CN102645448A - 利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法 - Google Patents

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刘向荣
赵顺省
宋超超
王君
蔡会武
李侃社
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Xian University of Science and Technology
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Xian University of Science and Technology
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Abstract

本发明涉及一种利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法，在常压以及选定的温度下，用C80微量热仪即时测出小麦条锈病菌萌发培养液的热流值并存储于计算机中，经计算后得到小麦条锈病菌的生长周期曲线。本发明的操作简便、可靠性高，通过测得的生长周期曲线可以清晰地辨别小麦条锈病生长周期中的各个生长阶段以及各个生长阶段的时间长短、热量变化的快慢以及具体数值，从而为小麦条锈病菌的研究和防治提供有力的参考。

Description

利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法
技术领域
本发明属于植物病害监测研究技术领域，涉及一种利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法。
背景技术
小麦条锈病是由小麦条锈菌(Puccinia striiformisWest.f.sp.tritici)引起的世界性小麦重要病害，主要在我国西北、西南、华北和淮北等地冬麦区和西北春麦区发生。该病害具有分布广、传播快、危害面积大等特点，一般流行年份可使小麦减产20％～30％，大流行年份则可使小麦减产60％～90％，甚至绝收，为此对小麦条锈病菌的生长问题研究也是一个关系到国家民生的重大课题。
目前本领域对于小麦条锈病菌生长周期的测定主要采用计数法或光电比浊法：计数法包括稀释平板计数法以及显微镜直接计数法，是将少量纯种单细胞小麦条锈病菌接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，进而绘制曲线，该方法虽然原理简单，但操作复杂繁琐，精确度不高；光电比浊法是利用在可见光的450～650nm波段内微生物细胞浓度与透光度成反比的原理而采用的一种自动控制的方法，但该法只能检测含有大量细菌的悬浮液，对颜色太深的样品具有一定的局限性，致使其测定对培养液的选择性较大。
发明内容
本发明的目的在于对现有技术存在的问题加以解决，提供一种操作简便、自主和可靠性高的利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法，通过该方法可以清晰地确定出小麦条锈病菌生长速率最快的时间段和条件，从而为小麦条锈病的防治提供有力的参考。
为实现上述发明目的而提供的测定小麦条锈病菌生长周期的方法包括下述的测定步骤：
1、根据田间采集的典型的小麦条锈病叶片，通过震荡法获取小麦条锈病菌的菌种，配制菌种浓度为0.05g/l～0.10g/l；
2、取重量百分比为2％～5％的灭菌水或蔗糖液或葡萄糖液或麦芽糖液与重量百分比为95％～98％的蒸馏水配制成小麦条锈病菌萌发培养液，培养液的pH为6～7；
3、分别在两个试管A、B中加入等量的配适温度为10℃～30℃的培养液，然后在试管A中添加小麦条锈病菌的菌种，添加比例为每10ml培养液中添加0.6～1mg菌种，将试管A、B置于摇床中震荡24小时；
4、在常压以及选定的温度28℃下，从试管A、B中移取溶液3ml分别加入C80微量热仪的样品池和参比池(参比池主要用来消除培养液引起的误差，例如溶解热)中，用C80微量热仪每间隔40秒时间自动记录样品池在该时段的热流(Heatflow)值Pt并存储于计算机中，通过公式
lnPt＝lnP0+kt
进行指数增长期微生物的生长速率常数k的定量计算，式中Pt、P0、k和t分别是时间t时的热流、初始热流、对数期生长速率常数和生长时间，以时间t为横坐标，用lnPt对t作图就可得到对数期生长速率常数k的曲线图，即小麦条锈病菌生长周期曲线，由此获得小麦条锈病菌处于各个生长阶段的时间以及热量变化的具体数值，进而确定出小麦条锈病菌生长速率最快的时间段和条件，为小麦条锈病的防治提供了有力的参考。
具体实施过程中，小麦条锈病菌萌发的适宜培养液的适温范围因基质不同而略有差异，由灭菌水与蒸馏水配置的培养液的适温范围为10℃～20℃，在蒸馏水与蔗糖液、葡萄糖液或麦芽糖液配置的培养液的适温范围为10℃～15℃。
与现有技术相比，本发明所述的测定方法操作简便、实时、定量、可靠性高，它利用C80微量热即时记录小麦条锈病菌生长期间的热流变化的方法获得小麦条锈病菌的生长周期曲线，通过该生长周期曲线可以清晰地辨别小麦条锈病生长周期中的各个生长阶段以及各个生长阶段的时间长短、热量变化的快慢以及具体数值，从而为小麦条锈病菌的研究和防治提供了有力的参考。
附图说明
附图是本发明一个实施例方法测得的小麦条锈病菌的生长周期曲线图。图中横轴为时间坐标t轴，纵轴为对数热流坐标lnPt轴。
具体实施方式
以下结合一个实施例对本发明内容做进一步说明。
1、制备菌种——根据田间采集的典型的小麦条锈病叶片，通过震荡法获取小麦条锈病菌的菌种，配制菌种浓度为0.08g/l；
2、配制培养液——取2％重量的葡萄糖液与98％重量的蒸馏水配制成小麦条锈病菌萌发培养液500ml，培养液pH为6～7；
3、分别移取10ml培养液至两个试管A、B中，然后向A中添加0.8mg的小麦条锈病菌，B中培养液作为参比液，培养液温度为10℃～15℃，将试管A、B置于摇床中震荡24小时；
4、在常压以及选定的温度28℃下，从试管A、B中移取溶液3ml分别加入C80微量热仪的样品池和参比池中，用C80微量热仪每间隔40s时间即时自动记录样品池在该时段的热流值Pt并存储于计算机中，通过公式
lnPt＝lnP0+kt                            (1)
进行指数增长期微生物的生长速率常数k的定量计算，以时间t为横坐标，用lnPt对t作图就可得到对数期生长速率常数k的曲线图，即小麦条锈病菌生长周期曲线。
表1：小麦条锈病菌生长曲线的部分原始数据
Figure BSA00000698671400041
Figure BSA00000698671400051
根据公式(1)并通过计算机对测得数据进行计算后，得到如附图所示的小麦条锈病菌的生长周期曲线图，并可以得到小麦条锈病菌处于各个阶段的热量变化的具体数值。从图中可以看出，微生物生长周期大致分为四个阶段A-B、B-C、C-D、D-E，它们分别对应着小麦条锈病菌生长周期的延缓期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段，其中的对数期B-C阶段为小麦条锈病菌生长最快的阶段，也是最佳防治阶段。

Claims (3)

1.一种利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法，其特征在于包括下述的测定步骤：
1.1根据田间采集的典型的小麦条锈病叶片，通过震荡法获取小麦条锈病菌的菌种，配制菌种浓度为0.05g/l～0.10g/l；
1.2取重量百分比为2％～5％的灭菌水或蔗糖液或葡萄糖液或麦芽糖液与重量百分比为95％～98％的蒸馏水配制成小麦条锈病菌萌发培养液，培养液的pH为6～7；
1.3分别在两个试管A、B中加入等量的配适温度为10℃～30℃的培养液，然后在试管A中添加小麦条锈病菌的菌种，添加比例为每10ml培养液中添加0.6～1mg菌种，将试管A、B置于摇床中震荡24小时；
1.4在常压以及选定的温度28℃下，从试管A、B中移取溶液3ml分别加入C80微量热仪的样品池和参比池中，用C80微量热仪每间隔40秒时间即时自动记录样品池在该时段的热流值Pt并存储于计算机中，通过公式
lnPt＝lnP0+kt
进行指数增长期微生物的生长速率常数k的定量计算，式中Pt、P0、k和t分别是时间t时的热流、初始热流、对数期生长速率常数和生长时间，以时间t为横坐标，用lnPt对t作图就可得到对数期生长速率常数k的曲线图，即小麦条锈病菌生长周期曲线。
2.根据权利要求1所述的利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法，其特征是在两个试管A、B中加入的培养液由灭菌水与蒸馏水配置而成，其配适温度为10℃～20℃。
3.根据权利要求1所述的利用微量热法测定小麦条锈病菌生长周期的方法，其特征是在两个试管A、B中加入的培养液由蔗糖液或葡萄糖液或麦芽糖液与蒸馏水配置而成，其配适温度为10℃～15℃。
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