CN102559496B - 一株对芘具有降解功能的菌株 - Google Patents

一株对芘具有降解功能的菌株 Download PDF

Info

Publication number
CN102559496B
CN102559496B CN201010584916.8A CN201010584916A CN102559496B CN 102559496 B CN102559496 B CN 102559496B CN 201010584916 A CN201010584916 A CN 201010584916A CN 102559496 B CN102559496 B CN 102559496B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pyrene
bacterial strain
degradation
days
degrading
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201010584916.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102559496A (zh
Inventor
程莉蓉
豆俊峰
丁爱中
杜勇超
李帅冉
范福强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Normal University
Original Assignee
Beijing Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Normal University filed Critical Beijing Normal University
Priority to CN201010584916.8A priority Critical patent/CN102559496B/zh
Publication of CN102559496A publication Critical patent/CN102559496A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102559496B publication Critical patent/CN102559496B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Processing Of Solid Wastes (AREA)

Abstract

本发明公开了属于生物降解处理技术领域的一株对芘具有降解功能的菌株。芘降解菌经鉴定为Stenotrophomonas acidaminiphila，菌种保藏号为CGMCC3683。将该菌株制成含菌量为1.25×108CFU/ml的菌悬液，对初始浓度分别为0.13mg/L、0.29mg/L、0.58mg/L、1.21mg/L的芘在7天后的降解去除率分别为96.31％、92.55％、90.17％、88.48％。

Description

一株对芘具有降解功能的菌株
技术领域
本发明属于受污染土壤与水的生物降解处理技术领域，特别涉及一株对芘具有降解功能的菌株。
背景技术
多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)是一类含有两个或两个以上苯环，以线状、角状或簇状排列的稠环型化合物，具有疏水性、低溶解度、低蒸汽压、高熔点和沸点、辛醇-水分配系数高等特性。多环芳烃类化合物具有强烈的致癌作用、致畸作用和致突变作用，一般来说，2～3环的低分子量PAHs具有显著的急性毒性，而某些高分子量的PAHs具有潜在的致癌性。由于PAHs分子中存在共轭大π键电子体系，因此具有较高的稳定性，其光解作用和生物降解作用缓慢，能够通过各种环境介质长距离迁移并长期存在于环境中，通过环境蓄积、生物蓄积、生物转化或化学反应等方式损害健康和环境，已引起各国环境科学家的高度重视。美国环保局早在80年代就已把16种未带分支的PAHs确定为环境中的优先污染物，我国也把PAHs列入环境污染的黑名单中。生物降解是实现恢复PAHs污染环境的最有效手段之一，常见的具有降解PAHs功能微生物有假单胞菌属(Pseudomonas)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、红球菌属(Rhodococcus)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、芽抱杆菌属(Bacillus)、黄杆菌属(Flavobacterium)、气单胞菌属(Aeromonas)、拜叶林克氏菌属(Beijernckia)、棒状杆菌属(Corynebaeterium)、蓝细菌(Cyanobacteria)、微球菌属(Micrococcus)、诺卡氏菌属(Nocardia)和弧菌属(Vibrio)等。
然而由于缺少高效的多环芳烃降解菌，制约了多环芳烃污染土壤生物修复技术的进一步发展和应用。因此，需要从污染的环境中驯化筛选出对多环芳烃降解速率较快的微生物菌种，然后再把它们应用于实际PAHs污染环境的生物治理，这对于治理和修复多环芳烃污染土壤有重要的意义。
发明内容
本发明提供一株对芘具有降解功能的菌株。所用菌株经鉴定为Stenotrophomonasacidaminiphila，2010年3月23日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，该中心位于北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC3683。将该菌株制成含菌量为1.25×108CFU/ml的菌悬液，可用于环境中芘的降解。
从污染土壤中分离纯化所述芘降解菌的步骤如下：
(1)选取受石油污染的土壤，将其通过直径为2mm的网筛后立即放置于4℃冰箱中保存备用。
(2)向体积为1000mL的开口玻璃瓶中加入25～30mL浓度为1g/L的芘的丙酮混合溶液，为除去丙酮将玻璃瓶开口放置2天。
(3)向步骤(2)中开口玻璃瓶中加入500～600mL基础培养基，在转速为100r/min的条件下搅拌40～50min后加入步骤(1)中的土壤250g；然后置于温度为25～30℃的环境中在转速为100r/min的条件下搅拌富集驯化培养30d，在培养期间定期向玻璃瓶中加入基础培养基以维持玻璃瓶中泥浆系统的水土比例保持不变；其中基础培养基的组成为：NH4Cl：1.5g·L-1，KH2PO4：1.5g·L-1，MgCl2：0.25g·L-1，CaCl2·2H2O：0.10g·L-1。
(4)向体积为100～200mL的锥形瓶中加入10mL浓度为1g/L的芘的丙酮混合溶液，为除去丙酮将锥形瓶开口放置2天。
(5)向步骤(4)中的锥形瓶中入50mL基础培养基、0.5mL微量金属液和0.1mL维生素c溶液；其中微量金属液的组成为：CoCl2·6H2O：35mg·L-1，CuCl2：0.20mg·L-1，H3BO3：6.0mg·L-1，MnCl2·4H2O：25mg·L-1，Na2MoO4·2H2O：3.0mg·L-1，NiCl2·2H2O：2.0mg·L-1，ZnCl2：2.5mg·L-1。
(6)向步骤(5)中的锥形瓶内接入步骤(3)驯化的土壤0.25g，然后置于温度为25～30℃转速为100r/min的振荡器中培养5～7天，每天打开瓶口一次以恢复锥形瓶内的溶解氧；按接种体积比为200～250∶1的比例转入另一按步骤(4)至(5)处理后的锥形瓶内，当转接次数大于8之后即可获得高效去除芘的好氧降解菌群。
(7)向体积为500mL的锥形瓶内加入400mL基础培养基、1.0mL微量金属液、0.1mL维生素c溶液，摇匀后作为液体培养基备用。
(8)向体积为150mL的锥形瓶内加入50mL按步骤(7)配制的液体培养基和0.60g琼脂，然后在温度为121℃的高压锅中灭菌20分钟，在室温下冷却至65～70℃时，在超净工作台中将其倒入体积为160mL的培养皿中，为除去培养基表面多余的水分将该培养皿在超净工作台中放置2天。
(9)在超净工作台中向步骤(8)中的培养皿中加入0.5mL浓度为1g/L的芘丙酮溶液，来回倾斜转动培养皿使芘的丙酮溶液均匀分布，为除去培养基表面的丙酮将该培养皿在超净工作台中放置2天。
(10)向体积为25mL的锥形瓶内加入10mL按步骤(7)配制的液体培养基和0.25g琼脂，在温度为121℃的高压锅中灭菌20分钟，在超净工作台中冷却至38～40℃。
(11)在超净工作台中向步骤(10)的锥形瓶中加入1mL步骤(6)得到的芘好氧降解菌群溶液，摇匀后吸取1mL慢慢加入步骤(9)中的培养皿中，来回倾斜转动培养皿使接种有混合菌群的培养基溶液均匀分布。将培养皿放入温度为25℃的培养箱中培养观察，10～15天后便可发现有明显的菌落出现。
(12)在超净工作台中挑取步骤(11)培养皿中的菌落，进行重复分离，分离纯化8个周期以上即可得到能够高效降解芘的纯菌种。
运用上述方法能够分离纯化到对芘降解性能好的微生物菌种。
具体实施方式
向加入芘和基础培养基的开口玻璃瓶内加入受石油污染的土壤进行芘降解微生物的富集与驯化，30d后向加入芘、基础培养基、微量金属液、维生素c溶液及吸附剂的锥形瓶内接入富集驯化的土壤。在温度为25～30℃、转速为100r/min的振荡器中培养5～7天后，进行循环转接，在循环次数大于8次后即可得到高效去除芘的降解菌群。在超净工作台中制作以芘为唯一碳源和能源的琼脂固体培养基底层平板，在底层平板上制作含有芘降解菌群的琼脂固体培养基顶层平板，将制作好的培养基平板在培养箱中培养10～15天。在超净工作台中向加入芘、基础培养基、微量金属液、维生素c溶液及吸附剂的锥形瓶内接入培养基平板中的菌落，在温度为25～30℃、转速为100r/min的振荡器中培养5～7天。然后进行循环转接，在循环次数大于8次后即可得到能够降解芘的纯菌种。
运用分离纯化得到的降解芘的菌种Stenotrophomonas acidaminiphila.制成菌悬液，含菌量为1.25×108CFU/ml，进行降解芘的降解试验。结果表明菌株Stenotrophomonasacidaminiphila.能够对芘进行有效的降解，当芘的初始浓度为0.13mg/L、0.29mg/L、0.58mg/L、1.21mg/L时，7天后的降解去除率分别为：96.31％、92.55％、90.17％、88.48％。

Claims (1)

1.一株对芘具有降解功能的菌株，其特征在于，所述菌株经鉴定为微嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)，其菌种保藏号为CGMCC3683。
CN201010584916.8A 2010-12-13 2010-12-13 一株对芘具有降解功能的菌株 Expired - Fee Related CN102559496B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010584916.8A CN102559496B (zh) 2010-12-13 2010-12-13 一株对芘具有降解功能的菌株

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010584916.8A CN102559496B (zh) 2010-12-13 2010-12-13 一株对芘具有降解功能的菌株

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102559496A CN102559496A (zh) 2012-07-11
CN102559496B true CN102559496B (zh) 2014-03-05

Family

ID=46406108

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201010584916.8A Expired - Fee Related CN102559496B (zh) 2010-12-13 2010-12-13 一株对芘具有降解功能的菌株

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102559496B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107090415A (zh) * 2017-04-22 2017-08-25 中国烟草总公司福建省公司 一株能够降解土壤残留二氯喹啉酸的寡养单胞菌

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040023362A1 (en) * 2000-02-28 2004-02-05 Grant Stanley Degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by microorganisms
CN101440354A (zh) * 2007-11-22 2009-05-27 北京师范大学 多环芳烃厌氧降解混合菌群的富集与驯化筛选方法及应用
CN101654657A (zh) * 2008-08-19 2010-02-24 北京师范大学 多环芳烃好氧降解菌群的富集与驯化筛选方法及应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040023362A1 (en) * 2000-02-28 2004-02-05 Grant Stanley Degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by microorganisms
CN101440354A (zh) * 2007-11-22 2009-05-27 北京师范大学 多环芳烃厌氧降解混合菌群的富集与驯化筛选方法及应用
CN101654657A (zh) * 2008-08-19 2010-02-24 北京师范大学 多环芳烃好氧降解菌群的富集与驯化筛选方法及应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
唐玉斌等.芴降解优势菌的筛选及降解特性研究.《中国环境科学》.2010,第30卷(第8期),1086-1090.
芘高效降解菌的分离鉴定及其降解特性;钟鸣等;《应用生态学报》;20100531;第21卷(第5期);1334-1338 *
芴降解优势菌的筛选及降解特性研究;唐玉斌等;《中国环境科学》;20100831;第30卷(第8期);1086-1090 *
钟鸣等.芘高效降解菌的分离鉴定及其降解特性.《应用生态学报》.2010,第21卷(第5期),1334-1338.

Also Published As

Publication number Publication date
CN102559496A (zh) 2012-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101974442B (zh) 一株芘降解菌及其应用
Jianlong et al. Microbial degradation of quinoline by immobilized cells of Burkholderia pickettii
CN101974443B (zh) 一株苯并[a]芘降解菌及其应用
CN102899271B (zh) 高效降解多环芳烃和苯系有机物的分枝杆菌16f及其应用
CN101654657A (zh) 多环芳烃好氧降解菌群的富集与驯化筛选方法及应用
He et al. Enhanced bioremediation of oily sludge using co‐culture of specific bacterial and yeast strains
CN106497810B (zh) 一种嗜麦芽寡养单胞菌、含有该菌的菌剂及其应用和降解柴油的方法
CN106635908B (zh) 一种海洋石油降解菌、菌剂及其应用
Laothamteep et al. Bioaugmentation with zeolite-immobilized bacterial consortium OPK results in a bacterial community shift and enhances the bioremediation of crude oil-polluted marine sandy soil microcosms
Luo et al. Isolation and characterization of marine diesel oil-degrading Acinetobacter sp. strain Y2
CN101935631B (zh) 罗尔斯通氏菌株及其在石油污染盐碱土壤生物修复中的应用
Ra et al. Comparative study on the petroleum crude oil degradation potential of microbes from petroleum-contaminated soil and non-contaminated soil
Liu et al. Development of a cell immobilization technique with polyvinyl alcohol for diesel remediation in seawater
CN101195811A (zh) 多环芳烃厌氧降解纯菌种的分离纯化方法与应用
Khanpour-Alikelayeh et al. Enhanced biodegradation of light crude oil by immobilized Bacillus licheniformis in fabricated alginate beads through electrospray technique
CN111733098A (zh) 一种芽孢杆菌在低温降解石油烃中的应用
Somtrakoon et al. Phenanthrene stimulates the degradation of pyrene and fluoranthene by Burkholderia sp. VUN10013
CN104789506A (zh) 一株可降解盐环境中多环芳烃的海旋菌及其应用
CN102533575B (zh) 一株对苯并[a]芘具有降解功能的菌株
CN103232960B (zh) 一种应用于高盐环境下的石油降解复合菌及菌剂
CN102559496B (zh) 一株对芘具有降解功能的菌株
CN101654656B (zh) 多环芳烃好氧降解纯菌种的分离纯化方法与应用
Luo et al. Characterization of a novel diesel oil-degrading pseudomonas sp. strain F4
US9669437B1 (en) Method for scavenging aromatic hydrocarbons, crude petroleum and/or a petroleum refined product
CN102080055A (zh) 一株茚并芘降解菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20140305

Termination date: 20141213

EXPY Termination of patent right or utility model