CN102838648A - 甾烯醇类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一类新的如式（Ⅱ）所示的甾烯醇类化合物，该化合物的制备方法，以及该化合物防治植物病毒病的用途。

Description

甾烯醇类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及植物化学技术领域，具体涉及一类新的甾烯醇类化合物及其制备方法和应用，特别是用于抗病毒剂的应用。 

背景技术

植物病毒病在世界范围内对农作物产量和质量构成严重威胁，每年造成的减产达10-30%，经济损失约200亿美元。我国是一个农业大国，每年因病毒病对粮食生产、园艺作物、经济作物等所造成的经济损失约数百亿元。因此，迫切需要开发研制抗病毒药物。国外从60年代初加大了这方面的研究，1985年日本登记的藻酸酪液蛋白（Mosanon）为紫茉莉提取蛋白和香菇菌汁提取物香菇菌素（Lentemin）曾被用于防治番茄病毒病。人工合成的抗病毒药物有病毒唑（Virazole，德国，1972）、吗啉甲基四氢嘧啶（1982；1996）、苯甲酰聚胺类（法国，1991）、三嗪类衍生物（德国，1992）等，但在田间应用较少。国内的病毒药物研究始于80年代初，迄今，研制并登记的出品有高脂膜、NS-83增抗剂、病毒A、植病灵等几种产品，大多是以化学品为主的混配制剂。目前国内病毒农药的现状是：（1）由于病毒对寄主的绝对寄生（专化寄生），其复制所需能量和物质由寄主细胞提供，虽然混配制剂较多，但是，缺乏直接作用于病毒的单一化合物农药品种，导致防治效果较差。（2）目前国内登记的药物绝大多数均以盐酸吗啉胍等为主要成分，而盐酸吗啉胍长期以来用于临床病毒性疾病的治疗，如果在粮食作物与水果蔬菜等长期使用会造成药物残留，长期食用带残留食品会通常引起人体产生抗药性问题。（3）化学病毒制剂的长期、大量施用，会造成严重的“农药公害”。因此，从生物源、特别是植物源寻找与开发新型的高活性抗病毒药物，不仅具有很高的理论价值，而且也在控制作物病毒病确保粮食丰产，绿色生态农业持续发展中具有重要的实际意义。 

锦葵科(学名：Malvaceae）是锦葵目的一个科。木本或草本，茎皮有很多纤维，有粘液。锦葵科大约有75属，1000-1500种，分布于温带及热带。中国有16属， 81种，36变种或变型，在全国各地都有分布。目前有关锦葵科植物的抗病毒应用的开发研究的技术报道较少，若能成功地从锦葵科植物开发研究具有生物活性的甾烯醇类化合物，这对农药、特别是抗病毒相关研究领域具有重要的意义。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种从锦葵科植物分离制备得到的甾烯醇类化合物。 

本发明的另一个目的是提供所述甾烯醇类化合物的制备方法。 

本发明还有一个目的是通过所述甾烯醇类化合物的应用。 

本发明的目的通过以下技术方案予以实现： 

提供一种甾烯醇类化合物，其结构式如下式（Ⅱ）所示： 

本发明同时提供上述式（Ⅱ）化合物的制备方法，包括以下步骤： 

（1）采集锦葵科植物的枝叶和树皮，烘干后粉碎； 

（2）将粉碎后的植物原料先用水浸泡，其中原料和水的重量比为1：1；随后采用甲醇溶剂提取三次，减压浓缩得植物原料粗提物； 

（3）将植物原料粗提物装入提取罐，加入等体积水，在室温下超声震碎溶解，抽滤后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取三次，得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相； 

（4）将乙酸乙酯相利用硅胶柱层析分离纯化得到产物。 

本发明的锦葵科植物可以是锦葵、木槿、黄花稔、花稔、秋葵、棉花、苘麻和大麻槿等植物。 

本发明还提供上述甾烯醇类化合物的应用： 

通过实验证实，本发明所述的甾烯醇类化合物对多种植物病毒具有良好的生物活性，特别是针对西葫芦花叶病毒病、西瓜花叶病毒病、烟草花叶病毒病、小麦黄矮病毒病均具有良好的防治效果，可以应用于制备抗病毒剂。 

进一步地，本发明还提供上述甾烯醇类化合物与一种或多种选自下列农用活性物质的抗病毒剂组合物：氨基寡糖、葡聚寡糖素、低聚糖素、葡聚烯糖、香菇多糖；脂肪酸及混合脂肪酸；硫酸铜、乙酸铜、琥胶肥酸铜、硫酸锌、腐植酸；宁南霉素、嘧肽酶素；三十烷醇、盐酸吗啉呱、菌毒清、辛菌胺及辛菌胺醋酸盐；羟基腺嘌呤、羟腺嘌呤、三氮唑核苷、邻甲氧基酚、愈创木酚；苦参碱；氯溴异氰尿酸；毒氟磷。本发明提供将该组合物用于防治植物病毒病，具体为西葫芦花叶病毒病、西瓜花叶病毒病、烟草花叶病毒病或小麦黄矮病毒病等多种植物病毒病。 

进一步地，本发明还涉及一种抗病毒制剂，其特征在于，该抗病毒制剂包含根据权利要求1所述的甾烯醇类化合物与一种或多种农药上可以接受的农药助剂，所述制剂为粉剂、粒剂或水剂。 

本发明的有益效果是： 

（1）本发明提供了一种具有抗病毒活性的甾烯醇类化合物，对农药领域具有重要的意义。 

（2）本发明从锦葵科植物中制备得到一种具有农药、特别是抗病毒活性的甾烯醇类化合物，为有效开发利用锦葵科植物提供了广阔的前景； 

（3）本发明制备方法简单，成本较低。 

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步详细说明本发明 

实施例1：本发明式（Ⅱ）化合物的制备 

（1）采集锦葵科植物的枝叶和树皮，烘干后粉碎； 

（2）称取原料，每千克粉碎后的植物原料加入1升水，充分密封浸泡； 

（3）每千克原料加入3升甲醇溶剂，充分密封搅拌至全部溶解，减压浓缩得植物原料粗提物； 

（4）将植物原料粗提物30克装入提取罐，加入等体积的水，在室温下超声震碎溶解，抽滤后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取三次，得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相；随后选择乙酸乙酯相和正丁醇相上柱分离； 

（5）将乙酸乙酯相用100-200目硅胶拌样，挥干后，以硅胶柱（165g，200-300目）层析，用氯仿/甲醇（100∶0，99∶1，98∶2，95∶5，90∶10，85∶15，80∶20，75∶25，70∶30，1∶1，0∶100）梯度洗脱，每个流分500ml，洗脱液经减压浓缩，薄层检测合并，得6个组分，按极性大小依次为组分1-6； 

将组分3（4.242g）上硅胶，以石油醚/丙酮（99∶1，98∶2，95∶5，90∶10，80∶20，70∶30）梯度洗脱得2个组分，按照极性大小分为组分3.1和组分3.2，其中组分3.1再次用氯仿/丙酮（10∶1）洗脱，纯化得到化合物Ⅱ； 

将分离得到的单体化合物，用薄层层析(TLC)检测，分别采用三种不同的溶剂系统展开，在紫外分析仪254nm和365nm下观察，然后在碘缸中显色，再分别喷5％浓硫酸-乙醇试剂加热显色，均为单一斑点，因此可初步判断所分离到的化合物为纯化合物。 

化合物Ⅱ的结构解析与鉴定 

化合物Ⅱ：无色针状结晶(丙酮)，mp.133-136℃，易溶于氯仿，丙酮。Liebermann-Burchard反应阳性。与已知甾烯醇对照品共薄层检测，3种展开系统下（石油醚一丙酮，氯仿-甲醇，环己烷一乙酸乙酯）其Rf值相近，根据氢谱和质谱结果确定该化合物为甾烯醇，结构式如下式所示： 

式（II） 

实施例2：本发明式（Ⅱ）化合物对西葫芦花叶病毒以及西瓜花叶病毒的防治效果 

（1）、接种苗的准备：西葫芦以及西瓜种子首先用温汤浸种30分钟，然后，在培养皿中催芽，待芽长到1cm左右，挑选一致芽播于花盆中，放于有防虫网的温室内进行培养，长到两子叶一心叶时，进行接种和喷药处理。 

（2）、处理方法：试验分4个处理，每个处理6株，设有发病对照(只接种，不喷药)，空白对照（不接种，不喷药）、喷药处理(先接种，24h后喷式（Ⅱ）化合物和对照药物（20%盐酸吗啉胍铜可湿性粉剂）)，喷药后第7天观察、采样； 

（3）、接种浓度：接种浓度均为5%，方法是在繁殖的毒源植物上取2.5g发病明显的新鲜叶片，在研钵中加入少量1%Na2HPO4;(pH=7.0)缓冲液和少量400目金刚砂，充分研磨成匀浆，再加入适量缓冲液，混匀，然后用四层纱布过滤，将滤液用缓冲液定容至50ml； 

（4）、接种方法：采用汁液摩擦接种，用手指蘸取适量接种液，在每个接种叶片上向同一方向轻轻磨擦3次，面积约2-3cm，最后用清水冲洗接种叶片表面； 

（5）、喷药浓度和方法：将式（Ⅱ）化合物稀释100倍，接种24小时后喷药。用小型喷雾器喷施在供试西葫芦和西瓜叶片上，直到叶表面均匀布满药液为止； 

（6）、病情调查：在喷药7天后调查西葫芦和西瓜处理植株的发病情况。 

（7）、试验结果：在西葫芦和西瓜发病初期，调查统计发病和生长增长情况，从表1和表2的结果表明，抗病毒化合物Ⅱ治疗处理对西葫芦和西瓜花叶病毒病的平均相对疗效为84.8%和76.4%。 

表1本发明抗病毒化合物对西葫芦花叶病毒病的疗治效果 

实施例3：本发明式（Ⅱ）化合物对烟草花叶病毒以及小麦黄矮病毒的大田防治效果 

1.实验条件：作物选择烟草和小麦；靶标为烟草花叶病毒和小麦黄矮病毒。 

2.试验设计和安排：试验药剂为本研究抗病毒制剂，设立20%盐酸吗啉胍铜可湿性粉剂对照药剂和清水对照。共3个处理，重复3次，共9个小区。试验小区按随机区组排列。 

3.施药方法：移栽后20天进行喷雾施药，隔7天后第二次喷药。 

4.实验结果： 

表3试验药剂对烟草花叶病毒病的防治效果 

表4试验药剂对小麦黄矮病毒病的防治效果 

由此可见，抗病毒化合物治疗西葫芦花叶病毒病的结果看，本发明式（Ⅱ）化合物对病毒的侵染和扩展具有显著的抑制作用。抗病毒化合物的室内生物学防效测定确定了粗提物的乙酸乙酯提取分离物为抗病毒活性部分。 

本发明的甾烯醇类化合物及其制备方法和应用已经通过具体的实例进行了描述，本领域技术人员可借鉴本发明内容，适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。 

Claims (7)

1.一种甾烯醇类化合物，其特征在于具有如下式（Ⅱ）所示结构：

2.根据权利要求1所述的甾烯醇类化合物的制备方法，其特征在于：

（1）采集锦葵科植物的枝叶和树皮，烘干后粉碎；

（2）将粉碎后的植物原料先用水浸泡，其中原料和水的重量比为1：1；随后采用甲醇溶剂提取三次，减压浓缩得植物原料粗提物；

（3）将植物原料粗提物装入提取罐，加入等体积水，在室温下超声震碎溶解，抽滤后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取三次，得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相；

（4）将乙酸乙酯相利用硅胶柱层析分离纯化得到产物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，所述锦葵科植物是锦葵、木槿、黄花稔、花稔、秋葵、棉花、苘麻和大麻槿。

4.根据权利要求1所述的甾烯醇类化合物的应用，其特征在于，该化合物用于防治西葫芦花叶病毒病、西瓜花叶病毒病、烟草花叶病毒病或小麦黄矮病毒病。

5.一种抗病毒剂组合物，其特征在于，该组合物包含根据权利要求1所述的甾烯醇类化合物与一种或多种选自下列农用活性物质：氨基寡糖、葡聚寡糖素、低聚糖素、葡聚烯糖、香菇多糖；脂肪酸；硫酸铜、乙酸铜、琥胶肥酸铜、硫酸锌、腐植酸；宁南霉素、嘧肽酶素；三十烷醇、盐酸吗啉呱、菌毒清、辛菌胺、辛菌胺醋酸盐；羟基腺嘌呤、羟腺嘌呤、三氮唑核苷、邻甲氧基酚、愈创木酚；苦参碱；氯溴异氰尿酸；毒氟磷。

6.根据权利要求5所述的抗病毒剂组合物的应用，其特征在于，该抗病毒剂组合物用于防治西葫芦花叶病毒病、西瓜花叶病毒病、烟草花叶病毒病或小麦黄矮病毒病。

7.一种抗病毒制剂，其特征在于，该抗病毒制剂包含根据权利要求1所述的甾烯醇类化合物与一种或多种农药上可以接受的农药助剂，所述制剂为粉剂、粒剂或水剂。