CN102548945A - 作为抗癌剂的阿朴棉子酚酮衍生物 - Google Patents

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Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute
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Abstract

本揭示提供化合物使用阿朴棉子酚酮衍生物用于治疗疾病和病症的方法。特别是，本揭示提供式i化合物或是其医药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，和提供用于制备式i化合物的方法；及经由投与式i化合物治疗癌症、自体免疫疾病和发炎的方法。

Description

作为抗癌剂的阿朴棉子酚酮衍生物
技术领域
本揭示大体上涉及阿朴棉子酚酮(Apogossypolone，APOG2)及其衍生物，并且更具体地说，涉及APOG2和其衍生物于治疗癌症、自体免疫疾病及/或发炎的用途。
背景技术
已知细胞凋亡级联会通向细胞死亡。当细胞过度产生抗凋亡蛋白(诸如BCL-2(B-细胞淋巴瘤/白血病-2)族蛋白)时，不受调控的细胞生长接著发生，因而可能导致各种严重疾病、病症和病理(特别是癌症)的发生。程序化细胞死亡(细胞凋亡)在正常组织恒稳状态的维持上扮演著重要角色，以确定细胞产生和细胞损失的适当平衡。程序化细胞死亡之调节的缺陷会促进肿瘤生成，并且也会显著造成化学抗性(chemoresistance)。Bcl-2族蛋白为细胞凋亡的中心调节者。抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白的过度表达发生在很多人类癌和白血病，因此这些蛋白质为新颖抗癌剂之发展的很具吸引力的标的。在人类中，至今已经确认并且定性出六种Bcl-2族的抗细胞凋亡成员，包括Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1、Bfl-1、Bcl-W和Bcl-B。Bcl-2族蛋白的成员还包括促细胞凋亡效应子，像是Bak、Bax、Bad、Bim和Bid。抗细胞凋亡和促细胞凋亡的Bcl-2族蛋白发生二聚化并且会抵消彼此的功能。结构研究已经说明在抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白的表面有一个疏水性缺口(hydrophobic crevice)，其可结合至促细胞凋亡族成员的BH3二聚化结构域(dimerization domain)。因此，模拟促细胞凋亡蛋白的BH3结构域的分子可诱导细胞凋亡及/或消除抗细胞凋亡Bcl-2蛋白抑制癌细胞死亡的能力。
细胞凋亡在组织恒稳状态上起作用，例如在发育期间和宿主防御机制上生理性移除不需要的细胞。一般相信，BCL-2族的蛋白涉及调节细胞凋亡。具体来说，BCL-2基因族的成员可以抑制程序化细胞死亡(例如BCL-2、BCL-XL和ced-9)或促使细胞死亡(例如Bax、Bak和BCL-XS)。这个族的促存活成员(诸如BCL-XL)在表面有一个疏水沟(hydrophobic groove)，一般相信其可与促细胞凋亡之配对蛋白之BH3结构域结合。这一结合据信在细胞凋亡的调节上发挥作用。事实上，促存活和抗存活蛋白可经由二聚化来逆转彼此的功能。各种可能的BCL-2拮抗剂先前经确定可抑制抗细胞凋亡蛋白，像是BCL-2族蛋白。然而，无一化合物可抑制BCL-2家族中所有的六种蛋白质，亦即下列所有的蛋白质：BCL-XL、BCL-2、BCL-W、BCL-B、BFL-1和MCL-1。例如先前确定的合成BCL-2拮抗剂中无一者可有效抑制蛋白BFL-1。另外，现存的拮抗剂具有其他缺点，像是效力不足或是安全性问题。
先前已经显示(图1和图2)天然产物棉子酚(Gossypol)为BCL-2、BCL-XL和MCL-1的抑制剂并作用如BH3模拟物。(-)棉子酚目前正进行第II期临床试验，于患有后期恶性肿瘤的患者上展现出单剂的抗肿瘤活性。考虑到棉子酚可能由于带有两个活性醛基而具有毒性的问题，制备出阿朴棉子酚(Apogossypol)。阿朴棉子酚不具有这些醛但仍在活体外和细胞内保留对抗抗细胞凋亡BCL-2族蛋白的活性。于小鼠中棉子酚及阿朴棉子酚的效力和毒性已经经过比对。临床前的活体内数据显示，相较于棉子酚，阿朴棉子酚的效力较佳且毒性较低，同时，阿朴棉子酚具有较佳的单一剂量药物动力学特性，包括相较于棉子酚具有随著时间更好的血液浓度，这是因为清除较慢的缘故。近来，阿朴棉子酚酮之阻转异构体的分离和鉴定已经完成，其中显示外消旋的阿朴棉子酚酮和个别异构体一样有效。再者，数种5，5’经烷基、酮和酰胺取代的阿朴棉子酚酮衍生物的合成和评估，以及具有改良之活体外和活体内功效的纯光学化合物的制备被报导。这些观察资料显示出阿朴棉子酚酮和其衍生物有望成为癌症疗法上具有前景的领先化合物。
BCL-2族成员也被认为涉及炎性病症。例如BCL-2族成员经显示在嗜中性白细胞的细胞凋亡及炎性积聚上发挥作用。在数种炎性疾病中，嗜中性白细胞细胞凋亡的延迟与促细胞凋亡BCL-2族成员BAX的含量减少有关。曾显示，从患有急性气喘的孩童分离得到的嗜酸性细胞具有增加之抗细胞凋亡蛋白质BCL-2的表达，这与呼气流速呈负相关。BCL-2族蛋白也与克罗恩病(Crohn’s disease)有关。从患有克罗恩病之患者分离的固有层(laminapropria)的T细胞中，BAX的表达减弱而BCL-XL的表达增强。这显示经由促存活及抗细胞凋亡的信号机制，炎性细胞的存活参与炎性疾病的致病机制。红斑狼疮为一种复杂的系统性自体免疫疾病，其特征在于高水平的抗DNA及抗肾小球的自身抗体、活化的B和T细胞及肾小球肾炎。取自红斑狼疮易感之小鼠中的嗜中性白细胞显示出减缓的细胞凋亡速度。减缓的细胞凋亡与BCL-2族蛋白表达的改变有关，此改变于红斑狼疮易感小鼠中造成更多嗜中性白细胞的积聚。使用数种不同之红斑狼疮品系的信号研究指出，随著疾病的发展，于淋巴细胞和非淋巴细胞中，多重的信号通路经向上调节，包括BCL-2和BCL-XL的活化。已知这些抗细胞凋亡分子会延长所有细胞的寿命，包括自体反应的B和T细胞。
因此，鉴于这些考量，此领域中依然需要改良的抗细胞凋亡蛋白之拮抗剂(包括BCL-2族)。
发明内容
抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白的过度表达一般与肿瘤的保持、进展和化学抗性有关连。这些抗细胞凋亡蛋白的抑制为癌症疗法上值得进行的方向。阿朴棉子酚及其衍生物经鉴定为抗癌剂，因为它们经由抑制抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白而具有诱导细胞凋亡的能力。阿朴棉子酚的氧化物为阿朴棉子酚酮，其曾被显示在细胞培养和阿朴棉子酚的小鼠模型中保留一些抗癌特性，但是于活体外的抗Bcl-2活性则降低。在核磁共振(NMR)结合分析法的导引下，合成一系列之5，5’经取代的阿朴棉子酚酮衍生物，并且确定了抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白的全活性拮抗剂，其在低微摩尔至毫微摩尔范围内具有结合效能。因此，本揭示提供新颖的阿朴棉子酚酮衍生物，其表现出改良之活体外和活体内活性。
根据一方面，本揭示提供具有式I的化合物：
Figure BDA0000150832470000031
或其医药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，其中：
R1独立地为氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的烷氧基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基、-(CH2)jOR2、-(CH2)jC(O)R2、-(CH2)jC(O)OR2、-(CH2)jOC(O)R2、-(CH2)jNR3R4、-(CH2)jC(O)NR3R4、-(CH2)jOC(O)NR3R4、-(CH2)jNR5C(O)R2、-(CH2)jNR5C(O)OR2、-(CH2)jNR5C(O)NR3R4、-(CH2)jS(O)mR6或-(CH2)jNR5S(O)mR6，其中j为从0至12的整数；且m为从0至2的整数；
R2独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R3和R4各自独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基，或是R3和R4与其所连接的N原子一起形成经取代或未经取代的杂环基或经取代或未经取代的杂芳基；
R5独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R6独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R、R1、R2、R3、R4、R5平品偏和R6可任选且独立地经1至3个选自于下列的基团所取代：氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、烷氧基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、-(CH2)jOR7、-(CH2)jC(O)R7、-(CH2)jC(O)OR7、-(CH2)jOC(O)R7、-(CH2)jNR8R9、-(CH2)jC(O)NR8R9、-(CH2)jOC(O)NR8R9、-(CH2)jNR10C(O)R7、-(CH2)jNR10C(O)OR7、-(CH2)jNR10C(O)NR8R9、-(CH2)jS(O)mR11或-(CH2)jNR10S(O)mR11，其中j为从0至12的整数；且m为从0至2的整数；
R7独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
R8和R9各自独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基，或是R8和R9与其所连接的N原子一起形成杂环基或杂芳基；
R10独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；及
R11独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；及其限制条件为R1不是异丙基。
在另一方面，本揭示提供用于治疗疾病及/或病症的方法，包括癌症(例如肺癌、乳癌、前列腺癌及淋巴瘤)、自体免疫疾病、发炎等等，其藉由对需要的个体投与治疗上有效量的式I化合物，从而治疗该疾病或该病症。
附图说明
图1提供(A)棉子酚和阿朴棉子酚的结构；(B)本揭示之化合物的结构；及(C)和(D)分子对接研究。
图2提供：(A)棉子酚(1)、阿朴棉子酚(2a)、BI79D10(3a)和8r(4a)的结构；(B)棉子酚酮(5)、阿朴棉子酚酮(6a)和5，5’经取代的6a衍生物(7，8a)的结构；及分子对接研究，包括(C)化合物6a(阿朴棉子酚酮)与Bcl-2对接之结构，以及(D)化合物6f与Bcl-2(PDB ID：1YSW)对接之结构。
图3提供：(A)Bcl-XL(25μM，黑色)以及在阿朴棉子酚和B179D10存在下Bcl-XL的1H-NMR谱之脂肪区域NMR结合分析；及(B)阿朴棉子酚(2.8μM)和化合物B179D9(1.9μM)、B179F7(0.78μM)及B179D10(0.36μM)的EC50值。
图4(A)和4(B)描述棉子酚、阿朴棉子酚和本揭示之化合物BCL-2小鼠脾脏之减轻上的有效性。
图5提供本揭示之化合物使用BCL-XL之FP竞争性结合曲线图。
图6A和6B提供棉子酚对比阿朴棉子酚的毒性剖析。
图7A、7B和7C描述以阿朴棉子酚或棉子酚处理之小鼠的血液学剖析。
图8显示以阿朴棉子酚或棉子酚处理之小鼠的反应性血液化学剖析。
图9提供经由阿朴棉子酚和棉子酚所诱导之NHL B细胞株细胞凋亡的比较，包括DOHH2、RS11846和380。
图10提供棉子酚和阿朴棉子酚2对于取自转基因小鼠(BCL-2对比BCL-2/TRAF2DN)的培养鼠B细胞的活性比较。
图11提供阿朴棉子酚和棉子酚诱导经培养CLL B细胞之细胞凋亡的比较。
图12A和12B显示于BCL-2转基因小鼠中阿朴棉子酚的活性。
图13提供：(A)棉子酚(1)、阿朴棉子酚(2)及BI79D10(3)的结构；(B)5，5’经取代的阿朴棉子酚衍生物的结构；分子对接分析及对接后之立体结构图：(C)化合物2(阿朴棉子酚)和(D)化合物8r分别与Bcl-2(PDB ID：1YSW)对接。
图14提供：(A)NMR结合研究：Bcl-XL(25μM，黑色)和在化合物8m(200μM，灰色)、化合物8q(200μM，蓝色)和化合物8r(200μM，红色)存在下Bcl-XL脂肪区域的1H-NMR谱。(B)使用Bcl-2得到的8m(实心正方形)、8q(实心正立三角形)，8r(实心倒立三角形)及2(阿朴棉子酚，实心圆点)的基于萤光偏振之竞争性结合曲线图。(C)在H460人类肺细胞株中，化合物8m(红色正方形)，8q(绿色三角形)，8r(蓝色菱形)，8p(深色三角形)及2(阿朴棉子酚，深色圆点)对于细胞生长的抑制作用。细胞经处理3天后，使用ATP-LITE分析法测定细胞存活率。(D)具有野生型(MEF/WT；蓝色柱)或是bax-/-bak-/-双基因剔除(红色柱)基因型之小鼠胚胎成纤维细胞以各种5，5’经取代之阿朴棉子酚衍生物在10μM下处理之后，藉由膜联蛋白V(Annexin V)-FITC分析法监测细胞凋亡状况。
图15提供：(A)6f之基于萤光偏振之竞争性竞争性曲线图，使用Bcl-XL(红色正方形)、Bcl-2(蓝色圆点)和Mcl-1(绿色倒立三角形)。(B)于PC-3人类前列腺癌细胞株中，化合物1(深色圆点)、6a(蓝色正方形)、6i(红色倒立三角形)、8a(紫色菱形)和6f(绿色正立三角形)对于细胞生长的抑制作用。细胞经处理3天后，使用ATP-LITE分析法测定细胞存活率。(C)于H460人类肺癌细胞株中，化合物6a(红色圆点)、6b  (绿色正方形)、6i(蓝色正立三角形)和6f(紫色倒立三角形)对于细胞生长的抑制作用。细胞经处理3天后，使用ATP-LITE分析法测定细胞存活率。(D)于人类原代CLL细胞中，化合物6a(深色正方形)、6f(红色菱形)及6i(绿色圆形)对于细胞生长的抑制作用。细胞经处理1天后，使用膜联蛋白V细胞凋亡分析法测定细胞存活率。
图16提供：(A)呈粉末形式的阿朴棉子酚衍生物于室温下放置时的化学稳定性：8m(红色圆点)、8p(绿色正方形)、8q(紫色圆点)、8r(蓝色三角形)、8k(粉色圆点)、12e(深色圆点)、2(带有抗坏血酸的阿朴棉子酚，深色正方形)及2(阿朴棉子酚，深色三角形)。化学稳定性的测定系在室温下于大气中经过60天期间内进行。使用HPLC和LCMS的组合监测稳定性。(B)在单次腹膜内注射剂量0.072mmol/kg之下，5，5’经取代之阿朴棉子酚衍生物对于Bcl-2小鼠脾脏之减轻上的影响。所有减轻数据为小鼠脾脏尺寸之最大减少百分比。(C)单次腹膜内注射各种量的化合物8r所造成之小鼠重量减少％。(D)42mg/kg化合物8r(0.06mmol/kg)对于经单次腹膜内注射的六只Bcl-2小鼠的脾脏重量减少的影响。数据以平均值±S.E.(n＝6)表示。P＜0.0001。
图17显示5，5’经取代阿朴棉子酚衍生物之ITC分析。
图18提供：(A)化合物8r和Bcl-2族蛋白竞争与FITC-Bim BH3肽之结合；(B)使用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶分析法进行的ABT-737抗BP3的细胞毒性分析。
图19显示使用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶分析法进行的5，5’经取代阿朴棉子酚衍生物抗(A)BP3细胞和(B)RS11846癌细胞株的细胞毒性分析。
图20显示化合物之活体内鉴定。(A)5，5’经取代6a衍生物在分别以60μmmol/kg和120μmmol/kg的单次腹膜内注射剂量下对于Bcl-2小鼠脾脏减轻的影响。所有减轻数据为小鼠脾脏尺寸的最大减少程度的百分比。(B)化合物6f在60μmmol/kg下对于以单次腹膜内注射处理之六只Bcl-2小鼠的脾脏重量减少的影响。数据以平均值±S.E.(n＝7)显示。P＜0.0002。(C)6f和6a在以腹膜内注射50mg/kg下对于裸小鼠中PCC-1肿瘤生长的影响。以Anova统计(P＜0.001)测定，相较于载剂对照组，化合物6f显著抑制肿瘤生长。处理组的平均肿瘤体积除以对照组的平均肿瘤体积可计算得到肿瘤生长的抑制比例(T/C％)。深色向下箭头“↓”代表以化合物处理小鼠的日子。(D)于处理期间平均体重的改变。
具体实施方式
除外另外定义，否则本揭示所使用的科学性及技术性术语应具有为本领域技术人员一般了解的意义。再者，除非另外为上下文意所需要，否则单数形式的术语应包括复数形式，且复数形式的术语应包括单数形式。通常本文所使用之细胞和组织培养、分子生物学及蛋白质和寡或多核苷酸化学和杂交的技术和与该等技术联结的命名法为本领域所熟知及常用的技术和命名法。使用DNA重组、寡核苷酸合成及组织培养和转化(例如电穿孔、脂转染)的标准技术。酵素反应和纯化技术根据制造商的说明书或是如本领域常用的方法或是如本文所述的方法来进行。本文所使用的分析化学、合成有机化学和医学及药学化学之实验步骤及技术和与该等化学联结的命名法为本领域所熟知及常用的的实验步骤及技术和命名法。使用化学合成、化学检测、药物制备、调配及传送和治疗患者的标准技术。
下列术语、定义及缩写词进一步在此适用。
术语“患者”系指经由本揭示的方法所治疗的生物，此生物包括(但不限于)人类及其他哺乳动物。在本揭示的背景中，术语“个体”一般系指将接受或已经接受本文所述治疗的个体(例如投与本揭示的化合物和可任选地一或多种额外的治疗剂)。
术语“BCL-2族蛋白”系指目前包括至少下列六种蛋白质：BCL-XL、BCL-2、BCL-W、BCL-B、BFL-1和MCL-1之该族蛋白。
在取代基以它们常用的化学式表示(从左至右书写)的情况下，它们同样地包括从右至左书写之结构在化学上相同的取代基，例如--CH2O--与--OCH2--相同。
除非另外说明，否则单独或作为另一取代基的部分的术语″烷基″系指直链(即无分支)或支链或是环烃基或是其组合，其可为完全饱和、单或多不饱和，且可包括二价和多价基，并指定碳原子数目(即C1-C10指1至10个碳)。饱和烃基的实例包括(但不限于)像是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙甲基，例如正戊基、正己基、正庚基、正辛基等等的同系物和异构体。不饱和烷基为具有一或多个双键或三键的基团。不饱和烷基的实例包括(但不限于)乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、2-异戊烯基、2-(丁间二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基及高级同系物和异构体。限于烃基的烷基称为″同烷基(homoalkyl)″。
本文所列之基团、取代基和范围的特定值仅作为说明之用；它们并未排除其他界定值或对于基团和取代基之界定范围内的其他值，例如“烷基”可为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、3-戊基或己基；环烷基可为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；“-O(C1-C6)烷基(烷氧基)”可为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、3-戊氧基或己氧基。
单独或作为另一取代基的部份的术语″亚烷基″系指衍生自烷基的二价基团，例如(但不限于)--CH2CH2CH2CH2--、--CH2CH＝CHCH2--、--CH2C.ident.CCH2--、--CH2CH2CH(CH2CH2CH3)CH2--。通常烷基(或亚烷基)有1至24个碳原子，包括本揭示之具有10个或更少碳原子的基团。″低级烷基″或″低级亚烷基″为短链的烷基或亚烷基，一般有8个或更少的碳原子。
术语“烷基、烷氧基、烯基、炔基”等等表示直链和支链基团两者；但是提到个别基团(像是“丙基”)则仅包含直链基团，支链基团的异构体(像是“异丙基”)会被特别地指明。
除非另外说明，否则单独或与另一术语组合的术语″杂烷基″意指稳定直链或支链或是环烃基或是其组合，由至少1个碳原子和至少1个杂原子所组成，该杂原子选自由O、N、P、Si和S所组成的群组中，且其中氮、磷和硫原子可任选地经氧化，且氮杂原子可任选地经季铵化。杂原子O、N、P和S和Si可位在任何杂烷基的内部位置或是烷基与分子的其馀部分连接的位置，实例包括(但不限于)--CH2--CH2--O--CH3、--CH2--CH2--NH--CH3、--CH2--CH2--N(CH3)--CH3、--CH2--S--CH2--CH3、--CH2--CH2、--S(O)--CH3、--CH2--CH2--S(O)2--CH3、--CH＝CH--O--CH3、--Si(CH3)3、--CH2CH＝N--OCH3、--CH＝CH--N(CH3)--CH3、O--CH3、--O--CH2--CH3和--CN。至多2或3个杂原子为连串的，像是例如--CH2--NH--OCH3和--CH2--O--Si(CH3)3。相似地，单独或作为另一取代基的部份的术语″亚杂烷基″意指衍生自杂烷基的二价基，实例包括(但不限于)--CH2--CH2--S--CH2--CH2--和--CH2--S--CH2--CH2--NH--CH2--。就亚杂烷基而言，杂原子也可以占据链端的任一端或两端(例如亚烷基氧代基、亚烷基二氧代基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等等)。更进一步地，对于亚烷基和亚杂烷基的键接基团，键接基团化学式所写的方向并未暗示键接基团的定向。例如化学式--C(O)OR′--表示--C(O)OR′--和--R′OC(O)--两者。如上所述，如本文所用的杂烷基包括经由杂原子连接至分子的其馀部分的基团，诸如--C(O)R′、--C(O)NR′、--NR′R′、--OR′、--SR′及/或--SO2R′。在列举″杂烷基″后接著列举特定杂烷基(诸如--NR′R″等等)的情况下，应了解术语杂烷基和--NR′R″被非多馀或是互相排除的，而是列举出该特定杂烷基使之更加清楚。因此，术语″杂烷基″在本文中不应被解释为排除特定杂烷基，诸如--NR′R″等等。
除非另外说明，否则单独或与其他术语组合的术语″环烷基″和″杂环烷基″系分别意指″烷基″和″杂烷基″的环状形式。另外，对于杂环烷基，杂原子可以占据杂环与该分子其馀部分连接的位置。环烷基的实例包括(但不限于)环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等等。杂环烷基的实例包括(但不限于)1-(1，2，5，6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基、1-哌嗪基、2-哌嗪基等等。术语″亚环烷基″和″亚杂环烷基″系分别意指环烷基和杂环烷基的二价衍生物。
更特定地，术语“烷基”系指1至6个碳原子的支链或无支链饱和烃基，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等等。本文揭示的烷基含有1至6个碳原子，像是例如甲基、乙基等等。如本文所用的术语“烷基”也包括术语“环烷基”，其系指3至8个或3、5或6个碳原子的环状烷基。如本文所用的术语“亚环烷基”系指二价环状亚烷基，通常为3、5、6或8元环。
如本文所用的术语“烷氧基”系指经由单一末端的醚键所结合的烷基，即“烷氧基”可被定义为-OR，其中R为本文所界定的烷基。“低级烷氧基”系指含有1至6个碳原子的烷氧基。
除非另外说明，否则术语″芳基″意指多未饱和、芳香族、烃基取代基，其可为单环或是经稠合或共价键结的多环(从1至3环)。术语″杂芳基″系指含有1至4个选自N、O和S杂原子的芳基(或环)(在多环的情况为每一个个别的环)，其中氮和硫原子可任选地氧化，氮原子可任选地季铵化。杂芳基可经由碳或杂原子连接到分子的其馀部分。芳基和杂芳基的非限制性实例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹噁啉基、5-喹噁啉基、3-喹啉基及6-喹啉基。每一个上述芳基和杂芳基环系统的取代基选自下述可接受的取代基基团之中。术语″亚芳基″和″杂亚芳基″分别系指芳基和杂芳基的二价基。
为了简洁的目的，当与其他术语(例如芳氧代基、芳硫代基、芳基烷基)合并使用时，术语″芳基″包括如上所定义的芳基环和杂芳基环两者。因此，术语″芳基烷基″拟包括芳基连接至烷基的基团(例如苯甲基、苯乙基、吡啶甲基等等)，包括碳原子(例如亚甲基)经例如氧原子所取代的烷基(例如苯氧甲基、2-吡啶氧甲基、3-(1-萘氧基)丙基等等)。
如本文所用的术语“芳基”系指芳香族碳环，一般为6或10元，其中至少一个环为芳香族环。例如“芳基”表示苯基或是具有约9至10个环原子的邻位稠合的双环碳环基，其中至少一个环为芳香族环。
“杂芳基”包含经由含有5或6个环原子由碳和1至4个杂原子所组成之单环芳香族环的环碳连接的基团，该杂原子各自独立地为非过氧的氧、硫和N(X)，其中X不存在或是为H、O、(C1-C4)烷基、苯基或苯甲基，以及由此衍生之约8至10个环原子的邻位稠合的双环杂环的基团，特别是苯并衍生物或是经由与丙烯、三亚甲基或四亚甲基双基稠合所衍生的基团。
当杂烷基、杂环烷基或杂芳基包括特定数目元(例如″3至7元″)时，术语″元″系指碳或杂原子。
除非另外说明，否则单独或作为另一取代基的部份的术语″卤代″或″卤素″系指氟、氯、溴或碘原子。此外，诸如″卤代烷基″之术语拟包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如术语″卤代(C1-C4)烷基″意欲包括(但不限于)三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等等。术语“卤代”也指氟代、氯代、溴代或碘代。
如本文所用的术语″氧代基″系指与碳原子双键键结的氧。
每一个上述的术语(例如″烷基″、″杂烷基″、″环烷基″和″杂环烷基″、″芳基″、″杂芳基″以及其二价衍生物)意欲包括所指基团的经取代和未经取代形式两者。于下文提供每一类基团的取代基。
烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基之单价和二价衍生物基的取代基(包括经常称为亚烷基、烯基、亚杂烷基、杂烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、环烯基和杂环烯基的基团)可为一或多个选自(但不限于)下列的不同基团：--OR′、＝O、＝NR′、＝N--OR′、--NRR″、--SR′、-卤素、--SiR′R″R″′、--OC(O)R′、--C(O)R′、--CO2R′、--C(O)NR′R″、--OC(O)NR′R″、--NR″C(O)R′、--NR′--C(O)NR″R″′、--NR″C(O)OR′、--NR--C(NR′R″)＝NR″′′、--S(O)R′、--S(O)2R′、--S(O)2NR′R″、--NRSO2R′、--CN和--NO2，基团数目为介于0至(2m′+1)的范围，其中m′为此一基中碳原子的总数目。R′、R″、R″′和R″″各自独立地为氢、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的环烷基、经取代或未经取代的杂环烷基、经取代或未经取代的芳基(例如经1至3个卤素取代的芳基)、经取代或未经取代的烷基、烷氧基或硫代烷氧基或芳基烷基。例如当本揭示的化合物包括多于一个R基团时，R基团是如各R′、R″、R″′和R″″基团在存在超过一个时那样各自独立地选择。当R′和R″′连接至相同氮原子时，它们可与氮原子结合形成4、5、6或7元环。例如--NR′R″意欲包括(但不限于)1-吡咯烷基和4-吗啉基。本领域技术人员从以上取代基的讨论中会了解到术语″烷基″意欲包括包括了与非氢基团键结之碳原子基团，诸如卤代烷基(例如--CF3和--CH2CF3)及酰基(例如--C(O)CH--、--C(O)CF3、--C(O)CH2OCH3等等)。
相似于以上用以描述烷基的取代基，芳基和杂芳基(以及它们的二价衍生物)的示范性取代基有所不同，且选自例如：卤素、--OR′、--NR′R″、--SR′、-卤素、--SiR′R″R″′、--OC(O)R′、--C(O)R′、--CO2R′、--C(O)NR′R″、--OC(O)NR′R″、--NR″C(O)R′、--NR′--C(O)NR″R″′、--NR″C(O)OR′、--NR--C(NR′R″R″′)＝NR″″、--NR--C(NR′R″)＝NR″′、--S(O)R′、--S(O)2R′、--S(O)2NR′R″、--NRSO2R′、--CN和--NO2、--R′、--N3、--CH(Ph)2、氟代(C1-C4)烷氧及氟代(C1-C4)烷基，基团数目介于0至芳香族环系统之开放价态的总数的范围内；且其中R′、R″、R″′和R″″各自独立地为选自氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的环烷基、经取代或未经取代的杂环烷基、经取代或未经取代的芳基和经取代或未经取代的杂芳基。当本揭示的化合物包括多于一个R′基团时，例如，R基团是如各R′、R″、R″′和R″″基团在存在超过一个时那样各自独立地选择。
芳基或杂芳基环之邻接原子的两个取代基可任选地形成式-T-C(O)--(CRR′)q--U--的环，其中T和U独立地为--NR--、--O--、--CRR′--或单键，而q为0至3的整数。或者芳基或杂芳基环之邻接原子的两个取代基可任选地经式-A-(CH2)r--B--之取代基所置换，其中A和B独立地为--CRR′--、--O--、--NR--、--S--、--S(O)--、--S(O)2--、--S(O)2NR′--或单键，而r为1至4的整数。所形成之新环的单键中的一个可任选经双键所置换。或者芳基或杂芳基环之邻接原子的两个取代基可任选地经式--(CRR′)5--X′--(C″R″′)d--的取代基所置换，其中s和d独立地为0至3的整数，且X′为--O--、--NR′--、--S--、--S(O)--、--S(O)2--或--S(O)2NR′--。取代基R、R′、R″和R″′各自独立地选自氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、经取代或未经取代的杂环烷基、经取代或未经取代的芳基和经取代或未经取代的杂芳基。
如本文所用的术语″杂原子″或″环杂原子″意欲包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、磷(P)和硅(Si)。
″氨烷基″如本文所用系指与烯烃基连接端共价键结的氨基。氨基为--NR′R″，其中R′和R″一般为选自氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的环烷基、经取代或未经取代的杂环烷基、经取代或未经取代的芳基或经取代或未经取代的杂芳基。
如本文所用的″取代基基团″系指选自下列部分的基团：
(A)-OH、--NH2、--SH、--CN、--CF3、--NO2、氧代、卤素、未经取代烷基、未经取代杂烷基、未经取代环烷基、未经取代杂环烷基、未经取代芳基、未经取代杂芳基，及
(B)烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，经至少一个选自下列的取代基所取代：
(i)氧代、--OH、--NH2、--SH、--CN、--CF3、--NO2、卤素、未经取代烷基、未经取代杂烷基、未经取代环烷基、未经取代杂环烷基、未经取代芳基、未经取代杂芳基，及
(ii)烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基，经至少一个选自下列的取代基所取代：
(a)氧代、--OH、--NH2、--SH、--CN、--CF3、--NO2、卤素、未经取代烷基、未经取代杂烷基、未经取代环烷基、未经取代杂环烷基、未经取代芳基、未经取代杂芳基，及
(b)烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，经至少一个选自下列的取代基所取代：氧代、--OH、--NH2、--SH、--CN、--CF3、--NO2、卤素、未经取代烷基、未经取代杂烷基、未经取代环烷基、未经取代杂环烷基、未经取代芳基和未经取代杂芳基。
如本文所用之″大小受限的取代基″或″大小受限的取代基基团″系指选自上述关于″取代基基团″的所有取代基的基团，其中每个经取代或未经取代的烷基为经取代或未经取代的C1-C20烷基，每个经取代或未经取代的杂烷基为经取代或未经取代的2至20元的杂烷基，每个经取代或未经取代的环烷基为经取代或未经取代的C4-C8环烷基，及每个经取代或未经取代的杂环烷基为经取代或未经取代的4至8元的杂环烷基。
如本文所用的″低级取代基″或″低级取代基基团″系指选自上述关于″取代基基团″的所有取代基的基团，其中每个经取代或未经取代的烷基为经取代或未经取代的C1-C8烷基，每个经取代或未经取代的杂烷基为经取代或未经取代的2至8元的杂烷基，每个经取代或未经取代的环烷基为经取代或未经取代的C5-C7环烷基，及每个经取代或未经取代的杂环烷基为经取代或未经取代的5至7元的杂环烷基。
本揭示的化合物可以盐类存在。本揭示包括这等盐类。适当的盐形式之实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐(例如(+)-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或其混合物，包括外消旋混合物)、琥珀酸盐、苯甲酸盐和氨基酸(诸如谷氨酸)的盐类。这些盐类可经由本领域技术人员所知的方法来制备。同时包括碱加成盐，诸如钠、钾、钙、铵、有机氨基或镁盐或相似盐。当本揭示的化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐类可经由将此种化合物的中性形式与足量之所想要的酸单独接触或于合适的惰性溶剂中接触来取得。可接受之酸加成盐的实例包括衍生自无机酸的盐类，像是盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等等，以及衍生自有机酸的盐类，像是乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等等。也包括氨基酸盐类，诸如精氨酸盐等等，及有机酸盐类，像是甘氨酸或半乳糖醛酸等等。本揭示之某些特定化合物同时含有碱性和酸性官能团，其允许化合物被转化为碱或酸加成盐。
经由将盐与碱或酸接触，并以习用方式分离母化合物，可再生得到化合物的中性形式。化合物的母形式在某些物理性质上不同于各种盐形式，诸如于极性溶剂中的溶解度。
本揭示的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式(包括水合化形式)存在。一般而言，溶剂化形式相当于非溶剂化形式，并且被涵盖于本揭示的范围内。本揭示的某些化合物可以多种结晶或是非结晶形式存在。总体来说，本揭示所涵盖的所有物理形式的用途都相当，且意欲被纳入本揭示的范围内。
本揭示的某些化合物具有非对称碳原子(光学或手性中心)或双键；对映异构体、外消旋体、非对映异构体、互变异构体、几何异构体、立体异构体形式(依据绝对立体化学经界定为(R)-或(S)-，或是在氨基酸界定为(D)-或(L)-)以及个别异构体被涵盖在本揭示的范围内。本揭示的化合物未包括本领域已知的过于不稳定而无法合成及/或分离的化合物。本揭示拟包括外消旋及纯光学形式的化合物。光学活性之(R)-和(S)-或是(D)-和(L)-异构体可使用手性合成子或手性试剂制备，或是使用习用技术分辨。除非另外指明，否则当本文所述的化合物含有烯键或其他几何不对称中心时，预期该化合物包括E和Z几何异构体两者。
如本文所用的术语″互变异构体″系指两种或以上结构异构体中的一者，其平衡存在且易于从一种异构体形式转化为另一种形式。
对于本领域技术人员显而易见的是，本揭示的某些化合物可以互变异构体形式存在，所有该等化合物的这种互变异构体形式纳入本揭示的范围内。
除非另外说明，否则本文描述的结构也意欲包括所有结构的立体化学形式；即每个非对称中心的R和S构型。因此，单一立体化学异构体以及化合物的对映异构体和非对映异构体的混合物系在本揭示的范围内。
除非另外说明，否则本文描述的结构也意欲包括差别只在于存在一或多个同位素富集的原子的化合物。例如具有所述结构但氢经氘或氚置换或是碳经13C-或14C-富集碳置换的化合物系在本揭示的范围内。
本揭示的化合物也可能在所组成此化合物的一或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。例如化合物可经放射性同位素标记，像是例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C)。不论具有或是不具有放射性，本揭示化合物的所有同位素变体被涵盖在本揭示的范围内。
术语″医药学上可接受的盐类″意欲包括活性化合物的盐类，取决于在本文所述之化合物上所存在之特定取代基部分，该盐类以相对无毒的酸或碱制备。当本揭示之化合物含有相对酸性的官能团时，碱加成盐类可经由将此化合物的中性形式与足量之所想要的碱单独接触或是于合适的惰性溶剂中接触来获得。医药学上可接受的碱加成盐类的实例包括钠、钾、钙、铵、有机氨基或镁盐或相似盐。当本揭示的化合物含有相对碱性的官能团时，酸加成盐类可经由将此化合物的中性形式与足量之所想要的酸单独接触或是于合适的惰性溶剂中接触来获得。医药学上可接受的酸加成盐类的实例包括衍生自无机酸的盐类，像是盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等等，以及衍生自相对无毒性之有机酸的盐类，像是乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等等。也包括氨基酸盐类，诸如精氨酸盐等等，及有机酸盐类，像是甘氨酸或半乳糖醛酸等等(请参阅例如Berge等人，″Pharmaceutical Salts″，Journal ofPharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本揭示之某些特定化合物同时含有碱性和酸性官能团时，其允许化合物被转化为碱或是酸加成盐。
除了盐形式，本揭示提供呈现前药形式的化合物。本文所述之化合物的前药为已准备好在生理条件下进行化学性改变以提供本揭示化合物的化合物。另外，前药可于生物体外的环境经由化学性或生化性方法转变为本揭示的化合物，例如当前药被置于透皮贴片储积器中时，可利用合适的酵素或化学试剂将其缓慢转化为本揭示的化合物。
当用于本文取代基基团时，术语″一种″、″一个″系指至少一种(个)。例如当化合物经″一个″烷基或芳基所取代，该化合物可任选地经至少一个烷基及/或至少一个芳基所取代。再者，当化合物的某一部分经R取代基所取代，该基团可被称为″经R取代(的)″。当化合物的某一部分为经R取代，该部分为经至少一个R取代基所取代且每个R取代基可任选地不同。
本揭示化合物的描述受本领域技术人员所知之化学键结原则的限制。据此，当一基团可经一或多个取代基所取代时，所选之取代基应符合化学键结原则，并所产生的化合物并非本质上不稳定，及/或为本领域技术人员所知可能在周围条件下(诸如水性、中性和数种已知生理条件)不稳定，例如在依照为本领域技术人员所知的化学键结原则下将杂环烷基或杂芳基经由一环杂原子连接至分子的其馀部分，从而避免固有不稳定的化合物。
用于特定疾病之术语″治疗″包括该疾病的预防。
术语“前药”系指于活体内转变为母药的药剂。前药通常为有用的，因为在一些情况下它们比母药更容易投与。例如它们经由口服为生物可利用的，然而母药则不行。于医药组合物中前药也可能具有较母药为改良的溶解度，或是可显示增加的适口性或更容易调配。
如本文所用的术语“阿朴棉子酚”为一广泛的术语，其包括(但不限于)L-阿朴棉子酚、D-阿朴棉子酚、外消旋的阿朴棉子酚、S-阿朴棉子酚、R-阿朴棉子酚、(-)阿朴棉子酚和(+)阿朴棉子酚，并包括实质上不含(+)阿朴棉子酚的(-)阿朴棉子酚。
在本揭示的每一处，当提及特定化合物的名字时，例如阿朴棉子酚或阿朴棉子酚酮，本揭示的范围当然涵盖该所提化合物的医药学上可接受的盐类、酯类、酰胺类、代谢物或前药。
本领域技术人员应了解具有手性中心的本揭示化合物可存在于光学活性和外消旋形式中且自光学活性和外消旋形式中分离。一些化合物可展现同质多像(polymorphism)。应理解的是，本揭示涵盖任何本揭示化合物的外消旋、光学活性、同质多像性或立体异构体的形式或其混合物，其具有本文所述之有用的特性。同时，如果所提的化合物包含手性中心，本揭示的范围也包括了包含两种对映异构体的外消旋混合物的组合物，以及包含个别之每个对映异构体且实质上不含另一个对映异构体的组合物。因此，例如本文涵盖包含实质上不含R对映异构体的S对映异构体的组合物，或是包含实质上不含S对映异构体之R对映异构体的组合物。
“实质上不含”系指组合物包低低于10％、或低于8％、或低于5％、或低于3％、或低于1％的少量对映异构体。如果所提的化合物包含多于一种手性中心，本揭示的范围也包括了包含各种非对映异构体的混合物的组合物，以及包含每个非对映异构体且实质上不含另一种非对映异构体的组合物。因此，例如市售的阿朴棉子酚为包含两种不同的对映异构体的外消旋混合物。在本揭示通篇陈述的“阿朴棉子酚”包括了包含阿朴棉子酚之外消旋混合物的组合物、包含(+)对映异构体且实质上不含(-)对映异构体的组合物和包含(-)对映异构体且实质上不含(+)对映异构体的组合物。
如何制备光学活性形式(例如经由再结晶技术分辨外消旋形式、从光学活性原料来合成、经由手性合成或是经由使用手性固定相的色谱分离法)，以及如何使用本文所述的标准测试或是使用本领域所熟知的其他相似测试来测定抗癌活性，已为本领域所熟知。
术语“医药组合物”系指化合物伴随其他化学组分(诸如稀释剂或载体)的混合物。医药组合物可方便将化合物投与至有机体。本领域中存在各种投与化合物的技术，包括(但不限于)经口、注射、气雾、肠胃外和局部投药。医药组合物也可以藉由使化合物与无机或有机酸(诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等等)反应来取得。
术语“医药学上可接受的盐”系指化合物的调配物，其不会对于经其投与的有机体造成重大刺激，且不会消除该化合物的生物活性和特性。医药盐类可经由使本揭示化合物与无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等等)反应来取得。医药盐类也可以经由使本揭示化合物与碱反应以形成盐(诸如铵盐、碱金属盐(诸如钠或钾盐)、碱土金属盐(诸如钙或镁盐)、有机碱盐(诸如二环己胺、N-甲基-D-葡萄糖胺、三(羟甲基)氨基甲烷)和氨基酸盐类(诸如精氨酸、赖氨酸等等)。
如本文所用的“发炎”为对于经由身体损伤、感染或局部免疫反应所引发的体液、血浆蛋白质和白细胞之局部累积的常用术语。发炎的很多不同形式与不同的疾病相关。“发炎相关的”疾病包括例如红斑狼疮、牛皮癣、类风湿性关节炎和炎性肠疾病。其他发炎相关的疾病于本文中讨论。
如本文所用的术语“消炎剂”系指任何用于治疗发炎的消炎化合物。
如本文所用的“治疗”系关于本揭示化合物用于预防、改善或治愈疾病的治疗性投药。
如本文所用的术语“药剂或药”系指当适当投与至患者时能够产生所要之疗效的化学化合物或组合物。
如本文所用的“实质上纯的”系指目标物质为主要物质(即，以摩尔量计，该物质比任何其他在组成物中的个别物质为更丰富)，而实质上经纯化部分为目标物质在所有巨分子物质中包含至少约50百分比的(以摩尔量计)组合物。总体来说，实质上纯的组合物于该组合物中会包含高于约80百分比的所有巨分子物质，例如高于约85％、90％、95％和99％。目标物质也可以被纯化至基本上为同质(经由习用检测方法无法测得组合物中的污染物)，其中该组合物基本上由单一物质所组成。
据此，在一方面本揭示提供式I的化合物：
Figure BDA0000150832470000191
或其医药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，其中：
R1独立地为氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的烷氧基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基、-(CH2)jOR2、-(CH2)jC(O)R2、-(CH2)jC(O)OR2、-(CH2)jOC(O)R2、-(CH2)jNR3R4、-(CH2)jC(O)NR3R4、-(CH2)jOC(O)NR3R4、-(CH2)jNR5C(O)R2、-(CH2)jNR5C(O)OR2、-(CH2)jNR5C(O)NR3R4、-(CH2)jS(O)mR6或-(CH2)jNR5S(O)mR6，其中j为从0至12的整数；且m为从0至2的整数；
R2独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R3和R4各自独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基，或是R3和R4与其所连接的N原子一起形成经取代或未经取代的杂环基或经取代或未经取代的杂芳基；
R5独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R6独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R、R1、R2、R3、R4、R5和R6可任选且独立地经取代1至3个选自于下列的基团所取代：氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、烷氧基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、-(CH2)jOR7、-(CH2)jC(O)R7、-(CH2)jC(O)OR7、-(CH2)jOC(O)R7、-(CH2)jNR8R9、-(CH2)jC(O)NR8R9、-(CH2)jOC(O)NR8R9、-(CH2)jNR10C(O)R7、-(CH2)jNR10C(O)OR7、-(CH2)jNR10C(O)NR8R9、-(CH2)jS(O)mR11或是-(CH2)jNR10S(O)mR11，其中j为从0至12的整数；且m为从0至2的整数；
R7独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
R8和R9各自独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基，或是R8和R9与其所连接的N原子一起形成杂环基或杂芳基；
R10独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；及
R11独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
其限制条件为R1不是异丙基。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为-(CH2)jC(O)NR3R4；且R3和R4各自独立地为氢、经取代或未经取代的烷基或经取代或未经取代的芳基烷基。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为-(CH2)jC(O)NR3R4；j为0；R3为氢；且R4为-CH2CH(CH3)C6H5、-CH2(C6H4)CH3或-CH2(C6H4)CH2CH3。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为-(CH2)jC(O)NR3R4；j为0；R3为氢；且R4为或
Figure BDA0000150832470000212
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为-(CH2)jC(O)R2；且R2为经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的芳基烷基。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为-(CH2)jC(O)R2；j为0；且R2为CH2C6H5。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为经取代或未经取代的烷基或经取代或未经取代的环烷基。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为(C1-C6)烷基。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、或-CH2CH(CH3)2。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为-(CH2)q(C5H9)或-(CH2)q(C6H11)，其中q为自0至6的整数。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为经取代或未经取代的芳基烷基。
在另一方面本揭示提供式I的化合物，其中R1为经取代或未经取代的芳基(C1-C6)烷基。
在另一方面本揭示提供式I的化合物，其中R1为经取代或未经取代的-(C1-C6)烷基(C6H5)。
在另一方面，本揭示提供式I的化合物，其中R1为
Figure BDA0000150832470000214
或
Figure BDA0000150832470000215
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I的化合物，从而治疗该疾病或该病症。
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I的化合物，其中该疾病或该病症为癌症。
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I的化合物，其中该疾病或病症为癌症，其中癌症为肺癌、乳癌、前列腺癌或淋巴瘤。
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I的化合物，其中该治疗包括抑制至少一种BCL-2族蛋白的活性。
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I的化合物与一种抗癌剂的组合。
在另一方面，本揭示提供治疗具有至少一种BCL-2族蛋白表达水平升高的个体之癌症或自体免疫疾病的方法，经由投与至该个体治疗上有效量的式I的化合物，从而治疗该癌症或自体免疫疾病。
在另一方面，本揭示提供治疗具有至少一种BCL-2族蛋白表达水平升高的个体之癌症或自体免疫疾病的方法，经由投与至个体治疗上有效量的式I的化合物，并且确定是否该个体对于使用该化合物的疗法有反应，其经由测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应。
在另一方面，本揭示提供治疗具有至少一种BCL-2族蛋白表达水平升高的个体之癌症或自体免疫疾病的方法，经由投与至该个体治疗上有效量的式I的化合物，并且确定是否该个体对于使用该化合物的疗法有反应，其经由测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应，其中该测定是基于取自该个体之样本进行。
在另一方面，本揭示提供用以确定是否一个体对于使用式I的化合物的疗法有反应的方法，经由测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应。
在另一方面，本揭示提供用以确定是否一个体对于使用式I的化合物的疗法有反应的方法，经由测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与一正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应，且其中该测定是基于取自该个体之样本进行。
在另一方面，本揭示提供用以确定是否一个体对于使用式I的化合物的疗法有反应的方法，经由测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与一正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应，其中该测定是基于取自该个体之样本进行，且其中该样本为生物流体或肿瘤样本。
在另一方面，本揭示提供用以确定是否一个体对于使用式I的化合物的疗法有反应的方法，经由测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与一正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应，且其中该BCL-2族的多核苷酸或多肽为BCL-2、BCL-XL、BCL-W、MCL-1或BCL-A1。
在另一方面，本揭示提供诱导具有至少一种BCL-2族蛋白成员之水平高于对照细胞中之水平的细胞的细胞凋亡的方法，经由向该细胞投与有效量的式I的化合物，从而减少BCL-2族蛋白的水平并于该细胞中诱导细胞凋亡。
在另一方面，本揭示提供诱导具有至少一种BCL-2族蛋白成员之水平高于对照细胞中之水平的细胞的细胞凋亡的方法，经由向该细胞投与有效量的式I的化合物，从而减少BCL-2族蛋白的含量并于该细胞中诱导细胞凋亡，其中该细胞为癌细胞。
在另一方面，本揭示提供诱导具有至少一种BCL-2族蛋白成员之水平高于对照细胞中之水平的细胞的细胞凋亡的方法，经由向该细胞投与有效量的式I的化合物，从而减少BCL-2族蛋白的水平并于该细胞中诱导细胞凋亡，其中该细胞为癌细胞，且其中癌为肺癌、乳癌、前列腺癌或淋巴瘤。
在另一方面，本揭示提供诱导具有至少一种BCL-2族蛋白成员之水平高于对照细胞中之水平的细胞的细胞凋亡的方法，经由向该细胞投与有效量的式I的化合物，从而减少BCL-2族蛋白的水平并于该细胞中诱导细胞凋亡，其中该细胞为免疫系统细胞。
在另一方面，本揭示提供用以确定治疗方案的有效性的方法，包括投与式I化合物至一个体，经由在以该化合物处理之前和处理期间比较该个体细胞中BCL-2族蛋白的水平，其中BCL-2族蛋白水平降低指示利用该化合物的疗法的有效性。
在另一方面，本揭示提供用以确定治疗方案的有效性的方法，包括投与式I化合物至一个体，经由在以该化合物处理之前和处理期间比较该个体细胞中BCL-2族蛋白的水平，其中BCL-2族蛋白水平降低指示利用该化合物的疗法的有效性，其中该个体患有癌症。
在另一方面，本揭示提供用以确定治疗方案的有效性的方法，包括投与式I化合物至一个体，经由在以该化合物处理之前和处理期间比较该个体细胞中BCL-2族蛋白的水平，其中BCL-2族蛋白水平降低指示利用该化合物的疗法的有效性，其中该个体患有癌症，且其中癌症为肺癌、乳癌、前列腺癌或淋巴瘤。
在另一方面，本揭示提供用以确定治疗方案的有效性的方法，包括投与式I化合物至一个体，经由在以该化合物处理之前和处理期间比较该个体细胞中BCL-2族蛋白的水平，其中BCL-2族蛋白水平降低指示利用该化合物的疗法的有效性，其中该个体患有癌症，且其中癌症包括(但不限于)消化器官/胃肠道癌、结肠癌、肝癌、皮肤癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病(包括急性骨髓性白血病和慢性骨髓性白血病)、肾癌、肺癌、肌肉癌、骨癌、膀胱癌或脑癌。
在另一方面，本揭示提供用以确定治疗方案的有效性的方法，包括投与式I化合物至一个体，经由在以该化合物处理之前和处理期间比较该个体细胞中BCL-2族蛋白的水平，其中BCL-2族蛋白水平降低指示利用该化合物的疗法的有效性，其中该个体患有自体免疫病症。
在另一方面本揭示提供用以治疗个体发炎的方法，经由对需要治疗的个体投与医药学上有效量的式I化合物、或其医药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，因而减轻发炎，其中R1为如上文所述。
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I化合物，其中该疾病或病症为红斑狼疮、牛皮癣、牛皮癣关节炎、狼疮肾炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、溃疡性结肠炎、重症肌无力、ITP、TTP、格雷夫斯病(Grave’s disease)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、克罗恩病(Crohn’s disease)、自体免疫性溶血性贫血、胰岛素依赖型糖尿病、肾小球肾炎、风湿热、骨关节炎、痛风性关节炎、皮炎、支气管炎、鼻炎、气喘、干燥综合征(Sjogrens’syndrome)、脑膜炎、肾上腺脑白质营养不良(adrenoleukodystrophy)、中枢神经系统血管炎、线粒体肌病(mitochondrial myopathies)、肌萎缩侧索硬化(AmyotrophicLateral Sclerosis)、阿兹海默病(Alzheimer’s disease)或肿瘤。
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I化合物，其中该疾病或病症为线粒体肌病，诸如MELAS综合征、MERF综合征、利伯氏病(Leber’s disease)、韦尼克氏脑病(Wernicke’s encephalopathy)、雷特综合征(Rett syndrome)、同型胱氨酸尿症(homocystinuria)、血脯氨酸过多(hyperprolinemia)、非酮性高甘氨酸血症(nonketotic hyperglycinemia)、羟丁氨基酸尿症(hydroxybutyricaminoaciduria)、亚硫酸氧化酶缺乏症或联合系统疾病(维生素B12缺乏症)。
在另一方面，本揭示提供治疗疾病或病症的方法，经由对需要的个体投与治疗上有效量的式I化合物，藉由进一步投与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)。
在另一方面，本揭示提供用以治疗个体发炎的方法，经由对需要治疗的个体投与医药学上有效量的式I的化合物，藉由进一步投与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)。
在另一方面，本揭示提供用以治疗个体发炎的方法，经由对需要治疗的个体投与医药学上有效量的式I化合物，其中该发炎为与一种病况相关的发炎，其中该病况为红斑狼疮、牛皮癣、牛皮癣关节炎、狼疮肾炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、溃疡性结肠炎、重症肌无力、ITP、TTP、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、克罗恩病、自体免疫溶血性贫血、胰岛素依赖型糖尿病、肾小球肾炎、风湿热、骨关节炎、痛风性关节炎、皮炎、支气管炎、鼻炎、气喘、干燥综合征、脑膜炎、肾上腺脑白质营养不良、中枢神经系统血管炎、线粒体肌病、肌萎缩侧索硬化、阿兹海默病或肿瘤。
在另一方面，本揭示提供用以治疗个体发炎的方法，经由对需要治疗的个体投与医药学上有效量的式I化合物，其中该发炎为与一种病况相关的发炎，其中该病况为线粒体肌病，其中该线粒体肌病为MELAS综合征、MERF综合征、利伯氏病、韦尼克氏脑病、雷特综合征、同型胱氨酸尿症、血脯氨酸过多、非酮性高甘氨酸血症、羟丁氨基酸尿症、亚硫酸氧化酶缺乏症或联合系统疾病(维生素B12缺乏症)。
发炎病症可能涉及细胞凋亡调节者的活性。因此，鉴定出可调节细胞凋亡调节者之活性的化合物(诸如BCL-2蛋白)是需要的。此等化合物如本文所述。在一些实施例中，这些化合物的结合防止抗细胞凋亡BCL-2族成员与促细胞凋亡BCL-2族成员的相互作用，从而减少抗细胞凋亡BCL-2族成员的生物活性。结果是，化合物可用来治疗或预防涉及抗细胞凋亡BCL-2蛋白活性的炎性病症。在各种实施例中，有兴趣的化合物包含各种具有式I的阿朴棉子酚酮衍生物。这些化合物可被投与至具有高度易发展为与发炎相关病况(例如红斑狼疮)的患者，以减少该患者发展为此等病况的可能性。
本揭示也提供具有式I之阿朴棉子酚酮的前药，例如当式I的R1为乙酸盐部分(-OC(O)CH3)时，这些化合物可被用作为阿朴棉子酚酮衍生物之口服用前药。在另一实施例中，本揭示的化合物包括式I的化合物，其中该化合物为实质上纯的，诸如高于约85％、90％、95％和99％。例如式I的化合物可被纯化至基本上为同质。
阿朴棉子酚酮可比棉子酚更有效但毒性更低。棉子酚中的醛使得这种化合物具有活性，因而实际上减少有效药的可用浓度并造成毒性。阿朴棉子酚酮(一种棉子酚类似物但没有造成问题的醛)保留对抗抗细胞凋亡BCL-2-族蛋白的活性。每日给药研究显示小鼠对于阿朴棉子酚酮的给药有耐药性。此外，关于毒性和功效，阿朴棉子酚酮比母化合物棉子酚更好。用阿朴棉子酚治疗癌症的用途被描述于2005年6月25日申请的PCT公开案第WO 2005/009434号中，此案以全文引用的方式并入本文中。考虑到棉子酚可能因为两个活性醛基而有毒性的问题，式I的化合物经设计缺少这些醛但于活体外和细胞中仍保留对抗抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白的活性。
于Bcl-2的BH3结合沟中阿朴棉子酚的分子对接研究说明阿朴棉子酚分别经由1和1’羟基与Bcl-2的残基Arg 143和Tyr 105形成两个氢键。阿朴棉子酚也经由位在右萘环上的6’羟基与Bcl-2的Trp141和Tyr 199形成氢键。左萘环上的异丙基嵌进Bcl-2的第一疏水袋(P1)中，而右萘环上的异丙基嵌进疏水袋(P2)。预测结合模型的分析指出，虽然阿朴棉子酚的整体核心结构在Bcl-2的BH3结合沟中相当适合，但是两个异丙基显然没有完全占据疏水袋P1和P2。
用来合成本揭示化合物的一般合成方案系提供如下。
特别是，式I化合物之5，5′经酰胺取代之阿朴棉子酚酮衍生物的合成概述如下：
Figure BDA0000150832470000281
试剂和条件：(a)NaOH，H2O，回流；(b)H2SO4；(c)DMS，K2CO3；(d)TiCl4，Cl2CHOCH3，rt；(e)HCl，H2O(f)NaClO2，H2O2，KH2PO4，CH3CN，rt；(g)HCl，H2O；(h)EDCl，NH2R，HOBT，rt；(i)BBr3，CH2Cl2(j)HCl，H2O；(k)FeCl3，H2SO4。
如上所示，棉子酚1在回流状态下经NaOH水溶液处理，且该溶液经H2SO4酸化，以提供化合物2。当以DMS和K2CO3处理时，化合物2发生甲基化，以提供化合物4。化合物4以TiCl4和二氯甲基甲醚处理造成失去异丙基并同时发生双甲酰基化(bisformylation)，其当经HCl水溶液酸化时提供醛化合物5。化合物5在NaClO2、H2O2、KH2PO4乙腈溶液中氧化，并经HCl水溶液酸化，以提供对应的酸化合物6。于室温下以EDCl、NH2R、HOBT处理化合物6提供酰胺化合物7。化合物7的脱甲基化发生在当其以BBr3二氯甲烷溶液处理，并且该溶液经HCl水溶液酸化提供酰胺化合物8。最后，化合物8于FeCl3/H2SO4中的氧化提供所要的阿朴棉子酚酮衍生物9。
式I之5，5′经烷基取代之阿朴棉子酚酮衍生物的合成概述如下。
试剂和条件：(a)RMgBr或RLi，rt；(b)NH4Cl，H2O；(c)氯铬酸吡啶盐，CH2Cl2，rt；(d)Et3SiH、TFA或Pd/C，H2；(e)BBr3；(f)HCl，H2O。
化合物5经不同的格氏(Grignard)或锂试剂处理，以提供仲醇9，其经由氯铬酸吡啶盐氧化，以得到苯酮10。三乙基硅烷将苯酮10还原为烷基化合物11，接著使用三溴化硼进行随后的脱甲基化，以提供化合物12。
化合物13和14仅在5，5’位置具有氢原子或羧酸，其等被合成来探究是否5，5’位置的取代对于提高生物活性是重要的。化合物13经由以浓硫酸处理化合物4以失去异丙基来合成。接著该产物和化合物6个别以三溴化硼处理，以分别得到化合物13和14。
Figure BDA0000150832470000292
试剂和条件：(a)H2SO4，rt；(b)H2O；(c)BBr3，CH2Cl2；(d)HCl，H2O。
式I的5，5′经酮取代之阿朴棉子酚酮衍生物的合成经概述如下：
Figure BDA0000150832470000301
试剂和条件：(a)BBr3；(b)HCl，H2O；(c)FeCl3，H2SO4。
如上所示，酮化合物11的脱甲基化发生在当以BBr3二氯甲烷溶液处理时，且该溶液以HCl水溶液酸化，以提供化合物15。化合物15在FeCl3/H2SO4中的氧化提供所要的阿朴棉子酚酮衍生物16。
经合成的式I的化合物可经由针对Bcl-XL的单维1H核磁共振谱(1D-1HNMR)结合分析法来筛选。接著选出1D-1H NMR结合分析法中的活性化合物并以等温滴定量热分析法(ITC)、细胞存活率分析法和竞争性萤光偏振分析法(FPA)来评估。在这些分析法中，一组式I化合物显示对于Bcl-XL的高结合亲和力。最有效的化合物在Bcl-XL的单维1H-NMR光谱中可在活性位点甲基(-0.38和0.42ppm之间的区域)引起显著的化学位移改变，同时在FP置换分析法中具有比阿朴棉子酚更有效的IC50值。为了确认NMR结合数据和FP分析法的结果，式I化合物对于Bcl-XL的结合亲和力使用ITC分析法来测试。与NMR结合和FPA数据一致，式I化合物显示对于Bcl-XL有效的结合亲和力，于相同分析法中具有比阿朴棉子酚更有效的Kd值(Kd＝1.7μM)。与NMR结合、FPA和ITC数据一致，式I的化合物在表达高水平的Bcl-XLPC3ML细胞中显示强的细胞生长抑制功效。
Bcl-2和Mcl-1在细胞凋亡上扮演关键的角色，且据称于Bcl-2族蛋白中Bfl-1在大B细胞淋巴瘤中为重要的抗细胞凋亡因子。因此，可使用FP分析法来评估所选之Bcl-XL活性式I化合物对于Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1的结合特性和专一性。式I化合物显示对于Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1之强结合亲和力，且以低IC50值抑制Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1，在相似FP分析法中比阿朴棉子酚更为有效。可进一步针对H460、H1299和BP3细胞株来评估式I化合物，该等细胞株分别表达高水平的Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1。与FPA数据一致，式I化合物在抑制H460和BP3细胞的细胞生长上显示显著功效，其具有较阿朴棉子酚更为有效之低IC50值。式I化合物的分子对接研究说明了在5，5’位置的2-苯丙基更深入地嵌进Bcl-2中的疏水袋(P1和P2)，因此相较于阿朴棉子酚的异丙基更有效地占据这些区域。此外，在右萘环上的羰基也与残基Tyr199形成一个额外的氢键。其他的式I化合物也显示强的全活性抑制Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1的特性。
合成之式I化合物的结构与活性关系(SAR)的分析显示在5，5’位置的取代对于达到对于Bcl-2族蛋白的更强结合亲和力为重要。据此，在5，5’位置上具有氢原子或羧酸基团的式I化合物在所有的分析法中均显示弱的抑制或没有抑制作用。5，5’经酰胺取代之式I化合物的SAR分析指出，较长的且韧性的疏水性基团，与小的、短的及刚性的疏水性基团相比较，显示出较佳的效力。以较长的甲基环己基置换小的甲基环丙烷或短的环戊基可显著地增加细胞抑制效能。同时，在5，5’位置上具有苯乙基的式I化合物在H460和PC3ML细胞株中显示出有效的细胞活性，具有苯基的式I化合物显示相对弱的细胞活性。基于模型预测，这可能是因为较长且韧性的基团可更深地嵌进P1和P2袋中。对5，5’经烷基取代之式I化合物的SAR进行研究。一般而言，较长的疏水性基团显示改良的效能。具有异丁基和异戊基的式I化合物相较于具有异丙基的阿朴棉子酚显示出改良的活性。同样地，具有苯乙基的式I化合物的活性可能高于具有苯甲基的化合物的活性。
已经利用数个基团来研究H460细胞株。在H460细胞株中测试一种全Bcl-2族抑制剂(或是GX15-070)，IC50值为3.85μM。BP3为过度表达Bfl-1的人类弥漫性大B-细胞淋巴瘤(DLBCL)的细胞株。Bfl-1、Bcl-XL和Mcl-1之mRNA比例约为10∶3∶1。如表1所示，经蛋白质印迹分析法(Western blotanalysis)测定出BP3细胞过度表达高水平的Bfl-1和Mcl-1。
表1
  Mcl-1   Bcl-2   Bcl-X1   Bfl-1
  BP3   +++   No   +   +++
  RS4；11   No   ++++   +   No
蛋白质印迹数据的4点分级量表：
++++：极高水平
+++：高水平
++：中水平
+：低
No：无法检测
因为有效的Bcl-XL和Bcl-2拮抗剂ABT-737无法有效对抗Mcl-1和Bfl-1，ABT737对于BP3细胞株未显示细胞活性。
进行式I化合物诱导人类淋巴瘤RS11846细胞株(其表达高水平的Bcl-2和Bcl-XL)之细胞凋亡能力的评估。对于这些分析法，使用膜联蛋白V-FITC及碘化丙啶(PI)双染色，接著以流式细胞术分析。合成的式I化合物以剂量依赖性方式有效地诱导RS11846细胞株的细胞凋亡。特别是，式I化合物为有效的，且具有低的EC50值。此结果与在人类癌PC3ML和H460细胞株的先前结果一致。同样地，阴性对照化合物对于RS11846细胞株诱导出微弱的细胞凋亡或是没有细胞凋亡。
式I化合物对于Bax/Bak双基因剔除(DKO)小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)具有细胞毒性，在该成纤维细胞中，抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白缺少细胞保护的表型。使用FITC-膜联蛋白V/PI分析法发现，一些有效的全活性Bcl-2化合物在10μM下杀死20-35％的Bax/Bak双基因剔除小鼠胚胎成纤维细胞(MEF/DKO)，对这些细胞呈现微量的细胞毒性，这意味这些化合物显示出一些脱靶效应(off-target effects)。然而，这些化合物显示出的脱靶效应低于在10μM下于MEF和MEF/DKO细胞中显示出非常相似细胞毒性的棉子酚。与5，5’经酰胺取代之式I化合物相比之下，阿朴棉子酚具有较低的脱靶效应，但显示出较弱的诱导MEF细胞凋亡的能力。
阿朴棉子酚具有在萘环上6个羟基的多酚支架，其可被氧化为醌。稳定的阿朴棉子酚可藉由与抗坏血酸共结晶获得。阿朴棉子酚也可以由引入吸电子基团(诸如在萘环上的羰基)来稳定，因为这些会减少萘环上的电子密度并随后放慢氧化速率和其他副反应。固体化合物的化学稳定性是在室温下评估。化合物的稳定性使用HPLC和LCMS的组合来监测。总的来说，5，5’经酰胺取代之式I化合物相较于阿朴棉子酚显示较好的化学稳定性。特别是，于室温下该化合物在60天后仅有10％降解，而阿朴棉子酚在没有抗坏血酸的相同条件下为将近80％分解。在5，5’位置具有苯乙基的化合物也由于缺少吸电子基团较酰胺化合物不稳定。
为了测试式I化合物的药理学特性，测定活体外血浆稳定性、微粒体稳定性和细胞膜通透性。从这些研究中，式I化合物显示比阿朴棉子酚更好的血浆和微粒体稳定性。在大鼠血浆中培育1小时后，化合物仅分别降解4％和11％，而在相同条件下阿朴棉子酚降解了47％。此外，在大鼠微粒体制剂中培育1小时后，该化合物分别降解了24％和10％，而在相同条件下阿朴棉子酚降解36％。该化合物相较于阿朴棉子酚也显示相似或改良的细胞膜通透性。
使用1D 1H-NMR结合分析法、FP分析法、ITC分析法、细胞毒性分析法和初步活体外ADME数据的组合，选出式I化合物以便进一步用于使用B6Bcl-2转基因小鼠的活体内研究。B6Bcl-2转基因小鼠的B-细胞可过度表达人类的Bcl-2并累积于小鼠的脾脏中。因为在年龄和性别相当的Bcl-2-转基因小鼠中重量为非常一致，且在对照B6Bcl2小鼠中变异性为±2％之内，脾脏重量被用来作为用于评估活体内活性的终点。通过在单一Bcl-2转基因小鼠中进行单次腹膜内(ip)注射(72μmol/kg)，化合物的活体内活性与阿朴棉子酚和棉子酚一起进行筛选。与所有的活体外数据一致，测试之5，5’经酰胺取代的式I化合物相较于阿朴棉子酚和棉子酚显示较好的活体内活性。特别是，化合物造成高于40％的脾脏重量减少。因为在这个实验模型中最大的脾脏减少程度不超过50％，这些化合物引出近乎最大之(85至95％)生物活性，而阿朴棉子酚和棉子酚在相同剂量下仅造成40％之最大脾脏重量减少。同样地，如同预期，阴性对照化合物在转基因小鼠模型中未显示活性。总的来说，测试的5，5’经烷基取代之式I化合物的活体内活性低于5，5’经酰胺取代化合物。
以72μmol/kg(50mg/kg)式I化合物处理的小鼠有更明显之GI毒性征兆。为了平衡化合物的毒性和功效，使用一组5只小鼠来研究化合物的最大耐受剂量(MTD)。以单一剂量的100、75、50、25和12.5mg/kg(ip)处理小鼠，并观察14天时间，监测发病率(体重减少)和死亡率。14天后所有的小鼠都存活，且在第5天时观察到最大重量减少，其在14天后经历80-100％的复原。投与25和12.5mg/kg剂量的小鼠未显示重量减少，而投与50mg/kg剂量之小鼠显示约13％的重量减少。因此，式I化合物的MTD大概介于约25mg至50mg/kg之间。接著，评估在多组六只小鼠中给予每只剂量为42mg/kg(60μmol/kg)的式I化合物的活体内活性和毒性。与单一小鼠的实验一致的是，相较于对照组的六只小鼠，以化合物处理这些小鼠导致脾脏重量之显著减少(～70％)(P＜0.0001)。所有的小鼠对于处理有良好的耐受力，且仅观察到轻微的GI毒性征兆。在这研究的过程中小鼠的平均重量减少7.8％。
合成式I化合物，并且以各种活体外和活体内的分析法来评估。最有效的化合物以低IC50值结合至Bcl-XL、Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1。这些化合物在亚微米摩尔至纳摩尔范围的EC50值下也可有效地抑制PC3ML、H460、H1299和BP3癌细胞株(分别表达Bcl-XL、Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1)的细胞培养的生长。这些化合物也可以剂量依赖性方式有效地诱导RS11846人类淋巴瘤细胞株的细胞凋亡，并显示对于Bax/Bak双基因剔除小鼠胚胎成纤维细胞之微低的细胞毒性，在该成纤维细胞中抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白缺少细胞保护的表型，这意味这些化合物有极低的脱靶效应。最后，在B细胞过度表达Bcl-2的Bcl-2转基因小鼠中，相较于阿朴棉子酚，这些化合物显示有利的化学稳定性、活体外ADME特性和较好的活体内功效。因此，抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白在肿瘤生成、化学抗性上的重要作用和式I化合物对抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白的有效抑制活性，可提供重要的基于细胞凋亡的癌症疗法。
本文揭露的化合物结合至抗细胞凋亡BCL-2蛋白可以诱导细胞凋亡，从而治疗发炎及/或炎性病症。在一些实施例中，本文揭露的化合物可以结合至抗细胞凋亡BCL-2族蛋白，像是例如BCL-2或BCL-XL。这种结合可以抑制抗细胞凋亡BCL-2族成员结合至促细胞凋亡BCL-2族成员。在各种实施例中，本文揭露的化合物的结合可以减少抗细胞凋亡BCL-2蛋白和促细胞凋亡BCL-2族成员的BH3结构域之间复合物的形成。
在核磁共振(NMR)结合分析法和计算对接研究的组合的指引下，一系列的式I化合物被合成为有效的抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白的全活性抑制剂。最有效的化合物之一(8r)分别以0.76μM、0.32μM、0.28μM和0.73μM之IC50值抑制BH3肽结合至Bcl-XL、Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1。这个化合物也分别以0.33μM和0.66μM之EC50值有效地抑制H460人类肺癌和BP3人类B-细胞淋巴瘤细胞株的细胞生长。化合物8r以剂量依赖性方式有效地诱导RS11846人类淋巴瘤细胞株凋亡并对于bax-/-bak-/-细胞(该细胞中抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白缺少细胞保护的表型)显示微少细胞毒性，这意味化合物8r具有极低脱靶效应。化合物8r于脾脏的B细胞中会过度表达Bcl-2的转基因小鼠中也显示活体内功效。加上其相对于阿朴棉子酚之改良的化学、血浆和微粒体稳定性，化合物8r成为基于细胞凋亡的癌症疗法。
棉子酚酮5，为经氧化作用形成的化合物1主要代谢物，在数种癌细胞株中显示与化合物1相似的细胞毒性效果，且近来被提出用于癌症治疗。阿朴棉子酚酮(6a或ApoG2)，5的衍生物，同时也被报告为Mcl-1和Bcl-2蛋白的有效的抑制剂。化合物6a会阻挡Bim和Bcl-2的结合，并在数种人类癌细胞株中诱导细胞凋亡。化合物6a在数种肿瘤异种移植模型中也诱导消退，当经口服时它的最大耐受剂量(MTD)大于240mg/kg，而(-)1的MTD为50mg/kg。因此，进一步研究是否6a衍生物显示出比较于6a相似或改良的生物活性为值得做的。可预见的是5，5’经取代的6a会产生具改良生物活性的化合物。本文提供新颖的5，5’经取代6a衍生物(6-8)(其以各种烷基(6)、酮(7)和酰胺(8)基在5，5’位置替代6a的异丙基)的合成和生物评估。
因此，在另一实施例中，用来合成本揭示化合物的一般合成方案提供如下。
Figure BDA0000150832470000361
试剂和条件：(a)NaOH，H2O，回流；(b)H2SO4；(c)DMS，K2CO3；(d)H5IO6，95℃；(e)BBr3，CH2Cl2；(f)HCl，H2O；(g)TiCl4，rt；(h)Cl2CHOCH3，rt；(i)HCl，H2O；(j)NaClO2，H2O2，KH2PO4，CH3CN，rt；(k)EDCI，NH2R，HOBT，rt；(l)FeCl3，CH3COOH，60℃；(m)20％H2SO4。
化合物1在90℃以NaOH溶液处理，以提供化合物2a，其在碳酸钾的存在下快速地被甲基化，以提供化合物9。使用高碘酸化合物9被氧化为化合物10。接著使用三溴化硼进行化合物10的脱甲基化，以提供化合物6a。使化合物9w依序与TiCl4和二氯甲基甲醚反应造成失去异丙基并同时发生双甲酰基化，以得到醛化合物11。化合物11的醛基被氧化，并在1-乙基-3-(3’-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)的存在下与各种市售的胺耦合，以提供酰胺化合物12。随后的化合物12脱甲基化提供化合物4。数种氧化剂(诸如[二(三氟乙酸)碘]苯、亚硝基过硫酸钾和氯化铁)被用来使酚4转变为醌8，而我们的经验是氯化铁为对于这个转化反应最有效的氧化剂。
5，5’经烷基取代的6a衍生物的合成经概述如下：
试剂和条件：(a)RMgBr或RLi，rt；(b)NH4Cl，H2O；(c)氯铬酸吡啶盐，CH2Cl2，rt；(d)BBr3；(e)HCl，H2O；(f)Et3SiH，TFA；(g)Pd/C，H2，CH3COOH；(h)FeCl3，CH3COOH，60℃；(i)20％H2SO4。
化合物11经不同的格氏或锂试剂处理，以提供仲醇13，其经由氯铬酸吡啶盐氧化，以得到苯酮14。使用三乙基硅烷将醇13和苯酮14快速地还原，以提供烷基化合物15。接著使用三溴化硼使化合物15脱甲基化，以提供化合物2。使用氯化铁氧化化合物2得到6成为5，5’经烷基取代6a衍生物。在Pd/C存在下使用H2还原酮3也可提供化合物2。化合物14的脱甲基化和随后的氯化铁氧化提供化合物7成为5，5’经酮取代6a衍生物。
合成的5，5’经取代6a衍生物首先经由针对Bcl-XL的单维1H核磁共振谱(1D1HNMR)结合分析法来筛选。一组化合物(6a、6b、6f、6i、6l、6m、7、8a-c)在Bcl-XL的单维1H-NMR光谱中可在活性位点甲基(-0.38和0.42ppm之间的区域)引起化学位移改变。如表2所示，使用1D1H-NMR结合分析法和细胞存活率分析法的组合评估5，5’经取代的6a衍生物。
表2
Figure BDA0000150832470000381
Figure BDA0000150832470000391
a*4点分级评量表：++++：极高活性；++：有活性；+：轻度活性；-：微弱活性
b*使用ATP-LITE分析法针对细胞株分析化合物
c*使用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶分析法针对细胞株分析化合物
为了确认上文所述的1D 1H NMR结合分析法的结果，制作15N-标记Bcl-XL蛋白，并在有和没有所选化合物存在下，以2D[15N，1H]-HSQC相关光谱来测量。与1D 1H NMR结合分析法一致，经由在配体/蛋白质比例1∶1的位移性质下的定量评估，化合物6f、6i和8a显示与Bcl-XL的强结合性。为了确认NMR结合数据的结果，使用FP分析法来评估对于Bcl-XL所选化合物的结合亲和力。表3说明所选的5，5’经取代6a衍生物抗Bcl-XL、Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1的交叉活性。
表3
Figure BDA0000150832470000392
Figure BDA0000150832470000401
Figure BDA0000150832470000402
与NMR结合一致，化合物6f显示出有效的结合至Bcl-XL的亲和力，在FP分析法中具有3.1μM的IC50值。一组化合物(6a、6b、6i、6l、6m、7、8a、8c)比6f更有效5至19倍，且在相同分析法中具有0.16至0.63μM范围的IC50值。化合物6f分别以IC50值3.10、3.12和2.05μM抑制BH3肽结合至Bcl-XL、Bcl-2和Mcl-1。在细胞分析法中，6f以剂量依赖性方式有效地抑制于数种人类癌细胞株中的细胞生长。化合物6f进一步显示于转基因小鼠中的活体内功效，说明了在PPC-1小鼠异种移植模型中较好的单剂抗肿瘤功效。连同可忽略不计的毒性，化合物6f象征一种在基于细胞凋亡的新颖癌症疗法的发展上具有前景的药物。
为了进一步确认NMR结合数据和FP分析法的结果，使用等温滴定量热法(ITC)评估所选的化合物(6a、6b、6f、6i)对于Bcl-XL的结合亲和力。与NMR结合和FPA数据一致，化合物6f显示与Bcl-XL的高结合亲和力，经由ITC得到2.5μM的Kd值，且在相同分析法中化合物6i显示出增加的结合亲和力(Kd值为0.45μM)。化合物6a显示与6f相似的结合亲和力，经由ITC得到Kd值为2.80μM。与NMR结合、FPA和ITC数据一致，在一个3天的ATP-Lite分析法中，于可表达高水平Bcl-XL的PC3细胞株中，化合物6a、6d-6g、6i和6l-m显示出在抑制细胞生长上有效的功效。6i、6l和6m的平均EC50值为0.60μM，所以比6a(EC50＝1.5μM)更有效的2.5倍。在相同分析法中，如同有效的化合物6a，化合物6f(EC50＝1.1μM)显示出在抑制PC3细胞生长上相似的功效。然而，虽然化合物8a和8c在NMR结合分析法和FP分析法中显示强的Bcl-XL结合亲和力，它们在抑制PC3细胞生长上显示出相对较弱的功效，EC50值大约为7.6μM。这个差异可能是由于8a和8c的高亲水性和分子量造成低的细胞通透性导致。因此，使用平行人造膜通透性分析法(PAMPA)来评估所选的化合物的细胞通透性。如所预期，化合物8a具有较低的LogPe值为-7.9，此显示不良的细胞膜通透性，而6f的LogPe值为-5.6表示良好的细胞膜通透性。与6f比较，化合物6a也具有相对较低的细胞膜通透性(LogPe＝-5.9)。
除Bcl-XL之外，已知其他Bcl-2族成员在肿瘤存活上扮演重要的角色。因此，使用FP分析法进一步评估所选5，5’经取代6a衍生物对Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1之结合特性和特异性。在FP分析法中，化合物6f显示出对于Bcl-2(IC50＝3.12μM)、Mcl-1(IC50＝2.05μM)的有效亲和力，和对于Bfl-1(IC50＝14.0μM)之相对较低亲和力。进一步评估化合物6f对于H460和H1299癌细胞株(其分别表达高水平的Bcl-2和Mcl-1)的作用。与FPA数据一致，在3天的ATP-Lite分析法中，于H460和H1299细胞株中，化合物6f在抑制细胞生长上显示有效的功效，分别具有EC50值为0.59μM和1.5μM，这与6a类似。化合物6f的分子对接研究说明在5，5’位置的1-甲基-4-丙苯基更深地嵌进Bcl-2的疏水袋(P1和P2)中。基于对接模型，化合物6f也与Bcl-2中的残基Arg 143和Tyr 199分别经由1’氧和6’羟基形成两个氢键。此外，在右侧萘环上的7’羟基也与残基Tyr141形成一额外的氢键。其他的5，5’经取代6a衍生物(诸如6b、6i、6l和6m)也显示强的抗Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1的全活性抑制特性。在FP分析法中最有效的化合物6i分别以IC50值0.29、0.24和0.65μM替换BH3与Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1的结合。与这些FPA结果一致，在3天的ATP-Lite分析法中，化合物6i显示抗H460和H1299细胞株之细胞生长的有效抑制活性，分别具有0.13和0.31μM的IC50值。关于Bcl-2拮抗剂的敏感性，已经利用数个基团来研究H460细胞株，然而，虽然在FP分析法中化合物7、8a和8c显示对于Bcl-2和Mcl-1有效的结合亲和力(分别具有平均IC50值为0.22μM和0.38μM)，它们在抑制H460和H1299细胞生长上显示出相对弱的功效(分别具有平均EC50值为约5.8μM和17μM)。这差异系部分由于高亲水性和分子量的5，5’经酮和酰胺取代6a衍生物造成细胞通透性降低的缘故。
在1天的膜联蛋白-V细胞凋亡分析法中评估5，5’经取代6a衍生物诱导人类白血病RS4；11细胞株(其表达高水平的Bcl-2和Bcl-XL)及人类淋巴瘤BP3细胞株(其表达高水平的Bfl-1和Mcl-1)凋亡的能力。这个分析法使用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶(PI)双染色，接著以流式细胞术分析。全Bcl-2族抑制剂6f以剂量依赖性方式有效地诱导RS4；11和BP3细胞株的凋亡，分别具有3.5和3.0μM的EC50值，其比相同分析法中的6a(EC50值分别为7.4和9.2μM)更有效2至3倍。相比之下，大概是因为有效的Bcl-XL和Bcl-2拮抗剂ABT737并非有效对抗Mcl-1和Bfl-1，ABT-737没有显示出对BP3细胞株的细胞毒性。与先前由人类PC3、H460和H1299癌细胞株所取得的结果一致，大部分合成的6a衍生物以剂量依赖性方式诱导RS4；11和BP3细胞株的凋亡。
为了进一步研究所选的5，5’经取代6a衍生物的抗癌活性，在1天的膜联蛋白-V细胞凋亡分析法中测试它们诱导自罹患慢性淋巴细胞白血病(CLL)的不同患者中新鲜分离出之原代淋巴细胞白血病细胞凋亡的能力。与先前人类RS4；11和BP3细胞株获得的结果一致，最有效的化合物6f以剂量依赖性方式有效地诱导两种原代CLL样本的细胞凋亡，LD50值分别为10μM和15μM。相比之下，化合物6a在这些两种原代细胞中显示弱的活性(LD50＞30μM)。使用相同分析法，进一步测试化合物6f对原代白血病细胞(自罹患CLL之不同六名患者新鲜分离出来)的作用。与先前CLL结果一致，化合物6f有效地诱导所有六种CLL样本的细胞凋亡(LD50值的范围为从1.0至16.9μM)。化合物6c也有效地诱导原代CLL样本的细胞凋亡，LD50值为6.5μM，而6a较不有效(LD50＞30μM)。
为了测试5，5’经取代化合物6a衍生物的药理学特性，测定它们的活体外血浆稳定性、微粒体稳定性和细胞膜通透性。表4提供所选的5，5’经取代6a衍生物的血浆稳定性、微粒体稳定性和膜通透性。
表4
Figure BDA0000150832470000421
从这些研究中得到的结论是，与6a比较，大部分经合成的化合物显示出更好的血浆和微粒体稳定性。在培育于大鼠血浆中1小时后，化合物6f和6i分别降解37％和9％，而在相同条件下6a降解53％。此外，化合物6f和6i也显示更好的血浆稳定性，且在大鼠血浆制剂中培育1小时后，仅分别降解14％和5％，而在相同条件下6a降解了23％。
基于1D 1H-NMR结合分析法、FP分析法、ITC、细胞毒性分析法和初步活体外ADME数据的组合，选出化合物以便用于使用B6-Bcl-2转基因小鼠模型的活体内研究。B6转基因小鼠的B细胞可过度表达人类Bcl-2，并累积于小鼠的脾脏中。由于在年龄和性别相当的Bcl-2-转基因小鼠中重量为非常一致，在对照Bcl2小鼠中仅变异±2％，故脾脏重量被用来作为用于评估活体内活性的终点。在单一Bcl-2转基因小鼠中进行单次腹膜内(ip)注射诸如6b和6f的化合物(分别为60和120μmol/kg)与6a一起筛选其活体内活性。与所有活体外数据一致，测试的5，5’经取代6a衍生物以剂量依赖性方式造成小鼠中脾脏重量的显著减少。在剂量为60μmol/kg下，化合物6b、6d和6f与6a相比较显示更好的活体内活性。特别是，与6a所造成之20％的脾脏重量减少比较，化合物6b和6f造成高于30至40％的脾脏重量减少。因为在这个实验模型中最大的脾脏减少程度不超过50％19，这些化合物引起近乎最大(60至80％)之生物活性，而6a在相同剂量下仅造成40％之最大脾脏重量减少。以6b、6d和6f处理的小鼠对于处理有良好的耐受力，且未观察到毒性。然而，小鼠以化合物6i、6l和8a在60μmol/kg(i.p.)下处理则死亡。尽管如此，当在30μmol/kg下(i.p.)投与时，化合物6i和6l有良好的耐受力，造成显著之最大脾脏尺寸的减少(分别为86％±8.0％和76％±14.0％。)
为了进一步确认单一转基因小鼠实验的结果，评估在多组7只B6-Bcl-2转基因小鼠(每只剂量为60μmol/kg)内化合物6f的活体内活性。与单一小鼠实验一致，相较于对照组的7只小鼠，化合物6f的处理造成脾脏重量显著的减少(～60％)(P＜0.0002)。所有的小鼠对于处理有良好的耐受力，没有明显的毒性征兆。在化合物6f研究的过程中平均小鼠重量减少为～5.0％。
为了细查化合物6a和其衍生物(6f和6i)作为抗前列腺癌的单剂的治疗潜力，在PPC-1异种移植肿瘤的生长上对于这些化合物的活体内功效与化合物1一起进行研究。当在第一周以50mg/kg(i.p.)投与三次，与对照组比较，化合物6f和6a导致极大的肿瘤消退。在第一周经6f和6a处理的小鼠对于处理有良好的耐受性，具有适中的重量减少(～5％)。然而，经6i(50mg/kg，i.p.)和1(25mg/kg，i.p.)处理的小鼠在本实验的第一周死亡。50mg/kg之6f和6a在第二周处理小鼠两次且在第三周处理一次。总的来说，与对照组比较，化合物6f显示显著抗肿瘤活性，在PPC-1带有异种移植的裸小鼠中具有T/C％比例为33％(P＜0.001)。相较于6f，化合物6a显示较弱的抗肿瘤活性，在相同的异种移植模型中T/C％比例为65％。以6f处理的小鼠对于处理具良好的耐受力，未观察到毒性征兆。在处理期间，6f组、对照组和6a组的平均体重减少分别为6.8％、7.1％和9.3％。
合成一系列的5，5’经取代6a衍生物，并以各种的活体外和活体内分析法评估。化合物6f被发现会结合到Bcl-XL、Bcl-2和Mcl-1，IC50值分别为3.10μM、3.12μM和2.05μM。在一细胞分析法中，6f有效地抑制PC3、H460、H1299和BP3癌培养细胞株(其分别表达Bcl-XL、Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1)的生长，EC50值为个位数的微摩尔至纳摩尔的范围。化合物6f以剂量依赖性方式有效地诱导RS4；11人类淋巴瘤细胞株和原代人类慢性淋巴细胞白血病细胞的凋亡。在转基因小鼠(于其脾脏的B细胞中过度表达Bcl-2)中，化合物6f也显示活体内功效。最后，在PPC-1裸小鼠异种移植模型中，化合物6f显示作为单剂比6a更有利的活体外ADME特性和更好的活体内功效。鉴于抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白在肿瘤生成、化学抗性的关键作用以及6f对抗细胞凋亡Bcl-2族蛋白上有效的抑制活性，化合物6f代表在基于细胞凋亡之新颖癌症疗法的发展上有前景的化合物。
根据其他的实施例，本揭示提供一种用于治疗疾病或病症的方法。该方法可以包括对需要此治疗的个体投与有效量的任何本文所述的化合物或其医药学上可接受的盐类、水合物或溶剂合物。可被治疗的疾病或病症的非限制性实例为癌症和自体免疫疾病。
根据另一实施例，本揭示提供用于治疗癌症的方法。该方法包含对有需要的个体投与治疗上有效量的任何本文所述的化合物或其医药学上可接受的盐类、水合物或溶剂合物。任何本文所述的化合物可用来治疗任何类型的癌症。在一些方面，可被治疗的癌症类型包括肺癌、乳癌、前列腺癌以及各种淋巴瘤。
根据另一实施例，任何揭露的化合物可被用于制造供治疗哺乳动物(诸如人类)中病况或病征的药物。在本文所述限制内，该药物可针对癌症的治疗。
根据另一实施例，本揭示提供医药组合物。该医药组合物可包含任何揭露的化合物或其医药学上可接受的盐类、水合物或溶剂合物以及医药学上可接受的稀释剂或载体。该医药组合物可被用于治疗癌症。该医药组合物进一步可任选包括一或多种额外的治疗性抗癌剂，包括(但不限于)以下试剂(1)生物碱，包括微管抑制剂(例如长春新碱、长春花碱和长春地辛等等)、微管稳定剂(例如紫杉醇[Taxol]和多西紫杉醇(Docetaxel)、泰索帝(Taxotere)等等)及染色质功能抑制剂，包括拓扑异构酶抑制剂，像是表鬼臼毒素(例如足叶乙甙(Etoposide[VP-16])和替尼泊甙(Teniposide[VM-26])等等)和攻击拓扑异构酶I的试剂(例如喜树碱(Camptothecin)和依立替康(Isirinotecan)[CPT-11]等等)；(2)共价DNA-结合剂[烷基化剂]，包括氮芥(例如双氯乙基甲胺(Mechlorethamine)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、环磷酰胺(Cyclophosphamide)、异环磷酰胺(Ifosphamide)和白消安(Busulfan[Myleran])等等)、亚硝基脲(例如卡莫司汀(Carmustine)、洛莫司汀(Lomustine)和司莫司汀(Semustine)等等)及其他烷基化剂(例如达卡巴嗪(Dacarbazine)、羟基甲基三聚氰胺(Hydroxymethylmelamine)、塞替派(Thiotepa)及Mitocycin等等)；(3)非共价DNA-结合剂[抗肿瘤抗生素]，包括核酸抑制剂(例如更生霉素(Dactinomycin)[放线菌素D(ActinomycinD)]等等)、蒽环类抗生素(例如柔红霉素(Daunorubicin)[Daunomycin和Cerubidine]、阿霉素(Doxorubicin[Adriamycin])和去甲氧柔红霉素(Idarubicin[Idamycin])等等)、蒽二醌(anthracenediones)(例如蒽环类抗生素相似物，像是[米托蒽醌(Mitoxantrone)]等等)、平阳霉素(bleomycins)(Blenoxane)等等和普卡霉素(plicamycin(Mithramycin))等等；(4)抗代谢物，包括抗叶酸剂(例如氨甲喋呤(Methotrexate)、脱叶亚磷(Folex)和甲氨喋呤(Mexate)等等)、嘌呤抗代谢物(例如6-巯基嘌呤(6-Mercaptopurine[6-MP，Purinethol])、6-硫代鸟嘌呤(6-Thioguanine[6-TG])、硫唑嘌呤(Azathioprine)、阿昔洛韦(Acyclovir)、更昔洛韦(Ganciclovir)、氯脱氧腺苷(Chlorodeoxyadenosine)、2-氯脱氧腺苷[CdA]、2′-脱氧助间型霉素(2′-Deoxycoformycin [Pentostatin])等等)、嘧啶拮抗剂(例如氟嘧啶(fluoropyrimidines)[例如5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil(Adrucil))、5-氟脱氧尿苷(5-fluorodeoxyuridine(FdUrd)(Floxuridine)])等等)及胞嘧啶阿拉伯醣(cytosine arabinosides)(例如阿糖胞苷(Cytosar[ara-C])和氟达拉滨(Fludarabine)等等)；(5)酶，包括L-天冬酰胺酶和羟基脲等等；(6)激素，包括糖皮质素，像是抗雌激素(例如他莫昔芬(Tamoxifen)等等)、非类固醇的抗雄激素(例如氟他胺(Flutamide)等等)和芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑(anastrozole[Arimidex])等等)；(7)铂化合物(例如顺铂(Cisplatin)和卡铂(Carboplatin)等等)；(8)结合抗癌药物、毒素及/或放射性核素等等的单克隆抗体；(9)生物反应调节剂(例如干扰素[例如IFN-α等等]和白细胞介素[例如IL-2等等]等等)；(10)过继免疫治疗(adoptiveimmunotherapy)；(11)造血生长因子；(12)诱导肿瘤细胞分化的试剂(例如全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid)等等)；(13)基因疗法试剂；(14)反转录疗法试剂；(15)肿瘤疫苗；(16)直接对抗肿瘤转移灶的试剂(例如巴马司他(Batimistat)等等)；(17)血管生成抑制剂和(18)选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)。
可被使用的(但非限制性实例)之适合的活性SSRI包括舍曲林(sertraline)(例如Pfizer，Inc.以商标
Figure BDA0000150832470000461
销售的盐酸舍曲林)或舍曲林代谢物、氟伏沙明(fluvoxamine)(例如Solvay Pharmaceuticals，Inc.以商标销售的马来酸氟伏沙明)、帕罗西汀(paroxetine)(例如SmithKline Beecham Pharmaceuticals，Inc.以商标
Figure BDA0000150832470000463
销售的盐酸帕罗西汀)、氟西汀(fluoxetine)(例如由Eli Lilly and Company以商标
Figure BDA0000150832470000464
或
Figure BDA0000150832470000465
销售的盐酸氟西汀)及西酞普兰(citalopram)(例如由Forest Laboratories，Parke-Davis，Inc.以商标
Figure BDA0000150832470000466
销售的氢溴酸西酞普兰)及其代谢物。其他实例包括文拉法辛(venlafaxine)(例如Wyeth-AyerstLaboratories以商标
Figure BDA0000150832470000467
销售的盐酸文拉法辛)、米氮平(mirtazapine)(Organon，Inc.以商标销售者)、丁螺环酮(buspirone)(例如Bristol-Myers Squibb以商标
Figure BDA0000150832470000469
销售的盐酸丁螺环酮)、曲唑酮(trazodone)(例如Bristol-Myers Squibb and Apothecon以商标
Figure BDA0000150832470000471
销售的盐酸曲唑酮)、萘法唑酮(nefazadone)(例如Bristol-Myers Squibb以商标
Figure BDA0000150832470000472
销售的盐酸萘法唑酮)、氯米帕明(clomipramine)(例如Novopharm，LTD、Ciba和Taro Pharmaceuticals以商标销售的盐酸氯米帕明)、丙米嗪(imipramine)(例如Glaxo-Welcome，Inc.以商标
Figure BDA0000150832470000474
销售的盐酸丙米嗪)、去甲替林(nortriptyline)(例如Lundbeck以商标销售的盐酸去甲替林)、米安色林(mianserine)(例如Organon，Inc.以商标
Figure BDA0000150832470000476
销售者)、度洛西汀(duloxetine)(例如EliLilly and Company销售的盐酸度洛西汀)、达泊西汀(dapoxetine)(例如ALZACorporation所销售的盐酸达泊西汀)、利托西汀(litoxetine)(例如位于法国巴涅的Synthelabo Recherche(L.E.R.S.)所销售的盐酸利托西汀)、非莫西汀(femoxetine)、洛非帕明(lofepramine)(例如MERCK & Co.，Inc.以商标
Figure BDA0000150832470000477
销售者)、托莫西汀(tomoxetine)(例如Eli Lilly and Company销售者)。本揭示涵盖当前使用的SSRI或是以后发现或调配的SSRI。SSRI(包括于本文所列出者)可以每日约2mg和约2,500mg经口投与。
从广泛义上来说，任何癌症或肿瘤(例如血液和实体肿瘤)可根据本揭示的实施例来治疗。根据本揭示的实施例来治疗的示范性癌症包括(但不限于)头颈癌、脑癌(例如多形性成胶质细胞瘤)、乳癌、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、肺癌(非小细胞型)、卵巢癌和其他妇科癌(例如子宫和子宫颈的肿瘤)、胰脏癌、前列腺癌、肾癌、绒毛膜癌(肺癌)、皮肤癌(例如黑色素瘤、基底细胞瘤)、毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(乳房和膀胱)、急性髓细胞性白血病、脑膜白血病、慢性髓细胞性白血病及红白血病。更常见地，被治疗的癌症包括白血病和B细胞癌(例如淋巴瘤、多发性骨髓瘤和MDS)。
可使用任何本文所述的化合物和本揭示的方法治疗的自体免疫疾病的非限制性实例包括类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、幼年特发性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、重症肌无力、幼年型糖尿病、肾小球肾炎、自体免疫甲状腺炎、贝切特氏病(Behcet’s disease)、格雷夫斯病、溃疡性结肠炎、大疱性类天疱疮、类肉瘤病、牛皮癣、鱼鳞病，格雷夫斯眼病、牛皮癣、牛皮癣炎性肠疾病和气喘。
如本文中更详尽地讨论，一些实施例也提供用于治疗及/或预防各种炎性病症、疾病和病况的方法。这种炎性病症、疾病和病况包括(不限于)系统性自体免疫疾病(像是例如红斑狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化症及牛皮癣)；和器官特异性自体免疫疾病(像是例如溃疡性结肠炎、重症肌无力、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、克罗恩病、狼疮肾炎、自体免疫溶血性贫血、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、胰岛素依赖型糖尿病、肾小球肾炎和风湿热。可根据本揭示治疗的其他的炎性疾病包括(不限于)其他炎性关节炎病况(诸如牛皮癣关节炎、骨关节炎和痛风性关节炎)以及其他由损伤、过敏、感染、微生物、创伤或是物理或化学试剂造成的炎性病况(诸如结膜炎、皮炎、支气管炎、鼻炎等等)。气喘、干燥综合征、脑膜炎、肾上腺脑白质营养不良、中枢神经系统血管炎、线粒体肌病、肌萎缩侧索硬化、阿兹海默病或肿瘤在炎性方面的治疗也被涵盖作为本揭示的部份。线粒体肌病的实例包括MELAS综合征、MERF综合征、利伯氏病、韦尼克氏脑病、雷特综合征、同型胱氨酸尿症、血脯氨酸过多、非酮性高甘氨酸血症、羟丁氨基酸尿症、亚硫酸氧化酶缺乏症和联合系统疾病(维生素B12缺乏症)。与这些预防及/或治疗有关连，也提供揭露之化合物的制品、组合物、使用方法和药物治疗。
在一些情况中，可了解的是以盐的形式来投与任何本文所述的化合物。医药学上可接受的盐类的实例包括与酸形成的有机酸加成盐类，其形成生理上可接受的阴离子，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、酮戊二酸盐和甘油磷酸盐。合适的无机盐类也可被形成，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。医药学上可接受的盐类可使用本领域所熟知的标准程序来取得，例如使任何本文所述的化合物与一合适的碱反应可提供生理上可接受的阴离子。羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)或是碱土金属(例如钙)盐类也可以被制得。
包含任何本文所述之化合物的任何片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂或相似物也可含有粘合剂(诸如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶)；赋形剂(诸如磷酸氢钙)；崩解剂(诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸等等)；润滑剂(诸如硬脂酸镁)；和甜味剂(诸如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦(aspartame))或是加入矫味剂(诸如薄荷、冬青油或樱桃口味)。当有任何本文所述的化合物单位剂型时，除本文所述类型的原料之外，它可含有液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其他原料可作为包衣形式或是其他可修饰固体单位剂型的物理形式。比如片剂、丸剂或胶囊剂可被包上明胶、蜡、紫胶或是糖等等。糖浆剂或酏剂可含有活性化合物、蔗糖或果糖作为甜味剂、羟苯甲酯和羟苯丙酯作为防腐剂、染剂和矫味剂(诸如樱桃或橘子口味)。任何用于制备任何单位剂型的原料应为医药学上可接受的且所用量为实质上无毒的。此外，任何本文所述的化合物可被包含在缓释制备物和装置中。
任何本文所述的化合物也可经静脉内或腹腔内以输注或注射方式投与。任何本文所述的化合物的溶液可于水中制备，可任选地与无毒表面活性剂混合。分散液也可于甘油、液态聚乙二醇、三乙酸甘油酯及其混合物中和于油中制备。在正常的贮存和使用条件下，这些制备物可含有防腐剂来预防微生物的生长。
经由将于适当溶剂中足够治疗量的任何本文所述的化合物并入各种其他本文列举的组分，如有需要随后经无菌过滤，可制备无菌可注射溶液。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况中，制备方法为真空干燥和冷冻干燥技术，其产生在先前经过无菌过滤的溶液中之活性组分加上任何额外所要组分的粉末。
关于局部投药，任何本文所述的化合物可以纯形式(即当其为液体时)来施用。然而，一般会希望以组合物或调配物并与皮肤病学上可接受的载体(其可为固体或液体)组合的方式将其投与至皮肤。有用的固体载体包括细微分割的固体(诸如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等等)。有用的液体载体包括水、醇或乙二醇或水-醇/乙二醇混合物，有效量的化合物可被溶解或分散于其中，并可任选地使用无毒表面活性剂来辅助。可加入佐剂和额外的抗菌剂，以使得拟定的使用特性更加完善。
所产生的液体组合物可从吸收垫来施用、用来浸透绷带和其他的敷料或是使用泵型或气雾式喷雾器喷至受疾病侵袭的区域。如本领域普通技术人员所知，增稠剂(诸如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐类和酯类、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物质)也可以与液体载体一起使用，以形成易涂开的糊剂、凝胶、软膏、肥皂等等，而直接施用到使用者的皮肤。
本揭示也提供医药组合物，其包含揭露的化合物或其医药学上可接受的盐组合医药学上可接受的稀释剂或载体。再者，本揭示提供本揭露的化合物组合其他已知消炎化合物的用途。
在各种实施例中，本揭示提供用于治疗炎性疾病及/或与发炎有关的病况的方法，包含投与需要此治疗的哺乳动物有效量的揭露化合物与额外的消炎化合物或其医药学上可接受的盐的组合。在其他实施例中系提供用于预防炎性疾病及/或与发炎有关的病况的方法或是用于减少患者会发展为此发炎之可能性的方法。该等方法可包括投与需要此治疗的哺乳动物有效量的揭露化合物或其医药学上可接受的盐。
同时提供用于治疗被怀疑罹患或是易于罹患涉及发炎的疾病或病况的哺乳动物个体(特别是人类)方法，包含对需要的哺乳动物个体投与治疗上有效量的化合物，其包含至少一种揭露的式I化合物，可为单一对映异构体、(+)对映异构体和(-)对映异构体的混合物、分别约90重量％或以上的(+)或(-)对映异构体和约10重量％或以下的(-)或(+)对映异构体的混合物、或是其医药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，以便治疗或预防发炎。
在一些实施例中，用于治疗发炎或预防发炎的方法包括投与有用于治疗或预防本文揭露的疾病或病症之有效量的另一治疗剂。在一些实施例中，其他治疗剂可发挥疗效的时间与阿朴棉子酚或衍生物可发挥疗效的时间重叠。
在一些实施例中，其他治疗剂为消炎剂。根据一些本揭露的实施例，适用之消炎剂的实例包括(但不限于)类固醇(例如皮质醇、皮质酮、氟氢可的松(fludrocortisone)、泼尼松(prednisone)、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、6-甲基泼尼松(6-methylprednisone)、曲安西龙(triamcinolone)、倍他米松(betamethasone)或地塞米松(dexamethasone))、非类固醇消炎药(NSAIDS(例如阿司匹林、对乙酰氨基酚、托美丁(tolmetin)、水杨酸盐、布洛芬(ibuprofen)、甲灭酸(mefenamic acid)、吡罗昔康(piroxicam)、萘丁美酮(nabumetone)、罗非昔布(rofecoxib)、塞来昔布(celecoxib)、依托度酸(etodolac)或尼美舒利(nimesulide))。例如关于红斑狼疮的治疗，本揭露的化合物也可以与抗疟药(包括例如羟基氯醌)联合或是与细胞毒性化学疗法联合(包括例如硫唑嘌呤和环磷酰胺)投与。
在一些实施例中，其他治疗剂为抗生素(例如万古霉素(vancomycin)、青霉素(penicillin)、阿莫西林(amoxicillin)、氨苄西林(ampicillin)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢克肟(cefixime)、利福平(rifampin)、甲硝唑(metronidazole)、多西环素(doxycycline)或链霉素(streptomycin))。在另一实施例中，其他治疗剂为PDE4抑制剂(例如罗氟司特(roflumilast)或咯利普兰(rolipram))。在另一实施例中，其他治疗剂为抗组织胺(例如赛克力嗪(cyclizine)、羟嗪(hydroxyzine)、异丙嗪(promethazine)或苯海拉明(diphenhydramine))。在另一实施例中，其他治疗剂为抗疟药(例如青蒿素(artemisinin)、蒿甲醚(artemether)、青蒿琥酯(artsunate)、磷酸氯喹(chloroquine phosphate)、盐酸甲氟喹(mefloquinehydrochloride)、盐酸强力霉素(doxycycline hyclate)、盐酸氯胍(proguanilhydrochloride)、阿托伐醌(atovaquone)或卤泛群(halofantrine))。
适用于本揭示之联合治疗的另一类型的治疗剂为抗体，诸如人源化单克隆抗体.非限制性实例包括抗CD99抗体。参阅例如U.S.专利第7,223,395号；White等人，Annu.Rev.Med.，52：125(2001)。利妥昔单抗(Rituximab(
Figure BDA0000150832470000511
Genentech，South San Francisco，CA))为有用于与治疗类风湿性关节炎的揭示联合的另一种治疗剂。另一种有用于本揭示的治疗剂也可为细胞毒性剂，如本文所用，其为任何直接或间接促进细胞死亡的分子。特定的抗癌剂包括夫拉平度(Flavopiridol)、阿霉素、VP16(足叶乙甙)、紫杉醇(paclitaxel)、顺铂等等。
在化合物相当碱性或酸性而形成稳定的无毒酸或碱盐类的情况下，化合物以盐类的形式投药可为适当的。医药学上可接受的盐类的实例为与酸形成的有机酸加成盐类，其形成生理上可接受的阴离子，例如甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、a-酮戊二酸盐和甘油磷酸盐。合适的无机盐类也可被形成，包括盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐。
医药学上可接受的盐类可使用本领域所熟知的标准程序来取得，例如使相当碱性的化合物(诸如胺)与一合适的酸反应，以提供生理上可接受的阴离子。也可以制得羧酸的碱金属(例如钠、钾或锂)或是碱土金属(例如钙)盐类。
有用于实行本揭示的化合物可被调配为医药组合物，并以各种适应所选投药途径的形式被投与至哺乳动物寄主(诸如人类患者)，即经口的或肠胃外的、经静脉内的、肌内的、局部或皮下途径。
化合物可与医药学上可接受的载剂(诸如惰性稀释剂或能吸收的可食用载体)组合进行全身性投与(例如经口)。投药途径可为经口或静脉内的。其他投药途径包括例如肠胃外的、肌内的、局部和皮下。化合物可被装入硬或软壳明胶的胶囊剂中、可被压制为片剂或是可直接并入患者饮食的食物中。关于经口的治疗投药，活性化合物可与一或多种赋形剂联合，并以可摄取的片剂、口含片剂、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、圆片等等的形式使用。这样的组合物和制备物应含有至少0.1％的活性化合物。组合物和制备物的百分比当然会有所不同，而宜在拟定单位剂型的约2至约60重量％之间。在这样治疗上有用的组合物中活性化合物的量应能获得有效剂量。
式I化合物可以各种方式投与。例如片剂、锭剂、丸剂、胶囊剂等等也可以含有下列者：粘合剂(诸如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶)；赋形剂(诸如磷酸氢钙)；崩解剂(诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸等等)；润滑剂(诸如硬脂酸镁)；和甜味剂(诸如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦(aspartame))或是加入矫味剂(诸如薄荷、冬青油或樱桃口味)。当单位剂型为胶囊剂时，除本文所述类型的原料之外，它可以含有液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其他的原料可作为包衣形式或是其他可修饰固体单位剂型的物理形式。比如片剂、丸剂或胶囊剂可被包上明胶、蜡、紫胶或是糖等等。糖浆剂或酏剂可含有活性化合物、蔗糖或果糖作为甜味剂、羟苯甲酯和羟苯丙酯作为防腐剂、染剂和矫味剂(诸如樱桃或橘子口味)。任何用于制备任何单位剂型的原料应为医药学上可接受的且所用量为实质上无毒的。此外，活性化合物可被包含在缓释制备物和装置中。
化合物也可经静脉内或腹腔内以输注或注射方式投与。活性化合物或其盐类的溶液可于水中制备，可任选地与无毒表面活性剂混合。分散液也可于甘油、液态聚乙二醇、三乙酸甘油酯及其混合物中和于油中制备。在正常的贮存和使用条件下，这些制备物可含有防腐剂来预防微生物的生长。
适用于注射或输注的医药剂型可包括无菌的水性溶液或分散液或是无菌的粉末，其包含可适应于无菌可注射或可输注溶液或分散液的临时制备的活性组分，并可任选地被包入脂质体中。在所有情况中，最后的剂型在制造和贮存条件下应为无菌的、流体的并为稳定的。液体载体或载剂可以为溶剂或液体分散液介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液态聚乙二醇等等)、植物油、无毒甘油酯和其等合适的混合物。例如可经由形成脂质体、经由维持所需的粒子大小(在分散液的情况下)或是经由使用表面活性剂来维持适当的流动性。各种抗菌剂和抗真菌剂可以预防微生物的作用，例如对羟基苯甲酸酯(parabens)、三氯叔丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞(thimerosal)等等。在很多的情况中建议包括等渗透压剂，例如糖、缓冲液或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可经由于组合物使用延迟吸收的试剂来达成，例如单硬脂酸铝和明胶。
经由将于适当溶剂中足够治疗量的任何本文所述的化合物并入各种其他本文列举的组分，如有需要随后经无菌过滤，可制备无菌可注射溶液。在用于无菌可注射溶液制备的无菌粉末的情况中，制备方法为真空干燥和冷冻干燥技术，其产生在先前经过无菌过滤的溶液中之活性组分加上任何额外所要组分的粉末。
关于局部投药，化合物可以纯形式(即当其为液体时)来施用。然而，一般会希望以组合物或调配物并与皮肤病学上可接受的载体(其可为固体或液体)组合的方式将其投与至皮肤。
有用的固体载体包括细微分割的固体(诸如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等等)。有用的液体载体包括水、醇或乙二醇或水-醇/乙二醇混合物，有效量的化合物可被溶解或分散于其中，并可任选地使用无毒表面活性剂来辅助。可加入佐剂(诸如香水)和额外的抗菌剂，以使得拟定的使用特性更加完善。所产生的液体组合物可从吸收垫来施用、用来浸透绷带和其他的敷料或是使用泵型或气雾式喷雾器喷至受疾病侵袭的区域。
增稠剂(诸如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐类和酯类、脂肪醇、改性纤维素或改性矿物质)也可以与液体载体一起使用，以形成易涂开的糊剂、凝胶、软膏、肥皂等等，而直接施用到使用者的皮肤。
可用于传递结构A或B化合物至皮肤的皮肤病学组合物的实例为本领域所知；例如请参阅美国专利第4,608,392、4,992,478、4,559,157和4,820,508号。
化合物的有用剂量可经由比较它们在活体外的活性和于动物模型中活体内的活性来决定。从小鼠和其他动物之有效剂量外推至人类的方法为本领域所知；例如请参阅美国专利第4,938,949号。
一般而言，式I化合物于液体组合物(诸如洗剂)中的浓度可介于约0.1和约25.0质量％之间，诸如介于约0.5约10.0质量％之间。于半固态或固态组合物(诸如凝胶或粉末)中的浓度可介于约0.1和约5.0质量％之间，诸如介于约0.5和2.5质量％之间。
化合物或是其活性盐或衍生物在治疗上所需的含量不仅会因所选的特定盐而不同也会因给药途径、所治疗病况的性质及患者的年龄和病况而不同，且最终由负责的医师或临床医生斟酌决定。然而，一般而说，合适的剂量可在每天约0.2和约100.0μmol/kg之间的范围内。在一实施例中，剂量可为例如每天约0.2至约1.0μmol/kg之间。在一些实施例中，合适的剂量可在约0.5和约100mg/kg之间的范围内，例如每天约10和约75mg/kg(体重)之间，诸如每天每公斤(服药者的体重)在约3和约50mg之间，例如在约6和约90mg/kg/day之间的范围内，诸如在约15和约60mg/kg/day之间的范围内。
适用于本揭露之方法的医药组合物包括了含有可有效达成所欲目的之含量的活性组分的组合物。更特定地，治疗上有效量意指有效预防、减轻或改善疾病之病征或延长经治疗个体之生命的化合物含量。本领域技术人员特别是按照本文所提供的详细揭示将有专业能力确定治疗上有效量。
准确的调配物、给药途径和本文揭露之医药组合物的剂量可由个别医师基于患者的病况来选择。通常投与患者之组合物的剂量范围可在约0.5和约1000mg/kg(患者体重)之间，或是约1和约500mg/kg之间、或约10和约500mg/kg之间、或约50和约100mg/kg(患者体重)。剂量可以是单一剂量，或在一或多天的疗程内给予的一系列之两个或以上的剂量，视患者的需要而定。当尚未建立人类剂量时，合适的人类剂量可从ED50或ID50值来推定，或是其他源自于活体外或活体内研究的适当值，同时通过动物的毒性研究和功效研究的证明。
虽然准确的剂量是依各药物来决定，在大部分的情况中可以作出一些关于剂量的归纳。对于成年人类患者的每日剂量方案可以是例如每种组分的口服剂量介于约0.1mg和约500mg之间，诸如于约1mg和约250mg之间，例如于约5和约200mg之间，或是每种组分的静脉内的、皮下或、肌内的剂量介于约0.01mg和约100mg之间，诸如于约0.1mg和约60mg之间，例如本揭露医药组合物的每种组分或其医药学上可接受的盐(以游离碱计算)介于约1和约40mg之间，每天投与该组合物1至4次。或者，本揭露的组合物可经由连续静脉内的输注来投与，其中每种组分的剂量每天至多400mg。因此，每种组分的每日口服剂量总计通常在约1和约2000mg之间的范围内，而经肠胃外的投与的每日剂量总计通常在约0.1和约400mg之间的范围内。在一些实施例中，化合物会被投与一段连续治疗的期间，例如一周或数周，或是数月或是数年。
可个别调整剂量的含量和间隔，以提供足以维持调制作用或是最低有效浓度(MEC)的活性部分的血浆含量。每种化合物的MEC会不同但可从活体外数据来估算。为达到MEC的必要剂量取决于个体的特征和给药途径。然而，HPLC分析法或生物分析法可用来测定血浆浓度。
剂量间隔也可使用MEC值来决定。投与组合物所使用的方案应保持血浆含量在10-90％的时间内高于MEC，诸如在30-90％之间，例如在50-90％之间。在局部给药或选择性吸收的情况中，有效的局部药物浓度可能与血浆浓度无关。
经投与之组合物的含量当然会取决于被治疗的个体、个体重量、病痛的严重性、给药方式和开药医师的判断。
在各种实施例中，如果需要，组合物可在一包装或分配装置中，其可以含有一或数个包含活性组分的单位剂型。该包装可以包含例如金属或塑料箔，诸如泡罩包装。包装或分配装置可附有给药说明。包装或分配器也可在容器上附带由管理制造、使用或销售医药品的政府机构所规定的形式的注意事项，该注意事项系反映该政府机构批准用于人类或动物投药的药物形式。例如这样的注意事项可为经美国食品药品监督管理局批准之处方药的标签或是经批准的产品插页。也可制备包含调配于可相容的医药载体中之本揭露化合物的组合物，其置于适当的容器中，并标记上可治疗的指定情况。
在各种实施例中，可使用本领域已知的方法来标记本揭示化合物。一种可检测的基团为萤光基团。萤光基团通常会产生高信杂比，从而在检测程序中提供较高的分辨率和灵敏度。例如萤光基团吸收波长为大于约300nm的光，诸如大于约350nm，例如大于约400nm。萤光基团所发出的光波长为大于约310nm，诸如大于约360nm，例如大于约410nm。
萤光可检测部分可从多种结构类别中选出，包括下列非限制性的实例：1-和2-氨基-萘、p，p’-二氨基-二苯乙烯、芘、季菲啶盐、9-氨基吖啶、p，p’-二氨基二苯甲酮亚胺、蒽、氧杂羰花青(oxacarbocyanine)、部花青(marocyanine)、3-氨基马萘雌酮(3-aminoequilenin)、苝、双苯并噁唑、双-对噁唑基苯、1，2-苯并吩嗪、维生素A、双-3-氨基吡啶盐、嚏根苷配基(hellebrigenin)、四环素、sterophenol、苯并咪唑基苯胺、2-氧代-3-色烯、吲哚、占吨、7-羟基香豆素、吩噁嗪、水杨酸盐、毒毛旋花子苷元(strophanthidin)、卟啉、三芳基甲烷、黄素、占吨染料(例如萤光黄和罗丹明染料(rhodamine dyes))；菁蓝染料；4，4-二氟-4-硼-3a，4a-二氮杂-s-二环戊二烯并苯染料和萤光蛋白质(例如绿萤光蛋白质、藻胆蛋白质)。
在各种实施例中，化合物可被标记，其中该标记基团自发地发射信号或是当引入一合适的刺激物时会产生信号。标记包括原子，像是例如13C、15N、19F、1H等等。在各种实施例中，化合物可以单位剂型被方便地投与；例如含有在约5和约1,000mg之间，诸如在约10和约750mg之间，例如每单位剂型在约50和约500mg之间的活性组分。
在一些实施例中，活性组分可被投与以达到在约0.5和约75μM之间的活性化合物的血浆峰值浓度，诸如在约1和约50μM之间，例如在约2和约30μM之间。这可经例如静脉内注射0.05至5％的活性组分溶液(可任选地于生理盐水中)或是以含有约1-100mg的活性组分之丸药(bolus)经口投与来达成。所要的血液含量可经由例如持续输注以提供约0.01-5.0mg/kg/hr或是经由间歇输注含有约0.4-15mg/kg的活性组分来维持。
所要的剂量可合宜地以单一剂量形式或是在适当间隔投与的分次剂量形式(例如每天两、三、四或更多份的亚剂量)提供。亚剂量本身可被进一步划分，例如分成多次不连续的松散间隔给药；诸如由吹入器的多次吸入。
实例
本揭示的各个方面可藉由下列非限制性实例进一步说明。
缩写表：Bcl-2：B-细胞淋巴瘤/白血病-2；EDCI：1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；1D-1H NMR：单维1H核磁共振光谱法；SAR：结构与活性关系；FPA：萤光偏振分析法；ITC：等温滴定量热法；CLL：慢性淋巴细胞白血病；WT：野生型；MEFs：小鼠胚胎成纤维细胞；DKO：Bax/Bak双基因剔除；DKO/MEFs：Bax/Bak双基因剔除小鼠胚胎成纤维细胞；ACN：乙腈；LC-MS：液相色谱串联质谱；HPLC：高效液相色谱；TROSY：横向弛缓最佳化光谱(Transverse Relaxation-Optimized Spectroscopy)；ADME：吸收、分布、代谢和排泄；DMSO：二甲亚砜；PPC-1：人类前列腺癌细胞株；PAMPA：平行人造膜通透性分析法；FITC：萤光黄(isothiocyanate)；GST：谷胱甘肽-S-转移酶；PBS：磷酸盐缓冲生理盐水；SE：标准差；PI：碘化丙啶；NADPH：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；Rpm：每分钟转数；和AUC：曲线下面积。
实例1：通用合成程序
除非另外说明，否则所有试剂和无水溶剂(CH2Cl2、THF、二乙醚等)都是从市售来源获得并不经纯化即使用。所有反应都是在经烘箱干燥的玻璃器具中进行。所有涉及空气或水份敏感性试剂的反应都是在氮气氛围中进行。硅胶或是反向色谱法分别使用预填充的硅胶或C-18药筒(RediSep)进行。通过使用Atlantis T3 3 μM 4.6 mm x 150mm反相柱的来自Waters Co.的HPLC Breeze测定，所有最终化合物被纯化至纯度＞95％。
方法A：洗脱液为线性梯度，且流速为1mL/min，在15分钟内从50％A和50％B至5％A和95％B，随后为5分钟100％B(溶剂A：含0.1％TFA的H2O；溶剂B：含0.1％TFA的ACN)。在λ＝254nm下检测化合物。
方法B：洗脱液为线性梯度，且流速为1mL/min，在15分钟内从20％A和80％B至100％B，随后为5分钟100％B(溶剂A：含0.1％TFA的H2O；溶剂B：含0.1％TFA的ACN)。在λ＝254nm下检测化合物。
1H NMR光谱图记录在Varian 300或是Bruker 600 MHz仪器上。化学位移是相对于1H(Me4Si在0.00ppm)以ppm(δ)报导。偶合常数11始终以Hz报导。对于低分辨率，质谱数据是在岛津(Shimadzu)LCMS-2010EV上取得，而对于高分辨率，是在安捷伦(Agilent)ESI-TOF上取得。
实例2：式I化合物的合成
式I化合物之5，5′经酰胺取代的阿朴棉子酚酮衍生物的合成概述如下：
Figure BDA0000150832470000581
试剂和条件：(a)NaOH，H2O，回流；(b)H2SO4；(c)DMS，K2CO3；(d)TiCl4，Cl2CHOCH3，rt；(e)HCl，H2O(f)NaClO2，H2O2，KH2PO4，CH3CN，rt；(g)HCl，H2O；(h)EDCl，NH2R，HOBT，rt；(i)BBr3，CH2Cl2(j)HCl，H2O；(k)FeCl3，H2SO4。
棉子酚1在回流状态下经NaOH水溶液处理，且该溶液经H2SO4酸化，以提供化合物2。当以DMS和K2CO3处理时，化合物2发生甲基化，以提供化合物4。化合物4以TiCl4和二氯甲基甲醚处理造成失去异丙基并同时发生双甲酰基化，其当经HCl水溶液酸化时提供醛化合物5。化合物5在NaClO2、H2O2、KH2PO4乙腈溶液中氧化，并经HCl水溶液酸化，以提供对应的酸化合物6。于室温下以EDCl、NH2R、HOBT处理化合物6提供酰胺化合物7。化合物7的脱甲基化发生在当其以BBr3二氯甲烷溶液处理，并且该溶液经HCl水溶液酸化提供酰胺化合物8。最后，化合物8于FeCl3/H2SO4中的氧化提供所要的阿朴棉子酚酮衍生物9。
5，5’经烷基取代阿朴棉子酚衍生物的合成概述如下。
试剂和条件：(a)RMgBr或RLi，rt；(b)NH4Cl，H2O；(c)氯铬酸吡啶盐，CH2Cl2，rt；(d)Et3SiH，TFA或Pd/C，H2；(e)BBr3；(f)HCl，H2O。
化合物5经不同的格氏或锂试剂处理，以提供仲醇9，其经由氯铬酸吡啶盐氧化，以得到苯酮10。三乙基硅烷将苯酮10还原为烷基化合物11，接著使用三溴化硼进行随后的脱甲基化，以提供化合物12。
化合物13和14仅在5，5’位置具有氢原子或羧酸，其等被合成来探究是否5，5’位置的取代对于提高生物活性是重要的。化合物13经由以浓硫酸处理化合物4以失去异丙基来合成。接著该产物和化合物6个别以三溴化硼处理，以分别得到化合物13和14。
Figure BDA0000150832470000592
试剂和条件：(a)H2SO4，rt；(b)H2O；(c)BBr3，CH2Cl2；(d)HCl，H2O。
式I的经5，5′酮取代阿朴棉子酚酮衍生物的合成概述如下：
Figure BDA0000150832470000601
试剂和条件：(a)BBr3；(b)HCl，H2O；(c)FeCl3，H2SO4。
酮化合物11的脱甲基化发生在当以BBr3二氯甲烷溶液处理时，且该溶液以HCl水溶液酸化，以提供化合物15。化合物15在FeCl3/H2SO4中的氧化提供所要的阿朴棉子酚酮衍生物16。
实例3：式I化合物的详细合成
1，1′，6，6′，7，7′-六羟基-5，5′-二异丙基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-8，8′-二甲醛(1)。化合物1(棉子酚)可从Yixin Pharmaceutical Co买到。HPLC纯度99.0％，tR＝12.50分钟(方法A)。
5，5′-二异丙基-1，1′，6，6′，7，7′-六甲氧基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘(9)
在90℃、氮气下于暗处加热溶于50mL 40％NaOH中的化合物1(5g，8.65mmol)3.5小时。使反应混合物冷却并缓慢倒至冰(300mL)和浓H2SO4(35mL)的混合物上，以形成白色沈淀。沈淀经过滤，用水洗涤并干燥，以提供3.8g呈白色固体状的化合物2a(95％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.61(s，2H)，7.50(s，2H)，5.93(s，2H)，5.27(s，2H)，5.13(s，2H)，3.88(m，2H)，2.12(s，6H)，1.55(d，J＝5.5Hz，12H)。HPLC纯度99.2％，tR＝13.12min。HRMS对于C28H30O6计算得到463.2115(M+H)，实验得到463.2108。将化合物2a(3.8g，8.21mmol)溶于丙酮(200mL)中。添加K2CO3(23.9g，206.7mmol)和硫酸二甲酯(16.3mL，206.7mmol)，并使反应混合物在氮气下回流24小时。经由过滤收集固体，用丙酮和水洗涤并干燥，得到4.2g呈白色固体状的化合物9(93％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)7.83(s，2H)，7.43(s，2H)，3.98(m，8H)，3.94(s，6H)，3.57(s，6H)，2.20(s，6H)，1.56(s，12H)。
5，5′-二异丙基-6，6′，7，7′-四甲氧基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(10)
将高碘酸(10g，43.8mmol)添加至溶于20mL二噁烷的化合物9(0.62g，112mmol)溶液中，在95℃搅拌反应混合物15分钟。加入碎冰使反应骤冷。以乙酸乙酯萃取溶液两次，以水、盐水洗涤有机
Figure BDA0000150832470000611
，并经MgSO4干燥。在真空下浓缩溶剂，并经闪式硅胶柱色谱法纯化残馀物，得到142mg呈黄色固体状的化合物10(23％)。1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.56(s，2H)，4.31(m，2H)，3.97(s，6H)，3.94(s，6H)，2.03(s，6H)，1.40(d，J＝1.8Hz，6H)，1.39(d，J＝1.8Hz，6H)。
6，6′，7，7′-四羟基-5，5′-二异丙基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6a)
在-78℃下，将0.54mL BBr3(1.43g，5.71mmol)逐滴添加至化合物10(260mg，0.48mmol)于10mL无水CH2Cl2中的溶液中。在-78℃继续搅拌1小时，在0℃下搅拌1小时，并在环境温度下搅拌1小时。添加含有5mL 6MHCl的50克的冰至混合物并在室温下搅拌1小时。以二氯甲烷(3×50mL)萃取水层。以水、盐水洗涤合并的有机层，并经MgSO4干燥。在真空下浓缩溶剂，并使用C-18柱色谱法(H2O/乙腈)纯化残馀物，随后自乙酸乙酯/己烷中再结晶，以得到163mg呈褐黄色固体状的化合物6a(70％)。1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.31(s，2H)，4.32(m，2H)，1.88(s，6H)，1.42(s，6H)，1.40(s，6H).13CNMR(600MHz，(CD3)2SO))δ187.10，182.51，150.92，149.54，147.60，137.78，137.10，126.24，125.00，111.03，27.07，20.50，20.35，15.00。HPLC纯度99.5％，tR＝11.60min(方法A)。HRMS对于C28H26O8计算得到491.1700(M+H)，实验得到491.1696。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-1，1′，4，4′-四氧代-N5，N5′-双(2-苯基丙基)-1，1′，4，4′-四氢-2，2′-联萘基-5，5′-二甲酰胺(8a)
在添加18mL 10％氯化铁(6.64mmol)水溶液的期间，在油浴(60-67℃)中加热于12mL丙酮和23mL乙酸中的化合物4a(290mg，0.414mmol)溶液，并再继续数分种久。将溶液冷却，并添加30mL水，随后添加20mL 20％硫酸水溶液。以二乙醚萃取溶液两次，以水、盐水洗涤有机层，并经MgSO4干燥。在真空下浓缩溶剂，并经C-18柱色谱法(H2O/乙腈)纯化残馀物，以得到60mg呈黄色固体状的化合物8a(45％)。1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.42(s，2H)，7.34(d，J＝7.2Hz，4H)，7.30(t，J1＝J2＝7.2Hz，4H)，7.18(t，J1＝J2＝7.2Hz，4H)，3.54(d，J＝7.2Hz，4H)，3.22(m，2H)，1.91(s，6H)，1.39(s，6H)，1.38(d，J＝6.6Hz，6H).13C NMR(600MHz，CD3OD)δ184.50，183.68，170.44，151.92，150.19，146.99，146.55，140.68，129.63，128.54，127.53，127.23，126.13，124.30，113.14，48.34，40.74，19.97，14.50。HPLC纯度98.3％，tR＝5.82min(方法A)。HRMS对C42H36N2O10计算得到729.2443(M+H)，实验得到729.2441。
依照上述的程序和所用的适合原料及试剂，合成化合物7和8b-8c。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-N5，N5′-双(3-甲基苯甲基)-1，1′，4，4′-四氧代-1，1′，4，4′-四氢-2，2′-联萘基-5，5′-二甲酰胺(8b)。产率50％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.44(s，2H)，7.39(s，2H)，7.29(d，J＝7.2Hz，2H)，7.20(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.8Hz，4H)，7.06(d，J＝7.8Hz，2H)，4.61(dd，J1＝15Hz，J2＝4.8Hz，4H)，2.35(s，6H)，1.91(s，6H).13C NMR(600MHz，CD3OD)δ184.57，183.70，170.33，152.01，150.28，147.04，139.71，139.24，129.68，129.41，128.87，127.33，126.04，126.00，124.32，113.21，44.65，21.66，14.49。HPLC纯度99.0％，tR＝5.53min(方法A)。HRMS对C40H32N2O10计算得到701.2130(M+H)，实验得到701.2128.
N5，N5′-双(4-乙基苯乙基)-6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-1，1′，4，4′-四氧代-1，1′，4，4′-四氢-2，2′-联萘基-5，5′-二甲酰胺(8c)。产率52％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.43(s，2H)，7.23(d，J＝6.6Hz，4H)，7.12(d，J＝6.6Hz，4H)，3.60(m，4H)，2.96(t，J1＝J2＝6.6Hz，4H)，2.50(q，J1＝J2＝6.6Hz，4H)，1.93(s，6H)，1.20(t，J1＝J2＝6.6Hz，6H).13C NMR(600MHz，CD3OD)δ184.55，183.68，170.37，151.99，150.18，147.01，143.51，140.73，138.24，130.09，129.09，127.38，126.09，124.31，113.18，43.03，36.03，29.68，16.49，14.51。HPLC纯度97.6％，tR＝6.99min(方法A)。HRMS对C44H40N2O10计算得到757.2756(M+H)，实验得到757.2745。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-5，5′-双(2-苯乙酰基)-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(7)。产率49％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.32(s，2H)，7.28(d，J＝6.0Hz，4H)，7.22(t，J1＝J2＝6.0Hz，4H)，7.15(t，J1＝J2＝6.0Hz，2H)，4.13(m，4H)，1.93(s，6H).13C NMR(600MHz，CD3OD)δ204.02，183.63，181.97，150.74，147.30，145.10，139.75，134.05，130.14，129.78，127.70，126.40，125.69，122.90，111.65，49.31，12.84。HPLC纯度99.0％，tR＝9.44min(方法A)。HRMS对C38H26O10计算得到643.1599(M+H)，实验得到643.1601。
1，1′，6，6′，7，7′-六甲氧基-3，3′-二甲基-5，5′-双(4-甲基苯乙基)-2，2′-联萘基(15f)。于室温下，添加11(2.0g，3.86mmol)于无水四氢呋喃(30mL)中的溶液至新鲜制备的4-甲基苯甲基氯化镁(30.85mmol)溶液中，在30℃下加热反应混合物18小时。将反应混合物倒至饱和氯化铵溶液中，并以二乙醚萃取水层两次，以盐水洗涤并经MgSO4干燥。过滤，随后蒸发醚，得到黄色油狀物13。3.1mL三乙基硅烷逐滴加至黄色油狀物13(1.4g，1.929mmol)于25mLTFA中的溶液中。在75℃下加热溶液1小时，随后于室温下搅拌18小时。在真空下浓缩溶液，接著经硅胶柱色谱法得到660mg呈无色油状的化合物15f(50％从11)。1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.64(s，2H)，7.44(s，2H)，7.26(d，J＝7.8Hz，4H)，7.15(d，J＝7.8Hz，4H)，3.99(s，6H)，3.94(s，6H)，3.60(s，6H)，3.37(t，J1＝J2＝8.40Hz，4H)，2.98(t，J1＝J2＝8.4Hz，4H)，2.35(s，6H)，2.20(s，6H)。
3，3′-二甲基-5，5′-双(4-甲基苯乙基)-2，2′-联萘基-1，1′，6，6′，7，7′-六醇(2f)。在-78℃下，逐滴添加2.1mL BBr3溶液(5.56g，22.2mmol)至15f(1.23g，1.76mmol)于60mL无水CH2Cl2中的溶液中。分别在-78℃继续搅拌1小时，在0℃搅拌1小时，并在环境温度下搅拌1小时。添加含有30mL 6M HCl的300克的冰至混合物并在室温下搅拌0.5小时。以二氯甲烷(3x 100mL)萃取水层。以水、盐水洗涤合并的有机层，并经MgSO4干燥。在真空下浓缩溶剂，并经C-18柱色谱法(H2O/乙腈)纯化残馀物，以得到1.1g呈白色固体状的化合物2f(90％)。产率45％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.45(s，2H)，7.34(s，2H)，7.20(d，J＝7.2Hz，4H)，7.08(d，J＝7.2Hz，4H)，3.27(m，4H)，2.87(m，4H)，2.31(s，6H)，2.03(s，6H)。HPLC纯度96.6％，tR＝17.00min(方法A)。HRMS对C40H38O6计算得到615.2741(M+H)，实验得到615.2720。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-5，5′-双(4-甲基苯乙基)-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6f)。在添加68mL 10％氯化铁水溶液的期间，在油浴(60-67℃)中加热于50mL丙酮和80mL乙酸中的化合物2f(1.0g，1.55mmol)溶液，并再继续数分种久。将溶液冷却，添加50mL水，随后添加30mL 20％硫酸水溶液。以二乙醚萃取溶液两次，以水、盐水洗涤有机层，并经MgSO4干燥。在真空下浓缩溶剂，并经C-18柱色谱法(H2O/乙腈)纯化残馀物，得到350mg呈黄色固体状的化合物6f(35％)。1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.40(s，2H)，7.22(d，J＝7.8Hz，4H)，7.08(d，J＝7.2Hz，4H)，3.45(m，4H)，2.78(t，J1＝8.4Hz，J2＝7.8Hz，4H)，2.30(s，6H)，1.93(s，6H).13C NMR(600MHz，CD3OD)δ185.65，182.87，149.35，148.72，146.61，139.47，138.20，134.62，131.79，128.32，128.14，126.47，123.95，110.50，34.44，28.68，19.69，13.36。HPLC纯度99.0％，tR＝17.53min(方法A)。HRMS对C40H34O8计算得到643.2326(M+H)，实验得到643.2326。
依照上述的程序和所用的适合原料及试剂，合成化合物6b-I、6l和6m。
6，6′，7，7′-四羟基-5，5′-二异丁基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6b)。产率50％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.39(s，2H)，3.18(m，4H)，1.94(m，2H)，1.93(s，6H)，0.96(d，J＝6.0Hz，6H)。13C NMR(600MHz，(CD3)2SO))δ185.67，182.75，149.97，149.53，146.67，138.38，132.10，126.65，123.60，111.39，34.43，29.18，23.13，23.11，14.96。HPLC纯度96.7％，tR＝13.68min(方法A)。HRMS对C30H30O8计算得到519.2013(M+H)，实验得到519.2012。
5，5′-双(环戊甲基)-6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6c)。产率40％；1H NMR(600MHz，(CD3)2SO)δ10.99(s，br，2H)，9.54(s，br，2H)，7.34(s，2H)，3.23(dd，J1＝7.2Hz，J2＝4.8Hz，2H)，3.15(dd，J1＝7.2Hz，J2＝4.8Hz，2H)，2.10(m，2H)，1.87(s，6H)，1.61(m，8H)，1.45(m，4H)，1.26(m，4H).13C NMR(600MHz，(CD3)2SO))δ185.25，182.29，149.36，149.00，146.23，137.95，132.26，126.19，123.05，110.84，40.26，32.00，30.65，24.50，14.52。HPLC纯度99.0％，tR＝16.80min(方法A)。HRMS对C34H34O8计算得到571.2326(M+H)，实验得到571.2323。
5，5′-双(2-环己基乙基)-6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6d)。产率50％；1H NMR(600MHz，(CD3)2SO)δ10.88(s，br，2H)，9.51(s，br，2H)，7.30(s，2H)，3.08(m，4H)，1.85(s，6H)，1.80(d，J＝12.0Hz，4H)，1.68(d，J＝12.6Hz，4H)，1.61(d，J＝11.4Hz，2H)，1.35(m，6H)，1.23(q，J1＝24.6Hz，J2＝12.6Hz，4H)，1.16(m，2H)，0.96(m，4H)。13C NMR(600MHz，(CD3)2SO))δ185.20，182.22，148.95，148.85，146.16，138.00，133.20，125.96，123.03，110.72，38.02，36.26，32.87，26.32，25.91，23.93，14.44。HPLC纯度98.5％，tR＝14.76min(方法B)。HRMS对C38H42O8计算得到627.2952(M+H)，实验得到627.2952。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-5，5′-二苯乙基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6e)。产率38％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.41(s，2H)，7.36(d，J＝7.8Hz，4H)，7.28(t，J1＝7.8Hz，J2＝7.2Hz，4H)，7.16(t，J1＝7.8Hz，J2＝7.2Hz，2H)，3.47(m，4H)，2.84(t，J1＝8.4Hz，J2＝7.8Hz，4H)，1.95(s，6H)。HPLC纯度99.0％，tR＝15.48min(方法A)。HRMS对C38H30O8计算得到615.2013(M+H)，实验得到615.2015。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-5，5′-双(3-苯基丙基)-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6g)。产率42％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.39(s，2H)，7.26(m，8H)，7.14(m，2H)，3.27(m，4H)，2.81(t，J1＝J2＝7.8Hz，4H)，1.97(s，6H)，1.90(p，J1＝J2＝7.8Hz，4H).13C NMR(600MHz，CD3OD)δ185.90，183.4，149.40，148.80，146.70，142.80，138.22，132.54，127.96，127.75，126.61，125.11，123.67，110.42，36.15，30.73，26.21。HPLC纯度98.0％，tR＝16.20min(方法A)。HRMS对C40H34O8计算得到643.2326(M+H)，实验得到643.2334。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-5，5′-双(3-甲基-3-苯基丁基)-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6h)。产率50％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.52(d，J＝7.8Hz，4H)，7.36(s，2H)，7.32(t，J1＝J2＝7.8Hz，4H)，7.16(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.8Hz，2H)，3.04(t，J1＝7.8Hz，J2＝8.4Hz，4H)，1.96(s，6H)，1.91(m，4H)，1.47(s，12H)。HPLC纯度98.0％，tR＝13.5min(方法B)。13C NMR(600MHz，CD3OD)δ185.36，182.93，149.38，148.47，146.58，138.18，133.24，131.96，127.47，126.47，125.66，124.84，123.69，110.29，42.15，37.51，35.48，28.19，22.01。HRMS对C44H42O8计算得到699.2952(M+H)，实验得到699.2964。
5，5′-二甲基-6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6i)。产率55％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.44(s，2H)，7.22(d，J＝7.2Hz，4H)，7.17(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.8Hz，4H)，7.17(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.8Hz，2H)，4.63(q，J1＝11.4Hz，J2＝14.4Hz，4H)，1.86(s，6H)。13C NMR(600MHz，(CD3)2SO))δ185.38，182.54，149.94，149.77，146.53，140.89，138.49，130.01，128.60，128.33，126.45，125.76，123.69，111.68，31.68，14.77。HPLC纯度99.6％，tR＝12.12min(方法A)。HRMS对C36H26O8计算得到587.1700(M+H)，实验得到587.1710。
5，5′-双(4-氯苯甲基)-6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6l)。产率60％；1HNMR(600MHz，CD3OD)δ7.45(s，2H)，7.22(d，J＝6.4Hz，4H)，7.18(d，J＝6.4Hz，4H)，4.59(dd，J1＝13.8Hz，J2＝26.4Hz，4H)，1.85(s，6H)。HPLC纯度99.0％，tR＝14.88min(方法A)。HRMS对C40H32F2O8计算得到655.0921(M+H)，实验得到655.0931。
5，5′-双(联苯基-4-基甲基)-6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6m)。产率52％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.55(d，J＝7.2Hz，4H)，7.44(d，J＝7.8Hz，6H)，7.38(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.8Hz，4H)，7.30(d，J＝7.8Hz，4H)，7.27(t，J1＝7.2Hz，J2＝6.6Hz，2H)，4.59(dd，J1＝13.8Hz，J2＝27.0Hz，4H)，1.88(s，6H)。HPLC纯度99.0％，tR＝16.96min(方法A)。HRMS对C40H32F2O8计算得到739.2326(M+H)，实验得到739.2329。
6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-5，5′-双(4-(三氟甲氧基)苯乙基)-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6j)。于室温、H2下，添加10％钯碳(0.10g)至3j(100mg，0.13mmol)于25mL乙醇和1mL乙酸中的溶液中，并搅拌过夜。以二乙醚萃取溶液两次，以水、盐水洗涤有机层，并经MgSO4干燥。在真空下浓缩溶剂，并将粗残馀物(2j)溶于5mL丙酮和8mL乙酸中，在添加7ml 10％氯化铁水溶液的期间，在油浴(60-67℃)中加热，再继续数分种久。将溶液冷却，添加5mL水，随后为3mL 20％硫酸水溶液。以二乙醚萃取溶液两次，以水、盐水洗涤有机层，并经MgSO4干燥。在真空下浓缩溶剂，并经C-18柱色谱法(H2O/乙腈)纯化残馀物，得到30mg呈黄褐色固体状的化合物6j(30％)。1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.48(d，J＝7.8Hz，4H)，7.42(s，2H)，7.20(d，J＝7.8Hz，4H)，3.48(m，4H)，2.88(t，J1＝8.4Hz，J2＝7.2Hz，4H)，1.95(s，6H)。HPLC纯度97.0％，tR＝11.67min(方法B)。HRMS对C40H28F6O10计算得到783.1659(M+H)，实验得到783.1659。
依照上述的程序和所用的适合原料及试剂，合成化合物6k。
5，5′-双(3-(4-氟苯基)丙基)-6，6′，7，7′-四羟基-3，3′-二甲基-2，2′-联萘基-1，1′，4，4′-四酮(6k)。产率45％；1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.37(s，2H)，7.24(m，4H)，6.97(m，4H)，3.26(m，4H)，2.78(t，J1＝7.2Hz，J2＝7.8Hz，4H)，1.94(s，6H)，1.90(m，4H)。HPLC纯度96.5％，tR＝8.76min(方法B)。HRMS对C40H32F2O8计算得到679.2138(M+H)，实验得到679.2150。
实例4：使用细胞存活率分析法评估式I化合物
使用ATP-LITE分析法(PerkinElmer)评估式I化合物对于人类癌细胞株(PC3ML、H460、H1299、RS11846)的活性。将所有细胞接种在含有5mML-谷氨酰胺并补充有5％胎牛血清(Mediatech Inc.)、青霉素和链霉素(Omega)的F12或RPMI1640培养基中。为了维持，细胞培养在5％FBS中。取决于倍增时间，将细胞以不同的初始密度接种到96孔板中。H460和H1299以每孔2000个细胞接种，A549和PC3以每孔3000个细胞接种，RS118456S以每孔10,000个细胞接种。用0.1％DMSO将化合物稀释至最终浓度。在将化合物配到细胞上之前，将新鲜5％培养基放置于孔中。在接种到新鲜培养基中后的24小时投与化合物。处理72小时后，使用ATP-LITE试剂(PerkinElmer)评估细胞存活率。使用Prism 5.01版(Graphpad Software)将数据对DMSO对照处理的细胞进行归一化。
经由膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)的染色评估化合物抗RS11846细胞的凋亡活性。将淋巴瘤细胞株RS 11846培养于含有10％胎牛血清(Mediatech Inc.，Herndon，VA 20171)和青霉素/链霉素(Mediatech Inc.，Herndon，VA 20171)的RPMI 1640培养基(Mediatech Inc.，Herndon，VA 20171)中。将细胞培养在各种浓度的式I化合物1至2天。使用细胞凋亡检测试剂盒(BioVisionInc.)经FITC-膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)标记来测定活细胞百分比，并经由流式细胞术(FACSort；Bectin-Dickinson，Inc.；Mountain View，CA)分析染色细胞。膜联蛋白V阴性和PI阴性的细胞被视为活细胞。
经由膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)染色来评估式I化合物对小鼠胚胎成纤维野生型细胞(MEF/WT)和小鼠胚胎成纤维BAX/Bak双基因剔除细胞(MEF/DKO)的凋亡活性。将MEF/WT和MEF/DKO细胞以每孔500,000个细胞的接种密度接种至24孔板中(于补充有10％FCS之1ml DMEM培养基之中)。次日，将式I化合物以最终浓度0、2.5、5.0、7.5和10μM添加至野生型和DKO细胞中。隔日，将悬浮细胞与用0.25％胰蛋白酶/EDTA溶液(Gibco/In-Vitrogen Inc.)短暂培育后采集的粘附细胞汇集在一起。离心细胞并丢弃上清液，以0.2ml膜联蛋白-V结合缓冲液将细胞小团重新悬浮，随后添加1μl膜联蛋白-FITC和1μl PI(碘化丙啶)。经由3色FACSort仪器来测定活细胞百分比，且以Flow-Jo程序分析数据，膜联蛋白V阴性、PI阴性的细胞被记为活细胞。式I化合物的EC50值提供于如下表5中。
表5
Figure BDA0000150832470000681
Figure BDA0000150832470000682
实例5：所选式I化合物的交叉活性
使用基于萤光偏振之竞争性结合分析法(FPA)测定所选式I化合物抗Bcl-XL、Bcl-2、Mcl-1和Bfl-1的交叉活性显示于如下表6中。
表6
Figure BDA0000150832470000692
实例6：所选式I化合物的血浆稳定性、微粒体稳定性和细胞通透性
为了测试所选式I化合物的药理学特性，测定活体外血浆稳定性、微粒体稳定性和细胞膜通透性。结果显示在如下表7中。
表7
Figure BDA0000150832470000693
Figure BDA0000150832470000701
NDa*＝未测定
实例7：所选式I化合物活体内的鉴定
测定所选的式I化合物活体内的鉴定。如下列(A)和(B)所示，BI97C10和BI97C7分别以单次腹膜内注射剂量0.06和0.12mmol/kg对于Bcl-2转基因小鼠之脾脏减轻的剂量依赖性作用并未显示任何毒性。所有减轻数据为小鼠脾脏尺寸的最大减少程度的百分比。(C)化合物BI97D1在0.12mmol/kg对于以单次腹膜内注射处理的七只Bcl-2转基因小鼠的脾脏重量减少的影响。数据以平均值±标准差(n＝7)显示(P＝0.0002)。未观察到毒性。
Figure BDA0000150832470000702
实例9：分子模拟
分子模拟研究在Linux工作站和643.2-GHz CPUs Linux集群系统上进行。对接研究可使用BCL-XL与Bak衍生肽(蛋白质数据库编码1BXL)的复合物的晶体结构进行。以ChemScore作为GOLD对接程序中的打分函数获得式I化合物于肽结合袋中的对接结构。以在Sybyl(Tripos，St.Louis)中执行的MOLCAD程序来制备蛋白质表面。对接研究也可使用Bcl-2与苯并噻唑BH3模拟配体(蛋白质数据库编码1YSW)的复合物的晶体结构进行。从蛋白质结构中提取出配体并用于确定小分子的结合位点。经由使用ChemScore作为打分函数的GOLD对接程序，阿朴棉子酚和其衍生物可对接至Bcl-2蛋白中。活性位点半径设在
Figure BDA0000150832470000711
且每个分子产生10GA溶液。蛋白质结构保持静止的同时，GOLD中的GA对接程序允许小分子灵活地探测最佳结合构型。以在Sybyl(Tripos，St.Louis)中执行的MOLCAD程序来制备蛋白质表面，并用于分析被研究小分子的结合姿势。
实例10：萤光偏振分析法(FPA)
用异硫氰酸萤光黄(fluorescein isothiocyanate(FITC))(MolecularProbes)标记Bak BH3肽(F-BakBH3)(GQVGRQLAIIGDDINR)的N末端，并经HPLC纯化。对于竞争性结合分析法，于室温下，将100nM GST-BCL-XLΔTM蛋白以在96孔黑板中于47.5μL PBS(pH＝7.4)中不同浓度的测试化合物预培育10分钟，接著添加2.5μL 100nM FITC标记的Bak BH3肽，以产生50μL最终体积。每个检测板中都包括野生型和突变型Bak BH3肽分别作为阳性和阴性对照。在室温下培育30分钟后，在480/535nm的激发/发射波长下用多标记板读取器(PerkinElmer)测量偏振值(以毫偏振(millipolarization)为单位)。经由将实验数据放进S型剂量反应非线性回归模型(SigmaPlot 10.0.1，Systat Software，Inc.，San Jose，CA，USA)中来测定IC50。报导的数据为三个独立实验的平均值±标准差(SE)。BCL-2和Mcl-1FPA的表现为相似的。简单来说，50nM GST-BCL-2或-Mcl-1与各种浓度的阿朴棉子酚或其衍生物一起培育2分钟，接著加入15nM经FITC结合的Bim BH3肽的PBS缓冲液。10分钟后，测量萤光偏振。
实例11：细胞存活率和细胞凋亡分析法
使用ATP-LITE分析法(PerkinElmer)评估化合物抗人类癌细胞株(PC3、H460、H1299)的活性。将所有细胞接种在含有5mM L-谷氨酰胺并补充有5％胎牛血清(Mediatech Inc.)、青霉素和链霉素(Omega)的12F2或RPMI1640培养基中。为了维持，细胞培养在5％FBS中。取决于倍增时间，将细胞以不同的初始密度接种到96孔板中。H460和H1299以每孔2000个细胞接种，而PC3以每孔3000个细胞接种。用0.1％DMSO将化合物稀释至最终浓度。在将化合物配到细胞上之前，将新鲜5％培养基放置于孔中。在接种到新鲜培养基中后的24小时投与化合物。处理72小时后，使用ATP-LITE试剂(PerkinElmer)评估细胞存活率。使用Prism 5.01版(Graphpad Software)将数据对DMSO对照处理的细胞进行归一化。
经由膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶(PI)的染色评估化合物抗RS4；11、BP3和原代CLL细胞的凋亡活性。将细胞培养于含有10％胎牛血清(Mediatech Inc.，Herndon，VA 20171)和青霉素/链霉素(Mediatech Inc.，Herndon，VA 20171)的RPMI 1640培养基(Mediatech Inc.，Herndon，VA 20171)中。将细胞培养在各种浓度的5，5’经取代6a衍生物中1天。使用细胞凋亡检测试剂盒(BioVisionInc.)经FITC-膜联蛋白V和碘化丙啶(PI)标记来测定活细胞百分比，并经由流式细胞术(FACSort；Bectin-Dickinson，Inc.；Mountain View，CA)分析染色细胞。膜联蛋白V阴性和PI阴性的细胞被视为活细胞。
实例12：BCL-2转基因小鼠研究
表达Bcl-2的转基因小鼠已经描述为B6系56。BCL-2转基因系标志t(14；18)转位的微小基因形式，其中人类BCL-2基因与免疫球重链(IgH)基因座和相关的IgH增强子融合。转基因是在Balb/c背景下增殖。这些小鼠在大约6个月大时开始发展出多克隆B细胞增生，同时异步转化成单克隆侵袭性淋巴瘤，大约90％的小鼠在12至24个月大时发生转化。所有在此使用的动物尚未发展侵袭性淋巴瘤。将溶于500μL溶液(乙醇∶蓖麻油聚氧乙烯醚(Cremophor EL)∶生理盐水＝10∶10∶80)中的化合物腹膜内注射至年龄和性别相当的B6Bcl2小鼠中，同时将500μL不含化合物的相同调配物腹膜内注射至对照小鼠中。24小时后，经由腹膜内注射致死剂量的三溴乙醇(Avertin)牺牲B6Bcl2小鼠。取出脾脏并秤重。小鼠的脾脏重量用来作为评估活性的终点，因为在初步研究中确定脾脏重量在年龄和性别相当的Bcl-2-转基因小鼠中为高度一致。在以对照物处理的年龄相当、性别相当B6Bcl2小鼠中，脾脏重量的变异性在±2％之内。
实例13：肿瘤异种移植研究
6周龄雌性裸小鼠购自Charles River Laboratories。将悬浮于0.2ml PBS中的5×106 PCC-1细胞皮下注射至每只裸小鼠的肋腹区域。将大小相配(200mm3)之带有肿瘤的小鼠分为处理和对照组，在耳部上标签，并个别监测。以数字卡尺每周两至三次测量肿瘤体积(体积＝长度×宽度2/2)。所有研究每组使用6只小鼠。将溶于500μL溶剂(乙醇∶蓖麻油聚氧乙烯醚/生理盐水＝10∶10∶80)的化合物腹膜内(i.p.)注射至带有肿瘤的小鼠中。对照的小鼠以生理盐水处理。第一周给予三次注射，第二周两次，第三周一次，在实验过程中总共投与六次注射。当所有对照组的肿瘤体积超过2000mm3，终止动物实验。处理组的平均肿瘤体积除以对照组的平均肿瘤体积可得到肿瘤生长的抑制比例(T/C％)。
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虽然已经参考上述实例来描述本揭示，但应了解，本揭示的精神和范围系涵盖修改和变化。

Claims (40)

1.一种式I的化合物，或其医药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物：
Figure FDA0000150832460000011
其中：
R1独立地为氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的烷氧基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基、-(CH2)jOR2、-(CH2)jC(O)R2、-(CH2)jC(O)OR2、-(CH2)jOC(O)R2、-(CH2)jNR3R4、-(CH2)jC(O)NR3R4、-(CH2)jOC(O)NR3R4、-(CH2)jNR5C(O)R2、-(CH2)jNR5C(O)OR2、-(CH2)jNR5C(O)NR3R4、-(CH2)jS(O)mR6或是-(CH2)jNR5S(O)mR6，其中j为自0至12的整数；且m为自0至2的整数；
R2独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R3和R4各自独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基，或是R3和R4与其所连接的N原子一起形成经取代或未经取代的杂环基或经取代或未经取代的杂芳基；
R5独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R6独立地为氢、经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的环烷基、全氟烷基、经取代或未经取代的烯基、经取代或未经取代的炔基、经取代或未经取代的杂烷基、经取代或未经取代的杂环基、经取代或未经取代的芳基、经取代或未经取代的芳基烷基、经取代或未经取代的杂芳基、经取代或未经取代的杂芳基烷基；
R、R1、R2、R3、R4、R5和R6可任选且独立地经1至3个选自于下列的基团所取代：氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、烷氧基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、
-(CH2)jOR7、-(CH2)jC(O)R7、-(CH2)jC(O)OR7、-(CH2)jOC(O)R7、-(CH2)jNR8R9、
-(CH2)jC(O)NR8R9、-(CH2)jOC(O)NR8R9、-(CH2)jNR10C(O)R7、
-(CH2)jNR10C(O)OR7-(CH2)jNR10C(O)NR8R9、-(CH2)jS(O)mR11或是
-(CH2)jNR10S(O)mR11，其中j为自0至12的整数；且m为自0至2的整数；
R7独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
R8和R9各自独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基，或是R8和R9与其所连接的N原子一起形成杂环基或杂芳基；
R10独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；及
R11独立地为氢、烷基、环烷基、全氟烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基或杂芳基烷基；
其限制条件为R1不是异丙基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-(CH2)jC(O)NR3R4；且R3和R4各自独立地为氢、经取代或未经取代的烷基或经取代或未经取代的芳基烷基。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中j为0；R3为氢；且R4为
-CH2CH(CH3)C6H5、-CH2(C6H4)CH3或-CH2(C6H4)CH2CH3。
4.根据权利要求2所述的化合物，其中j为0；R3为氢；且R4为
Figure FDA0000150832460000031
或
Figure FDA0000150832460000032
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为-(CH2)jC(O)R2；且R2为经取代或未经取代的烷基、经取代或未经取代的芳基烷基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中j为0；且R2为CH2C6H5。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为经取代或未经取代的烷基或经取代或未经取代的环烷基。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中R1为(C1-C6)烷基。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中R1为-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3或-CH2CH(CH3)2。
10.根据权利要求7所述的化合物，其中R1为-(CH2)q(C5H9)或-(CH2)q(C6H11)，其中q为自0至6的整数。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为经取代或未经取代的芳基烷基。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中R1为经取代或未经取代的芳基(C1-C6)烷基。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中R1为经取代或未经取代的-(C1-C6)烷基(C6H5)。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中R1为
Figure FDA0000150832460000041
Figure FDA0000150832460000042
或
Figure FDA0000150832460000043
15.一种治疗疾病或病症的方法，包含对需要的个体投与治疗上有效量的权利要求1所述的化合物，从而治疗该疾病或病症。
16.根据权利要求15所述的方法，其中该疾病或该病症为癌症。
17.根据权利要求16所述的方法，其中癌症为消化器官/胃肠道癌、结肠癌、肝癌、皮肤癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、淋巴瘤、白血病(包括急性骨髓性白血病和慢性骨髓性白血病)、肾癌、肺癌、肌肉癌、骨癌、膀胱癌或脑癌。
18.根据权利要求15所述的方法，其中该治疗包括抑制至少一种BCL-2族蛋白的活性。
19.根据权利要求15所述的方法，包含投与权利要求1所述的化合物与一种抗癌剂的组合。
20.一种治疗具有至少一种BCL-2族蛋白表达水平升高的个体的癌症或自体免疫疾病的方法，包含投与至该个体治疗上有效量之权利要求1所述的化合物，从而治疗该癌或自体免疫疾病。
21.根据权利要求20所述的方法，进一步包含确定是否该个体对于使用该化合物的疗法有反应，包含测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应。
22.根据权利要求21所述的方法，其中该测定是基于取自该个体之样本进行。
23.一种确定是否一个体对于使用根据权利要求1所述之化合物的疗法有反应的方法，包含测定该个体中至少一种BCL-2族蛋白的水平，并且与正常对照样本进行比较，其中水平升高指示个体对于该疗法有反应。
24.根据权利要求23所述的方法，其中该测定是基于取自该个体之样本进行。
25.根据权利要求24所述的方法，其中该样本为生物流体或肿瘤样本。
26.根据权利要求23所述的方法，其中该BCL-2族的多核苷酸或多肽为BCL-2、BCL-XL、BCL-W、MCL-1或BCL-A1。
27.一种诱导具有至少一种BCL-2族蛋白成员之水平高于对照细胞中之水平的细胞凋亡的方法，包含向该细胞投与有效量的权利要求1所述之化合物，从而减少BCL-2族蛋白的水平并于该细胞中诱导凋亡。
28.根据权利要求27所述的方法，其中该细胞为癌细胞。
29.根据权利要求28所述的方法，其中癌为肺癌、乳癌、前列腺癌或淋巴瘤。
30.根据权利要求27所述的方法，其中该细胞为免疫系统细胞。
31.一种确定治疗方案的有效性的方法，包括投与根据权利要求1所述之化合物至一个体，包含在以该化合物处理之前和处理期间比较该个体细胞中BCL-2族蛋白的水平，其中BCL-2族蛋白水平降低指示利用该化合物的疗法的有效性。
32.根据权利要求31所述的方法，其中该个体患有癌症。
33.根据权利要求32所述的方法，其中该癌症为肺癌、乳癌、前列腺癌或淋巴瘤。
34.根据权利要求31所述的方法，其中该个体患有自体免疫病症。
35.一种治疗个体发炎的方法，包含对需要治疗的个体投与医药学上有效量的根据权利要求1所述之式I化合物：
Figure FDA0000150832460000061
或其医药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，因而减轻发炎。
36.根据权利要求15所述的方法，其中该疾病或病症为红斑狼疮、牛皮癣、牛皮癣关节炎、狼疮肾炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、溃疡性结肠炎、重症肌无力、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、格雷夫斯病(Grave’sdisease)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto’sthyroiditis)，克罗恩病(Crohn’sdisease)、自体免疫性溶血性贫血、胰岛素依赖型糖尿病、肾小球肾炎、风湿热、骨关节炎、痛风性关节炎、皮炎、支气管炎、鼻炎、气喘、干燥综合征(Sjogrens’syndrome)、脑膜炎、肾上腺脑白质营养不良、中枢神经系统血管炎、线粒体肌病、肌萎缩侧索硬化、阿兹海默病(Alzheimer’sdisease)或肿瘤。
37.根据权利要求36所述的方法，其中该线粒体肌病为MELAS综合征、MERF综合征、利伯氏病(Leber’sdisease)、韦尼克氏脑病(Wernicke’sencephalopathy)、雷特综合征(Rettsyndrome)、同型胱氨酸尿症、血脯氨酸过多、非酮性高甘氨酸血症、羟丁氨基酸尿症、亚硫酸氧化酶缺乏症或联合系统疾病(维生素B12缺乏症)。
38.根据权利要求15或权利要求35所述的方法，进一步包含投与一种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)。
39.根据权利要求35所述的方法，其中该发炎为与一种病况相关的发炎，其中该病况为红斑狼疮、牛皮癣、牛皮癣关节炎、狼疮肾炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、溃疡性结肠炎、重症肌无力、免疫性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、格雷夫斯病、桥本氏甲状腺炎、克罗恩病、自体免疫溶血性贫血、胰岛素依赖型糖尿病、肾小球肾炎、风湿热、骨关节炎、痛风性关节炎、皮炎、支气管炎、鼻炎、气喘、干燥综合征、脑膜炎、肾上腺脑白质营养不良、中枢神经系统血管炎、线粒体肌病、肌萎缩侧索硬化、阿兹海默病或肿瘤。
40.根据权利要求39所述的方法，其中该线粒体肌病为MELAS综合征、MERF综合征、利伯氏病、韦尼克氏脑病、雷特综合征、同型胱氨酸尿症、血脯氨酸过多、非酮性高甘氨酸血症、羟丁氨基酸尿症、亚硫酸氧化酶缺乏症或联合系统疾病(维生素B12缺乏症)。
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