CN102671218A - 一种用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒，它是由以下方法制备得到的：1）制备2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷；2）制备GSA；3）制备GSA的冻干粉。本发明所述的用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒能够方便地应用于临床的肝功能检测。本发明还提供所述药盒的制备方法和在制备用于检测肝脏GSA摄取指数的药物中的应用。

Description

一种用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种医用药盒，具体涉及一种用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒，及其制备方法和应用。

背景技术

哺乳动物肝细胞膜上存在血浆去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）是介导肝脏清除血流中去唾液酸糖蛋白（ASGP）的专一位点。ASGPR可以在一定程度上反映出有效肝细胞功能，在肝炎、肝硬化或肝癌等肝损伤性疾病发生时，其数量和活性均受到损害，因此对ASGPR进行定量分析有助于在肝脏切除手术前更好地判断剩余肝的功能。在众多评价肝功能的手段中，肝脏显像方法发展迅速，特别是核医学科应用单光子发射型计算机断层扫描仪（SPECT）进行肝细胞的摄取、代谢、排泄等功能过程的动态观察，可获得肝细胞代谢的放射性-时间曲线，并对肝细胞功能进行定量分析，这种方法被认为是最有发展前途的肝功能评价方法之一。

肝受体显像剂的发展是进行SPECT显像的基础，1984年Vera等通过化学的方法将半乳糖结构与人血清白蛋白相连得到新乳糖白蛋白（NGA），并通过^99mTc标记进行肝的显像研究。1986年Kubota等研制了一种^99mTc标记的二亚乙基三胺五乙酸半乳糖酰人血清白蛋白（^99mTc-GSA），通过增加双功能连接剂DTPA结构，增强了标记的稳定性，减少了非特异性结合。其不但能够评价肝脏的形态和功能，有助于肝病的早期诊断，而且对研究体内物质代谢、肝脏的生理学和病理生理学也有重要价值。

目前日本已有GSA药盒应用于临床，但欧美和中国尚未开展此项技术。国内已经有了GSA合成并实验性应用于核医学科显像的GSA显像剂，但是其应用的缓冲液导致合成过程复杂且不稳定，因此国内缺乏可供临床使用、合成稳定、易于推广的GSA冻干配套药盒。

用放射性核素标记ASGPR的特异性配体GSA后注射入机体，采用SPECT技术可以反映ASGPR的功能状态及其在肝脏的三维分布。根据^99mTc-GSA的SPECT扫描图像，可以得到评价肝脏功能储备的参数[毛一雷；2008；杜顺达，2008]。关于参数的计算，目前主要包括两大类：（1）简单参数：应用不同时间心、肝放射性比值获得清除指数HH15，受体指数LHL15和校正的受体指数LH；（2）建立药代动力学模型[Miki，2001]，得到ASGPR受体浓度、受体总数、最大清除率等参数。文献显示，上述两大类参数虽然部分反映了肝脏功能，但却有着明显的缺陷，无法为临床提供准确的判断依据。

所述的简单参数HH15、LHL15和LH的测算过程是：在机体注射^99mTc-GSA之后，开始动态显像，通过常规的显像软件定义心脏和肝脏的感兴趣区，用15分钟时心脏感兴趣区的放射性活度(H15)值除以3分钟时的值(H3)，计算出清除指数（HH15），即：HH15=H15/H3，反映了肝脏转运去唾液酸糖蛋白的能力；用注射后15分钟时肝脏感兴趣区的放射性活度(L15)除以H15与L15之和，计算出受体指数（LHL15），即：LHL15=L15/（L15+H15），反映了肝脏摄取GSA的速率。为消除心脏放射性对于肝脏放射性影响所造成的偏差，用HH15校正LHL15，获得校正的受体指数（LH），即：LH=LHL15/HH15。

简单参数的缺陷主要包括：

1）简单参数只利用了3分钟和15分钟时的数据，而大多数动态采集的信息都未加以利用，并且肝脏对于^99mTc-GSA的摄取峰值通常在30分钟以后才出现。

2）严格意义上讲，简单参数都无法评价各肝脏局部的功能，因为如果以肝区局部放射性计数L15′来计算LHL15，将有可能出现两种情况：

LHL15’=L15’/(L15+H15)

LHL15’=L15’/(L15’+H15)

由于L15远大于H15，因而由第一种方法得到的LHL15实际上代表的是感兴趣区域占全肝的放射性计数比值，而不是其肝功能绝对值；如果按照第二种方法来计算，我们将发现被切除部分和剩余部分的肝脏LHL15′之和将大于全肝的LHL15。

3）尽管HH15、LHL15以及LH与传统的肝功能评价方法成正相关，但如果要精确计算剩余肝占全肝的功能比，该参数必须与肝功能之间保持严格线性关系，然而，HH15、LHL15以及LH尚无法满足这样的条件。

药代动力学模型是以生理学和药物代谢特点为依据建立的模型，能够获得具有生理学意义的肝功能参数。目前已有的方法包括：根据Vera的三室模型计算出的受体密度[R]₀和受体数量R₀。根据Ha-Kawa的五室模型计算出的最大清除率GSA-R_max，以及根据Miki的五室模型计算出的去唾液酸糖蛋白受体总数R_total等。所获得的参数均与传统肝功能检查结果有良好的相关性，部分结果甚至可以进行三维应用。但建立药代动力学模型方法的主要缺陷在于涉及到的参数太多，试图通过一次非线性拟合而获得多个参数的解常常会产生初值依赖的问题，对于我们最关心的参数不一定能够得到最优解；同时由于核医学数据的图像质量相对较差，勾画感兴趣区所获得的原始数据存在较大的随机性，用迭代算法做非线性拟合时常会产生无法收敛（即无解）的情况。因而此类方法尽管层出不穷，但到目前为止大多只停留在科研阶段，未得到广泛应用。

总之，现有技术中，GSA制备方法的多个环节存在着明显的缺陷，导致合成方法不够稳定，得不到标记率高的GSA药盒；而且对于肝脏功能的计算方法要么过于简单，不符合药物代谢的生理过程；要么过于复杂，造成了计算的不稳定。鉴于此，本发明提出一种^99mTc-GSA冻干粉合成方法，能够得到更加方便应用于临床的肝功能检测试剂。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒，能够方便地应用于临床的肝功能检测。

本发明另一个目的在于：提供所述冻干粉药盒的制备方法，该方法具有标记简单、标记率高和成本低的特点，能够制备出符合临床要求的能稳定合成的GSA药盒，并且能使制备的配合物同样具有良好的生物性能。

本发明的再一个目的在于：提供所述冻干粉药盒在制备用于检测肝脏GSA摄取指数的药物中的应用。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

提供一种用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒，它是由以下方法制备得到的：

1）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备

本步骤的合成路线如下：

其中，a代表Ac₂O，HClO₄，30~40℃/Br₂，P；

b代表：硫脲，丙酮；

c代表：氯乙腈，K₂CO₃，NaHSO₃；

d代表：CH₃ONa，CH₃OH；

1.1）1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖的制备：

250mL四口烧瓶中，加入32mL乙酸酐和0.16mL高氯酸。室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在30~40℃。半乳糖逐渐溶解，溶液颜色变深。待全部溶解后，加热控温30~40℃反应半个小时。停止加热，加入2.4g红磷。在水浴下，用滴液漏斗向烧瓶中滴加4.64mL溴和2.88mL水。反应放热，控制温度在20℃以内。滴加完毕后，控温18~20℃继续反应2h。反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，搅拌后过滤。所得滤液在分液漏斗中分离出有机相，水相20mL×3的氯仿萃取，合并有机相。有机相用10mL×3冰水和10mL×3饱和碳酸氢钠溶液洗至近中性。用无水硫酸钠干燥过夜后，旋干溶剂后，得到浅黄色粘稠物9mL。加入等体积的乙醚使之全部溶解，再加入两倍体积的石油醚，于冰箱内静置析晶。得到蜡状白色固体，过滤后真空干燥，得到产物14.6g，产率79.9%。熔点70~73℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.04（m，12H，CH₃），4.12（s，2H，CH₂），4.36（s，1H，CH），5.36（s，2H，CH），5.52（s，1H，CH），6.40（s，1H，CH）；

1.2）2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐的制备：

将步骤1.1）所得1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖14.6g，在50mL反应瓶中，溶于14mL丙酮中，加入2.7g硫脲，加热回流15min。有白色固体产生。过滤洗涤后，于真空干燥器中干燥，得到产物15.4g，产率89%。熔点173~176℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.09，2.12，2.19，2.24（4s，12H，CH₃），4.20（m，2H，CH₂），4.37（t，1H，CH），5.19（d，1H，CH），5.38（d，1H，CH），5.48（t，1H，CH），5.54（s，1H，CH），8.08（s，2H，=NH·HBr），9.70（s，2H，NH₂）；

1.3）氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

将步骤1.2）所得2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐3.8g加入20mL丙酮-水（1:1）和2mL氯乙腈，搅拌溶解，加入1.6g碳酸钾和2g亚硫酸氢钠，室温搅拌30min，然后倒入80mL冰水，室温搅拌2h后过滤，得到浅粉色固体2.6g。用无水甲醇重结晶，得到白色针状晶体1.6g。产率50.8%。熔点95~98℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.02，2.09，2.12，2.20（4s，12H，CH₃），3.37，3.67（2d，2H，CH₂CN），4.02（t，1H，CH），4.18（m，2H，CH₂），4.72（d，1H，CH），5.12（d，1H，CH），5.28（t，1H，CH），5.50（d，1H，H-CS）。IR v/cm^-1：2247（CN），1745（C=O）。元素分析（%）：C₁₆H₂₁NO₉S，计算值C,47.64;H,5.25;N,3.47实测值C,47.50;H,5.23;N,3.24。

氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷较为稳定，易于提纯，可于-20℃冰箱内长期保存。因此可首先大量制备氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，提纯后于冰箱内保存，合成GSA时再进行下步反应。

1.4）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

50mL反应瓶中，加入步骤1.3）所得氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷1.01g，加入0.1mol/L甲醇钠/甲醇溶液12.5mL，水浴控温20℃左右，反应48h。停止反应后，旋干溶剂，得到浅黄色固体。产率约55%；

2）GSA的制备

本步骤合成路线如下：

2.1）用0.1mol/L pH7.0的HEPES缓冲液溶解0.6g人血白蛋白（总体积9mL，根据蛋白浓度调节加入缓冲液和蛋白溶液的量），全部溶解后，加入40mg DTPA环酐，室温搅拌反应15min。得到DTPA-HSA溶液；

2.2）取6mL步骤2.1）所得DTPA-HSA溶液（含400mg DTPA-HSA），加入0.1mol/LpH8.5硼酸缓冲液稀释至20mL，调pH值至8.5，将稀释好的DTPA-HSA溶液加入步骤1）制备的2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，待固体全部溶解后，37℃搅拌反应3h后，用二次蒸馏水透析平衡72h，得到GSA；

3）^99mTc-GSA冻干粉的制备：

3.1）将步骤2）得到的GSA溶于0.2mol/L pH3.5醋酸-醋酸钠缓冲液中；然后在其中加入含有还原剂的盐酸溶液，混合均匀，使溶液中还原剂比配体的重量为1:10~800，并控制溶液pH在2.5~4.0之间；所述的还原剂为SnCl₂·2H₂O；

3.2）按照酒石酸钾钠比配体为1:1~160的重量比，在步骤3.1）得到的溶液中加入酒石酸钾钠，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化；

3.3）将步骤3.2）制备的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述的用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒。

本发明还提供所述药盒的制备方法，包括以下步骤：

1）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备

本步骤的合成路线如下：

其中，a代表Ac₂O，HClO₄，30~40℃/Br₂，P；

b代表：硫脲，丙酮；

c代表：氯乙腈，K₂CO₃，NaHSO₃；

d代表：CH₃ONa，CH₃OH；

1.1）1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖的制备：

250mL四口烧瓶中，加入32mL乙酸酐和0.16mL高氯酸。室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在30~40℃。半乳糖逐渐溶解，溶液颜色变深。待全部溶解后，加热控温30~40℃反应半个小时。停止加热，加入2.4g红磷。在水浴下，用滴液漏斗向烧瓶中滴加4.64mL溴和2.88mL水。反应放热，控制温度在20℃以内。滴加完毕后，控温18~20℃继续反应2h。反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，搅拌后过滤。所得滤液在分液漏斗中分离出有机相，水相20mL×3的氯仿萃取，合并有机相。有机相用10mL×3冰水和10mL×3饱和碳酸氢钠溶液洗至近中性。用无水硫酸钠干燥过夜后，旋干溶剂后，得到浅黄色粘稠物9mL。加入等体积的乙醚使之全部溶解，再加入两倍体积的石油醚，于冰箱内静置析晶。得到蜡状白色固体，过滤后真空干燥，得到产物14.6g，产率79.9%。熔点70~73℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.04（m，12H，CH₃），4.12（s，2H，CH₂），4.36（s，1H，CH），5.36（s，2H，CH），5.52（s，1H，CH），6.40（s，1H，CH）；

1.2）2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐的制备：

将步骤1.1）所得1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖14.6g，在50mL反应瓶中，溶于14mL丙酮中，加入2.7g硫脲，加热回流15min。有白色固体产生。过滤洗涤后，于真空干燥器中干燥，得到产物15.4g，产率89%。熔点173~176℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.09，2.12，2.19，2.24（4s，12H，CH₃），4.20（m，2H，CH₂），4.37（t，1H，CH），5.19（d，1H，CH），5.38（d，1H，CH），5.48（t，1H，CH），5.54（s，1H，CH），8.08（s，2H，=NH·HBr），9.70（s，2H，NH₂）；

1.3）氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

将步骤1.2）所得2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐3.8g加入20mL丙酮-水（1:1）和2mL氯乙腈，搅拌溶解，加入1.6g碳酸钾和2g亚硫酸氢钠，室温搅拌30min，然后倒入80mL冰水，室温搅拌2h后过滤，得到浅粉色固体2.6g。用无水甲醇重结晶，得到白色针状晶体1.6g。产率50.8%。熔点95~98℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.02，2.09，2.12，2.20（4s，12H，CH₃），3.37，3.67（2d，2H，CH₂CN），4.02（t，1H，CH），4.18（m，2H，CH₂），4.72（d，1H，CH），5.12（d，1H，CH），5.28（t，1H，CH），5.50（d，1H，H-CS）。IR v/cm^-1：2247（CN），1745（C=O）。元素分析（%）：C₁₆H₂₁NO₉S，计算值C,47.64;H,5.25;N,3.47实测值C,47.50;H,5.23;N,3.24。

氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷较为稳定，易于提纯，可于-20℃冰箱内长期保存。因此可首先大量制备氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，提纯后于冰箱内保存，合成GSA时再进行下步反应。

1.4）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

50mL反应瓶中，加入步骤1.3）所得氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷1.01g，加入0.1mol/L甲醇钠/甲醇溶液12.5mL，水浴控温20℃左右，反应48h。停止反应后，旋干溶剂，得到浅黄色固体。产率约55%；

2）GSA的制备

本步骤合成路线如下：

2.1）用0.1mol/L pH7.0的HEPES缓冲液溶解0.6g人血白蛋白（总体积9mL，根据蛋白浓度调节加入缓冲液和蛋白溶液的量），全部溶解后，加入40mg DTPA环酐，室温搅拌反应15min。得到DTPA-HSA溶液；

2.2）取6mL步骤2.1）所得DTPA-HSA溶液（含400mg DTPA-HSA），加入0.1mol/LpH8.5硼酸缓冲液稀释至20mL，调pH值至8.5，将稀释好的DTPA-HSA溶液加入步骤1）制备的2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，待固体全部溶解后，37℃搅拌反应3h后，用二次蒸馏水透析平衡72h，得到GSA；

3）^99mTc-GSA冻干粉的制备：

3.1）将步骤2）得到的GSA溶于0.2mol/L pH3.5醋酸-醋酸钠缓冲液中；然后在其中加入含有还原剂的盐酸溶液，混合均匀，使溶液中还原剂比配体的重量为1:10~800，并控制溶液pH在2.5~4.0之间；所述的还原剂为SnCl₂·2H₂O；

3.2）按照酒石酸钾钠比配体为1:1~160的重量比，在步骤3.1）得到的溶液中加入酒石酸钾钠，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化；

3.3）将步骤3.2）制备的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述的用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒

本发明还提供所述药盒在制备用于检测肝脏GSA摄取指数的药物中的应用。

所述的用于检测肝脏GSA摄取指数的药物是锝-99m标记的GSA配合物，该配合物的制备方法是在检测肝脏GSA摄取指数前，将从医用⁹⁹Mo-^99mTc发生器中淋洗获得的^99mTcO₄ ^-淋洗液加入本发明所述的用于制备GSA的冻干粉药盒中，摇匀后室温反应5~30分钟，得到锝-99m标记的GSA配合物。

所述的锝-99m标记的GSA配合物用于检测肝脏GSA摄取指数的过程包以下步骤：

1）经静脉推注所述的锝-99标记的配合物GSA，GSA剂量记作D₀；

2）步骤1）静脉注射完成后立即采用SPECT进行动态数据采集，获得注射后30分钟内心脏、肝脏和肺脏的放射性计数分别随时间变化的函数，分别记作H(t)、L(t)和Lu(t)，并根据扫描图像勾画出心脏感兴趣区（Region of Interest，ROI）、肺ROI和肝脏ROI，计算心脏ROI的面积AH（Area of Heart）、肺ROI的面积ALu（Area of Lung）和肝脏ROI的面积AL（Area of Liver）；

3）根据步骤2）测得的数据计算单位时间内肝脏从外周血中摄取放射性核素标记的GSA的剂量UI，计算过程如下：

3.1）将步骤2）得到的H(t)按照以下关系式I换算成全身血浆放射性计数随时间变化的函数B(t)：

B(t)=K×H(t)    （I）

其中K是心脏内血浆和全身血浆之间的比例系数，存在个体差异，其数值可以根据公知常识获得；

3.2）将步骤3.1）得到的B(t)和步骤2）得到的L(t)一起代入以下函数关系式II：

$K_L\×\frac{\mathrm{dL}\left(t\right)}{\mathrm{dt}}=\mathrm{UI}\×K_B\×B\left(t\right)+b---\left(\mathrm{II}\right)$

以

为纵轴，K_B×B(t)为横轴作图，对2-30分钟内的数据点做直线拟合得到函数斜率，即为UI；

其中，K_L为肝脏放射性与所摄取GSA剂量之间的转换常数；K_B为肝外的全身血浆放射性与所摄取GSA剂量之间的转换常数；在以下函数关系式III中，取2-30分钟的H(t)和L(t)数据，以L(t)为纵轴，H(t)为横轴做散点图（如图3所示）后作线性回归求得K_L和K_BK：

$L\left(t\right)=-\frac{K_{B}K}{K_L}H\left(t\right)+\frac{100\%D_0}{K_L}---\left(\mathrm{III}\right).$

步骤2）所述的采用SPECT进行的动态数据采集，优选按照以下方法进行：

采集过程共分两个阶段，第一阶段2分钟，桢/2秒，总计60桢；第二阶段28分钟，桢/30秒，总计56桢；采集矩阵128×128。

在实际操作中，因肺脏部分心脏重叠，所以心脏的放射性受到肺脏的影响，需要去除；另外心脏的放射性的散射效应（scatter effect）会影响到肝脏。

从团注99mTc-GSA到心脏内放射性达到峰值的时间，此期间可以考虑为心脏聚集GSA，之后才开始向外排GSA，此期间肝脏是没有放射性的，其放射性主要来自心脏的散射。

另外还需要采用心脏与肺野外带感兴趣区的面积（A）比作为权重，根据肺区放射性计数对心区放射性计数作校正。

因此本发明的方案中，步骤3）优选将步骤2）得到的H(t)和L(t)先按照下面关系式IV和V进行校正，分别得到校正后的心脏放射性计数随时间变化的函数Hc(t)和肝脏放射性计数随时间变化的函数Lc(t)：

$\mathrm{Hc}\left(t\right)=H\left(t\right)-\frac{\mathrm{ALu}}{\mathrm{AH}}\×\mathrm{Lu}\left(t\right)---\left(\mathrm{IV}\right)$

$\mathrm{Lc}\left(t\right)=L\left(t\right)-\frac{{\∫}_0^{t0}L\left(t\right)\mathrm{dt}}{{\∫}_0^{t0}H\left(t\right)\mathrm{dt}}\×H\left(t\right)---\left(V\right)$

其中ALu为步骤2）得到的肺ROI的面积；AH为步骤2）得到的心ROI的面积；t0为从团注99mTc-GSA到心脏内放射性达到峰值的时间；

然后再将Hc(t)代替步骤3.1）所述的关系式I中的H(t)换算成校正的全身血浆放射性计数随时间变化的函数Bc(t)，再将Bc(t)和Lc(t)代入以下函数关系式VI：

$K_L\×\frac{\mathrm{dLc}\left(t\right)}{\mathrm{dt}}=\mathrm{UI}\×K_B\×\mathrm{Bc}\left(t\right)+b---\left(\mathrm{VI}\right)$

以

为纵轴，K_B×Bc(t)为横轴作图，对2-30分钟内的数据点做直线拟合得到函数斜率，即为优选的UI。

本发明的检测方法认为，在适当的时间内，GSA存在于全身血浆和肝脏中，全身血浆分为肝外血浆和肝内血浆，肝脏部分除去肝内血浆外，主要是肝细胞，因此我们将GSA的摄取分布状态用图1表示。其中，D1表示肝外血浆的GSA摄取量，D2表示肝细胞的GSA摄取量，D3表示肝内血浆的GSA摄取量，并认为D1+D2+D3=100%D0。又因肝内血浆中的GSA被肝细胞膜上的ASGPR快速摄取，且肝内血浆占全身血浆比例仅14%，所以，可以忽略肝内血浆中GSA的摄取量D3，由此认为D1+D2=100%D0。也就是说，注入机体的GSA主要由肝外血浆和肝细胞摄取吸收。本发明人将这一理论称为“二室模型”理论。由于肝外血浆和肝细胞对的摄取量是一系列随时间变化的动态数据，因此所述的D1和D2也可以看作是肝外血浆GSA摄取量随时间变化的函数和肝细胞GSA摄取量随时间变化的函数，如图4所示，其中上行的曲线代表D2，下行的曲线代表D1。

另外，本发明人还认为，在注入放射性标记的GSA后的2-30分钟内，GSA只以结合体存在，而不被降解；而且ASGPR的数量虽与肝脏功能相关，但肝脏功能应当以ASGPR与GSA的结合速度来表现，而并非最后结合的总数。

所以，基于上述前提，本发明的检测方法致力于：利用SPECT扫描获得的放射性核素标记的GSA在体内摄取的动态变化后，推算出单位时间内肝脏（肝细胞）从外周血摄取的GSA的量，也就是肝脏（肝细胞）从外周血摄取GSA的速率。我们将该速率命名为摄取指数（UI，uptake index），它代表肝脏从外周血中摄取GSA的能力，能够作为评价肝脏功能的有效依据。

具体讲，本发明中，因为D2代表了肝细胞GSA摄取量随时间变化的函数，因此通过对D2求导即可获得单位时间内GSA进入肝细胞的剂量，也就是肝脏（肝细胞）从外周血摄取GSA的速率。再基于D1+D2=100%D0的原理，即可得到以下关系式：

$\frac{d{D}_2}{\mathrm{dt}}=\mathrm{UI}\×D1+b$

如果能够求得该关系式中的斜率UI，就能够知晓肝脏（肝细胞）从外周血摄取GSA的速率。获得UI的方法可以如图5所示那，以D1为横轴，dD2/dt为纵轴作图，将得到一条近似直线，对2-30分钟内的数据点做直线拟合，即可得到斜率UI。

本发明检测方法中，步骤2）通过SPECT扫描得到的动态数据均为放射性核素标记的GSA的放射性计数随时间变化的函数，包括心脏、肝脏和肺脏的放射性计数分别随时间变化的函数，分别记作H(t)、L(t)和Lu(t)，如图2所示，其中从0点开始随时间向上发展的小圈组成的曲线代表肝脏放射性计数，下方小圈组成的平缓曲线代表心脏放射性计数随时间的变化。这些函数可以进一步通过放射性计数与GSA剂量之间的转换常数与肝外全身血浆GSA摄取量随时间变化的函数D1、肝细胞GSA摄取量随时间变化的函数D2对应起来，这种对应的推导过程如下：

设定肝外全身血浆放射性计数与其GSA摄取量之间的转换常数为K_B，肝细胞放射性计数与其GSA摄取量之间的转换常数为K_L，即得：

D1=K_B×B(t)；

D2=K_L×L(t)

其中B(t)代表全身血浆放射性计数随时间变化的函数。

又由于肝外全身血浆与心脏内血浆存在特定的比例关系，设定K为该特定比例系数，由此得到：

B(t)=K×H(t)

所以

D1=K_B×K×H(t)

这种情况下，上述对D2求导的关系式即可转化为所述的关系式II：

$K_L\×\frac{\mathrm{dL}\left(t\right)}{\mathrm{dt}}=\mathrm{UI}\×K_B\×B\left(t\right)+b---\left(\mathrm{II}\right)$

在关系式II中，只要以

为纵轴，K_B×Bc(t)（即K_B×K×H(t)）为横轴作图，对2-30分钟内的数据点做直线拟合求出斜率UI即可，而其中的H(t)和L(t)就是来源于所述步骤2）的SPECT扫描的动态数据，因此本领域技术人员在实践中只要通过SPECT扫描得到了H(t)和L(t)，并计算出常数K_L和K_B，就可以通过以

为纵轴，K_B×B(t)为横轴作图，对2-30分钟内的数据点做直线拟合得到函数斜率来求得UI了。

关于常数K、K_L和K_B的计算，本发明采用以下方法：

根据上述D1+D2=100%D0的原理，其中D1=K_B×B(t)，D2=K_L×L(t)，可以得出：

K_B×K×H(t)+K_L×L(t)=100%D0

由此得到了所述的关系式III：

$L\left(t\right)=-\frac{K_{B}K}{K_L}H\left(t\right)+\frac{100\%D_0}{K_L}---\left(\mathrm{III}\right)$

以L(t)为纵轴，H(t)为横轴做散点图后取2-30分钟的H(t)和L(t)数据作线性回归可求得上述常数K_L和K_BK。

通过上述过程，本发明检测方法在获得肝脏和心脏放射性计数的动态数据后，能够很容易地通过计算获得肝脏从外周血摄取GSA的速率，即肝脏摄取指数UI。

此外，为了更进一步提高本发明检测方法的准确性，还需要在检测过程中勾画感兴趣区时注意如下事项：1、肝区应尽量完整，应完全包含与心脏重叠的部分，因为前两分钟肝区的放射性计数并不参与模型的计算过程。2、心区宁小勿大，要尽量减少肝区散射效应对心区计数的影响。3、对于巨大血管瘤的患者，如果根据CT影像患者血管瘤在冠状面投影所形成的区域内正常肝组织可忽略不计，则在勾画肝脏感兴趣区时可绕开这一区域。

与现有技术相比，本发明的药盒能够更稳定的制备得到^99mTc-GSA，能够更方便地应用于临床的肝功能检测。

附图说明

图1是本发明所述的“二室模型”示意图。

图2是本发明检测方法中，通过对肝脏、心脏放射性随时间进行计数，获得的肝脏、心脏放射性变化图。

图3是本发明检测方法中以L(t)为纵轴，H(t)为横轴所做的散点图。

图4是本发明检测方法中肝脏、全身血浆中GSA的变化图。

图5是本发明检测方法中以

为纵轴，K_B×Bc(t)为横轴作的曲线图。

图6是实施例1中患者Y的术前计算肝脏摄取指数的散点图。

图7是实施例1中健康受试者T的计算摄取指数的散点图。

具体实施方式

实施例1.

一种用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒，它是由以下方法制备得到的：

1）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备

本步骤的合成路线如下：

其中，a代表Ac₂O，HClO₄，30~40℃/Br₂，P；

b代表：硫脲，丙酮；

c代表：氯乙腈，K₂CO₃，NaHSO₃；

d代表：CH₃ONa，CH₃OH；

1.1）1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖的制备：

250mL四口烧瓶中，加入32mL乙酸酐和0.16mL高氯酸。室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在30~40℃。半乳糖逐渐溶解，溶液颜色变深。待全部溶解后，加热控温30~40℃反应半个小时。停止加热，加入2.4g红磷。在水浴下，用滴液漏斗向烧瓶中滴加4.64mL溴和2.88mL水。反应放热，控制温度在20℃以内。滴加完毕后，控温18~20℃继续反应2h。反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，搅拌后过滤。所得滤液在分液漏斗中分离出有机相，水相20mL×3的氯仿萃取，合并有机相。有机相用10mL×3冰水和10mL×3饱和碳酸氢钠溶液洗至近中性。用无水硫酸钠干燥过夜后，旋干溶剂后，得到浅黄色粘稠物9mL。加入等体积的乙醚使之全部溶解，再加入两倍体积的石油醚，于冰箱内静置析晶。得到蜡状白色固体，过滤后真空干燥，得到产物14.6g，产率79.9%。熔点70~73℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.04（m，12H，CH₃），4.12（s，2H，CH₂），4.36（s，1H，CH），5.36（s，2H，CH），5.52（s，1H，CH），6.40（s，1H，CH）；

1.2）2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐的制备：

将所得1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖14.6g，在50mL反应瓶中，溶于14mL丙酮中，加入2.7g硫脲，加热回流15min。有白色固体产生。过滤洗涤后，于真空干燥器中干燥，得到产物15.4g，产率89%。熔点173~176℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.09，2.12，2.19，2.24（4s，12H，CH₃），4.20（m，2H，CH₂），4.37（t，1H，CH），5.19（d，1H，CH），5.38（d，1H，CH），5.48（t，1H，CH），5.54（s，1H，CH），8.08（s，2H，=NH·HBr），9.70（s，2H，NH₂）；

1.3）氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

所得2-S-（2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基）-2-异硫脲氢溴酸盐3.8g加入20mL丙酮-水（1：1）和2mL氯乙腈，搅拌溶解，加入1.6g碳酸钾和2g亚硫酸氢钠，室温搅拌30min，然后倒入80mL冰水，室温搅拌2h后过滤，得到浅粉色固体2.6g。用无水甲醇重结晶，得到白色针状晶体1.6g。产率50.8%。熔点95~98℃。¹HNMR（CDCl₃），δ：2.02，2.09，2.12，2.20（4s，12H，CH₃），3.37，3.67（2d，2H，CH₂CN），4.02（t，1H，CH），4.18（m，2H，CH₂），4.72（d，1H，CH），5.12（d，1H，CH），5.28（t，1H，CH），5.50（d，1H，H-CS）。IRv/cm^-1：2247（CN），1745（C=O）。元素分析（%）：C₁₆H₂₁NO₉S，计算值C,47.64;H,5.25;N,3.47实测值C,47.50;H,5.23;N,3.24。

氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷较为稳定，易于提纯，可于-20℃冰箱内长期保存。因此可首先大量制备氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，提纯后于冰箱内保存，合成GSA时再进行下步反应。

1.4）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

50mL反应瓶中，加入所得氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷1.01g，加入0.1mol/L甲醇钠/甲醇溶液12.5mL，水浴控温20℃左右，反应48h。停止反应后，旋干溶剂，得到浅黄色固体。产率约55%；

2）GSA的制备

本步骤合成路线如下：

用0.1mol/L pH7.0的HEPES缓冲液溶解0.6g人血白蛋白（总体积9mL，根据蛋白浓度调节加入缓冲液和蛋白溶液的量），全部溶解后，加入40mg DTPA环酐，室温搅拌反应15min。得到DTPA-HSA溶液；

取6mL所得DTPA-HSA溶液（含400mg DTPA-HSA），加入0.1mol/L pH8.5硼酸缓冲液稀释至20mL，调pH值至8.5，将稀释好的DTPA-HSA溶液加入步骤1）制备的2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，待固体全部溶解后，37℃搅拌反应3h后，用二次蒸馏水透析平衡72h，得到GSA；

3）^99mTc-GSA冻干粉的制备：

3.1）将步骤2）得到的GSA溶于0.2mol/L pH3.5醋酸-醋酸钠缓冲液中；然后在其中加入含有SnCl₂·2H₂O还原剂的盐酸溶液，混合均匀，使溶液中还原剂比配体的重量为1:10~800，并控制溶液pH在2.5~4.0之间；所述的还原剂为SnCl₂·2H₂O；

3.2）按照酒石酸钾钠比配体为1:1~160的重量比，在步骤3.1）得到的溶液中加入酒石酸钾钠，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化；

3.3）将步骤3.2）制备的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述的用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒。

实施例2.

患者Y，男，60岁，因发现肝脏占位1年余为行手术治疗于2009年3月20日入院。

患者于2007年12月体检发现约1cm右肝占位，当地考虑血管瘤，未治疗。2008年6月复查肿物增大至4cm，考虑肝癌，于2008年7、8月射频治疗2次，肿瘤未见明显缩小。2008年11月复查CT：第二肝门VIII段肿物5×4cm，与肝右静脉、肝中静脉关系密切，我院介入栓塞3次后为行手术入院。既往：HBsAg(+)26年，糖尿病半年。查体：右侧第6、7肋间可触及3×3cm肿块、质中、活动度差、无压痛，余无殊。辅助检查：HBsAg(+)。术前Child评分5分。

影像学：

B超：肝弥漫性病变，右肝后叶可见3.5×3.7cm中低回声。

CT：右肝4.2cm类圆形低密度灶伴多发斑片致密影，病变位于门脉右支主干上方，紧邻肝中静脉和肝右静脉近段。左半肝449ml，右半肝642ml。

针对该患者进行肝脏GAS摄取指数的检测，检测前采用实施例1所述的药盒制备锝-99m标记的GSA配合物，然后将得到的配合物用于检测患者肝脏GSA摄取指数，过程如下：

1）将从医用⁹⁹Mo-^99mTc发生器中淋洗获得的^99mTcO₄ ^-淋洗液加入实施例1所述的冻干粉药盒中，摇匀后室温反应5~30分钟，得到锝-99m标记的GSA配合物；

2）经肘正中静脉推注步骤1）得到的^99mTc-GSA，GSA注射剂量D₀为：GSA化学量3.0mg，放射量7.92mCi，标记率98.1%；

3）步骤2）静脉注射完成后立即采用SPECT进行动态数据采集，采集过程共分两个阶段，第一阶段2分钟，桢/2秒，总计60桢；第二阶段28分钟，桢/30秒，总计56桢；采集矩阵128×128；采集后获得注射后30分钟内心脏、肝脏和肺脏的放射性计数分别随时间变化的函数，分别记作H(t)、L(t)和Lu(t)，并根据扫描图像勾画出心脏ROI（感兴趣区）、肺ROI和肝脏ROI，计算心脏ROI的面积AH、肺ROI的面积ALu和肝脏ROI的面积AL；

4）根据步骤3）测得的数据计算单位时间内肝脏从外周血中摄取放射性核素标记的GSA的剂量UI，计算过程如下：

4.1）将步骤3）得到的H(t)和L(t)先按照下面关系式IV和V进行校正，分别得到校正后的心脏放射性计数随时间变化的函数Hc(t)和肝脏放射性计数随时间变化的函数Lc(t)：

$\mathrm{Hc}\left(t\right)=H\left(t\right)-\frac{\mathrm{ALu}}{\mathrm{AH}}\×\mathrm{Lu}\left(t\right)---\left(\mathrm{IV}\right)$

$\mathrm{Lc}\left(t\right)=L\left(t\right)-\frac{{\∫}_0^{t0}L\left(t\right)\mathrm{dt}}{{\∫}_0^{t0}H\left(t\right)\mathrm{dt}}\×H\left(t\right)---\left(V\right)$

其中ALu为步骤3）得到的肺ROI的面积；AH为步骤3）得到的心ROI的面积；t0为从团注99mTc-GSA到心脏内放射性达到峰值的时间；

将得到的Hc(t)按照以下关系式换算成全身血浆放射性计数随时间变化的函数Bc(t)：

Bc(t)=K×Hc(t)

其中K是心脏内血浆和全身血浆之间的比例系数；

4.2）将步骤4.1）得到的Bc(t)和步骤3）得到的Lc(t)一起代入以下函数关系式：

$K_L\×\frac{\mathrm{dLc}\left(t\right)}{\mathrm{dt}}=\mathrm{UI}\×K_B\×\mathrm{Bc}\left(t\right)+b$

其中，K_L为肝脏放射性与所摄取GSA剂量之间的转换常数；K_B为肝外的全身血浆放射性与所摄取GSA剂量之间的转换常数；在以下函数关系式III中，取2-30分钟的H(t)和L(t)数据，以L(t)为纵轴，H(t)为横轴做散点图后作线性回归求得K_L和K_BK：

$L\left(t\right)=-\frac{K_{B}K}{K_L}H\left(t\right)+\frac{100\%D_0}{K_L}---\left(\mathrm{III}\right).$

以

为纵轴，K_B×Bc(t)为横轴作图，对2-30分钟内的数据点做直线拟合得到函数斜率，即为肝脏对GSA的摄取指数UI。整个检测过程涉及到的曲线图或散点图，如图6所示。

最终计算得到患者Y肝脏GSA摄取指数UI=0.179min^-1。

实施例3.

健康受试者T，女，27岁，查肝功、凝血等指标均正常。

按照与实施例1相同的方法检测肝脏GSA摄取指数，得到UI=0.248min^-1。

整个检测过程涉及到的曲线图或散点图，如图7所示。

以本发明的药盒制备得到的锝-99m标记的GSA配合物为检测用药物，以实施例2相同的检测方法，针对64例患者进行了肝脏GSA摄取指数的检测，其结果均能有效的用于评价肝功能。

Claims (7)

1.一种用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒，它是由以下方法制备得到的：

1）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备

1.1）1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖的制备：

250mL四口烧瓶中，加入32mL乙酸酐和0.16mL高氯酸，室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在30~40℃，半乳糖全部溶解后，加热控温30~40℃反应半个小时，停止加热后加入2.4g红磷，在水浴下，向烧瓶中滴加4.64mL溴和2.88mL水，反应放热，控制温度在20℃以内，滴加完毕后，控温18~20℃继续反应2h，反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，搅拌后过滤，所得滤液分离出有机相，水相20mL×3的氯仿萃取，合并有机相，有机相用10mL×3冰水和10mL×3饱和碳酸氢钠溶液洗至近中性，用无水硫酸钠干燥过夜后，旋干溶剂，得到浅黄色粘稠物，加入等体积的乙醚使之全部溶解，再加入两倍体积的石油醚，于冰箱内静置析晶，得到蜡状白色固体，过滤后真空干燥，得到1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖14.6g；

1.2）2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐的制备：

将步骤1.1）所得1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖14.6g溶于14mL丙酮中，加入2.7g硫脲，加热回流15min，得到白色固体，过滤洗涤后，真空干燥得到产物2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐15.4g；

1.3）氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

将步骤1.2）所得2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐3.8g加入20mL由丙酮和水以1:1的摩尔比构成的混合溶液，同时加入2mL氯乙腈，搅拌溶解，加入1.6g碳酸钾和2g亚硫酸氢钠，室温搅拌30min，然后倒入80mL冰水，室温搅拌2h后过滤，得到浅粉色固体2.6g，用无水甲醇重结晶，得到氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷白色针状晶体1.6g；

1.4）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

在步骤1.3）所得氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷1.01g中，加入0.1mol/L甲醇钠/甲醇溶液12.5mL，水浴控温20℃左右，反应48h，停止反应后，旋干溶剂，得到2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的浅黄色固体；

2）GSA的制备

2.1）用0.1mol/L pH7.0的HEPES缓冲液溶解0.6g人血白蛋白，全部溶解后，加入40mg DTPA环酐，室温搅拌反应15min，得到DTPA-HSA溶液；

2.2）取6mL步骤2.1）所得DTPA-HSA溶液，加入0.1mol/L pH8.5的硼酸缓冲液稀释至20mL，调pH值至8.5，将稀释好的DTPA-HSA溶液加入步骤1）制备得到的2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，待固体全部溶解后，37℃搅拌反应3h后，用二次蒸馏水透析平衡72h，得到GSA；

3）GSA冻干粉的制备：

3.1）将步骤2）得到的GSA溶于0.2mol/L pH3.5醋酸-醋酸钠缓冲液中；然后在其中加入含有还原剂的盐酸溶液，混合均匀，使溶液中还原剂比配体的重量为1:10~800，并控制溶液pH在2.5~4.0之间；所述的还原剂为SnCl₂·2H₂O；

3.2）按照酒石酸钾钠比配体为1:1~160的重量比，在步骤3.1）得到的溶液中加入酒石酸钾钠，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化；

3.3）将步骤3.2）制备的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述的用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒。

2.权利要求1所述的用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒的制备方法，包括以下步骤：

1）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备

1.1）1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖的制备：

250mL四口烧瓶中，加入32mL乙酸酐和0.16mL高氯酸，室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在30~40℃，半乳糖全部溶解后，加热控温30~40℃反应半个小时，停止加热后加入2.4g红磷，在水浴下，向烧瓶中滴加4.64mL溴和2.88mL水，反应放热，控制温度在20℃以内，滴加完毕后，控温18~20℃继续反应2h，反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，搅拌后过滤，所得滤液分离出有机相，水相20mL×3的氯仿萃取，合并有机相，有机相用10mL×3冰水和10mL×3饱和碳酸氢钠溶液洗至近中性，用无水硫酸钠干燥过夜后，旋干溶剂，得到浅黄色粘稠物，加入等体积的乙醚使之全部溶解，再加入两倍体积的石油醚，于冰箱内静置析晶，得到蜡状白色固体，过滤后真空干燥，得到1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖14.6g；

1.2）2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐的制备：

将步骤1.1）所得1-溴代-2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-半乳糖14.6g溶于14mL丙酮中，加入2.7g硫脲，加热回流15min，得到白色固体，过滤洗涤后，真空干燥得到产物2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐15.4g；

1.3）氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

将步骤1.2）所得2-S-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基)-2-异硫脲氢溴酸盐3.8g加入20mL由丙酮和水以1:1的摩尔比构成的混合溶液，同时加入2mL氯乙腈，搅拌溶解，加入1.6g碳酸钾和2g亚硫酸氢钠，室温搅拌30min，然后倒入80mL冰水，室温搅拌2h后过滤，得到浅粉色固体2.6g，用无水甲醇重结晶，得到氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷白色针状晶体1.6g；

1.4）2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的制备：

在步骤1.3）所得氰甲基-2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷1.01g中，加入0.1mol/L甲醇钠/甲醇溶液12.5mL，水浴控温20℃左右，反应48h，停止反应后，旋干溶剂，得到2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷的浅黄色固体；

2）GSA的制备

2.1）用0.1mol/L pH7.0的HEPES缓冲液溶解0.6g人血白蛋白，全部溶解后，加入40mg DTPA环酐，室温搅拌反应15min，得到DTPA-HSA溶液；

2.2）取6mL步骤2.1）所得DTPA-HSA溶液，加入0.1mol/L pH8.5的硼酸缓冲液稀释至20mL，调pH值至8.5，将稀释好的DTPA-HSA溶液加入步骤1）制备得到的2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷，待固体全部溶解后，37℃搅拌反应3h后，用二次蒸馏水透析平衡72h，得到GSA；

3）GSA冻干粉的制备：

3.1）将步骤2）得到的GSA溶于0.2mol/L pH3.5醋酸-醋酸钠缓冲液中；然后在其中加入含有还原剂的盐酸溶液，混合均匀，使溶液中还原剂比配体的重量为1:10~800，并控制溶液pH在2.5~4.0之间；所述的还原剂为SnCl₂·2H₂O；

3.2）按照酒石酸钾钠比配体为1:1~160的重量比，在步骤3.1）得到的溶液中加入酒石酸钾钠，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化；

3.3）将步骤3.2）制备的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述的用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒。

3.权利要求1所述用于制备^99mTc-GSA的冻干粉药盒在制备用于检测肝脏GSA摄取指数的药物中的应用。

4.权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的用于检测肝脏GSA摄取指数的药物是锝-99m标记的GSA配合物，该配合物的制备方法是在检测肝脏GSA摄取指数前，将从医用⁹⁹Mo-^99mTc发生器中淋洗获得的^99mTcO₄ ^-淋洗液加入权利要求1所述的冻干粉药盒中，摇匀后室温反应5~30分钟，得到锝-99m标记的GSA配合物。

5.权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的锝-99m标记的GSA配合物用于检测肝脏GSA摄取指数的过程包以下步骤：

1）经静脉推注所述的锝-99标记的配合物GSA，GSA剂量记作D0；

2）步骤1）静脉注射完成后立即采用SPECT进行动态数据采集，获得注射后30分钟内心脏、肝脏和肺脏的放射性计数分别随时间变化的函数，分别记作H(t)、L(t)和Lu(t)，并根据扫描图像勾画出心脏ROI、肺ROI和肝脏ROI，计算心脏ROI的面积AH、肺ROI的面积ALu和肝脏ROI的面积AL；

3）根据步骤2）测得的数据计算单位时间内肝脏从外周血中摄取放射性核素标记的GSA的剂量UI，计算过程如下：

3.1）将步骤2）得到的H(t)按照以下关系式I换算成全身血浆放射性计数随时间变化的函数B(t)：

B(t)=K×H(t)    （I）

其中K是心脏内血浆和全身血浆之间的比例系数；

3.2）将步骤3.1）得到的B(t)和步骤2）得到的L(t)一起代入以下函数关系式II：

$K_L\×\frac{\mathrm{dL}\left(t\right)}{\mathrm{dt}}=\mathrm{UI}\×K_B\×B\left(t\right)+b---\left(\mathrm{II}\right)$

以

为纵轴，K_B×B(t)为横轴作图，对2-30分钟内的数据点做直线拟合得到函数斜率，即为UI；

其中，K_L为肝脏放射性与所摄取GSA剂量之间的转换常数；K_B为肝外的全身血浆放射性与所摄取GSA剂量之间的转换常数；在以下函数关系式III中，取2-30分钟的H(t)和L(t)数据，以L(t)为纵轴，H(t)为横轴做散点图（如图3所示）后作线性回归求得K_L和K_BK：

$L\left(t\right)=-\frac{K_{B}K}{K_L}H\left(t\right)+\frac{100\%D_0}{K_L}---\left(\mathrm{III}\right).$

6.权利要求5所述的应用，其特征在于：步骤2）所述的采用SPECT进行的动态数据采集，按照以下方法进行：

采集过程共分两个阶段，第一阶段2分钟，桢/2秒，总计60桢；第二阶段28分钟，桢/30秒，总计56桢；采集矩阵128×128。

7.权利要求5所述的应用，其特征在于：步骤3）是将步骤2）得到的H(t)和L(t)先按照下面关系式III和IV进行校正，分别得到校正后的心脏放射性计数随时间变化的函数Hc(t)和肝脏放射性计数随时间变化的函数Lc(t)：

$\mathrm{Hc}\left(t\right)=H\left(t\right)-\frac{\mathrm{ALu}}{\mathrm{AH}}\×\mathrm{Lu}\left(t\right)---\left(\mathrm{III}\right)$

$\mathrm{Lc}\left(t\right)=L\left(t\right)-\frac{{\∫}_0^{t0}L\left(t\right)\mathrm{dt}}{{\∫}_0^{t0}H\left(t\right)\mathrm{dt}}\×H\left(t\right)---\left(\mathrm{IV}\right)$

其中ALu为步骤2）得到的肺ROI的面积；AH为步骤2）得到的心ROI的面积；t0为从团注99mTc-GSA到心脏内放射性达到峰值的时间；

然后再将Hc(t)代替步骤3.1）所述的关系式I中的H(t)换算成校正的全身血浆放射性计数随时间变化的函数Bc(t)，再将Bc(t)和Lc(t)代入以下函数关系式V：

$K_L\×\frac{\mathrm{dLc}\left(t\right)}{\mathrm{dt}}=\mathrm{UI}\×K_B\×\mathrm{Bc}\left(t\right)+b---\left(V\right)$

最后以为纵轴，K_B×Bc(t)为横轴作图，对2-30分钟内的数据点做直线拟合得到函数斜率，即为UI。

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