CN102565317B - 一种凝血因子和d-二聚体的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种凝血因子和纤溶功能的测定方法,使用一台半自动凝血分析仪进行测试,测定步骤是:采集患者血液样品,分离出血浆;使用加样枪将血浆注入测试杯中;然后将该测试杯放入凝血因子测试装置中,加入试剂,启动凝血因子测试装置的计时按钮,凝血因子测试装置依据双磁路磁珠法对测试杯中的血浆进行测试;使用加样枪将血浆注入纤溶功能测试杯中,然后将该测试杯放入纤溶功能测试装置中,加入试剂,启动纤溶功能测试装置的计时按钮,所述纤溶功能测试装置依据光电比浊法对该测试杯中的血浆进行测试,纤溶功能测试装置测试完毕,打印输出纤溶功能数据;本发明不仅操作简便,而且大大降低了成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种凝血因子和D-二聚体的测定方法,使用半自动凝血分析仪,凝血因子依据双磁路磁珠法进行测定,D-二聚体依据光电比浊法进行测定。
背景技术
中国专利200520103130.4公开了一种使用全自动血流变仪测试血浆的方法,第一方案:①关闭阀l 7,②吸样泵19开始工作,吸入定量测试样品,③打开阀17,令测试样品自由下流,④检测测试样品从传感器17流到传感器18的时间,⑤所用时间与纯水流出的时间相比,即为血浆粘度。第二方案:①用传感器感应测试血浆的液面,然后令加样针深入液面一定距离,距离深度与装血浆的试管直径有关,与测试血浆用量有关,用户可自行设定,②令吸样泵开始定量吸样,液面在降低,传感器脱离液面,③打开与大气联通的阀,计时开始,液体开始自由下流,当传感器重新接触到液面时,停止计时;所用时间与纯水流出时间相比,即为血浆粘度。该专利仅仅测量血浆粘度,无法测量其它项目。因此,需要提出一种凝血因子和D-二聚体的测定方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种凝血因子和D-二聚体的测定方法,本发明使用一台半自动凝血分析仪,凝血因子依据双磁路磁珠法进行测定,D-二聚体依据光电比浊法进行测定,本发明的针对凝血因子和纤溶功能(D-二聚体)采用了两种测试原理,将两套测试装置和一种测试杯有机的结合成一体,不仅操作简便,而且大大降低了成本。
本发明的目的是由下述技术方案实现的:一种凝血因子和D-二聚体的测定方法,使用一台半自动凝血分析仪进行测试,测定步骤是:
A、采集患者血液样品,对该血液样品进行抗凝处理,生成抗凝全血,将抗凝全血离心处理,离心速度是3000转/分钟,保持15-30分钟,或者离心力是1000g,保持15-30分钟,分离出血浆,放入血浆储存杯备用;
B、使用加样枪从血浆储存杯中按测试用量取出血浆样本注入测试杯中,使用加珠器在注入血浆样本的测试杯中置入一枚磁珠,然后将该测试杯放置到预热槽装置中,设置样品号,操作启动键对该测试杯中的血浆样本预热;
C、所述血浆样本预热到37℃,预热槽装置发出提示音,从预热槽装置中取出所述测试杯,然后将该测试杯放入凝血因子测试装置中,使用加样枪在所述测试杯中按测试要求加入凝血因子测试专用试剂,启动凝血因子测试装置的计时按钮,所述的分析仪开始计时,所述专用试剂的温度是37℃;如果使用与仪器联动的加样枪进行加入试剂的操作时,当该加样枪将所述专用试剂加入测试杯后,所述的分析仪即刻开始计时;
D、运行凝血因子测试装置依据双磁路磁珠法对测试杯中的血浆样本进行测试,测试完毕,按照所述仪器的设置自动打印输出被测血浆样本的凝血因子测定数据;
测试项目Ⅰ,血浆样本用量50μl,试剂用量100μl,凝血因子测试专用试剂的名称是凝血酶原时间测定试剂,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;
测试项目Ⅱ,血浆样本用量50μl,试剂1用量50μl,试剂2用量50μl,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;所述试剂1的名称是活化部分凝血活酶时间试剂,所述试剂2的名称是氯化钙;
测试项目Ⅲ,血浆样本用量75μl,试剂用量75μl,凝血因子测试专用试剂的名称是凝血酶时间试剂,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;
测试项目Ⅳ,血浆样本用量10μl,缓冲液用量90μl,缓冲液名称是咪唑缓冲液,试剂用量50μl,凝血因子测试专用试剂的名称是纤维蛋白原试剂,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;
E、使用加样枪从血浆储存杯中按测试用量取出血浆样本注入纤溶功能测试杯中,然后将该测试杯放置到预热槽装置中,设置样品号,操作启动键对该测试杯中的血浆样本预热;
F、所述血浆样本预热到37℃,所述预热槽装置发出提示音,从所述预热槽装置中取出所述测试杯,然后将该测试杯放入纤溶功能测试装置中,在所述测试杯中按测试要求加入纤溶功能测试专用试剂,启动纤溶功能测试装置的计时按钮,所述的分析仪即刻开始计时,所述试剂温度是37℃;如果使用与仪器联动的加样枪进行加入试剂的操作时,当该加样枪将所述专用试剂加入测试杯后,所述的分析仪即刻开始计时;
G、运行纤溶功能测试装置依据光电比浊法对该测试杯中的血浆样本进行测试,纤溶功能测试装置测试完毕,按照所述分析仪的设置,根据测定值和标准数据计算出D-二聚体数据,然后打印输出被测血浆样本的D-二聚体数据;
当采用的纤溶功能测试专用试剂是日本试剂时,血浆样本用量是7μl,缓冲液R1的用量是180μl,试剂R2的用量是60μl,所述试剂R2是日本第一化学公司的乳胶试剂;血浆样本加入缓冲液R1,37℃预热180秒,然后再加入试剂R2,37℃预热21秒读测定值A1,37℃预热151秒读测定值A2;
当采用的纤溶功能测试专用试剂是德国试剂时,血浆样本用量15μl,缓冲液用量60μl,所述试剂用量30μl,所述试剂是德国美创化学公司的乳胶试剂,所述血浆样本加入所述缓冲液,37℃预热1-10分钟,然后再加入预热到37℃的所述试剂,读测定值A1;
所述的半自动凝血分析仪,有一个机座装置,所述机座装置前部设置打印机装置和试剂槽装置,所述机座中部设置液晶显示器和纤溶功能测试装置,所述机座装置后部设置预热槽装置、凝血因子测试装置、微电脑键盘装置,所述机座装置内部设置控制电路;所述试剂槽装置包括多个盛放试剂的槽体,该槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;所述纤溶功能测试装置包括多个测试杯位和光电检测电路,所述测试杯位一侧设置发光晶体管电路,该测试杯位另一侧设置光电转换电路,该光电检测电路的控制端与所述控制电路电连接;所述预热槽装置包括多个预热槽体,所述预热槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;所述凝血因子测试装置包括多个测试杯位,所述测试杯位两侧设置电磁驱动线圈,所述测试杯位正下方设置一组测量线圈,所述电磁驱动线圈的控制端及所述测量线圈的输出端与所述控制电路电连接。
本发明与现有技术相比具有如下优点:
1、本发明针对凝血因子和纤溶功能(D-二聚体)采用了两种测试原理,将两套测试装置和一种测试杯有机的结合成一体,不仅操作简便,而且大大降低了成本。
2、本发明中的两套测试装置分立设置,统一控制,确保各测试通道的各自特定试验参数良好一致性。
3、本发明中实施的两种检测项目使用同一种配套的专利样品杯,方便用户使用,节约了耗材成本,也使测试通道的一致性得到确保。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
附图说明
图1是本发明所用仪器的正面的结构示意图;
图2是本发明所用仪器的俯视结构图;
图3是本发明所用仪器的光电检测元件位置示意图;
图4是本发明所用仪器的电磁驱动元件位置示意图。
具体实施方式
实施例一:
本发明的凝血因子和D-二聚体的测定方法,使用一台半自动凝血分析仪进行测试,测定步骤是:
A、采集患者血液样品,对该血液样品进行抗凝处理,生成抗凝全血,将抗凝全血离心处理,离心速度是3000转/分钟,保持15-30分钟(优选时间是20分钟),或者离心力是1000g,保持15-30分钟(优选时间是20分钟),分离出血浆,放入血浆储存杯备用;
采集患者血液样品(按检测标准用量采集,通常是5ml),对该血液样品进行抗凝处理,生成抗凝全血,将抗凝全血离心处理;本实施例中,患者血液样品用血液抗凝剂3.8%(浓度)枸橼酸钠进行抗凝,抗凝剂和血液的比例为1:9;将抗凝全血注入样品管中然后移入到离心机中离心;本实施例中,也可以采用控制离心力的指标来实现分离,本发明也可以采用LDI4-0.8水平式离心机(北京医用离心机厂)。
B、使用加样枪从血浆储存杯中按测试用量取出血浆样本注入测试杯中,使用加珠器在注入血浆样本的测试杯中置入一枚磁珠,然后将该测试杯放置到预热槽装置中,设置样品号,操作启动键对该测试杯中的血浆样本预热;
C、所述血浆样本预热到37℃,预热槽装置发出提示音,从预热槽装置中取出所述测试杯,然后将该测试杯放入凝血因子测试装置中,使用加样枪在所述测试杯中按测试要求加入凝血因子测试专用试剂,启动凝血因子测试装置的计时按钮,所述的分析仪开始计时,所述专用试剂的温度是37℃;如果使用与仪器联动的加样枪进行加入试剂的操作时,当该加样枪将所述专用试剂加入测试杯后,所述的分析仪即刻开始计时(不必另行启动所述计时按钮);
D、运行凝血因子测试装置依据双磁路磁珠法对测试杯中的血浆样本进行测试,测试完毕,按照所述仪器的设置自动打印输出被测血浆样本的凝血数据;
测试项目Ⅰ,血浆用量50μl,试剂用量100μl,凝血因子测试专用试剂的名称是凝血酶原时间测定试剂(简称PT),测试时间小于100秒,最优选的测试时间是11-16秒,测试温度是37℃;
测试项目Ⅱ,血浆用量50μl,试剂1用量50μl,试剂1名称是活化部分凝血活酶时间试剂(简称APTT),试剂2用量50μl,试剂2名称是氯化钙,测试时间小于100秒,最优选的测试时间是24-38秒,测试温度是37℃;试剂1、试剂2是凝血因子测试专用试剂;
测试项目Ⅲ,血浆用量75μl,试剂用量75μl,凝血因子测试专用试剂的名称是凝血酶时间试剂(简称TT),测试时间小于100秒,最优选的测试时间是11-20秒,测试温度是37℃;
测试项目Ⅳ,血浆用量10μl,缓冲液用量90μl,缓冲液名称是咪唑缓冲液,试剂用量50μl,凝血因子测试专用试剂的名称是纤维蛋白原试剂(简称FIB),测试时间小于100秒,测试温度是37℃;
E、使用加样枪从血浆储存杯中按测试用量取出血浆样本注入纤溶功能测试杯中,然后将该测试杯放置到预热槽装置中,设置样品号,操作启动键对该测试杯中的血浆样本预热;
F、所述血浆样本预热到37℃,所述预热槽装置发出提示音,从所述预热槽装置中取出所述测试杯,然后将该测试杯放入纤溶功能测试装置中,在所述测试杯中按测试要求加入纤溶功能测试专用试剂,启动纤溶功能测试装置的计时按钮,所述的分析仪即刻开始计时,所述试剂温度是37℃;如果使用与仪器联动的加样枪进行加入试剂的操作时,当该加样枪将所述专用试剂加入测试杯后,所述的分析仪即刻开始计时;
G、运行纤溶功能测试装置依据光电比浊法对该测试杯中的血浆样本进行测试,纤溶功能测试装置测试完毕,按照所述分析仪的设置,根据测定值和标准数据计算出D-二聚体数据,然后打印输出被测血浆样本的D-二聚体数据;
当采用的纤溶功能测试专用试剂是日本试剂时,血浆样本用量是7μl,缓冲液R1的用量是180μl,试剂R2的用量是60μl,所述试剂R2是日本第一化学公司的乳胶试剂(胶乳颗粒包被的抗体);血浆样本加入缓冲液R1,37℃预热180秒,然后再加入试剂R2,37℃预热21秒读测定值A1,37℃预热151秒读测定值A2;缓冲液R1的成分是三甲基氨基甲烷,PH=6.7;
当采用的纤溶功能测试专用试剂是德国试剂时,血浆样本用量15μl,缓冲液用量60μl,所述试剂用量30μl,所述试剂是德国美创化学公司的乳胶试剂,所述血浆样本加入所述缓冲液,37℃预热1-10分钟,然后再加入预热好的所述试剂,读测定值A1;
本实施例中,所述的测定值A1、测定值A2,各自仅代表一个具体的数值。
本实施例中,测试用的缓冲液和试剂都必须预热到37℃。
本实施例中,可以先对凝血因子进行测定,再对纤溶功能进行测定;也可以先对纤溶功能进行测定,再对凝血因子进行测定;还可以同时进行凝血因子测定和纤溶功能测定。
本发明中所述的纤溶功能测试是指D-二聚体的测定,D-二聚体(D-Dimer,D-D)是交朕纤维蛋白特异的降解产物,它的生成或增高反映了凝血和纤溶系统的激活,血浆D-二聚体测定是了解继发纤维蛋白溶解功能的一个试验。
本发明中所用的半自动凝血分析仪,有一个机座装置,所述机座装置前部设置打印机装置和试剂槽装置,所述机座中部设置液晶显示器和纤溶功能测试装置,所述机座装置后部设置预热槽装置、凝血因子测试装置、微电脑键盘装置,所述机座装置内部设置控制电路;所述试剂槽装置包括多个盛放试剂的槽体,该槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;所述纤溶功能测试装置包括多个测试杯位和光电检测电路,所述测试杯位一侧设置发光晶体管电路,该测试杯位另一侧设置光电转换电路,该光电检测电路的控制端与所述控制电路电连接;所述预热槽装置包括多个预热槽体,所述预热槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;所述凝血因子测试装置包括多个测试杯位,所述测试杯位两侧设置电磁驱动线圈,所述测试杯位正下方设置一组测量线圈,所述电磁驱动线圈的控制端及所述测量线圈的输出端与所述控制电路电连接。
参见图1、图2、图5,本发明的半自动凝血分析仪,有一个机座装置100,机座装置包括一个框架式底座和一个面板;所述机座装置前部设置打印机装置2和试剂槽装置5,打印机装置采用常规微型打印机(爱普森微型打印机),其控制端与控制电路的输出端信号连接;试剂槽装置包括4个试剂槽体,其中3个试剂槽体是恒温保持试剂槽体3,该试剂槽体底部设置恒温电热板,设定温度是37℃,该设定温度可以通过微电脑键盘装置进行修改;其中的一个试剂槽体5是带搅拌机构的,该试剂槽体底部有一个可以转动的驱动磁盘,将试剂槽体内放入试剂然后再放入一个磁棒,启动驱动磁盘就可以实现搅拌功能。所述机座中部设置液晶显示器1和纤溶功能测试装置8,液晶显示器与控制电路电连接,用于显示微电脑键盘装置输入的检测数据、运行数据和检测结果数据;所述机座装置后部设置预热槽装置13、凝血因子测试装置10、微电脑键盘装置9;所述预热槽装置包括四组16个测试杯位,每组测试杯位可以放置一个四联体的测试杯,每组测试杯位设置一个启动键12;在测试杯位下面设置恒温电热板,设定温度是37℃,该设定温度可以通过微电脑键盘装置进行修改;本发明使用四联体测试杯进行测试,四联体测试杯结构可以参见中国专利号200930125807.8公开的内容,实际使用中,四联体测试杯可以分解成四个独立的测试杯或者两个贰联体测试杯;凝血因子测试装置包括一组四个测试杯位,测试杯位后方设置一个计时按钮11,可以放置一个四联体的测试杯;微电脑键盘装置包括六个操作键,分别是左向光标键、右向光标键、参数+设定键、参数-设定键、退出键、确认键;所述机座装置内部设置控制电路,该控制电路中包括电源电路和微电脑电路,该微电脑电路中固化有操作程序,用于对测试全过程的控制。所述试剂槽装置包括多个盛放试剂的槽体,该槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;所述纤溶功能测试装置包括多个测试杯位和光电检测电路,本实施例中,纤溶功能测试装置包括一组四个测试杯位,可以放置一个四联体的测试杯,测试杯位后方设置一个计时按钮。所述测试杯位一侧设置发光晶体管电路,该测试杯位另一侧设置光电转换电路,该光电检测电路的控制端与所述控制电路电连接;发光晶体管电路中包括一个红外发光二级管,光电转换电路中包括一个红外接收晶体管;参见图3(光电检测元件位置图),测试杯位801的一侧设置红外发光二极管802,相对应一侧设置红外接收晶体管803;本发明依据光电比浊法进行纤溶功能测定,红外接收晶体管将其电信号传送给控制电路中的微电脑电路,微电脑电路就生成一个血浆纤溶功能参数。所述预热槽装置包括多个预热槽体,所述预热槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;参见图4(电磁驱动元件位置图)所述凝血因子测试装置包括多个测试杯位,所述测试杯位101两侧设置电磁驱动线圈(即左侧电磁驱动线圈102、右侧电磁驱动线圈103),驱动线圈内部有电磁铁,该电磁驱动线圈的控制端与所述控制电路电连接,测试杯位正下方设置一组测量线圈,所述测量线圈的输出端与所述控制电路电连接。本发明依据双磁路磁珠法进行凝血因子测定,测量线圈将其获得的电磁信号传送给控制电路中的微电脑电路,微电脑电路就生成一个凝血因子参数。本发明的控制采用计算机控制技术,其控制电路属于常规技术手段,不进行详细描述。
在本实施例中,预热槽装置采用现有技术,在预热槽面设置一个加热装置,该加热装置是一个加热用线路板,通过该线路板上的导线发热,用于达到使测试区域保持37℃恒温的作用,本发明的控制采用计算机控制技术,其自动控制电路属于常规技术手段,不进行详细描述。
本实施例中,所述机座装置上设置加珠器保护槽4和加样枪保护槽6和7,所述加样枪上设置信号传输插头,该传输插头通过机座装置上的插孔与控制电路电连接。所述加珠器是一个存放和释放检测用钢珠的工具(属于现有技术),检测时加珠器放在加珠器保护槽内可以防止钢珠磁化。加样枪是向测试杯中添加试剂的工具(属于现有技术),加样枪保护槽可以防止加样枪的污染和损坏,并且取用方便。加样枪上设置加样结束的信号检测元件,加样结束时,该检测元件发出一个电信号,该电信号通过信号传输插头、机座装置上的插孔发送给控制电路,控制电路开始对测试项目计时。
Claims (1)
1.一种凝血因子和D-二聚体的测定方法,其特征在于:使用一台半自动凝血分析仪进行测试,测定步骤是:
A、采集患者血液样品,对该血液样品进行抗凝处理,生成抗凝全血,将抗凝全血离心处理,离心速度是3000转/分钟,保持15-30分钟,或者离心力是1000g,保持15-30分钟,分离出血浆,放入血浆储存杯备用;
B、使用加样枪从血浆储存杯中按测试用量取出血浆样本注入测试杯中,使用加珠器在注入血浆样本的测试杯中置入一枚磁珠,然后将该测试杯放置到预热槽装置中,设置样品号,操作启动键对该测试杯中的血浆样本预热;
C、所述血浆样本预热到37℃,预热槽装置发出提示音,从预热槽装置中取出所述测试杯,然后将该测试杯放入凝血因子测试装置中,使用加样枪在所述测试杯中按测试要求加入凝血因子测试专用试剂,启动凝血因子测试装置的计时按钮,所述的分析仪开始计时,所述专用试剂的温度是37℃;如果使用与仪器联动的加样枪进行加入试剂的操作时,当该加样枪将所述专用试剂加入测试杯后,所述的分析仪即刻开始计时;
D、运行凝血因子测试装置依据双磁路磁珠法对测试杯中的血浆样本进行测试,测试完毕,按照所述仪器的设置自动打印输出被测血浆样本的凝血因子测定数据;
测试项目Ⅰ,血浆样本用量50μl,试剂用量100μl,凝血因子测试专用试剂的名称是凝血酶原时间测定试剂,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;
测试项目Ⅱ,血浆样本用量50μl,试剂1用量50μl,试剂2用量50μl,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;所述试剂1的名称是活化部分凝血活酶时间试剂,所述试剂2的名称是氯化钙;
测试项目Ⅲ,血浆样本用量75μl,试剂用量75μl,凝血因子测试专用试剂的名称是凝血酶时间试剂,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;
测试项目Ⅳ,血浆样本用量10μl,缓冲液用量90μl,缓冲液名称是咪唑缓冲液,试剂用量50μl,凝血因子测试专用试剂的名称是纤维蛋白原试剂,测试时间小于100秒,测试温度是37℃;
E、使用加样枪从血浆储存杯中按测试用量取出血浆样本注入纤溶功能测试杯中,然后将该测试杯放置到预热槽装置中,设置样品号,操作启动键对该测试杯中的血浆样本预热;
F、所述血浆样本预热到37℃,所述预热槽装置发出提示音,从所述预热槽装置中取出所述测试杯,然后将该测试杯放入纤溶功能测试装置中,在所述测试杯中按测试要求加入纤溶功能测试专用试剂,启动纤溶功能测试装置的计时按钮,所述的分析仪即刻开始计时,所述试剂温度是37℃;如果使用与仪器联动的加样枪进行加入试剂的操作时,当该加样枪将所述专用试剂加入测试杯后,所述的分析仪即刻开始计时;
G、运行纤溶功能测试装置依据光电比浊法对该测试杯中的血浆样本进行测试,纤溶功能测试装置测试完毕,按照所述分析仪的设置,根据测定值和标准数据计算出D-二聚体数据,然后打印输出被测血浆样本的D-二聚体数据;
当采用的纤溶功能测试专用试剂是日本试剂时,血浆样本用量是7μl,缓冲液R1的用量是180μl,试剂R2的用量是60μl,所述试剂R2是日本第一化学公司的乳胶试剂;血浆样本加入缓冲液R1,37℃预热180秒,然后再加入试剂R2,37℃预热21秒读测定值A1,37℃预热151秒读测定值A2;
当采用的纤溶功能测试专用试剂是德国试剂时,血浆样本用量15μl,缓冲液用量60μl,所述试剂用量30μl,所述试剂是德国美创化学公司的乳胶试剂,所述血浆样本加入所述缓冲液,37℃预热1-10分钟,然后再加入预热到37℃的所述试剂,读测定值A1;
所述的半自动凝血分析仪,有一个机座装置,所述机座装置前部设置打印机装置和试剂槽装置,所述机座中部设置液晶显示器和纤溶功能测试装置,所述机座装置后部设置预热槽装置、凝血因子测试装置、微电脑键盘装置,所述机座装置内部设置控制电路;所述试剂槽装置包括多个盛放试剂的槽体,该槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;所述纤溶功能测试装置包括多个测试杯位和光电检测电路,所述测试杯位一侧设置发光晶体管电路,该测试杯位另一侧设置光电转换电路,该光电检测电路的控制端与所述控制电路电连接;所述预热槽装置包括多个预热槽体,所述预热槽体底部设置恒温电热板,该恒温电热板的控制端与所述控制电路电连接;所述凝血因子测试装置包括多个测试杯位,所述测试杯位两侧设置电磁驱动线圈,所述测试杯位正下方设置一组测量线圈,所述电磁驱动线圈的控制端及所述测量线圈的输出端与所述控制电路电连接。
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