CN102675447A - 抗着丝粒抗体自身抗原及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了抗着丝粒抗体自身抗原，其为CENP-P、CENP-Q、CENP-J、CENP-M(亚型I)、CENP-T和CENP-I。本发明还提供所述的自身抗原作为生物标志物在制备自身免疫性疾病检测试剂中的应用。本发明通过构建着丝粒蛋白质芯片并与SSc血清杂交筛选到11个着丝粒蛋白质抗原，其中6个为新发现的，它们是CENP-P、CENP-Q、CENP-J、CENP-M(亚型I)、CENP-T和CENP-I。抗CENP-P和CENP-Q自身抗体在新发现的自身抗体中的阳性率较高，且与SSc患者的一些临床症状存在显著相关性，这些自身抗原可作为SSc检测的生物标志物。

Description

抗着丝粒抗体自身抗原及其应用

技术领域

本发明属于生物标志物领域，具体涉及抗着丝粒抗体自身抗原及其应用。

背景技术

抗着丝粒抗体(anticentromere antibody，ACA)是指一类识别存在于着丝粒区域的蛋白质抗原的抗体。目前已知CENP-B、CENP-A和CENP-C是ACA的三种主要自身抗原。ACA是一些自身免疫性疾病诊断的生物标记物，特别是对于局限性硬皮病(limited cutaneoussystemic sclerosis，lcSSc)的诊断具有重要意义。同时，ACA对于细胞生物学家探索和理解高度有序的染色体结构和细胞分裂的调节机理是一把利器。

ACA首次被发现是在1980年(Fritzler MJ，1980)，Fritzler等利用间接免疫荧光技术发现CREST综合征患者血清中存在可以特异性识别使细胞着丝点区域的自身抗体。目前间接免疫荧光法是最常用的检测ACA的检测方法之一，其使用的抗原基质为快速分裂的组织培养细胞系，如Hep-2细胞(人喉表皮样癌细胞)等。典型的ACA免疫荧光图谱是在分裂间期的细胞中呈现散在颗粒状荧光，而在分裂中期的细胞中呈现聚集在细胞平板上的姐妹染色单体配对点状荧光。

目前发现的ACA的主要抗原为CENP-B，CENP-A和CENP-C。由于大部分ACA阳性血清均可以识别重组CENP-B的C端和CENP-A的N端，故临床上常用的检测ACA的方法还包括使用重组的CENP-B和CENP-A进行ELISA检测和/或Western blot检测，可以大大提高灵敏度(Mahler，M.，D，2011)。也有报道称基于合成的CENP-A抗原表位多肽的ELISA检测结果也比较好(Mahler，M.，L，2010)。

ACA是公认的系统性硬皮病诊断和预后判断的重要生物标记物。虽然ACA亦在多种其他疾病患者的血清中出现过，但关于ACA对其他疾病的诊断和预后价值研究的比较少或者争议较多。

着丝粒是一个高度复杂的结构，尽管着丝粒的具体分子结构尚不是很清楚，但已知有很多着丝粒蛋白质或蛋白质复合体参与了着丝粒的构建并且在其中发挥重要作用，例如CENP-A是一种着丝粒特异性的组蛋白，细胞分裂期间CENP-A与其他蛋白质组成一个致密的颗粒状结构动粒，在细胞分裂过程中牵拉复制染色体发生分离。研究显示动粒中含有两个非常保守的蛋白质-蛋白质相互作用的网络，一个是已知的KMN(KNL1/MIND/NDC80)复合体网络，另一个是最近发现的CENP-A-NAC/CENP-A-CAD复合体网络。其中CENP-A-NAC(CENP-A Nucleosome Associated Complex)复合体至少包含CENP-A、CENP-C、CENP-H、CENP-M、CENP-N、CENP-T和MLF1IP/CENP-U等着丝粒蛋白质。CENP-A-CAD(CENP-A Nucleosome Distal Proteins)复合体至少包含CENP-I、CENP-K、CENP-L、CENP-O、CENP-P、CENP-Q、CENP-R和CENP-S等着丝粒蛋白质。CENP-A-NAC复合体与CENP-A-CAD复合体相互作用参与动粒蛋白质的组装、染色体的分离及有丝分裂的进行(Okada，M.，I.M，2006)。

随着着丝粒结构的解析和成分的鉴定，人们发现原来越多的着丝粒蛋白质成为ACA的靶标抗原。除了CENP-B，CENP-A和CENP-C外，其他CENP-自身抗原还包括在SSc血清中被发现或鉴定到的CENP-D(Kingwell B，1987，Ford AL，1998)，CENP-E(RattnerJB，1996)，和CENP-O(Saito，A，2009)以及在其他自身免疫性疾病中被发现或鉴定到的CENP-F(Rattner JB，1993)，CENP-G(He D，1998)，和CENP-H(Sugata N，1999，Hsu，T.C.2006)。目前只有CENP-B、CENP-A和CENP-C已经成功应用于临床，其他的自身抗体多数仅用于细胞生物学研究或者实验室阶段疾病相关研究。

对于组成着丝粒复杂结构的其他相关蛋白质是否也是ACA的自身抗原及其与临床症状和疾病治疗以及预后的关系等则不得而知，特别是在SSc血清中的特征及其与SSc临床症状之间的关系。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供抗着丝粒抗体自身抗原及其应用。

本发明使用临床实验室确认的ACA阳性血清与着丝粒蛋白质芯片杂交，鉴定每一份ACA阳性血清能够识别的着丝粒蛋白质自身抗原谱。结果发现35份ACA阳性SSc血清能够与芯片上的11种着丝粒蛋白质呈阳性反应，除已知的，还鉴定到6个新的着丝粒自身抗原，分别是分别CENP-P、CENP-Q、CENP-J、CENP-M(亚型I)、CENP-T和CENP-I。

进一步地，本发明还提供所述的自身抗原作为生物标志物在制备自身免疫性疾病检测试剂中的应用。

其中，所述的自身免疫性疾病优选为系统性硬皮病(SSc)。

其中，所述检测试剂为基于放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫或金免疫技术的试剂，优选的，所述的检测试剂为包被有一种或多种所述的自身抗原的抗着丝粒抗体检测芯片；或为含有包被有一种或多种所述的自身抗原的酶标板的抗着丝粒抗体ELISA检测试剂盒；或为含有一种或多种所述的自身抗原的抗着丝粒抗体Western blot检测试剂盒。

在本发明优选的实施方案中，所述检测试剂为包被有一种或多种所述的自身抗原的抗着丝粒抗体检测芯片，更优选的，所述的检测芯片还可包被CENP-B，CENP-A、CENP-C、CENP-H和CENP-O中的一种或多种抗着丝粒抗体自身抗原。当然，本领域人员还可在所述的检测芯片上包被质控阳性探针和阴性对照探针。其中，所述的质控阳性探针可为流感病毒的核心蛋白和人血清IgG中的一种或两种。所述的阴性对照探针可为GST标签蛋白和所述自身抗原的缓冲液(芯片点样缓冲液)。

进一步的，本发明还提供一种抗着丝粒抗体检测芯片，其包被一种或多种所述的自身抗原。优选的，所述的检测芯片还可包被CENP-B，CENP-A、CENP-C、CENP-H和CENP-O中的一种或多种抗着丝粒抗体自身抗原。当然，本领域人员还可在所述的检测芯片上包被质控阳性探针和阴性对照探针。其中，所述的质控阳性探针可为流感病毒的核心蛋白和人血清IgG中的一种或多种。所述的阴性对照探针可为GST标签蛋白和所述自身抗原的缓冲液(芯片点样缓冲液)。

进一步地，本发明还提供一种抗着丝粒抗体ELISA检测试剂盒，其含有酶标板，所述酶标板包被一种或多种所述的自身抗原。

优选的，所述的的酶标板还包被CENP-B，CENP-A、CENP-C、CENP-H和CENP-O中的一种或多种抗着丝粒抗体自身抗原。

进一步的，本发明还提供一种抗着丝粒抗体Western blot检测试剂盒，其含有一种或多种所述的自身抗原。

本发明通过构建着丝粒蛋白质芯片并与SSc血清杂交筛选到11个着丝粒蛋白质抗原，其中6个为新发现的，它们是CENP-P、CENP-Q、CENP-J、CENP-M(亚型I)、CENP-T和CENP-I。抗CENP-P和CENP-Q自身抗体在新发现的自身抗体中的阳性率较高。基于重组蛋白的ELISA检测结果显示抗CENP-P和CENP-Q自身抗体亦可以在临床试验方法测定为ACA阴性的血清中检测为阳性，且部分能够用Western blot验证。新发现的6种ACA，尤其是抗CENP-P抗体和抗CENP-Q抗体与SSc患者的一些临床症状存在显著相关性，这些自身抗原可作为SSc检测的生物标志物。

附图说明

图1着丝粒蛋白质芯片的构建，质量检测以及血清杂交的效果图。A为芯片上每个矩阵中着丝粒蛋白质靶标的位置图，字母代表着丝粒蛋白质的名字，M(I)和N(I)分别代表亚型I类型的CENP-M和CENP-N，M(II)和N(II)分别代表亚型II类型的CENP-M和CENP-N；Buffer表示点样缓冲液；GST表示GST标签蛋白；NP表示流感病毒核心蛋白(AIV-NP)；IgG表示人血清IgG；B为小鼠抗GST单克隆抗体检测芯片上所有探针的结果图；C为着丝粒蛋白质芯片上每种探针三个重复点之间的点样平行性分析；D-I为不同的ACA血清与芯片杂交的结果图。

图2所示为分别与芯片上16种着丝粒蛋白质抗原呈阳性反应的ACA阳性SSc血清的数量。

图3所示为每份血清的IIF检测ACA的滴度及其与芯片上每个着丝粒蛋白质抗原的反应结果。其中，灰色方格代表阳性反应；*和**分别代表相应CENP的亚型I和亚型II两种表达形式。

图4所示为基于重组CENP-P蛋白质的ELISA检测各个血清组的信号分布图。其中，检测的血清组包括ACA阳性的SSc血清、阴性SSc血清、健康人血清以及ACA阳性的SS、SLE、RA和PBC等自身免疫性疾病对照血清。横坐标为个血清组，纵坐标为以cutoff值为100个单位的血清杂交信号。

图5所示为基于重组CENP-Q蛋白质的ELISA检测各个血清组的信号分布图。其中，检测的血清组包括ACA阳性的SSc血清、阴性SSc血清、健康人血清以及ACA阳性的SS、SLE、RA和PBC等自身免疫性疾病对照血清。横坐标为个血清组，纵坐标为以cutoff值为100个单位的血清杂交信号。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1着丝粒蛋白质芯片的制备

将经酿酒酵母表达纯化的16种重组着丝粒蛋白质以及阳性对照探针(流感病毒的核心蛋白质和人血清IgG)和阴性对照探针(酵母表达GST标签蛋白，重组蛋白缓冲液(芯片点样buffer))点制到环氧基片上，每张基片上点制12个矩阵，每个矩阵呈9列×7排的排列方式，每一排有三种靶标抗原，每个靶标抗原并列重复三次点制。如图1A是芯片上每个矩阵中着丝粒蛋白质靶标的模式图。点制好的芯片放入芯片盒内抽真空处理，4℃保存过夜直到使用。

表1 UniProt数据库收录的人着丝粒蛋白质

由于芯片上所有纯化的重组着丝粒蛋白质均带有GST标签，因此我们用抗GST抗体检测该芯片，以确保芯片上每个靶标蛋白质能够被检测。同时在芯片的构建上还加入了点样buffer作为阴性对照，加入了GST标签蛋白质减少GST对自身抗体的检测以及统计结果的影响，加入AIV-NP蛋白(流感病毒核心蛋白)和人血清IgG作为监测血清杂交和荧光标记抗人二抗的阳性对照。抗GST抗体检测着丝粒蛋白质芯片的结果如下图1B所示。

如图1B所示，芯片上所有16个重组蛋白质均能够被检测到，且3个点之间有很好的平行性(如图1C)，故自制的着丝粒蛋白质芯片适合后续的着丝粒蛋白质自身抗原的筛选与鉴定工作。

实施例2 ACA阳性SSc血清杂交着丝粒蛋白质芯片筛选新的着丝粒自身抗原

本实施例共使用了35份ACA阳性SSc血清和20份ACA阴性健康人血清。

ACA阳性血清的判定：本研究使用间接免疫荧光技术(Indirectimmunofluorescence，IIF)和免疫印迹技术(immunoblot)两种技术判断ACA的阳性。两种检测技术的操作均是按照欧蒙公司提供的相关产品说明书要求操作的。间接免疫荧光技术使用的基质是商品化固定Hep2细胞，当血清滴度大于160的情况下，免疫荧光检测结果为ACA典型的荧光图谱(即在分裂间期的细胞中呈现散在颗粒状荧光，而在分裂中期的细胞中呈现聚集在细胞平板上的姐妹染色单体配对点状荧光)的时候，该血清判为ACA阳性血清。免疫印迹技术使用的是欧蒙公司生产的细胞核相关抗原免疫膜条(SystemicSclerosis Profile(Nucleoli))，每根膜条含有CENP-A和CENP-B的重组抗原，在血清稀释度为1∶100的情况下，杂交信号大于等于10的血清即可判为ACA阳性血清。当两种技术中的任何一种判定ACA阳性的时候，该血清即为ACA阳性血清。

将所选的血清与着丝粒蛋白质芯片杂交，部分SSc患者血清杂交效果图如图1D-I所示。

从图2中可以看出几乎所有的SSc血清能够识别CENP-B蛋白质探针，绝大多数能够识别CENP-A和CENP-C蛋白质探针。对于每个蛋白质探针点来说，以20份健康人血清杂交的信号值加上其3倍的标准差为判断探针点阳性的cutoff值，当每个探针的3个重复点中至少2个被判为阳性的时候，认为血清与该蛋白质探针的反应为阳性。经统计后得知，所有健康人血清与芯片上所有16个着丝粒蛋白质探针都呈阴性反应。与芯片上每一种着丝粒蛋白质呈阳性反应的ACA阳性SSc血清的数量如图2所示。每份血清与芯片上每个着丝粒蛋白质抗原的反应结果如图3所示。

从图2和图3中得知，所有35份血清中34份血清中存在抗CENP-B抗体，与CENP-C和CENP-A阳性反应的血清数分别为27份和25份，明显高于其他的着丝粒抗原。

除了CENP-B，CENP-A和CENP-C外，还发现分别有14、12、10、4、4、4、3、2份血清与芯片上的CENP-H、CENP-P、CENP-Q、CENP-J、CENP-M(亚型I)、CENP-T、CENP-O和CENP-I等着丝粒抗原杂交呈阳性反应。在这8个着丝粒蛋白质中，有报道显示抗CENP-H与CENP-O自身抗体分别在SS和SSc患者血清中发现，其余6个为新发现的。

实施例3 ELISA方法检测抗CENP-P和CENP-Q自身抗体

1.抗CENP-P自身抗体的检测

重组CENP-P蛋白质以50ng/孔的浓度包被聚苯乙烯的96孔板，4度过夜，然后1％BSA封闭过夜。待检测血清稀释度为1∶100，HRP标记小鼠抗人IgG抗体以1∶10000稀释使用，加TMB显色液，显色1.5min后终止。酶标仪检测OD450信号值。

ELISA检测ACA阳性SSc血清、ACA阴性血清SSc血清、ACA阴性血清健康人血清、以及ACA阳性的SS、RA、SLE、PBC等自身免疫性疾病对照血清中抗CENP-P的信号值分布如图4所示。

从图中可以看出，抗CENP-P抗体可以在部分ACA阳性的血清组中检测出。此外在ACA阴性组的SSc血清组中仍然可以检测出抗CENP-P抗体，而在健康人血清组中无法检出。

以健康人血清杂交信号的平均值加其5倍标准差(standarddeviation，SD)为cutoff值，定为数值100。如图4所示，所有血清杂交信号值对cutoff值的百分数即为该血清中自身抗体的单位值。统计各血清组中抗CENP-P阳性血清的比例以及各对照血清组与ACA阳性的SSc血清组的显著性差异计算如下表2所示。

表2基于重组CENP-P蛋白质的ELISA检测各个血清组中抗CENP-P自身抗体阳性血清的个数

p值计算的是各对照组中阳性比例与35份ACA阳性血清组之间的显著性差异统计

从表2中可以看出，抗CENP-P抗体在ACA阳性的SSc中的阳性率最高，为40％(14/35)，在ACA阴性SSc血清组的阳性率为11.3％(17/151)。在健康人血清组中没有检测出抗CENP-P抗体，与芯片的杂交结果一致。在ACA阳性的SS、SLE、RA、PBC等自身免疫性疾病对照组血清中的阳性率分别为：5.6％(1/18)、20％(4/20)、15.4(2/13)、27.8％(5/18)。

对35份ACA阳性的SSc血清来说，14例ELISA检测抗CENP-P抗体阳性的血清中10例在芯片中也显示阳性。

2.抗CENP-Q自身抗体的检测

重组CENP-Q蛋白质以200ng/孔的浓度包被聚苯乙烯的96孔板，4度过夜，然后1％BSA封闭过夜。待检测血清稀释度为1∶100，HRP标记小鼠抗人IgG抗体以1∶10000稀释使用，加TMB显色液，显色1.5min后终止。酶标仪检测OD450信号值。

ELISA检测ACA阳性SSc血清、ACA阴性血清SSc血清、ACA阴性血清健康人血清、以及ACA阳性的SS、RA、SLE、PBC等自身免疫性疾病对照血清中抗CENP-Q的信号值分布如图5所示。

从图5中可以看出，除了ACA阳性的SSc血清外，抗CENP-Q抗体也可以在ACA阳性的SS、SLE和PBC血清组中检测出。ACA阴性组的SSc血清组中有一例也呈抗CENP-Q抗体阳性，而在ACA阳性的RA血清组以及健康人血清组中无法检出。

利用与抗CENP-P同样的方案统计各血清组中抗CENP-Q阳性血清的比例以及各对照血清组与ACA阳性的SSc血清组的显著性差异计算如下表3所示。

表3基于重组CENP-Q蛋白质的ELISA检测各个血清组中抗CENP-Q自身抗体阳性血清的个数

p值计算的是各对照组中阳性比例与35份ACA阳性血清组之间的显著性差异统计

从表3中可以看出抗CENP-Q抗体在ACA阳性的SSc血清中的阳性率最高，为31.4％(11/35)，在ACA阴性SSc血清组的阳性率为0.66％(1/151)。与芯片的杂交结果一致，在健康人血清组中没有检测出抗CENP-Q抗体。在ACA阳性的SS、SLE、RA、PBC等自身免疫性疾病对照组血清中的阳性率分别为：11.1％(2/18)、25％(5/20)、0％(0/13)、16.7％(3/18)。

对35份ACA阳性的SSc血清来说，11例ELISA检测抗CENP-P抗体阳性的血清中9例在芯片中也显示阳性。

3.抗CENP-P抗体与临床信息之间的关系

共使用三种分析方法对血清抗CENP-P阳性临床信息之间的相关性进行研究：1)ACA阳性SSc血清中抗CENP-P抗体阳性与阴性血清之间的临床信息差异，详细见表4；2)ACA阴性SSc血清中抗CENP-P阳性与阴性血清之间的临床信息差异详细见表5；3)所有SSc血清中抗CENP-P阳性与阴性血清之间的临床信息差异，详细信息见表6。计量资料采用均值±标准差的形式列出，显著性差异采用t检验判别显著性差异。计数资料采用阳性个数加括号的形式列出，括号内为阳性率，显著性差异采用卡方检验或fisher精确检验判别显著性差异。

表4 ACA阳性的SSc血清中抗CENP-P抗体阳性与临床信息之间的相关性

由表4中可以看出，在ACA阳性血清中，抗CENP-P抗体阳性的患者血清中IgG，IgA的含量明显高于抗CENP-P阴性患者，且抗CENP-P抗体阳性的患者的红细胞沉降速率(ErythrocyteSedimentation Rate，ESR)明显高于阴性患者。而抗CENP-P抗体与其他临床症状没有显著相关性。

表5 ACA阴性的SSc血清中抗CENP-P抗体阳性与临床信息之间的相关性

由表5可以看出，在151份ACA阴性SSc血清中，血清抗CENP-P抗体阳性的患者心脏受累与肾脏受累的比例明显高于抗CENP-P阴性的患者(p＜0.05)。

表6所有SSc血清中抗CENP-P抗体阳性与临床信息之间的相关性

由表6中可以看出，在不考虑传统方法检测ACA的情况下，基于重组CENP-P蛋白质的ELISA技术针对所有SSc血清进行检测结果表明，血清抗CENP-P抗体阳性的患者确诊的时候年龄明显比阴性的患者要高(p＜0.05)，同时抗CENP-P抗体阳性的患者肾脏受累的比例明显高于抗CENP-P阴性的患者(p＜0.05)。

4.抗CENP-Q抗体与临床信息之间的关系

血清抗CENP-Q阳性与临床信息之间的相关性研究思路与统计方法与抗CENP-P基本一致。

表7 ACA阳性的SSc血清中抗CENP-Q抗体阳性与临床信息之间的相关性

由表7中可以看出，在ACA阳性血清中，血清抗CENP-Q抗体阳性与临床信息之间没有显著相关性(p＞0.05)。

表8所有SSc血清中抗CENP-Q抗体阳性与临床信息之间的相关性

由表8中可以看出，对所有SSc血清进行检测结果表明，血清抗CENP-Q抗体阳性的患者患肺间质病变的比例明显低于抗CENP-Q阴性患者(p＜0.001)。

实施例5 Western blot检测抗CENP-P和CENP-Q自身抗体

为了验证所鉴定的抗CENP-P和CENP-Q自身抗体在血清中的存在，采用了传统的Western blot的方法对血清进行检测。

1.抗CENP-P自身抗体的检测

由于重组表达的CENP-P蛋白质带有GST标签，因此在蛋白质电泳的时候相邻的两个泳道分别上样0.5μg的CENP-P和0.25μg的GST标签蛋白(相同的分子摩尔数)，只有当CENP-P相当分子量的位置有条带而GST相当分子量的位置没有条带，才认为此血清为抗CENP-P阳性。Western blot的检测结果(表9)表明，大部分ELISA鉴定为阳性的抗CENP-P血清能够被Western blot所鉴定。

表9 Western blot验证各组血清中抗CENP-P自身抗体的存在

ELISA(+)代表ELISA方法鉴定的抗CENP-P的阳性血清的个数；Western blot(+)代表ELISA检测的阳性血清中能够被Western blot技术验证的阳性血清的个数

从表9中可以看出，14份ACA阳性/抗CENP-P阳性的SSc血清都能够被Western blot技术所验证，而17份ACA阴性/抗CENP-P阳性的SSc血清只有不到一半(8/17)能够被Western blot技术所验证，此差异显著，fisher精确检验p＝0.0035。对于17份ACA阴性/抗CENP-P阳性的SSc血清，发现其中8份经Western blot技术验证的血清在ELISA检测中的信号值与其余9份没有经Western blot技术验证的血清没有差异，表明Western blot技术对血清检测需要进一步优化检测流程。

2.抗CENP-Q自身抗体的检测

抗CENP-Q自身抗体的检测方法和结果判定与抗CENP-P自身抗体的检测一致。结果如表10所示。

表10 Western blot验证各组血清中抗CENP-Q自身抗体的存在

ELISA(+)代表ELISA方法鉴定的抗CENP-Q的阳性血清的个数；Western blot(+)代表ELISA检测的阳性血清中能够被Westernblot技术验证的阳性血清的个数

从表10中可以，绝大部分ELISA鉴定的抗CENP-Q阳性血清能够被Western blot所验证。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.抗着丝粒抗体自身抗原，其为CENP-P、CENP-Q、CENP-J、CENP-M(亚型I)、CENP-T和CENP-I。

2.权利要求1所述的自身抗原作为生物标志物在制备自身免疫性疾病检测试剂中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的自身免疫性疾病为系统性硬皮病。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂为包被有一种或多种权利要求1所述的自身抗原的抗着丝粒抗体检测芯片。

5.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂为含有包被一种或多种权利要求1所述的自身抗原的酶标板的ELISA检测试剂盒。

6.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂为一种或多种权利要求1所述的自身抗原的Western blot检测试剂盒。

7.一种抗着丝粒抗体检测芯片，其包被一种或多种权利要求1所述的自身抗原。

8.根据权利要求7所述的检测芯片，其特征在于，还包被CENP-B，CENP-A、CENP-C、CENP-H和CENP-O中的一种或多种抗着丝粒抗体自身抗原。

9.一种抗着丝粒抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，其含有酶标板，所述酶标板包被一种或多种权利要求1所述的自身抗原。

10.一种抗着丝粒抗体Western blot检测试剂盒，其含有一种或多种权利要求1所述的自身抗原。

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