化合物X1、X2和X3；或

步骤4：将步骤2中的石油醚/乙醚体积比50:50洗脱部分，经过重氮甲烷甲基化，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析洗脱并纯化，接着通过硅胶柱层析得到溴化烯炔类化合物X11，X21，X31；或

步骤5：将步骤3中得到的溴化烯炔类化合物X1、X2和X3分别在二氯甲烷溶液中与草酰氯反应，然后加入过量的R₄OH获得化合物X1、X2和X3的酯类化合物，其中，R₄为C1～C6烷基，或者用卤素、羟基或苯基取代的C1～C6烷基；或

步骤6：将步骤3中得到的溴化烯炔类化合物X1、X2和X3分别与碱反应即得到相应的溴化烯炔类化合物的碱金属盐、碱土金属盐或铵盐；或

步骤7：将步骤3中得到的溴化烯炔类化合物X1、X2和X3在二氯甲烷溶液中与草酰氯反应，然后加入过量的HNR₂R₃，获得化合物X1、X2和X3的酰胺化合物，其中，R₂和R₃与前述限定相同，

6.根据权利要求5所述的方法，其中

在步骤1中，所述的NaCl溶液优选为0.7～1.5N NaCl的水溶液；和/或

所述步骤3～4中，所述的石油醚/乙醚梯度洗脱是以石油醚/乙醚体积比80:20→70:30→60:40→50:50进行梯度洗脱；和/或

在步骤5中，R₄为C1～C4烷基，或者用卤素、羟基或苯基取代的C1～C4烷基；和/或

在步骤6中所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾、NH₃、叔丁醇钠或叔丁醇钾；和/或

在步骤7中所述HNR₂R₃为NH₃、甲胺、乙胺、二乙胺、丙胺、正丁胺或苄胺。

7.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1～4任一项所述的溴化烯炔类化合物和/或其药物学上可接受的盐，以及任选的药用辅料。

8.根据权利要求1～4任一项所述的溴化烯炔类化合物和/或其药物学上可接受的盐在制备胰脂肪酶抑制剂中的用途。

9.根据权利要求1～4任一项所述的溴化烯炔类化合物和/或其药物学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肥胖症及相关代谢性疾病的药物的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述相关代谢性疾病为代谢失调性疾病。

11.根据权利要求10所述的用途，其中，所述代谢失调性疾病为与肥胖相关的糖尿病、高脂血症或脂肪肝。