CN102703540B - 一种基于代谢参数our补糖发酵生产沙利霉素工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种沙利霉素的发酵工艺优化方法，特别是涉及一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，选择在糖油转化结束后,当发酵进入菌体代谢平稳期时，即OUR稳定期，流加补糖，减弱了“葡萄糖效应”，使得产品效价提高，同时降低了生产成本。本发明的技术成熟，适合工业规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及沙利霉素的发酵工艺优化方法，特别是涉及一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺。
背景技术
沙利霉素是一种聚醚类一元羧酸抗生素，具有特殊的环状结构，是典型的离子载体抗生素。沙利霉素是由白色链霉菌(Streptomysis albus)产生的聚醚类离子载体型动物专用抗生素, 由于其广谱高效的抗球虫病性能而得到广大饲养者的认可。
目前沙利霉素的生产主要通过生物发酵的方法进行，主要以豆油作为其主要的发酵碳源，例如中国专利CN1230596A公开的，但是随着近年来油的价格持续上升，沙利霉素的发酵成本相应有了很大的提高。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高沙利霉素效价同时降低生产成本的基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
发酵培养：将经斜面培养和种子培养所得种子液接种至装有培养基的发酵罐，发酵过程实时监测OUR,当糖油转换期结束后进入OUR稳定期，开始流加补糖；发酵进行280-320h放罐；所述糖为蔗糖或葡萄糖的一种或两种。
当发酵完成糖油转换阶段后，OUR菌体摄氧率和CER二氧化碳（CO2）释放率逐步上升，RQ呼吸商（RQ=CER/OUR）基本稳定在0.65，这意味着菌体开始进入产素阶段。若此时在糖油转换之后立即补糖虽然能够大幅度提高菌浓，促进菌体的生长，但对产素方面存在一定的抑制作用，这是由于葡萄糖或蔗糖作为速效碳源被菌体快速分解利用时，往往对其他代谢途径中的酶（包括抗生素合成酶和其他酶系）有阻遏或抑制作用，即“葡萄糖效应”。
OUR是菌体代谢活力的表征，在发酵初期OUR快速上升；当培养基中的葡萄糖含量已经不能满足菌体正常的生长所需，发酵进入葡萄糖限制阶段，OUR由升转降，此时发酵进入糖油转换期，OUR会经历一段时间的低迷，在该过程中菌体开始逐步诱导与产素相关的酶系；
当菌体完成了糖油转换，进入了完全以棕榈油作为碳源的阶段时，OUR逐步缓慢上升，这标志着菌体的活力开始恢复，同时也表明菌体进入产素阶段。当表征菌体活力的OUR上升到某一数值后，OUR便开始在该数值左右进行小幅度波动，没有大幅度的增长或降低，即OUR稳定期。
菌体进入产素阶段后，当在OUR上升到某一数值后2-3h内，OUR值的波动均不超过15%，表明进入OUR稳定期，可开始流加糖，对培养基进行补糖。
当菌体活力降低时，表现为OUR快速下降，作为放罐信号，表明可以放罐。
本发明选择在糖油转化结束当发酵进入菌体代谢平稳期时，即OUR稳定期，流加补糖，减弱了“葡萄糖效应”，使得产品效价提高，同时降低了生产成本。本发明的技术成熟，适合工业规模化生产。
作为优选，所述发酵培养条件是：接种量8-12%，培养温度30-35℃,压力0.04-0.06MPa，DO控制在30%-100%,转速250-500rpm。
作为优选，所述的斜面培养是：将菌株接种到斜面培养基上，26-30℃下培养6-8天。
作为优选，所述的种子培养是：将经斜面培养所得孢子接入种子培养基，在30-35℃、220-260 r/min的条件下培养25-30h。
作为优选，所述斜面培养基的组成是：可溶性淀粉1-3 wt%，硫酸镁 0.02-0.08 wt%，氯化钠 0.02-0.08 wt%，牛肉膏 0.05-0.2 wt%，硝酸钾0.05-0.2 wt%，磷酸氢二钾 0.02-0.08 wt%，亚硫酸铁 0.0005-0.0015 wt%，琼脂 1-3wt%，余量的蒸馏水；所述斜面培养基的pH 值为6.5-7.5。
作为优选，所述种子培养基的组成是：葡萄糖2-8 wt%，黄豆粉;2-4 wt%，酵母粉 0.5-2wt%，轻质碳酸钙 0.1-0.4 wt%，余量为蒸馏水。
作为优选，所述发酵罐的培养基的组成是：葡萄糖2-6 wt%，棕榈油 2-8wt%，氯化钾 0.1-0.4wt%，氯化钠 0.05-0.2 wt%，豆粕粉 0.1-0.8 wt%，胚芽粉 0.2-1wt%，磷酸氢二钾 0.01-0.02wt%，硫酸镁 0.005-0.02 wt%，乳化剂 0.02-0.08wt%，硫酸铵 0.1-1wt%，轻质碳酸钙 0.1-0.5 wt%，余量为蒸馏水；所述发酵培养基pH 值为6.5-7.0。
作为优选，所述流加补糖的速率为10-50ml/h，糖的质量百分浓度为20-60%。
作为优选，所述糖为葡萄糖。
作为优选，所述糖为蔗糖。
附图说明
图1是本发明实施例1的发酵时间-OUR关系图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
下面通过实施例来进一步说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明中种子罐及发酵罐由上海国强生化工程装备有限公司生产，尾气分析仪为PS6000型生物尾气分析系统分析（重庆哈特曼测量仪器有限公司），本发明中DO为溶解氧，OUR为菌体摄氧率，CER为二氧化碳（CO2）释放率，RQ为呼吸商，RQ=CER/OUR。
本发明实施例采用的沙利霉素生产菌种是为白色链霉菌(Streptomyces albus) F2110，来自申请人自主筛选菌种。
培养基成分1：
配制斜面培养基(wt%)：可溶性淀粉1，硫酸镁 0.08，氯化钠 0.02，牛肉膏 0.2，硝酸钾0.05，磷酸氢二钾 0.08，硫酸亚铁 0.0005，琼脂 3，pH 6.5,余量为蒸馏水；并进行灭菌 。
配制种子培养基(wt%)：葡萄糖 2，黄豆粉4，酵母粉 0.5，轻质碳酸钙 0.4，余量为蒸馏水；
配制发酵培养基(wt%)：葡萄糖2，棕榈油 8，氯化钾 0.1，氯化钠 0.2，豆粕粉 0.1，胚芽粉 1，磷酸氢二钾 0.01，硫酸镁 0.02，乳化剂 0.02，硫酸铵 1，轻质碳酸钙 0.1,余量为蒸馏水；所述发酵培养基的pH值为7.0。
培养基成分2：
斜面培养基(wt%)：可溶性淀粉3，硫酸镁 0.02，氯化钠 0.08，牛肉膏 0.05，硝酸钾0.2，磷酸氢二钾 0.02，硫酸亚铁 0.0015，琼脂 1，余量的蒸馏水；所述斜面培养基的pH 值为7.5。
种子培养基(wt%)：葡萄糖 8，黄豆粉2，酵母粉 2，轻质碳酸钙 0.1，余量为蒸馏水。
发酵罐的培养基(wt%)：葡萄糖6，棕榈油 2，氯化钾 0.4，氯化钠 0.05，豆粕粉0.8，胚芽粉 0.2，磷酸氢二钾 0.02，硫酸镁 0.005，乳化剂 0.08，硫酸铵 0.1，轻质碳酸钙0.5，余量为蒸馏水；所述发酵培养基的pH值为6.5。
培养基成分3：
斜面培养基(wt%)：可溶性淀粉2，硫酸镁 0.06，氯化钠 0.04，牛肉膏 0.1，硝酸钾0.1，磷酸氢二钾 0.05，硫酸亚铁 0.001，琼脂 2，余量为蒸馏水；所述斜面培养基的pH 值为7.0。
种子培养基(wt%)：葡萄糖 5，黄豆粉3，酵母粉 1，轻质碳酸钙 0.3，余量为蒸馏水。
发酵罐的培养基(wt%)：葡萄糖3，棕榈油 5，氯化钾 0.3，氯化钠 0.15，豆粕粉 0.5，胚芽粉 0.8，磷酸氢二钾 0.015，硫酸镁 0.01，乳化剂 0.05，硫酸铵 0.5，轻质碳酸钙 0.3，余量为蒸馏水；所述发酵培养基的pH值为6.8。
实施例1：
使用培养基成分1
（1）斜面培养：将白色链霉菌菌株接种到新鲜斜面上，26℃下培养8天；
（2）种子培养：将步骤（1）所得孢子接入种子培养基，在30℃、260 r/min的条件下培养30h；
（3）发酵培养：将步骤（2）所得种子液接种至发酵罐(15L罐，灭菌后大概8升种子培养基)，接种量10%，培养温度30-35℃,压力0.05MPa， DO控制在30%以上,转速250-500rpm，当OUR趋于平稳时，开始以10ml/h流速流加质量百分浓度为60%葡萄糖。发酵280小时后放罐，效价72457u/ml，见表1。
如图1所示，0-65h为糖油转换期，OUR上升；65-110h，糖油转换期结束，OUR开始回升，此阶段称为糖油转换结束后的OUR上升期；110h后，OUR值保持在35-40mol/l/h，趋于稳定，此阶段称为糖油转换结束后的OUR稳定期。
实施例2
使用培养基成分1
（1）斜面培养：将白色链霉菌菌株接种到新鲜斜面上，30℃下培养6天；
（2）种子培养：将步骤（1）所得孢子接入种子培养基，在35℃、220 r/min的条件下培养30h；
（3）发酵培养：将步骤（2）所得种子液接种至发酵罐(30L罐，灭菌后大概16升种子培养基)，接种量10%，培养温度30-35℃,压力0.05MPa， DO控制在30%以上,转速250-500rpm，当OUR趋于平稳时，开始以25ml/h流速流加质量百分浓度为40%蔗糖。发酵300小时后放罐。效价65530u/ml。
实施例3
使用培养基成分2
（1）斜面培养：将白色链霉菌菌株接种到新鲜斜面上，28℃下培养7天；
（2）种子培养：将步骤（1）所得孢子接入种子培养基，在32℃、240 r/min的条件下培养30h；
（3）发酵培养：将步骤（2）所得种子液接种至发酵罐(45L罐，灭菌后大概24升种子培养基)，接种量10%，培养温度30-35℃,压力0.05MPa， DO控制在30%以上,转速250-500rpm，当OUR趋于平稳时，开始以30ml/h流速流加质量百分浓度为50%葡萄糖。发酵320小时后放罐。效价69875u/m。
实施例4
使用培养基成分2
（1）斜面培养：将白色链霉菌菌株接种到新鲜斜面上，26℃下培养8天；
（2）种子培养：将步骤（1）所得孢子接入种子培养基，在30℃、260 r/min的条件下培养30h；
（3）发酵培养：将步骤（2）所得种子液接种至发酵罐(15L罐，灭菌后大概8升种子培养基)，接种量10%，培养温度30-35℃,压力0.05MPa， DO控制在30%以上,转速250-500rpm，当OUR趋于平稳时，开始以10ml/h流速流加质量百分浓度为50%蔗糖。发酵300小时后放罐。效价67138u/ml。
实施例5
使用培养基成分3
（1）斜面培养：将白色链霉菌菌株接种到新鲜斜面上，30℃下培养6天；
（2）种子培养：将步骤（1）所得孢子接入种子培养基，在35℃、220 r/min的条件下培养30h；
（3）发酵培养：将步骤（2）所得种子液接种至发酵罐(30L罐，灭菌后大概16升种子培养基)，接种量10%，培养温度30-35℃,压力0.05MPa， DO控制在30%以上,转速250-500rpm，当OUR趋于平稳时，开始以50ml/h流速流加20%质量百分浓度为葡萄糖。发酵290小时后放罐。效价70246u/ml。
实施例6
使用培养基成分3
（1）斜面培养：将白色链霉菌菌株接种到新鲜斜面上，28℃下培养7天；
（2）种子培养：将步骤（1）所得孢子接入种子培养基，在32℃、240 r/min的条件下培养30h；
（3）发酵培养：将步骤（2）所得种子液接种至发酵罐(45L罐，灭菌后大概24升种子培养基)，接种量10%，培养温度30-35℃,压力0.05MPa， DO控制在30%以上,转速250-500rpm，当OUR趋于平稳时，开始以20ml/h流速流加30%质量百分浓度为蔗糖，同时以20ml/h流速流加质量百分浓度为30%葡萄糖。发酵310小时后放罐。效价65487u/ml。
对比实施例1：
将实施例1中当糖油转换期结束后OUR开始回升时开始以10ml/h流速流加质量百分浓度为60%葡萄糖，其余条件不变，经分析效价为：62547u/ml。
对比实施例2：
将实施例2中当糖油转换期结束后OUR开始回升时开始以25ml/h流速流加质量百分浓度为40%蔗糖，其余条件不变，经分析效价为：60987u/ml。
对比实施例3：
将实施例1中当糖油转换期结束后OUR开始回升时开始以30ml/h流速流加质量百分浓度为50%葡萄糖，其余条件不变，经分析效价为：65467u/ml。
对比实施例4：
将实施例4中当糖油转换期结束后OUR开始回升时开始以10ml/h流速流加质量百分浓度为50%蔗糖，其余条件不变，小时后放罐，经分析效价为：63245/ml。
对比实施例5：
将实施例5中当糖油转换期结束后OUR开始回升时开始以50ml/h流速流加质量百分浓度为20%葡萄糖，其余条件不变，小时后放罐，经分析效价为：63897 u/ml。
对比实施例6：
将实施例6当糖油转换期结束后OUR开始回升时开始以20ml/h流速流加质量百分浓度为30%蔗糖，同时以20ml/h流速流加质量百分浓度为30%葡萄糖，其余条件不变，小时后放罐，经分析效价为：61314 u/ml。
表1
由以上实施例可以看出，本发明实施例通过一种基于代谢参数OUR稳定期，流加补充葡萄糖，使得产品效价提高，同时降低了生产成本。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (8)
1. 一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于包括以下工艺步骤：
发酵培养：将经斜面培养和种子培养所得种子液接种至装有发酵培养基的发酵罐，发酵过程实时监测OUR,当发酵进程糖油转换期结束后进入OUR稳定期时开始流加补糖；发酵进行280-320h放罐；
所述糖为蔗糖或葡萄糖的一种或两种。
2. 根据权利要求1所述的一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于发酵培养条件是：接种量8-12%，培养温度30-35℃,压力0.04-0.06MPa，DO控制在30%-100%,转速250-500rpm。
3. 根据权利要求1所述的一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于所述的斜面培养是：将菌株接种到斜面培养基上，26-30℃下培养6-8天。
4. 根据权利要求1所述的一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于所述的种子培养是：将经斜面培养所得孢子接入种子培养基，在30-35℃、220-260 r/min的条件下培养25-30h。
5. 根据权利要求2所述的一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于斜面培养基的组成是：可溶性淀粉1-3 wt%，硫酸镁 0.02-0.08 wt%，氯化钠 0.02-0.08 wt%，牛肉膏 0.05-0.2 wt%，硝酸钾0.05-0.2 wt%，磷酸氢二钾 0.02-0.08 wt%，亚硫酸铁 0.0005-0.0015 wt%，琼脂 1-3wt%，余量的蒸馏水；所述斜面培养基的pH 值为6.5-7.5。
6. 根据权利要求3所述的一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于种子培养基的组成是：葡萄糖2-8 wt%，黄豆粉2-4 wt%，酵母粉 0.5-2wt%，轻质碳酸钙 0.1-0.4 wt%，余量为蒸馏水。
7. 根据权利要求1所述的一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于发酵罐的培养基的组成是：葡萄糖2-6 wt%，棕榈油 2-8wt%，氯化钾 0.1-0.4wt%，氯化钠 0.05-0.2 wt%，豆粕粉 0.1-0.8 wt%，胚芽粉 0.2-1wt%，磷酸氢二钾 0.01-0.02wt%，硫酸镁 0.005-0.02 wt%，乳化剂 0.02-0.08wt%，硫酸铵 0.1-1wt%，轻质碳酸钙 0.1-0.5 wt%，余量为蒸馏水，所述发酵培养基pH 值为6.5-7.0。
8. 根据权利要求1所述的一种基于代谢参数OUR补糖发酵生产沙利霉素工艺，其特征在于流加补糖的速率为10-50ml/h，糖的百分浓度为20-60%。
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Non-Patent Citations (8)
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| 吴访其.沙利霉素产生菌2612-45株在工业生产中的生理代谢.《中国抗生素杂志》.1996,232-233. |
| 江苏省畜牧兽医学校.聚醚类抗生素.《饲料添加剂及分析》.1998,第134-135页. * |
| 沙利霉素产生菌2612-45株在工业生产中的生理代谢;吴访其;《中国抗生素杂志》;19961231;232-233 * |
| 盐霉素发酵工艺的优化研究;蒋顺进;《今日药学》;20101031;第20卷(第10期);23-25,29 * |
| 盐霉素生物合成的研究;陈代杰;《抗生素》;19881231;第13卷(第3期);208-213 * |
| 石永芝.盐霉素发酵补油工艺研究.《山东大学学报(理学版)》.2005,第40卷(第4期),110-113. * |
| 蒋顺进.盐霉素发酵工艺的优化研究.《今日药学》.2010,第20卷(第10期),23-25,29. |
| 陈代杰.盐霉素生物合成的研究.《抗生素》.1988,第13卷(第3期),208-213. |
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