CN102776265A - 酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法 - Google Patents

酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法 Download PDF

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Abstract

一种酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，其步骤是，试样经去除可溶性糖后，淀粉用淀粉酶水解成糊精和小分子双糖，再用糖化酶糖化成可发酵性的单糖，最后按还原糖测定，并折算成可发酵性淀粉含量，利用所产酒精的含量计数可发酵性淀粉的含量。本发明的方法有较强的可靠性，通过测定酒糟中的可发酵性淀粉，为酒糟的综合利用提供理论依据，所用的仪器和药品简单，能准确快速测定酒糟中可发酵性淀粉含量，通过先测定可发酵性淀粉含量，判定酒糟能否进一步利用。

Description

酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法
技术领域
本发明涉及一种酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法。
背景技术
白酒酒糟是酿酒工业中的主要副产品，如果酒糟不及时加以处理，就会腐败变质，不仅浪费了宝贵的资源，还会严重污染周围环境，因而充分而有效的对酒糟加以综合利用，既可以减轻环境污染，又可以节约粮食、降低成本，因此，酒糟的综合利用对我国的资源开发和环境保护具有十分重要的意义。利用酒糟再发酵生产优质白酒，通过技术手段进一步利用酒糟中的可发酵性淀粉，降低粮耗，实现资源的循环利用，节约成本。酒糟中可发酵性淀粉的定义：在合适温度、pH值等的条件下，酒糟中能够被淀粉酶水解为小分子的糊精或麦芽糖，然后被糖化酶糖化为可发酵性的糖类，如葡萄糖、果糖等，最后被酵母菌充分利用，发酵产生酒精和二氧化碳，放出一定生物热量的淀粉。目前，酒糟中可发酵性淀粉含量的测定尚无国家标准、行业标准、地方标准和企业标准，所以，酒厂的酒糟都没有测定过其中的可发酵性淀粉含量，不能够准确的评估酒糟的可利用价值。
发明内容
本发明的目的就是提供一种测定结果准确，可为酒糟的综合利用提供理论依据的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法。
本发明的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，包括以下步骤：
1、试样处理：
（1）、液化，每甑各取等量刚出甑的酒糟，相互混合均匀，称取酒糟样品质量m=50-100g，置于放有折叠滤纸的漏斗内，用300ml、85%的乙醇洗去可溶性糖类，滤干乙醇，将残留物移入500 ml烧杯内，并用100ml水洗滤纸，洗液并入烧杯内，再加入150 ml水于烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15min，使淀粉糊化，冷却至60℃以下，加20ml、5g/L的淀粉酶溶液，在55-60℃保温1h，并同时搅拌，然后取1滴此液加1滴碘溶液，若显蓝色，再加热糊化并加淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止，加热至沸，冷后移入250 ml三角瓶中，并加水至刻度，混匀；
所述的碘溶液：称取 3.6g 碘化钾溶于20m水中，加入1.3 g碘，溶解后加水定容至100ml；
所述的淀粉酶为α-淀粉酶，酶活力大于或等于20,000u/g。
（2）、蒸煮，将装有已液化酒糟糊的三角瓶用棉塞和防水纸封口后，放入高压蒸汽灭菌锅，于压力0.1MPa保压1h，取出，冷却至60℃。
（3）、糖化，用硫酸溶液调整蒸煮液pH值至4.4-4.7，按每克酒糟加入150u-200u糖化酶，糖化酶的活力大于或等于50,000u/g，当糖化酶活力为100000U /g，酒糟的量为50g时，加入糖化酶的量为50×200÷100000g=0.1g，搅匀，放入60℃恒温箱内，糖化60min，冷却至30℃- 35℃。
（4）过滤，糖化液用脱脂棉过滤，滤液用250ml容量瓶接收，用水洗涤残渣，用水定容至刻度，摇匀。
2、测定：
（1）、标定碱性酒石酸铜溶液，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，沸腾时使溶液均匀，并防止暴沸，从滴定管滴加9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒一滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好退去即为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同法平行操作三份，取其平均值，计算每10ml（甲乙液各5ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量A（mg）；
所述的葡萄糖标准溶液：称取1g，经过98℃～100℃干燥2h的葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸，并以水定容至1000ml，此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。
（2）、试样溶液预测，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾，以先快后慢的速度从滴定管中滴加试样溶液，待溶液颜色变浅时，再以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好退去为终点，记录样液消耗体积。
（3）、试样溶液测定，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的试样溶液至锥形瓶中，并在2min内加热至沸，保持沸腾继续以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗样液体积V。
所述的碱性酒石酸铜甲液：称15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.050g 亚甲蓝，溶于水中并定容至1000ml；
所述的碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠、75g氢氧化钠，溶于水中，完全溶解后，用水定容至 1000ml。
3、结果计算，试样中葡萄糖的含量 X﹦                                                
Figure 688351DEST_PATH_IMAGE001
×100 ，
式中：   
X-----酒糟中还原糖的含量（以葡萄糖计），单位为克每百克；
A---- 碱性酒石酸铜溶液(甲液、乙液各半)相当于葡萄糖的质量（mg）；
m------称取酒糟的质量，单位为克；
V------测定时平均消耗酒糟溶液的体积，单位为毫升；
酒糟中可发酵性淀粉的含量 Y﹦X×0.9 ，式中：
Y------酒糟中可发酵性淀粉的含量，单位为克每百克；
0.9----以葡萄糖计换算成淀粉的换算系数。
本发明的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，利用试样经去除可溶性糖后，淀粉用淀粉酶水解成糊精和小分子双糖，再用糖化酶糖化成可发酵性的单糖，最后按还原糖测定，并折算成可发酵性淀粉含量，通过测定酒糟中的可发酵性淀粉，为酒糟的综合利用提供理论依据。所用的仪器和药品简单，能准确快速测定酒糟中可发酵性淀粉含量，通过先测定可发酵性淀粉含量，判定酒糟能否进一步利用。
具体实施方式
一种酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法， 包括以下步骤：
1、试样处理：
（1）称取酒糟50g用300ml 85%乙醇冲洗酒糟样品，过滤掉乙醇，将残留物500 ml烧杯内，并用100ml水洗滤纸，洗液并入烧杯内，再加入150 ml水于烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，冷却至60℃以下，加20 ml淀粉酶溶液，在55℃-60℃保温1h，并同时搅拌，然后取1滴此液加1滴碘溶液，若显蓝色，再加热糊化并加淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止，50g酒糟的用酶量40ml，加热至沸，冷后移入250 ml三角瓶中，并加水至刻度。
（2）、蒸煮，将装有已液化好酒糟糊的三角瓶用棉塞和防水纸封口后，放入高压蒸汽灭菌锅，于压力0.1MPa保压1h，取出，冷却至60℃。
（3）、糖化，用10%的硫酸溶液调整蒸煮液pH值至4.6，加入糖化酶量0.1g，搅匀，放入60℃恒温箱内，糖化60min，冷却至30℃-35℃。  
（4）过滤，糖化液用脱脂棉过滤，滤液用250ml容量瓶接收，用水洗涤残渣，用水定容至刻度，摇匀。
2、测定：
（1）、标定碱性酒石酸铜溶液，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒一滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好退去即为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同法平行操作三份，取其平均值为13.3ml，计算每10ml（甲乙液各5ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量A（mg），这里 A=13.3mg。
（2）、试样溶液预测，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾，以先快后慢的速度从滴定管中滴加试样溶液，待溶液颜色变浅时，再以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好退去为终点，记录样液消耗体积，为3ml。 
（3）、试样溶液测定，吸取5.0ml 碱性酒石酸铜甲液及 5.0 ml 碱性酒石酸铜乙液，置于150ml 锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加4 ml 的试样溶液至锥形瓶中，使在2min 内加热至沸，保持沸腾继续以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗样液体积V，平均值为2.9ml。
3、结果计算：
试样中葡萄糖的含量 X﹦
Figure 357230DEST_PATH_IMAGE001
×100 
= 
Figure 537544DEST_PATH_IMAGE002
×100
= 2.29(g/100g)
酒糟中可发酵性淀粉的含量 Y﹦2.29×0.9 
= 2.06 (g/100g)。

Claims (6)

1.一种酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，其特征在于：它包括以下步骤：
（1）、试样处理：
（a）、液化，每甑各取等量刚出甑的酒糟，相互混合均匀，称取酒糟样品质量m=50-100g，置于放有折叠滤纸的漏斗内，用300ml、85%的乙醇洗去可溶性糖类，滤干乙醇，将残留物移入500ml烧杯内，并用100ml水洗滤纸，洗液并入烧杯内，再加入150ml水于烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15min，使淀粉糊化，冷却至60℃以下，加20ml、5g/L的淀粉酶溶液，在55-60℃保温1h，并同时搅拌，然后取1滴此液加1滴碘溶液，若显蓝色，再加热糊化并加淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止，加热至沸，冷后移入250ml三角瓶中，并加水至刻度，混匀；
（b）、蒸煮，将装有已液化酒糟糊的三角瓶用棉塞和防水纸封口后，放入高压蒸汽灭菌锅，于压力0.1MPa保压1h，取出，冷却至60℃；
（c）、糖化，用硫酸溶液调整蒸煮液pH值至4.4-4.7，按每克酒糟加入150u-200u糖化酶，搅匀，放入60℃恒温箱内，糖化60min，冷却至30℃-35℃；
（d）过滤，糖化液用脱脂棉过滤，滤液用250ml容量瓶接收，用水洗涤残渣，用水定容至刻度，摇匀；
（2）测定：
（a）、标定碱性酒石酸铜溶液，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒一滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好退去即为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同法平行操作三份，取其平均值，计算每10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量A；
（b）、试样溶液预测，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾，以先快后慢的速度从滴定管中滴加试样溶液，待溶液颜色变浅时，再以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好退去为终点，记录样液消耗体积；
（c）、试样溶液测定，吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml碱性酒石酸铜乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的试样溶液至锥形瓶中，并在2min内加热至沸，保持沸腾继续以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗样液体积V； 
（3）、结果计算，试样中葡萄糖的含量
Figure RE-FDA00001961180600021
式中：
X-----酒糟中葡萄糖计的含量，单位为克每百克；
A----碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量；
m------称取酒糟的质量；
V------测定时平均消耗酒糟溶液的体积；
酒糟中可发酵性淀粉的含量Y﹦X×0.9，式中：
Y------酒糟中可发酵性淀粉的含量，单位为克每百克。
2.如权利要求1所述的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，其特征在于：所述的碘溶液制备方法，称取 3.6g 碘化钾溶于20m水中，加入1.3 g碘，溶解后加水定容至100ml。
3.如权利要求1所述的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，其特征在于：所述的淀粉酶为α-淀粉酶，酶活力大于或等于20000u/g。
4.如权利要求1所述的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，其特征在于：糖化酶的活力大于或等于50000u/g。
5.如权利要求1所述的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，其特征在于：所述的葡萄糖标准溶液制备方法，称取1g，经过98℃～100℃干燥2h的葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸，并以水定容至1000ml，此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。
6.如权利要求1所述的酒糟中可发酵性淀粉酶水解测定方法，其特征在于：所述的碱性酒石酸铜甲液制备方法，称15g硫酸铜及0.050g 亚甲蓝，溶于水中并定容至1000ml；所述的碱性酒石酸铜乙液制备方法，称取50g酒石酸钾钠、75g氢氧化钠，溶于水中，完全溶解后，用水定容至 1000ml。
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