CN102732509A - 一种从发酵菌体中提取核糖核酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提取核糖核酸的方法，该方法包括：（1）将发酵菌体制备成悬浊液；（2）将步骤（1）所得悬浊液与中性盐溶液接触，以对菌体中的核糖核酸进行浸提，所述浸提的方法包括：在pH值为6.5-8.5，温度为70-110℃条件下，将接触后的混合物静置；（3）将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离，并将得到的上清液进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸。本发明提供的提取核糖核酸的方法，得到的核糖核酸的纯度高、提取率高、色泽浅；可以省去预处理工序，减少了废水的排放量，减轻了环保压力，降低了成本；相对于浓盐法，大大降低了盐的用量，进一步节省了成本。本发明的方法可广泛应用于工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种从发酵菌体中提取核糖核酸的方法。
背景技术
核糖核酸（RNA）具有末梢血管的扩张作用，有增加血色素浓度、增加红白血球数量的作用，维持机体免疫功能、抗氧化、提高机体蛋白质和铁的利用率的功效，因此，RNA提取技术研究越来越受到人们的关注。
发酵工序一般会产生大量的发酵菌体，而从发酵菌体中提取RNA是扩大发酵副产值的重要部分。
目前从发酵菌体中提取RNA的方法需要将含有菌体的发酵残渣经过洗涤、离心、脱杂或脱苦、真空干燥等预处理工序后配成一定浓度的悬浊液然后进行提取。其中，提取的方法主要为稀碱法或浓盐法。
稀碱法是使用稀碱使发酵残渣中的菌体细胞裂解，然后用酸中和，离心分离后的上清液用乙醇沉淀或调pH值利用等电点沉淀得到核糖核酸。这种方法提取时间长，一般需要18h左右；提取需要在110-120℃的高温下进行，RNA在此条件下不稳定，容易分解；因此，提取得到的核糖核酸纯度低且色泽较深。
浓盐法是利用高浓度的盐改变细胞膜的透性，使RNA释放出来，离心分离后的上清液用乙醇沉淀或调pH值利用等电点沉淀得到核糖核酸。这种方法提取时要消耗大量的盐，成本较高，因此通常重复利用盐，但是，如果将盐反复利用，对提取的核糖核酸纯度影响不大，但对提取率的影响较大，会降低提取率，而影响提取的收益。
此外，采用上述现有技术的方法在原料预处理时还会消耗大量的工艺水，从而增加废水的排放量。
发明内容
本发明的目的是为了克服采用现有技术的方法提取得到的RNA的提取率低、提取得到的RNA的纯度低、色泽较深的缺陷，而提供一种新的从发酵菌体中提取核糖核酸的方法。
本发明的发明人在研究中意外发现，将含有菌体的发酵残渣制成悬浊液后，与中性盐溶液接触，在一定pH值和一定温度下浸提，可使RNA从菌体细胞中充分释放出来，提取得到的核糖核酸的纯度较高、色泽较浅，RNA的提取率较高，且耗盐量低、条件温和，且不需对含有菌体的发酵残渣进行预处理，从而简化了工艺。因此，为了实现上述目的，本发明提供了一种提取核糖核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：
（1）将发酵菌体制备成悬浊液；
（2）将步骤（1）所得悬浊液与中性盐溶液接触，以对菌体中的核糖核酸进行浸提，所述浸提的方法包括：在pH值为6.5-8.5，温度为70-110℃的条件下，将接触后的混合物静置；
（3）将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离，并将得到的上清液进行等电点沉淀，并分离得到沉淀核糖核酸。
优选地，所述方法还包括在将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离之前，将所述浸提产物进行酶水解，以除去浸提产物中的蛋白质。
优选地，所述方法还包括对步骤（3）得到的沉淀核糖核酸进行醇洗。
本发明提供的提取核糖核酸的方法，提取得到的核糖核酸的纯度高、提取率高、色泽浅；省去了对含有菌体的发酵残渣进行预处理的复杂工序，减少了废水的排放量，减轻了环保压力，降低了成本；相对于浓盐法，大大降低了盐的用量，进一步节省了成本。本发明方法可广泛应用于工业生产。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
本发明提供了一种从发酵菌体中提取核糖核酸的方法，该方法包括：
（1）将发酵菌体制备成悬浊液；
（2）将步骤（1）所得悬浊液与中性盐溶液接触，以对菌体中的核糖核酸进行浸提，浸提的方法包括：在pH值为6.5-8.5，温度为70-110℃的条件下，将接触后的混合物静置；
（3）将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离，并将得到的上清液进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸。
本发明中，所述发酵菌体可以为各种用于发酵的菌体，通常为菌体残渣，对于固体发酵来说，例如酒精发酵，是指从发酵产物中蒸馏出酒精后剩余的菌体残渣；对于液体发酵来说，例如赖氨酸发酵以及谷氨酸发酵，是指将发酵产物进行固液分离后所得的固相，即菌体残渣。本发明中，对于发酵菌体无特殊要求，可以是采用本领域常规方法得到的菌体残渣，例如可以是谷氨酸发酵菌体残渣、赖氨酸发酵菌体残渣和酒精发酵菌体残渣中的一种或多种，优选酒精发酵菌体残渣。
本发明中，所述悬浊液的固含量的可选择范围较宽，为了更加利于RNA的提取，优选情况下，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量优选为5-15g/100mL，即以悬浊液中的菌体计，将发酵菌体配制成5-15g/100mL的悬浊液；以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量进一步优选为6-12g/100mL，即以悬浊液中的菌体计，将发酵菌体配制成6-12g/100mL的悬浊液。
根据本发明，尽管悬浊液与中性盐溶液接触，在pH值为6.5-8.5，温度为70-110℃条件下静置，即可使菌体中的RNA释放出来，但优选情况下，在pH值为7-8，温度为80-100℃的条件下，可使菌体中的RNA更容易地释放出来，从而进一步提高RNA的提取率。
本发明中，中性盐的用量只要保证菌体中的RNA释放出来即可，优选情况下，相对于悬浊液中的1g菌体，与悬浊液接触的中性盐的用量优选为0.72-1.20g，进一步优选为0.8-1.0g。中性盐溶液的浓度优选为5-12重量%，进一步优选为6-10重量%。本发明对于中性盐的种类无特殊要求，只要在上述pH值和温度条件下能使菌体中的RNA释放出来即可，例如可以为NaCl、KCl、CaCl2和MgCl2中的一种或多种，优选为NaCl。本领域技术人员应该理解的是，为了使悬浊液与中性盐更好地接触，可以采用边搅拌边向悬浊液中加入中性盐溶液的方式，直至二者混合均匀。
本发明中，对于静置的时间无具体要求，只要使菌体中的RNA释放出来即可，例如可以静置1-4h，优选2-3h。
本发明中，将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离，对于固液分离的方法无特殊要求，可以采用本领域常用的固液分离方法，例如沉降、过滤、离心分离等，优选离心分离。对于离心分离的转速和时间无特殊要求，只要达到固液分离的目的即可，例如转速可以为3000-4500rpm/min，优选为3800-4200rpm/min，时间可以为10-30min，优选为15-25min。
本发明中，等电点沉淀的条件包括：pH值为2.0-2.5，温度为0-10℃，时间为0.25-1.0h。进行等电点沉淀并分离得到沉淀核糖核酸，分离的方法与前文所述固液分离相同，在此不再赘述。沉淀核糖核酸是指进行等电点沉淀得到的沉淀，由于沉淀中主要成分为核糖核酸，因此，称为沉淀核糖核酸。
采用前文所述方法，即可实现本发明的目的，即提取核糖核酸纯度高、提取率高、色泽浅，但为了进一步提高提取核糖核酸纯度、提取率，并进一步降低色泽，本发明方法优选还包括在将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离之前，将浸提产物进行酶水解，以除去浸提产物中的蛋白质。
本发明中，酶水解的方法即本领域常用的包括在酶水解条件下将浸提产物与蛋白酶接触。对于本发明中的酶水解条件，本发明的发明人经过大量实验发现，在包括pH值为6.5-8.5，温度为30-50℃，时间为1-4h的条件下，将浸提产物与蛋白酶接触，可以使浸提产物中的蛋白充分水解。为了使浸提产物中的蛋白进一步充分水解，pH值优选为7.0-8.0，温度优选为35-45℃，时间优选为2-3h。本领域的技术人员应该理解的是，在酶水解后还应该进行灭酶的步骤，对于灭酶的方法无特殊要求，可以采用本领域常规采用的方法，例如可以在80-110℃下水浴10-15min。
本发明中，酶水解时，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的用量优选为30-60U，进一步优选为45-55U。酶水解所采用的蛋白酶可以采用本领域常用的各种蛋白酶，优选为碱性蛋白酶和/或中性蛋白酶，其中，碱性蛋白酶例如枯草杆菌碱性蛋白酶，中性蛋白酶例如枯草杆菌中性蛋白酶；进一步优选为中性蛋白酶。
本发明中，酶活力单位的定义为：在40℃，pH7.5条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸所需的酶量为一个酶活力单位，即1U。
为了进一步提高得到的核糖核酸的纯度，本发明方法优选还包括对步骤（3）得到的沉淀核糖核酸进行醇洗。对于醇洗的方法无特殊要求，可以采用本领域常用的各种方法，对于醇的种类和用量也无特殊要求，可以采用本领域常用的种类和用量，例如采用无水乙醇对沉淀核糖核酸进行醇洗，无水乙醇的用量为沉淀核糖核酸体积的2-4倍。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
实施例
以下的实施例将对本发明作进一步的说明，但并不因此限制本发明。
在下述实施例和对比例中：
各实施例和对比例均采用同一罐批的酒精发酵残渣（RNA含量为5重量%）。
RNA纯度计算：（1）纯核糖核酸溶液的A260/A280比值为2，由于蛋白质的最大吸收峰在波长280nm处，样品中若还有蛋白质的杂质，则A260/A280比值要下降，因此，核糖核酸样品的纯度通常可以用A260/A280比值来表示，即RNA纯度%=(A260/A280)/2×100%。
RNA的提取率：提取获得的核糖核酸的重量占发酵菌体重量的百分比。
实施例1
本实施例用于说明本发明提供的从发酵菌体中提取核糖核酸的方法。
称取酒精发酵菌体残渣1000g，将酒精发酵菌体残渣制备成悬浊液，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量为10g/100mL，向悬浊液中加入浓度为8重量%的NaCl溶液以对菌体中的核糖核酸进行浸提，相对于悬浊液中的1g菌体，NaCl的加入量为0.8g，边加入边搅拌直至混合均匀，浸提的条件为：pH值为7.5，温度为90℃，静置2.5h，得到浸提产物。然后在pH值为7.5下，向得到的浸提产物中加入枯草杆菌中性蛋白酶（购于湖北康宝泰精细化工有限公司，型号ZC-7，酶活力为1500000U/g，下同），相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的加入量为50U，在40℃下水浴2.5h，然后升温至90℃，水浴12min，然后以4000rpm/min离心分离20min，取上清液，用盐酸调pH值2.5，在5℃下静置0.75h进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸，将沉淀核糖核酸用无水乙醇反复清洗2-3次，无水乙醇的体积为沉淀核糖核酸体积的3倍。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例2
本实施例用于说明本发明提供的从发酵菌体中提取核糖核酸的方法。
称取酒精发酵菌体残渣600g，将酒精发酵菌体残渣制备成悬浊液，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量为6g/100mL，向悬浊液中加入浓度为6重量%的NaCl溶液以对菌体中的核糖核酸进行浸提，相对于悬浊液中的1g菌体，NaCl的加入量为1.0g，边加入边搅拌直至混合均匀，浸提的条件为：pH值为7，温度为80℃，静置2h，得到浸提产物。然后在pH值为7下，向得到的浸提产物中加入枯草杆菌中性蛋白酶，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的加入量为45U，在35℃下水浴2h，然后升温至80℃，水浴15min，然后以3800rpm/min离心分离25min，取上清液，用盐酸调pH值2.0，在0℃下静置0.25h进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸，将沉淀核糖核酸用无水乙醇反复清洗2-3次，无水乙醇的体积为沉淀核糖核酸体积的2倍。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例3
本实施例用于说明本发明提供的从发酵菌体中提取核糖核酸的方法。
称取酒精发酵菌体残渣1200g，将酒精发酵菌体残渣制备成悬浊液，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量为12g/100mL，向悬浊液中加入浓度为10重量%的NaCl溶液以对菌体中的核糖核酸进行浸提，相对于悬浊液中的1g菌体，NaCl的加入量为0.9g，边加入边搅拌直至混合均匀，浸提的条件为：pH值为8，温度为100℃，静置3h，得到浸提产物。然后在pH值为8下，向得到的浸提产物中加入枯草杆菌中性蛋白酶，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的加入量为55U，在45℃下水浴3h，然后升温至110℃，水浴10min，然后以4200rpm/min离心分离15min，取上清液，用盐酸调pH值2.5，在10℃下静置1h进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸，将沉淀核糖核酸用无水乙醇反复清洗2-3次，无水乙醇的体积为沉淀物体积的4倍。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例4
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量为15g/100mL。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例5
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，相对于悬浊液中的1g菌体，NaCl的加入量为1.2。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例6
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，浸提的pH值为6.5。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例7
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，浸提的温度为70℃。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例8
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，浸提静置的时间为1h。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例9
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的用量为30U。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例10
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，酶水解的温度为40℃。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例11
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，酶水解的时间为1h。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例12
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，不进行酶水解的步骤。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
实施例13
按照实施例1的方法提取核糖核酸，不同的是，进行酒精发酵菌体残渣的预处理工序：将1000g的酒精发酵菌体残渣用胶带机洗水2-3次，水的用量为2L，洗后过筛除杂，再以3500rpm/min离心分离10min沉淀发酵菌体，取沉淀加入0.1mol/L碳酸氢钠溶液4L，搅拌均匀，离心后再用胶带机洗水2-3次，水的用量为2L，然后在105℃下真空干燥至恒重，得到干发酵菌体。
将干发酵菌体制备成悬浊液，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量为10g/100mL。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
对比例1
本对比例为稀碱法提取核糖核酸。
将1000g的酒精发酵菌体残渣用胶带机洗水2-3次，水的用量为2L，洗后过筛除杂，再以3500rpm/min离心分离10min沉淀发酵菌体，取沉淀加入0.1mol/L碳酸氢钠溶液4L，搅拌均匀，离心后再用胶带机洗水2-3次，水的用量为2L，然后在105℃下真空干燥至恒重，得到干发酵菌体。
将干发酵菌体制备成悬浊液，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量为10g/100mL，调节悬浊液的pH值为9.0后迅速升温至120℃，然后迅速降温至37℃并保温18h，然后以4000rpm/min离心分离20min，取上清液，用盐酸调pH值2.5，在5℃下静置0.75h进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸，将沉淀核糖核酸用无水乙醇反复清洗2-3次，无水乙醇的体积为沉淀体积的3倍，清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
对比例2
本对比例为浓盐法提取核糖核酸。
将1000g的酒精发酵菌体残渣用胶带机洗水2-3次，水的用量为2L，洗后过筛除杂，再以3500rpm/min离心分离10min沉淀发酵菌体，取沉淀加入0.1mol/L碳酸氢钠溶液4L，搅拌均匀，离心后再用胶带机洗水2-3次，水的用量为2L，然后在105℃下真空干燥至恒重，得到干发酵菌体。
将干发酵菌体制备成悬浊液，以悬浊液中的菌体计，悬浊液的固含量为10g/100mL，向悬浊液中加入浓度为8重量%的NaCl溶液以对菌体中的核糖核酸进行浸提，相对于悬浊液中的1g菌体，NaCl的加入量为2.5g，边加入边搅拌直至混合均匀，然后调pH值为4.5并迅速升温至110℃保温2.5h，然后迅速冷却至10℃，然后以4000rpm/min离心分离20min，取上清液，用盐酸调pH值2.5，在5℃下静置0.75h进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸，将沉淀核糖核酸用无水乙醇反复清洗2-3次，无水乙醇的体积为沉淀核糖核酸体积的3倍。清洗后测定并计算核糖核酸纯度、提取率、记录沉淀颜色，结果见表1。
表1
| 核糖核酸纯度（%） | 提取率（%） | 颜色 | |
| 实施例1 | 92.46 | 6.15 | 乳白色 |
| 实施例2 | 90.15 | 5.25 | 乳白色 |
| 实施例3 | 91.86 | 5.98 | 乳白色 |
| 实施例4 | 89.50 | 5.84 | 浅棕色 |
| 实施例5 | 88.45 | 5.47 | 浅棕色 |
| 实施例6 | 89.65 | 3.84 | 浅棕色 |
| 实施例7 | 82.62 | 3.87 | 浅棕色 |
| 实施例8 | 80.32 | 3.34 | 浅棕色 |
| 实施例9 | 86.50 | 3.59 | 浅棕色 |
| 实施例10 | 82.15 | 3.64 | 浅棕色 |
| 实施例11 | 80.20 | 4.37 | 浅棕色 |
| 实施例12 | 79.44 | 4.15 | 浅棕色 |
| 实施例13 | 92.25 | 6.08 | 乳白色 |
| 对比例1 | 32.82 | 1.03 | 褐色 |
| 对比例2 | 78.80 | 2.12 | 棕色 |
将实施例12与对比例1进行比较可以看出，本发明方法比稀碱法得到的核糖核酸的纯度高、提取率高、色泽浅；将实施例12与对比例2进行比较可以看出，本发明方法与浓盐法得到的核糖核酸的纯度虽然相当，但是本发明方法的提取率要远高于浓盐法，色泽较浅，且盐的用量大大低于浓盐法。
将实施例1与实施例4进行比较可以看出，悬浊液中的固含量控制在本发明优选的范围内，更有利于核糖核酸的提取；将实施例1与实施例5进行比较可以看出，NaCl的加入量控制在本发明优选的范围内，更有利于核糖核酸的提取；分别将实施例1与实施例6-8进行比较可以看出，浸提的pH值、浸提的温度和浸提静置的时间控制在本发明优选的范围内，更有利于核糖核酸的提取；分别将实施例1与实施例9-11进行比较可以看出，蛋白酶的用量、酶水解的温度和酶水解的时间控制在本发明优选的范围内，更有利于核糖核酸的提取；将实施例1与实施例12进行比较可以看出，进行酶水解的步骤，更有利于核糖核酸的提取；将实施例1与实施例13进行比较可以看出，采用本发明方法，是否进行酒精发酵菌体残渣的预处理工序对核糖核酸的提取基本上没有影响，因此，本发明方法可以省去预处理工序，从而降低成本。
本发明提供的提取核糖核酸的方法，可以省去对含有菌体的发酵残渣进行预处理的复杂工序，减少了废水的排放量，减轻了环保压力，降低了成本；提取得到的核糖核酸纯度高、提取率高、色泽浅；相对于浓盐法，大大降低了盐的用量，进一步节省了成本。本发明方法可广泛应用于工业生产。
Claims (15)
1.一种从发酵菌体中提取核糖核酸的方法，其特征在于，所述方法包括：
（1）将发酵菌体制备成悬浊液；
（2）将步骤（1）所得悬浊液与中性盐溶液接触，以对菌体中的核糖核酸进行浸提，所述浸提的方法包括：在pH值为6.5-8.5，温度为70-110℃的条件下，将接触后的混合物静置；
（3）将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离，并将得到的上清液进行等电点沉淀，分离得到沉淀核糖核酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（1）中，以所述悬浊液中的菌体计，将所述发酵菌体配制成5-15g/100mL的悬浊液。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，步骤（1）中，以所述悬浊液中的菌体计，将所述发酵菌体配制成6-12g/100mL的悬浊液。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，所述发酵菌体选自谷氨酸发酵菌体残渣、赖氨酸发酵菌体残渣和酒精发酵菌体残渣中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（2）中，相对于悬浊液中的1g菌体，所述中性盐的用量为0.72-1.2g；所述中性盐溶液的浓度为5-12重量%；所述中性盐选自NaCl、KCl、CaCl2和MgCl2中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（2）中，浸提的条件包括：pH值为7-8，温度为80-100℃，静置时间为1-4h。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤（3）中等电点沉淀的条件包括：pH值为2.0-2.5，温度为0-10℃，时间为0.25-1.0h。
8.根据权利要求1-7中任意一项所述的方法，其中，所述方法还包括在将步骤（2）得到的浸提产物进行固液分离之前，将所述浸提产物进行酶水解，以除去浸提产物中的蛋白质。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述酶水解的方法包括在酶水解条件下将浸提产物与蛋白酶接触，所述酶水解条件包括pH值为6.5-8.5，温度为30-50℃，时间为1-4h。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述酶水解条件包括pH值为7.0-8.0，温度为35-45℃，时间为2-3h。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的用量为30-60U。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，相对于悬浊液中的1g菌体，蛋白酶的用量为45-55U。
13.根据权利要求9-12中任意一项所述的方法，其中，所述蛋白酶为碱性蛋白酶和/或中性蛋白酶；所述碱性蛋白酶为枯草杆菌碱性蛋白酶，所述中性蛋白酶为枯草杆菌中性蛋白酶。
14.根据权利要求1-13中任意一项所述的方法，其中，所述方法还包括对步骤（3）得到的沉淀核糖核酸进行醇洗。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，采用无水乙醇对沉淀核糖核酸进行醇洗，所述无水乙醇的用量为沉淀核糖核酸体积的2-4倍。
Priority Applications (1)
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| CN2012102500883A CN102732509A (zh) | 2012-07-19 | 2012-07-19 | 一种从发酵菌体中提取核糖核酸的方法 |
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| CN102174512A (zh) * | 2011-02-23 | 2011-09-07 | 武汉工业学院 | 一种酵母生产酵母多糖及核苷酸的工艺方法 |
-
2012
- 2012-07-19 CN CN2012102500883A patent/CN102732509A/zh active Pending
Patent Citations (2)
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| CN102174512A (zh) * | 2011-02-23 | 2011-09-07 | 武汉工业学院 | 一种酵母生产酵母多糖及核苷酸的工艺方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 谢宪章: "味精生产废液中菌体的开发利用---RNA提取法的研究", 《天然产物研究与开发》 * |
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