CN102539789B - 基于copeptin的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

copeptin作为诊断标志物的用途，用于测定加压素的释放、特别是与神经垂体释放加压素非生理学变化相关性病症有关的加压素释放，特别是用于心血管疾病、肾病和肺部疾病以及休克包括脓毒性休克、脓毒症和中枢神经系统的疾病/病症和神经变性疾病的检测和早期检测、诊断和病程监测。

Description

基于copeptin的试剂盒
本分案申请是基于申请号为200580021434.9，申请日为2004年8月19日，发明名称为“使用copeptin诊断病症的方法”的原始中国专利申请的分案申请。
本发明涉及copeptin和/或其前体或片段和/或其剪接变体、含copeptin的片段和/或其组合和/或衍生物在医学诊断中的用途，其作为与神经垂体释放加压素非生理学变化相关的或由其引起的病症的体液生物标志物，例如所述病症有心脏病、肾病、炎性疾病和脓毒症以及中枢神经系统的疾病/病症和神经变性疾病及下述的其它疾病。
在下文中所有具有表现copeptin免疫反应性的共同特征的上述生物分子和片段、变体及其组合，都在本申请中称为“copeptin”。因此，术语“copeptin”尤其还包括例如VP-激素原，如果以样品本身的形式存在。
本发明的copeptin作为生物标志物、特别是体液生物标志物使用，其可用于诊断与神经垂体释放加压素非生理学变化、尤其是增加相关的或由其引起的病症，所述病症有心血管疾病如慢性或充血性心力衰竭、心跳停止、心源性休克、心脏梗塞、急性心肌梗塞、动脉高压、心脏手术、硬化，肺病症，多囊性肾病的肾病，尿崩症，各种形式的低钠血症，各种形式的抗利尿激素不适当分泌综合征，出血，形成水肿的状态，炎性疾病，创伤、灼伤、其感染的并发症和脓毒症、严重的脓毒症和脓毒性休克，以及中枢神经系统(CNS)的疾病/病症和神经变性疾病。
在本申请中，若提到作为生物标志物使用，则它指在生物流体的体外样品(即离体)如血液、血清或血浆和脑脊髓液(脑脊液；CSF)中测定所述生物标志物。对于任何技术人员来说这明显意味只有这类生理存在的“copeptin”分子将被测定，事实上它们可在这类样品中存在。在体液样品可能存在几种不同种类的基本上等同的免疫反应性，例如它们在长度和/或其存在方式(presence)和/或类型和/或其翻译后的修饰例如糖基化和/或磷酸化的程度上有差别。鉴于任何给定的测定可识别不只一种类型的分子的固有可能性，按照优选的实施方案copeptin的测定将被理解为copeptin免疫反应性的测定，尤其优选用下文中描述的测定法测量免疫反应性。
就本发明的应用还可延伸至用于作为生物标志物、或作为药物中活性成分的copeptin测定相关的检测组分和试剂的制剂而言，任何适宜的copeptin肽或衍生物，包括具有例如与天然copeptin降低的同源性的、或具有改进的稳定性的融合产物和修饰物，都可以使用，而不限于天然copeptin产物。
因此本发明中的术语copeptin还包括显示出例如与copeptin只有75％同源性、优选至少80％同源性、更优选至少90％同源性的氨基酸序列。
术语“诊断”或“诊断的”作为普通术语用于本说明书中，如果不另外定义，则它们不仅包括鉴定特定疾病意义上的诊断，而且还包括筛选处于某些疾病风险之中或怀疑有某种疾病的无症状或高风险人群、监测未治疗的或经治疗的患者以及监测治疗过程和预测/早期预测和存活率预测。
本发明进一步涉及升高的抗copeptin或抗copeptin部分肽的抗体，特别是供上述方法之用的抗体、以及涉及这类组分的试剂盒和检测。
休克的血管扩张状态是危急生命的情形。外周血压急剧下降且通常在给予儿茶酚胺之后不能正常化。休克最常见的形式为脓毒性休克，它也是脓毒症最严重的形式。而且血管扩张性休克可在大型心脏手术、出血性和心源性休克之后或在药物或毒素中毒之后自身显现出来[1，2]。
一系列经自分泌/旁分泌途径显著有效的肽与血压的调节有关。已知下列分子为具有血管扩张功能：例如肾上腺髓质素、降钙素基因相关肽(CGRP和)和心房钠尿肽(ANP)。下列分子表现血管收缩效应：内皮素、血管紧张素II和加压素(亦称精氨酸-加压素、抗利尿激素(ADH))。
加压素是大前体分子(“VP激素原”；其多肽顺序如图3所示；或如SEQ ID NO：4所示)的分解产物，主要在下丘脑的神经元中形成[20]。在合成之后VP激素原在高尔基体中糖基化、被包入分泌小泡并被激素原转化酶SP3裂解成三个肽加压素、神经垂体素运载蛋白和copeptin。在轴突迁移至脑垂体的神经末梢之后这些肽在接受特定的刺激(例如高渗透压、血容量减少或不同的激素)时由小囊泡分泌。
加压素最重要的生理作用是体内水分的潴留(抗利尿)。加压素生理性升高血压的作用在健康个体中不如在脓毒性休克中突出。加压素的其它生理功能是调节垂体肾上腺轴(ACTH，皮质醇)刺激胃肠道的活动以及聚集血小板[1；括号中的数字指所附的参考文献序列]。
在休克的发病机理中加压素起着重要作用：实验休克模型中表明在刺激后加压素的血浆浓度在15分钟之内增加至高于正常浓度三个数量级[4]。在贮存于脑垂体中的加压素迅速释放之后加压素浓度在休克综合征的持续过程中急剧降低，这在脓毒性休克患者中观测到[5-7]。该观察结果是加压素用于治疗脓毒性休克的替代疗法原理的基础，已成功地试验[8-10]。这些结果表明加压素内源性降低会促进脓毒性休克状态[5]。
加压素还被研究作为标志物用于心动停止患者生存概率的预测[11]并因此用于治疗这类患者[12]。
加压素或VP激素原的病理生理学过表达已经在几种类型的癌症中显示，如前列腺癌、睾丸癌、卵巢癌以及胰腺癌、垂体腺瘤和神经节瘤、嗅神经母细胞瘤、乳房肿瘤和结肠肿瘤、鼻咽癌、脑癌和颈癌、嗜铬细胞瘤以及源于胃肠道的肿瘤、鳞状细胞癌、腺癌以及大细胞癌[13，24，25，26]。在癌症中产生或释放的加压素被认为是病理生理形成的，即由非正常的生理学途径(发生变化的病理组织)形成，其不同于正常的生理性加压素的产生。
在上述疾病中加压素由其正常来源的器官(神经垂体)释放，尽管以非生理学水平释放。
copeptin-亦称C-末端糖蛋白-包含39个氨基酸、它的糖基团且分子量为约2000Da[15-17]。在前体VP-激素原的131位上糖基化(cf.SEQ ID NO：4)。copeptin的生物学功能尚不清楚。
加压素作为体液例如血清或血浆中的体液诊断标志物的直接测定本身不适合于常规的诊断学。90％以上的加压素与血小板结合因此对于这种测量不可得到[21]。因此在血浆中发现的游离加压素不能反映加压素释放到血流里的实际量。加压素与血小板的结合导致不同的结果，取决于包含在测量中的血小板的量，取决于用于获得血浆的离心法[22]它是可变的。其它障碍是：如果血样在离心之前在室温下放置，则所观察到的加压素的量更高。这些影响和加压素在体内(24分钟，[14])和在即使储存于-20下的离体血浆样品[23]中的半衰期短已经防碍了加压素在常规的诊断学中的应用。由于半衰期短，在常规的诊断学中取样、得到血浆、将样品输送到实验室和在实验室中完成诊断包括在加压素达到检测的临界水平之前所需的试验是不可能的。
由于加压素在体内的稳定性低以及由于与血小板结合和从血小板释放导致的结果可变，即使在最佳的样品输给系统下作为生物标志物的应用也非常受限制，因为降解的影响发生太快。
本发明的目的是克服加压素不利的半衰期和测量中结果可变的影响，和研究用于与加压素释放相关的分子、更特别是copeptin的检测和测定的方法、应用和试剂盒，用于心血管疾病和脓毒症的诊断。
此目的可基于以下惊奇的发现来实现：VP激素原-加压素的前体-的某些片段尤其是copeptin，在心血管疾病和脓毒症的诊断和监测中，可用作加压素生理释放、尤其在体液中的测定工具。
片段、尤其是copeptin的产生与加压素的释放有关，因为所有片段都由相同的前体而来。
而且发现这些前体蛋白质、片段和/或其组合在活体外的稳定性令人惊奇地高，使得片段、尤其是copeptin完全适合于常规的目的。
所述片段如copeptin和前体肽的其它片段之间的连接使得它们适合于作为所有加压素起作用的疾病的诊断工具。因此copeptin尤其可在医学诊断中使用用于诊断和监测各种疾病，特别是心血管疾病和全身性炎症，特别是脓毒症。
此外在一实施方案中本发明还涉及copeptin用于这些疾病的诊断、上述加压素起作用的疾病的病程控制和预测的用途。
另外临床资料可以支持疾病的鉴定。
应用显示出与本发明的copeptin有至少75％同源性、优选至少80％同源性、更优选至少90％同源性的氨基酸序列也是可能的。
根据下面的实施例在本发明优选的实施方案中选择人加压素-神经垂体素运载蛋白2-copeptin-前体氨基酸序列的两个区域(PATV17；PLAY17)作为特异性抗体识别的免疫结合位点：
132-147位：CATQLDGPAGALLLRLV(PATV17-SEQ ID NO：1)
149-164位：CLAGAPEPFEPAQPDAY(PLAY17-SEQ ID NO：2)。
为了校准的目的和为了制备标准溶液，使用包含上述两个结合位点的肽(PAY33)：
132-164位：ATQLDGPAGALLLRLVQLAGAPEPFEPAQPDAY(PAY33-SEQID NO：3)。
选择特异性抗体识别的免疫结合位点PATV17和PLAY17使得它们不包含131位上copeptin的推定糖基化位点。因此，在使用这类抗体的检测中所测定的copeptin存在或不存在翻译后修饰(糖基化)将不会对copeptin的识别有任何显著的影响。因此，术语“copeptin”包括“裸露的”copeptin肽和所述肽的翻译后修饰的形式。
上述的各肽按下文中的描述合成，将氨基末端半胱氨酸残基加入到每个copeptin氨基酸序列中，按照本领域技术人员已知的方法化学合成这些可溶蛋白质的肽。将它们纯化和通过质谱和反相HPLC进行质量控制和冻干成等分试样(Jerini AG，Berlin，Germany)。
本发明的合成肽用于生产抗原，将其注入到动物体内以升高抗本发明copeptin的抗体。可采用不同的方法实现这些本领域技术人员所知的该目的。
在优选的实施方案中肽PATV17和PLAY17按照Pierce，Rockford，IL，USA的方法经MBS(间马来酸亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯)与载体蛋白钥孔血蓝素(KLH)连接。抗上述肽的抗体在绵羊体内生产。在本发明优选的实施方案中，抗上述肽的多克隆抗体升高。抗体按照已知的方法纯化。在本发明优选的实施方案中，这优选采用配体特异性亲合色谱法通过将肽经氨基末端半胱氨酸残基按照Pierce的方法与Pierce的SulfoLink-凝胶(Boston，USA)偶合来实现。在优选的实施方案中将抗体用能够检测的标志物标记。所用的标志物优选荧光标志物，在更优选的实施方案中，抗体用化学发光的标志物标记，在进一步优选的实施方案中抗PATV17(0413-pAK)和PLAY17(0417-pAK)的抗体用化学发光的标志物标记。
在其它优选的实施方案中本发明涉及所产生的抗体用于在体液样品中检测本发明copeptin的用途、以及包含一定量的这样一种抗体或多种检测本发明分子的特异性抗体的试剂盒。可运用本领域技术人员已知的不同分析法检测这些分子，包括使用多种标志物的手工、自动或为关注位点试验形式(point of care test formats)的竞争或夹心免疫分析法。
检测抗体与各个分子的结合的方法也为本领域技术人员所已知。所有这类已知的测定形式在copeptin测定的范围内都可使用。例如在本发明的范围内通过快速试验装置例如免疫色谱型的快速试验装置，所谓的POC(关注位点)试验来测定。copeptin的测定也可以用所谓的型的均相测定法、使用所谓的技术进行。
本发明优选的实施方案公开了所产生的抗上述肽0413-pAK和0417-pAK的抗体的用途，尤其用于夹心型的2位点免疫分析法。本发明的另一优选实施方案公开了这类抗体用于在多种体液及其它生物材料中检测和测定本发明的分子、尤其是copeptin的浓度的用途。在优选的实施方案中copeptin可在体液中50pg/ml以上的浓度时进行检测(图1)。
在一实施方案中本发明是基于和应用所发现的离体copeptin在血浆和血清中的长时间稳定性(表2)。即使在室温下贮存2天以后在血浆和血清中copeptin含量令人惊奇地稳定。因此copeptin比加压素更适合于诊断的目的。
本发明的优选实施方案公开了所产生抗PLAY17和PATV17的抗体用于检测健康个体、有脓毒症、心脏梗塞和动脉血压升高的患者体内的copeptin(图2)、和用于测定慢性或充血性心力衰竭(CHF)的严重程度(图4)。
本发明另外可以测定体液中本发明的分子、尤其是copeptin的存在和稳定性、和测定健康对照个体和有多种疾病包括上述的那些疾病的患者体内肽浓度的差别(图2；图4)。健康对照个体的中值为约13pg/ml。
本发明进一步公开了在疾病状态包括上述的那些疾病下体液生物标志物copeptin的在体液中浓度的显著变化。
本发明的优选实施方案是基于以下令人惊奇的发现：脓毒症(中值150，5pg/ml)和心肌梗塞(中值129，5pg/ml)患者的血浆中copeptin浓度变化非常显著即约10倍增加，在动脉血压升高患者中约35倍增加(中值459，5pg/ml)。
在CHF患者中所测copeptin的含量与疾病严重程度的相关性较好，其中疾病的严重程度通常采用New York Heart Association(NYHA)功能分类系统来评价，其中NYHA I至IV类与下列典型的功能能力对应：NYHA I类-无症状；NYHA II类-有中等努力(exertion)的症状；NYHA III类-有极小的努力症状；NYHA IV类-安静时的症状(呼吸困难)。在一项研究中对总共348CHF患者(25名为NYHA I类；124名为NYHA II类；127名为NYHA III类；72名为NYHA IV类；参见表1))的血浆样品中的copeptin含量进行了测定，不同类别的中值显示出清晰的倾向(参见下面的表1)。
本发明还提供利用尤其是copeptin的一种或多种抗体用于上述疾病的诊断方法、试剂盒和测定法。
附图说明
图1显示的是用肽PAY33作为标准物质对copeptin免疫反应性进行夹心免疫分析法的标准曲线。
图2显示的是健康个体和不同组的患者(脓毒症、心脏梗塞和动脉血压升高)的样品中copeptin免疫反应性的浓度。
图3显示的是加压素激素原的氨基酸序列(单字母代码；也参见SEQ ID NO：4)。
图4显示的是按照NYHA分类系统分类的CHF(慢性心力衰竭)患者的样品中copeptin免疫反应性的浓度。
材料、方法和测量
实施例1
肽的合成
按照本领域技术人员已知的标准方法合成肽并通过质谱和反相HPLC控制对其质量进行控制和冻干成等分试样(Jerini AG，Berlin，Germany)。肽的氨基酸序列如下(数字指人加压素原-神经垂体素运载蛋白2-copeptin-前体中的相应位置(132-147和149-164位)：
PATV 17(132-147+N-末端半胱氨酸残基)：CATQLDGPAGALLLRLV[序列ID 1]，
PLAY 17(149-164+N-末端半胱氨酸残基)：CLAGAPEPFEPAQPDAY[序列ID 2]，
标准肽PAY 33(132-164)ATQLDGPAGALLLRLVQLAGAPEPFEPAQPDAY[序列ID 3]。
实施例2
缀合和免疫
按照PIERCE，Rockford，IL，USA中所述的关于“NHS-酯-马来酰亚胺交联剂”方案将序列ID 1-2的肽通过MBS(-马来酸酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯)与载体蛋白KLH(钥孔血蓝素)连接。对绵羊进行免疫，接受100μg的缀合物(μg按照缀合物中肽的含量)随后每四周接受50μg的缀合物(与缀合物中肽含量相关的量)。从免疫之后第4个月开始每四周从每只绵羊中抽取700ml血液并通过离心得到抗血清。按照MicroPharm，Carmerthenshire，UK的方法进行抗血清的缀合、免疫和生产。
实施例3
抗体的纯化
用配体特异性亲和纯化法将自绵羊中的多克隆抗体纯化。对于该步骤将肽PATV 17和PLAY 17与Pierce(Boston，USA)供应的SulfoLink-凝胶连接。按照Pierce的方案发生结合。每5ml的凝胶加入5mg的肽。
概括地说，将柱子用10ml洗脱缓冲液(50mM枸橼酸，pH 2.2)和结合缓冲液(100mM磷酸钠，0.1％Tween，pH 6.8)洗三次。将100ml的绵羊抗血清用直径0.2μm的过滤器过滤然后加入到柱材料中，其中柱材料已经从柱子转移到装有10ml结合缓冲液的烧杯中。将该材料在平缓的旋转下于室温温育过夜。将该材料转移入空柱(NAP 25，Pharmacia，被清空)中。弃去洗脱液。随后将柱子用250ml无蛋白质的结合缓冲液(洗过的洗脱液中蛋白质含量＜0.02A 280nm)洗涤。将洗脱缓冲液加入到洗涤柱中然后收集1ml的级分。各级分的蛋白含量通过BCA法测定(按照PIERCE，Rockford，IL，USA的方案)。将蛋白含量＞0.8mg/ml的级分合并。测定蛋白含量后得到39mg的抗PATV17抗体0413-pAk和103mg的抗PLAY 17抗体0417-pAk。
实施例4
标记
将抗PLAY 17抗体0417-pAk如下处理：按照Pharmacia的方案将所产生的500μl亲和纯化的抗体经NAP-5凝胶过滤柱(Pharmacia)在1ml 100mM磷酸钾缓冲液(pH 8.0)中再次缓冲。抗体溶液中的蛋白浓度为1.5mg/ml。
至于用化学发光的标志物标记将10μl的MA70-Akridinium-NHS-酯(1mg/ml；Hoechst Behring)加入到67μl的抗体溶液中并在室温下温育15分钟。然后加入423μl的1M甘氨酸并温育10分钟。按照Pharmacia的方案使用NAP-5凝胶过滤柱将该溶液在1ml溶剂A(50mM磷酸钾，100mM NaCl，pH 7.4)中再次缓冲。为了最终清除未结合的标志物采用凝胶过滤HPLC(柱子：Waters Protein Pak SW300)。加入样品并以溶剂A于1ml/分钟的流速进行色谱分离。以UV计在280和368nm的波长下连续监测流液以测定标记的程度。所标记的抗体的吸收系数368/280nm为0.1。收集含单体抗体的级分(保留时间8-10分钟)并吸收于3ml 100mM磷酸钠，150mM NaCl，5％牛血清白蛋白，0.1％叠氮化钠，pH 7.4)中。
实施例5
偶合
将抗PATV 17抗体0413-pAk固定在放射处理过的5ml聚苯乙烯管(Greiner，Germany)上。对于该方法将抗体溶液用50mM Tris，100mM NaCl，pH 7.8稀释至蛋白浓度为6.6μg/ml。用移液管吸取每管300μl稀释的蛋白溶液。将这些溶液在22℃下温育20小时，移去溶液。然后向每个管中加入4.2ml的10mM磷酸钠，2％Karion FP，0.3％牛血清白蛋白，pH 6.5溶液。20小时后移去溶液并将各管在真空干燥器干燥。
实施例6
免疫分析
使用以下的测定缓冲液：100mM磷酸钠，150mM NaCl，5％牛血清白蛋白，0.1％非特定的绵羊IgG，0.1％叠氮化钠，pH 7.4。
测定健康个体和各种疾病/上述疾病的患者的EDTA-血浆的copeptin浓度，尤其是心脏病和循环系统的疾病。
使用作为标准物质的化学合成肽(肽PAY 33)，其相应于加压素-神经垂体素运载蛋白2-copeptin前体的132-164位。该标准物质以标准的马血清(Sigma)稀释。
在试验管中吸取100μl的标准物质或样品以及100μl的测定缓冲液。将各管在平缓的旋转下于22℃温育2小时。用1ml的洗涤缓冲液(0.1％Tween 20)洗4次后，弃去上清液。然后加入200μl的测定缓冲液，其中含1百万RLU(相对光单位)的MA70-标记的抗体，然后在平缓的旋转下于22℃再温育2小时。用1ml的洗涤缓冲液(0.1％Tween 20)洗4次后，以光度计(Berthold，LB952T，碱性试剂Brahms AG)测定与管结合的化学发光。用软件MultiCalc(样条拟合)确定样品的浓度。
实施例7
copeptin浓度的测定
术语copeptin免疫反应性描述的是通过显像的夹心免疫分析法检测出的底物的量。夹心免疫分析法使用升高的抗加压素-神经垂体素运载蛋白2-copeptin-前体的132-147和149-164位的抗体用于底物的检测。显像测定的典型的标准曲线描述于图1。使用所述分析法可定量定血浆或血清中copeptin免疫反应性在50pg/ml以上的浓度。
实施例8
健康个体和疾病状态中copeptin免疫反应性的浓度
分析健康个体和遭受各种疾病包括脓毒症、心脏梗塞和动脉血压升高的患者的血清和血浆(图2)。测定copeptin免疫反应性。与健康个体相比疾病状态中copeptin免疫反应性令人惊奇地增加。健康个体显示中值为约13pg/ml，脓毒症患者的中值为约150pg/ml，心肌梗塞患者分中值为约129pg/ml，动脉血压升高患者的中值为约459pg/ml。
实施例9
NYHA I至I V类的慢性心力衰竭(CHF)患者中的copeptin免疫反 应性浓度
用上述测定法对总共348CHF患者(25名为NYHA I类；124名为NYHA II类；127名为NYHA III类；72名为NYHA IV类；参见表1)的血清和血浆样品中的copeptin含量进行测定。结果以图解形式显示于图4。可以看出，不同类别的copeptin浓度(pg/ml)的中值显示出清晰的增加趋势：发现NYHA I类患者的中值为20.30pg/ml，II类33.25pg/ml，III类49.60pg/ml，IV类85.80pg/ml(参见下表1中的统计数据)。
表1
  NYHA I  NYHA II  NYHA III  NYHA IV
  各类的人数   25  124  127  72
  中值   20.30  33.25  49.60  85.80
  均值   27.00  45.32  63.91  184.7
  低于95％CI的均值   17.45  38.79  55.29  118.9
  高于95％CI的均值   36.56  51.86  72.54  250.5
CI＝置信区间
发现CHF的严重程度与血浆中copeptin含量有密切的相关性，这使得copeptin成为供CHF的诊断(阳性或阴性诊断)、CHF病程和进展的监测以及CHF治疗的监测与控制之用的生物标志物候选物。另外，鉴于目前在尝试评价心力衰竭的治疗中加压素受体拮抗剂的有效性[27]，测定心力衰竭患者的血清或血浆样品中的copeptin可以允许识别将比用加压素受体拮抗剂治疗的其他患者受益更多的这样的患者。
实施例10
copeptin免疫反应性的稳定性
发现血浆和血清中copeptin免疫反应性令人惊奇地稳定(表2)。表2显示的是脓毒症患者的血清和血浆中内源性免疫活性的copeptin的离体稳定性。
表2
即使在室温下(RT)贮存2天后可以检测到免疫反应性没有下降。
因此与加压素相比较copeptin免疫反应性的离体稳定性令人惊奇地显著提高。
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Claims (11)

1.测定copeptin的试剂盒，其包括用于免疫分析的试剂
-至少一种识别以SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2存在的第一氨基酸序列的第一抗体，和
-至少一种识别以SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2存在的另一第二氨基酸序列的第二抗体，
其中所述第一或第二抗体中至少一种载有可检测的标志物。
2.根据权利要求1的试剂盒，其中所述抗体为多克隆和/或单克隆抗体。
3.根据权利要求1的试剂盒，进一步包含用作标准和用于校准目的的肽。
4.根据权利要求3的试剂盒，其中所述肽具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
5.根据权利要求1的试剂盒，其中所述试剂盒用于测定体液样品中copeptin和/或显示copeptin免疫反应性的病理生理存在的copeptin前体、剪接变体、片段或翻译后经修饰的形式的量。
6.根据权利要求5的试剂盒，其中体液样品选自血清、血浆、血液或脑脊髓液CSF。
7.根据权利要求1的试剂盒，其中所述第一或第二抗体之一固定在表面上。
8.根据权利要求1至6任一项的试剂盒，其中所述免疫分析法是均相免疫分析法。
9.根据权利要求1至7任一项的试剂盒，所述免疫分析法是一种使用第一固定的特异性抗体和第二溶解的特异性抗体的异相免疫分析法，所述第二溶解特异性抗体载有可检测的标志物或可通过与标记过的标志物分子反应而被选择性地标记。
10.识别以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2存在的氨基酸序列的抗体在制备根据权利要求1至9任一项的试剂盒中的用途。
11.根据权利要求10的用途，所述试剂盒用于诊断或监测与神经垂体释放的加压素的非生理学变化相关的或由其引起的病症的存在和/或过程和/或严重程度和/或预后，所述病症选自脓毒症、心脏梗塞、慢性心力衰竭和动脉高压。
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