CN102516249A

CN102516249A - 一种抗凝血的二胺衍生物

Info

Publication number: CN102516249A
Application number: CN2011104051329A
Authority: CN
Inventors: 王颖; 黄青春; 闫革新
Original assignee: CHENGDU EASTON PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: CHENGDU EASTON PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2011-12-08
Filing date: 2011-12-08
Publication date: 2012-06-27

Abstract

本发明公开了一种抗凝血的二胺衍生物，该化合物能有效抑制激活的凝血因子X（简称FXa），可用于制备预防或治疗血栓形成或栓塞的抗凝血剂。

Description

一种抗凝血的二胺衍生物

技术领域

本发明涉及一种新化合物，该化合物能有效抑制激活的凝血因子X(简称“FXa”)，可用于制备预防或治疗血栓形成或栓塞的抗凝血剂。

背景技术

在动脉系统中，异常血栓形成主要与冠状动脉、脑血管和外周血管有关，与这些血管的血栓形成闭合有关的疾病主要包括急性心肌梗塞(AMI)、非稳定性心绞痛、血栓栓塞、与溶栓治疗和经皮穿刺冠状动脉腔内成形术(PTCA)有关的急性血管闭合、瞬时局部缺血发作、中风、间歇性跛行和冠状动脉旁路移植术(CABG)或外周动脉旁路移植术。对于静脉血管来说，病理性血栓形成常发生在腹部、膝关节和髋部手术后的下肢静脉(深静脉血栓形成，DVT)。DVT还使患者处于易患肺血栓栓塞的高度危险之中。所以，需要研制优良的抗凝血剂，这种抗凝血剂具有优良的剂量响应性、持续时间长、出血的危险性小，几乎没有副作用，并且即使用口服也能很快达到充分效果(Thrombosis Research，Vol.68，pp.507-512，1992)。

根据对各种抗凝血剂的作用机理的研究，提出FXa抑制剂是很好的抗凝血剂。凝血因子Xa是凝血链中的倒数第二种酶。凝血因子Xa的抑制作用通过该抑制剂与酶之间直接形成复合体而获得，因此该酶与血浆辅助因子抗凝血酶III无关。有效的凝血因子Xa抑制作用通过口服给药、连续静脉输注、快速浓注静脉给药或任何其他非胃肠道途径施用该化合物来实现，由此可获得阻止凝血因子Xa诱发凝血酶原形成凝血酶的所需作用。FXa抑制剂的另一个优点是在血栓形成模型中的有效剂量与实验性出血模型中延长时间的剂量有很大差别。由该此试验结果，可以认为FXa抑制剂是出血危险性较小的抗凝血剂。

发明内容

本发明目的是提供一种具有显著的抑制FXa作用新化合物，这类化合物能通过口服途径快速、充分和持久显示抗凝血作用。

发明人通过对FXa抑制剂合成和药理作用的反复研究和筛选，发现了一种新型的二胺衍生物，显示强药效的FXa抑制作用和抗凝作用，并且这些化合物能迅速地、持久地和强药效地抑制FXa，具有较好的抗凝血剂作用和抗血栓形成作用，可用于制备预防和治疗血栓栓塞引起的各种疾病的药物。

本发明提供一种由通式I所示的化合物：

其中：

R²选自C_1-3烷基；

R¹选自C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基或下列结构所示的取代苯基：

R³选自卤原子、C_1-3烷氧基、C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、C_3-6环烷基或CN；q＝0或1或2。

式I所示的化合物中：

R²优选自甲基；

R¹优选自CH₃，CF₃或下列结构所示的取代苯基：

R³优选自F、Cl、OCH₃、CF₃、环丙基、乙烯基、乙炔基；q＝0或1或2。

式I所示的化合物中：

两个R²可直接相连并与氮原子形成下列结构所示的3-6元环，

其中，n＝0或1或2或3，

更具体的是指两个R²可直接相连并与氮原子一起形成五元环。

式I所示的化合物中，R¹更具体的是指CF₃或3，5-二氟苯基。

本发明所述通式I的二胺类化合物制备方案如下：

其中，R¹、R²与上述定义相同；

R⁴为叔丁氧羰基或苄氧羰基。

本发明所述的二胺化合物II可用下述方法制备：

其中，R²、R⁴与上述定义相同。

化合物II也可按专利公开号为CN101263110A的公开的制备方法获得，上述制备过程中的化合物VI可按照J.Org.Chem.，Vol.61，pp.8687-8691(1996)中公开的方法进行制备。

羧酸III可通过与二氯亚砜或草酰氯反应制备羧酸III的酰氯。羧酸III所得的酰氯可通过酰化反应，在碱存在的条件下与二胺II反应得到化合物IV；氨基甲酸化合物V可通过与三光气等酰化试剂反应得到式V所示的酰氯；式V所示的酰氯再与脱保护后的化合物IV通过酰化反应得到本发明化合物I。

上述各步骤反应中使用的碱为：碳酸钠、碳酸钾，乙醇钠、丁醇钾，氢氧化钠、氢氧化钾，氢化钠，正丁基锂、二异丙基氨基锂、六甲基二硅基氨基锂，吡啶、2，6-二甲基吡啶、三甲基吡啶、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、N-甲基吗啉、二异丙基乙胺或二氮二环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)中的任一一种。

上述各步骤反应中使用的惰性溶剂为：二氯甲烷、氯仿，四氢呋喃、1，4-二氧六环，甲苯，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)或N-甲基吡咯-2-酮，除这些溶剂外，有些情况下可以使用二甲基亚砜(DMSO)或环丁砜，丙酮及甲基乙基酮中的任一一种。

具体实施方式

提供以下实施例以更完全地理解和通晓本发明，实施例不应看作是以任何方式限制本发明。本发明的范围由权利要求限定。

实施例1(1S，3R，4R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羟基-N，N-二甲基环己基甲酰胺

将5g(1S，3S，6R)-N，N-二甲基-7-氧杂二环[4.1.0]庚烷-3-甲酰胺10mL溶解于乙醇，室温下加入30mL 28％氨水，升温至40℃搅拌24小时，反应完全；反应混合物减压浓缩，得(1S，3R，4R)-3-氨基-4-羟基-N，N-二甲基环己基甲酰胺粗品5.9g，将粗品溶解于25mL水中，室温下加入9.65g二碳酸二叔丁酯、7g碳酸氢钠，于40℃下搅拌反应2小时，反应完全，以25mL甲基异丁基酮萃取3次，合并有机相，减压浓缩得粗品，粗品以甲基异丁基酮重结晶，过滤，干燥得标题化合物6.3g。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.43(s，9H)，1.48-1.59(m，2H)，1.77-1.78(m，2H)，1.86-1.97(s，1H)，2.11-2.17(m，1H)，2.77-2.82(m，1H)，2.92(s，3H)，3.02(s，3H)，3.51-3.59(m，1H)，3.94(br s，1H)，4.52-4.67(m，1H).

[α]＝+29°(c＝1.0，CHCl₃).

实施例2(1S，3R，4R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-甲磺酰氧基-N，N-二甲基环己基甲酰胺

室温下，将21.5g(1S，3R，4R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羟基-N，N-二甲基环己基甲酰胺溶于200mL甲基异丁基酮中，依次加入17g三乙胺、16g甲磺酰氯，室温下搅拌1小时，反应完全；向反应液加水后，分液，有机相减压浓缩得粗品，粗品中加入75mL甲基异丁基酮，室温下搅拌3小时，过滤，干燥得标题化合物24.3g。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.45(s，9H)，1.59-1.66(m，1H)，1.68-1.77(m，1H)，1.85-1.96(m，2H)，2.04-2.14(m，1H)，2.16-2.27(m，1H)，2.73-2.79(m，1H)，2.93(s，3H)，3.02(s，3H)，3.08(s，3H)，3.98-4.06(m，1H)，4.65-4.83(m，2H).

[α]＝-15°(c＝1.0，CHCl₃).

实施例3(1S，3R，4S)-4-氨基-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N，N-二甲基环己基甲酰胺乙二酸盐

室温下，将20g(1S，3R，4R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-甲磺酰氧基-N，N-二甲基环己基甲酰胺溶于100mL甲苯中，依次加入7.14g叠氮化钠和6.5g氯化苄基三乙铵，升温至60℃搅拌72小时后反应完全；向反应液加水，分液，有机相依次用饱和盐水、水洗涤后，直接加入甲醇稀释，然后加入7.5％Pd/C和甲酸铵，于40℃搅拌1小时，TLC监测反应完全；过滤除去Pd/C后，有机相减压浓缩得粗品，将粗品溶于200mL含水乙腈和4.94g乙二酸酐中，室温下搅拌17小时，过滤得结晶盐，将所得结晶加入到200mL乙腈中，于40℃下搅拌24小时，过滤、干燥得标题化合物12.7g。

¹H-NMR(D₂O)δ：1.32(s，9H)，1.37-1.50(m，2H)，1.64(t，J＝2.6Hz，1H)，1.73-1.84(m，3H)，2.78(s，3H)，2.80(t，J＝12.5Hz，1H)，2.96(s，3H)，3.32(t，J＝12.3Hz，1H)，4.12(br s，1H).

实施例4(1S，3R，4S)-4-({[(5-氯吡啶-2-基)氨基](氧代)乙酰基}氨基)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N，N-二甲基环己基甲酰胺

在60℃下，250mL三口瓶中依次加入20g(1S，3R，4S)-4-氨基-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N，N-二甲基环己基甲酰胺乙二酸盐、110mL乙腈、56mL三乙胺，搅拌10分钟后，加入16.8g[(5-氯吡啶-2-基)氨基](氧代)乙酸乙酯盐酸盐，搅拌6小时后，再在室温下搅拌16小时，反应完全，往反应液中加水后，于10℃下搅拌2小时后，过滤，得标题化合物结晶21.3g。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.26-1.56(m，2H)，1.45(s，9H)，1.6-2.13(m，5H)，2.56-2.75(br s，1H)，2.94(s，3H)，3.05(s，3H)，3.90-4.00(m，1H)，4.17-4.28(m，1H)，4.71-4.84(br s，0.7H)，5.71-5.99(br s，0.3H)，7.71(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.76-8.02(br，1H)，8.16(br d，J＝8.8Hz，1H，)，8.3(d，J＝2.4Hz，1H)，9.3(s，1H).

实施例5 3-三氟甲基-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酸丁酯

将19.1g 3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪溶于80mL二氯甲烷，依次加入15g氯甲酸丁酯，12g三乙胺，室温搅拌反应6小时，反应完全后，将反应体系倒入冷水中，分出有机相，水相以二氯甲烷萃取(40mL×2)，合并有机相，依次以碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干得粗品，再经减压浓缩得标题化合物26g。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：0.95(t，J＝8.1Hz，3H)，1.45(m，2H)，3.63(m，2H)，3.83-3.95(m，4H)，4.16(m，2H)，4.35(m，2H)，6.84(s，1H).

实施例6 3-三氟甲基-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酰氯

将29.1g 3-(三氟甲基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酸丁酯溶于300mL乙腈中，加入76.5g三氯氧磷，加热回流15小时，冷却至室温，加入120mL二氯甲烷稀释，再将所得混合物倒入碎冰中，分出有机相，水相以二氯甲烷萃取(120mL×3)，合并有机相，依次以碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干得粗品，再经减压浓缩得标题化合物20g。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：3.70(m，2H)，4.15(m，4H)，6.84(s，1H).

实施例7 N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(二甲氨基羰基)-2-(3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺

将19g(1S，3R，4S)-4-({[(5-氯吡啶-2-基)氨基](氧代)乙酰基}氨基)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N，N-二甲基环己基甲酰胺悬浮于380mL乙腈中，加入13.2mL甲磺酸()，室温下搅拌2小时，冰浴下，往反应体系中加入31mL三乙胺，搅拌下加入10.3g 3-三氟甲基-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酰氯，加毕，室温下搅拌36小时，TLC跟踪反应完全，减压浓缩，所得残留物加入10％碳酸氢钠水溶液、乙酸乙酯萃取；分液，有机相以饱和盐水洗涤，干燥、减压浓缩去溶剂得粗品，粗品通过快速柱层析得标题化合物20.5g。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.60-1.98(m，3H)，2.0-2.16(m，3H)，2.68(m，1H)，2.95(s，3H)，3.06(s，3H)，3.70(m，2H)，4.07-4.15(m，5H)，4.67-4.75(m，1H)，6.84(s，1H)，7.40(s，1H)，7.68(d，J＝8.8Hz，1H)，8.03(d，J＝7.8Hz，1H)，8.16(dd，J＝8.8，0.6Hz，1H)，8.32(dd，J＝0.6Hz，1H)，9.68(s，1H).

以下化合物均按上述方法制备。

实施例8N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(二甲氨基羰基)-2-(3-(3，5-二氟苯基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺

以3-(3，5-二氟苯基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪为原料，按照实施例5-6的合成方法制备得到中间体3-(3，5-二氟苯基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酰氯；再以中间体3-(3，5-二氟苯基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酰氯和实施例4合成得到的中间体(1S，3R，4S)-4-({[(5-氯吡啶-2-基)氨基](氧代)乙酰基}氨基)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N，N-二甲基环己基甲酰胺为原料，参照实施例7的合成方法制备标题化合物。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.63-1.95(m，3H)，2.02-2.18(m，3H)，2.64(m，1H)，2.95(s，3H)，3.06(s，3H)，3.68(m，2H)，4.09-4.16(m，5H)，4.67-4.76(m，1H)，6.89(s，1H)，7.22(s，1H)，7.41(s，2H)，7.68(d，J＝8.8，1H)，8.03(d，J＝7.8Hz，1H)，8.15(dd，J＝8.8，0.6Hz，1H)，8.30(d，J＝0.6Hz，1H)，9.52(s，1H).

实施例9N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(吡咯-1-羰基)-2-(3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺

以(1S，3S，6R)-7-氧代二环[4.1.0]庚烷-3-基(吡咯-1-基)酮为原料，参照实施例1-4的制备方法制备得到中间体(1S，3R，4S)-4-({[(5-氯吡啶-2-基)氨基](氧代)乙酰基}氨基)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基(吡咯-1-基)酮；再以中间体(1S，3R，4S)-4-({[(5-氯吡啶-2-基)氨基](氧代)乙酰基}氨基)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基(吡咯-1-基)酮和实施例5制备得到的中间体3-三氟甲基-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酰氯为原料，参照实施例6的合成方法制备得到标题化合物。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.65-1.98(m，7H)，2.0-2.16(m，3H)，2.68(m，1H)，3.34(m，4H)，3.70(m，2H)，4.07-4.15(m，5H)，4.67-4.75(m，1H)，6.84(s，1H)，7.40(d，J＝8.8Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.8，0.6Hz，1H)，8.0(d，J＝7.8Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.3(d，J＝0.6Hz，1H)，9.65(s，1H).

实施例10N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(吡咯-1-羰基)-2-(3-(3，5-二氟苯基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺

中间体1：以(1S，3S，6R)-7-氧代二环[4.1.0]庚烷-3-基(吡咯-1-基)酮为原料，参照实施例1-4或CN101263110A公开的制备方法制备得到中间体(1S，3R，4S)-4-({[(5-氯吡啶-2-基)氨基](氧代)乙酰基}氨基)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]环己基(吡咯-1-基)酮；

中间体2：以3-(3，5-二氟苯基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪为原料，按照实施例5-6的合成方法制备得到中间体3-(3，5-二氟苯基)-5，6-二氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7(8H)-羧酰氯

以中间体1和2为原料，参照实施例6的合成方法，反应得到标题化合物。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.67-1.99(m，7H)，2.02-2.16(m，3H)，2.68(m，1H)，3.33(m，4H)，3.70(m，2H)，4.07-4.15(m，5H)，4.67-4.75(m，1H)，6.64(s，1H)，6.84(s，1H)，7.29(s，2H)，7.40(d，J＝8.8Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.8，0.6Hz，1H)，8.03(d，J＝7.9Hz，1H)，8.16(d，J＝0.6Hz，1H)，8.3(d，J＝0.6Hz，1H)，9.61(s，1H).

试验例1测定人类FXa-抑制作用(IC₅₀值)：

将试验实施例7，8，9，10化合物和阳性药物EDOXABAN的5％DMSO溶液(10μl)(其浓度逐步适当设定)、Tris缓冲液(100mM Tris，200mM氯化钾，0.2％BSA，pH7.4)(40μl)和0.0625U/mL人类FXa(Enzyme Research Labolatories，Inc.，用Tris缓冲液溶解并稀释(10μl)分别放入96-孔微型板的孔中，加入S2222(Chromogenix Co.)的750μM水溶液(40μl)，以测定10分钟室温下在405nm的吸光度，从而测定吸光度增加(ΔOD/min)。作为阴性对照，用Tris缓冲液代替试验化合物。

按照下面公式，将试验化合物最初浓度和试验化合物最后浓度时的百分抑制率(％)分别绘在对数正交概率表的纵坐标和横坐标上，以确定50％抑制剂量(IC₅₀值)。

百分抑制率(％)＝[1-(试样的ΔOD/min)÷(对照ΔOD/min)]×100

结果：表1中，证实本发明化合物具有明显的FXa-抑制作用。

表1

化合物	人类FXa-抑制作用(IC₅₀)：nM
		实施例7	3.8
实施例8	3.6
		实施例9	3.6
实施例10	3.8
		EDOXABAN	4.4

试验例2测定在口服给药后大鼠血浆中抗-FXa活性：

(A)给药和血液采集：

将试验实施例7，8，9，10化合物及阳性对照药EDOXABAN(10mg)溶解或悬浮于0.5％甲基纤维素(MC)中，获得药物溶液(1mg/mL)，将该溶液口服给药给大鼠(10mL/kg)。从给药后的0.5，1，2和4小时，使用注射器从颈静脉收集血液(0.5mL)，注射器内含有柠檬酸三钠二水合物的3.13％(w/v)水溶液(50μl)(血液收集量：0.45mL)对大鼠对照组，在给予0.5％MC溶液后进行同样的血液收集。各血液样品在4℃以1500xg离心10分钟，以分离血浆，该血浆在-40℃保存，直到用于以下的测定抗FXa活性。

(B)测定血浆中FXa-抑制活性：

在测定血浆中抗-FXa活性中，使用S-2222作为底物。混合Tris缓冲液(100mM Tris，200mM氯化钾，0.2％BSA，pH7.4)(5456μl)、人类FXa(2.5U/mL，44μl)和水(550μl)。制得的人类FXa溶液在下面试验中使用。

将根据上述方法(A)获得的大鼠血浆(5μl)放入96-孔的微型板的孔中，随后加入上述人类FXa溶液(55μl)和750μM的S-2222水溶液(40μl)。之后，立刻用分光光度仪SPECTRAmax340或190(Molecular Devices Co.，U.S.A.)，测定室温405nm下的吸光度，从而测定反应速度(ΔOD/min)。

按照下面等式计算抗-FXa活性，即百分抑制率(％)：

百分抑制率(％)＝[1-(样品ΔOD/min)÷(对照ΔOD/min平均值)]×100

结果：在口服剂量为10mg/kg时显示为80-92％的强药效的FXa抑制活性。

表2

化合物	FXa活性的抑制作用(％)
		实施例7	85
实施例8	92
		实施例9	88
实施例10	84
		EDOXABAN	78

Claims

1.式I化合物：

其中：

R²选自C_1-3烷基；

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：

R¹优选自CH₃，CF₃或3，5-二氟苯基；

R²优选自甲基；

R³优选自F、Cl、OCH₃、CF₃、环丙基、乙烯基、乙炔基。

3.根据权利要求1～2所述的化合物，其特征在于：两个R²可直接相连并与氮原子形成下列结构所示的3-6元环，

其中，n＝0或1或2或3。

4.根据权利要求1～3所述的化合物，其特征在于：两个R²可直接相连并与氮原子一起形成五元环。

5.根据权利要求1～2所述的化合物，其特征在于，所述化合物为N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(二甲氨基羰基)-2-(3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺。

6.根据权利要求1～2所述的化合物，其特征在于，所述化合物为N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(二甲氨基羰基)-2-(3-(3，5-二氟苯基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺。

7.根据权利要求1～4所述的化合物，其特征在于，所述化合物为N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(吡咯-1-羰基)-2-(3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺。

8.根据权利要求1～4所述的化合物，其特征在于，所述化合物为N¹-(5-氯吡啶-2-基)-N²-((1S，2R，4S)-4-(吡咯-1-羰基)-2-(3-(3，5-二氟苯基)-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，5-a]吡嗪-7-羰基氨基)环己基)乙二酰胺。

9.根据权利要求1～8所述的化合物，其特征在于，该化合物可用于制备FXa抑制剂。