CN102478521A - 药物中游离肼的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种应用紫外分光光度法对氨氯地平类药物中所含游离肼的检测方法，其特征在于：游离肼与对二甲氨基苯甲醛发生反应，生成的黄色缩合物于456nm波长处有最大吸收，向不含游离肼的氨氯地平对照品中加入对二甲氨基苯甲醛在456nm波长处检测无吸收的原理，通过紫外分光光度计测定游离肼。本方法相比于已有的游离肼检测方法，准确度好，灵敏度高，误差小，且操作简便，易于实施。
Description
发明领域
本发明涉及药物中杂质分析检测技术领域，具体地说是氨氯地平类药物中所含游离肼的检测方法。
发明背景
二氢吡啶类的钙离子拮抗剂为当前一线的降压药物，最早应用的品种是硝苯地平。现在有不少新的品种，例如尼群地平，尼卡地平，氨氯地平，拉西地平等。其除降压作用外还能治疗心绞痛，应用广泛。
其中氨氯地平属双氢吡啶类中的长效品种，每天早餐后服一次，即能控制一天24小时的血压，服用方便，降压平稳，血压波动小，不良反应也少。伴有心力衰竭者也可应用，不受影响。目前在我国已上市的氨氯地平有苯磺酸氨氯地平、马来酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平与苯磺酸左旋氨氯地平、L-门冬氨酸氨氯地平等五种。氨氯地平类药物因治疗范围广，药效时间长，不良反应少，治疗效果好受到广大高血压患者的青睐，在高血压治疗药物中占据很高的市场份额。
当前氨氯地平类药物合成途径中，普遍应用的是氨氯地平亚胺与水合肼反应，生成氨氯地平，见以下反应式。后添加各种基团，生成氨氯地平类药物。此途径步骤简单，工艺易实施，收率高，是目前常用的氨氯地平药物合成途径。但因其合成工艺中引入水合肼，肼是一种诱变剂和致癌物质，因此要对氨氯地平药物中的肼进行方法学研究和控制。
氨氯地平亚胺 水合肼 氨氯地平
中华人民共和国卫生部药典委员会，卫生部药品标准(化学药品及制剂第一册)，1989年1月，描述用比浊法对药物中游离肼进行检测，但该方法专属性差，准确度低，人为误差大，放置时间过长会对结果造成较大影响。
中华人名共和国药典二部(2010版)中描述异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法，最大限度定为0.02％。但该方法准确度和精密度差，灵敏度低，人为误差大。
王洁，差示分光光度法应用于异烟肼注射液中游离肼的测定，现代食品与药品杂质，2007年第17卷第5期中描述了采用差示分光光度法，以对二甲氨基苯甲醛为显色剂，在参比溶液中加入3％丙酮消除干扰，在456nm检测波长处，用紫外分光光度计测定游离肼的方法。该试验采用多种溶剂，操作比较复杂。
发明内容
本发明采用分光光度计法测定氨氯地平类药物中游离肼含量。原理为：游离肼+对二甲氨基苯甲醛→黄色缩合物于456nm波长处有最大吸收，
不含游离肼的氨氯地平对照品+对二甲氨基苯甲醛→缩合物于456nm波长处无吸收。
本方法相比于已有的游离肼检测方法，准确度好，灵敏度高，误差小，且操作简便，易于实施。
测定方法：
对二甲氨基苯甲醛试液：取对二甲氨基苯甲醛适量，加盐酸使溶解，用水稀释至适宜浓度，即得
对照品溶液制备精密称取含游离肼化合物适量，制成肼标准液。
供试品溶液制备称取氨氯地平类药物样品适量，加水溶解制成适宜浓度的供试品溶液。
测定：精密吸取对照品溶液、供试品溶液适量，置量瓶中，加对二甲氨基苯甲醛试液适量，再加水稀释至刻度，摇匀，反应2-5分钟在456nm波长处测定吸光度，以含相应浓度的对二甲氨基苯甲醛试液的水溶液为空白。
公式：A对照品＝EC对照品L ①
A供试品＝EC供试品L ②
根据公式①、②得出C供试品＝A供试品＊C对照品/A对照品
肼含量％＝供试品溶液浓度＊供试品溶液体积/供试品称样量＊100％由此可计算出氨氯地平药物中游离肼含量。
实施例
实施例1：用分光光度法测定烟酸氨氯地平中游离肼的含量。
仪器：岛津UV1800紫外分光光度计
试剂：硫酸肼 分析纯 北京金龙化学试剂有限公司
对二甲氨基苯甲醛试液：取对二甲氨基苯甲醛20g，加盐酸172.5ml使溶解，用水稀释至1000ml，即得。
溶液制备
对照品溶液制备精密称取硫酸肼40.6mg(相当于肼10mg)，加水溶解并稀释至100ml；精密量取1ml，用水稀释至100ml，制成1μg/ml的肼标准液。
供试品溶液制备取烟酸氨氯地平样品适量，加少量甲醇溶解后加水制成60mg/ml的溶液，后用水稀释成6mg/ml的供试液。
测定法精密吸取溶液适量，置50ml量瓶中，加对二甲氨基苯甲醛试液20ml，再加水稀释至刻度，摇匀，反应2-5分钟在456nm波长处测定吸光度，以含相应浓度的对二甲氨基苯甲醛试液的水溶液为空白。
系统适用性试验：
溶液稳定性试验
我们考察了对照溶液的稳定性。
对照溶液稳定性试验
精密称取硫酸肼40.6mg(相当于肼10mg)，加水溶解并稀释至100ml；精密量取1ml，用水稀释至100ml，制成1μg/ml的肼标准液。精密吸取15ml肼标准液，置于50ml量瓶中，加20ml对二甲氨基苯甲醛试液，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。分别于0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、小时时取对照溶液于456nm波长处测定吸光度。溶液稳定性试验结果见表1
表1：烟酸氨氯地平对照溶液稳定性试验结果
结论：由上表可知，对照溶液在放置2小时时，吸光度基本无变化，因此本品对照溶液在放置2小时内稳定。
线性关系
精密量取1.01μg/ml的肼标准液7、10、15、20、25、28ml，分别置于6个50ml量瓶中，按上述对照品测定方法稀释成0.1409、0.2012、0.3018、0.4025、0.5031、0.5634μg/ml的溶液，于456nm波长处测定吸光度，以吸光度A值与肼标准液浓度C(μg/ml)做线性回归，结果见表2。标准曲线为y＝1.5474x-0.0073，R2＝0.9995。
表2：肼的标准曲线数据表
结论：该测定方法下，游离肼在0.14～0.56μg/ml浓度范围内成良好线性关系。
精密度试验
对同一个对照溶液(0.3019μg/ml)，按上述测定方法取6次溶液，检测6次吸光度，计算RSD，结果见表3。
表3：精密度试验结果
结论：以上数据表明仪器精密度符合要求
加样回收率试验
采用加样回收法，取已知游离肼含量的烟酸氨氯地平供试液(6mg/ml，)20ml，(游离肼含量为0.017ug/ml)分别加入等量的3种浓度的对照溶液，按上述方法测定游离肼的含量，计算回收率和RSD％为2.27，见表4。
表4：烟酸氨氯地平中肼的回收率测定结果
结论：本品的回收率测定符合要求。
烟酸氨氯地平中肼的检测结果
精密吸取本品供试液20ml，置50ml量瓶中，加对二甲氨基苯甲醛试液20ml，再加水稀释至刻度，摇匀，反应2-5分钟在456nm波长处测定吸光度，以含相应浓度的对二甲氨基苯甲醛试液的水溶液为空白；另取15ml肼标准液，同法测定。按外标法计算供试品中游离肼的含量。
表5：3批烟酸氨氯地平中肼的检测结果
供试液(6mg/ml)20ml，稀释至50ml，最终浓度为6＊2050＝2.4mgml。以最低可检出的A值为0.01计算，游离肼检出限为0.01/1.54742.4 1000×100％＝0.00027％，低于中国药典2010年版异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼的检查限度0.02％。因此，本发明中游离肼的测定方法优于药典中游离肼测定方法。
实施例2：用分光光度法测定苯磺酸氨氯地平中游离肼的含量。
方法同实施例1，结果：精密度RSD％＝0.23，游离肼在0.16～0.59μg/ml浓度范围内成良好线性关系，系统加样回收率为99.72％，RSD％＝2.16％。系统适应性良好。三批苯磺酸氨氯地平样品检测结果：平均肼含量为0.00106％。
实施例3：用分光光度法测定马来酸氨氯地平中游离肼的含量。
方法同实施例1，结果：精密度RSD％＝0.26，游离肼在0.12～0.54μg/ml浓度范围内成良好线性关系，系统加样回收率为99.79％，RSD％＝2.35％。系统适应性良好。三批苯磺酸氨氯地平样品检测结果：平均肼含量为0.00092％。
实施例4：用分光光度法测定甲磺酸氨氯地平中游离肼的含量。
方法同实施例1，结果：精密度RSD％＝0.35，游离肼在0.17～0.57μg/ml浓度范围内成良好线性关系，系统加样回收率为99.85％，RSD％＝1.85％。系统适应性良好。三批苯磺酸氨氯地平样品检测结果：平均肼含量为0.00063％。
Claims (6)
1.一种用于测定氨氯地平药物中所含游离肼的检测方法，其特征在于：依据游离肼与对二甲氨基苯甲醛发生反应，生成的黄色缩合物于456nm波长处有最大吸收，不含游离肼的氨氯地平对照品中加入对二甲氨基苯甲醛在456nm波长处检测无吸收的原理，通过紫外分光光度法测定游离肼。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：检测用对二甲氨基苯甲醛试液配制方法为：取对二甲氨基苯甲醛适量，加盐酸使溶解，用水稀释至适宜浓度，即得。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：游离肼检测中所用对照品为可产生肼的化合物。
4.根据权利要求3所述的肼对照品可选自肼、水合肼、盐酸肼、单乙酸肼、磷酸肼、硫酸肼等，优选盐酸肼、单乙酸肼、磷酸肼、硫酸肼等盐类。
5.根据权利要求4所述肼对照品溶液配制方法为：精密称取对照品适量，用适宜溶剂稀释，制成适宜浓度的肼标准液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所需检测游离肼的氨氯地平类药物，是通过氨氯地平亚胺与水合肼反应，生成氨氯地平，后与各种基团反应生成的氨氯地平类药物。例如：苯磺酸氨氯地平、马来酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平与苯磺酸左旋氨氯地平、L-门冬氨酸氨氯地平等。
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