CN102423489A - 组织蛋白酶l抑制剂在制备放疗增敏药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于放疗增敏药物领域，具体公开了组织蛋白酶L抑制剂用于制备放疗增敏药物的新用途。本发明首次证明CathepsinL活性与胶质瘤干细胞耐放射的机制有关，在辐射对胶质瘤干细胞DNA损伤修复及周期调控机制中CathepsinL活性是重要的调节分子，CathepsinL抑制剂能有效克服肿瘤细胞耐放射现象；从而提供实验依据证明CathepsinL是放射治疗胶质瘤中一个新的作用靶位；本发明同时提供了组织蛋白酶L抑制剂用于制备放疗增敏药物的新用途，所述组织蛋白酶L抑制剂选自：Z-苯丙氨酸-叔丁基酪氨酸-二氮甲酮或组织蛋白酶siRNA。

Description

组织蛋白酶L抑制剂在制备放疗增敏药物中的应用

技术领域

本发明属于放疗增敏药物领域，具体涉及组织蛋白酶L抑制剂用于制备放疗增敏药物的新用途。

背景技术

脑胶质瘤是最常见的神经系统原发肿瘤，放射治疗是目前脑胶质瘤综合治疗最重要的治疗手段之一。但是胶质瘤对放疗的抵抗性不断增加，相当一部分患者经过放射治疗后，肿瘤出现复发，而胶质瘤细胞耐辐射的机制仍然没有搞清楚。

辐射对生物大分子的破坏主要是引起细胞凋亡，对于细胞凋亡分子机制，尤其是电离辐射等因素通过DNA损伤而诱发细胞凋亡的信号传导途径研究，已经取得了突破性进展。然而，在过去十年中的研究发现，超过50%恶性胶质瘤中p53发生突变，抗凋亡蛋白如Bcl-2等的过渡表达，从而对以诱导凋亡为手段的疗法产生了抵抗。

随着研究的不断深入，人们认识到电离辐射可以激活多个信号传导通路和基因的表达，其中许多基因和信号通路参与了细胞DNA的损伤、细胞周期改变和细胞凋亡。而细胞的DNA 损伤修复能力及周期调控这两方面是细胞辐射敏感性的主要决定因素。

Cathepsin L是一种普遍存在的溶酶体的半胱氨酸蛋白酶，最初被认为与其它Cathepsins 一起共同参与蛋白的终末降解。近几年的研究发现，在细胞质、细胞核以及细胞外基质均存在Cathepsin L，当细胞在某些化学和物理因素刺激的情况下，Cathepsin L可以转位到细胞质及细胞核，并且可能剪切Bid成为tBid, 通过线粒体途径引起Cyt-c的释放和激活Caspase-3，理论上这一过程能高效率的诱导凋亡途径，然而，结果却是相反的：在高水平的cathepsin L活性下，体内和体外研究均证实cathepsin L具有抗凋亡的作用。

恶性脑胶质瘤细胞高表达Cathepsin L，它的含量可作为恶性脑胶质瘤的可靠标识，而且Cathepsin L还具有水解ECM的成分的能力，降解细胞外基质，促进了恶性脑胶质瘤的局部侵袭性，表明Cathepsin L不但具有抗凋亡作用，而且能促进恶性脑胶质瘤的转移，近几年还有研究证实，Cathepsin L通过对自噬及老化的调节影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，表明Cathepsin L活性已经涉及到恶性肿瘤的各种特征。因此，已有较多实验室开始研究靶向于Cathepsin L的药物，表明该药物分子作为抗肿瘤新药具有很好的前途。

现有技术中，专利号为98810768.6的发明专利公开了一种用作半胱氨酸组织蛋白酶如组织蛋白酶B、K、L和S的抑制剂的N-末端取代二肽腈，这种物质可用于治疗半胱氨酸组织蛋白酶依赖性疾病和病症，包括发炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨质疏松症、肿瘤(特别是肿瘤侵入和肿瘤转移)、冠状疾病、动脉粥样硬化(包括动脉粥样硬化斑块破裂和去稳定作用)。

但是现有技术中未见关于组织蛋白酶L抑制剂具有放疗增敏作用，并且可以用于制备放疗增敏药物的用途。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种组织蛋白酶L抑制剂的新应用，即组织蛋白酶L抑制剂用于制备放疗增敏药物的应用。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：组织蛋白酶L抑制剂在制备放疗增敏药物中的应用。

上述技术方案中，所述放疗增敏药物适用于胶质瘤。

优选的技术方案中，所述组织蛋白酶L抑制剂为Z-苯丙氨酸-叔丁基酪氨酸-二氮甲酮（Z-FY-DMK）、组织蛋白酶siRNA（Cathepsin L siRNA）。

上述技术方案中，Z-苯丙氨酸-叔丁基酪氨酸-二氮甲酮是III型组织蛋白酶L抑制剂(Z-Phe-Tyr(t-Bu)-diazomethylketone，Z-FY-DMK)，分子量为542.6，德国默克公司生产；Z-FY-DMK是一种不可逆转的组织蛋白酶抑制剂，作用于组织蛋白酶L和组织蛋白酶S，对组织蛋白L的抑制作用更为明显。

siRNA (Small interfering RNA)是一种小RNA分子，siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，目的在于从基因水平抑制、下调基因表达。是现有的常规实验技术，已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。优选地，所述组织蛋白酶siRNA选自具有以下序列的siRNA：

SEQ ID No.1：A5’-CACCGCGATGCACAACAGATTATACTTCAAGAGAGTATA ATCTGTTGTGCATCGCTTTTTTG-3’；或者，

SEQ ID No.2：A5’-GATCCAAAAAAGCGATGCACAACAGATTATACTCTCTTGA AGTATAATCTGTTGTGCATCGC-3’。

将上述蛋白酶siRNA序列转染SU-2细胞再挑取单克隆细胞株，筛选出一株Cathesin L低表达的细胞株，命名为SU-2-450。

发明人应用Cathepsin L特异性抑制剂Z-FY-DMK或者Cathepsin L siRNA处理人脑胶质瘤干细胞体外培养体系和裸小鼠原位移植瘤模型，再给予不同剂量的X线照射，发现：

（1）X射线处理胶质细胞后Cathepsin L发生核转位，该作用机制在脑胶质瘤干细胞辐射抗性中的所扮演的角色与细胞周期调控相关；

（2）正常人脑细胞几乎不表达Cathepsin L，而恶性脑胶质瘤细胞高表达Cathepsin L； 

（3）Cathepsin L在细胞凋亡和自噬性死亡中有重要的调节作用，提出Cathepsin L可作为脑胶质瘤辐射增敏的作用靶点，为药物开发提供重要的实验依据。Cathepsin L活性与脑胶质瘤干细胞辐射抗性的机制有关；

（4）Cathepsin L活性与胶质瘤干细胞耐放射的机制有关，在辐射对胶质瘤干细胞DNA损伤修复及周期调控机制中Cathepsin L活性是重要的调节分子，Cathepsin L抑制剂能有效克服肿瘤细胞耐放射现象。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

1．本发明首次证明Cathepsin L活性与胶质瘤干细胞耐放射的机制有关，在辐射对胶质瘤干细胞DNA损伤修复及周期调控机制中Cathepsin L活性是重要的调节分子，Cathepsin L抑制剂能有效克服肿瘤细胞耐放射现象；从而提供实验依据证明 Cathepsin L是放射治疗胶质瘤中一个新的作用靶位，为开发一种新的对辐射敏感的治疗药物提供实验依据。

附图说明

图1为实施例一中X射线处理胶质瘤干细胞后用免疫荧光法观察Cathepsin L的表达情况；

图2为实施例一中Cathepsin L在胶质瘤干细胞中的表达定量检测结果图；

图3为实施例一中X射线处理SU-2细胞的细胞克隆形成曲线；

图4为实施例一中Z-FY-DMK单独处理和X射线，Z-FY-DMK联合处理时SU-2细胞的细胞克隆形成曲线；

图5为实施例一中X射线单独处理组和Z-FY-DMK预处理再联合辐照处理组的细胞克隆形成曲线；

图6为实施例一中X射线单独处理、Z-FY-DMK和X射线联合处理SU-2细胞以及X射线处理SU-2-450细胞的细胞克隆形成曲线；

图7为实施例一中Cathepsin L在组织中的表达结果图；

图8为实施例一中单细胞凝胶电泳法检测SU-2细胞的核酸损伤结果图；

图9为实施例一中流式细胞仪检测细胞周期图；

图10为实施例一中SU-2细胞的p-CHK1蛋白的表达结果图；

图11为实施例一中SU-2细胞的cyclin B1蛋白的表达结果图；

图12为实施例中SU-2细胞的p21蛋白的表达图；

图13为实施例中SU-2注射入裸鼠皮下肿瘤体积变化图；

图14为实施例中MDC染色法检测SU-2细胞和SU-2-450细胞的自噬水平结果图；

图15为实施例中SU-2细胞和SU-2-450细胞的Beclin 1蛋白的表达图；

图16为实施例中电镜技术检测SU-2细胞和SU-2-450细胞的自噬水平结果图。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

实施例一：

（1）建立人脑胶质瘤干细胞体外培养体系和裸小鼠原位移植瘤模型。裸小鼠原位移植瘤模型为实验室常规技术，取对数生长期的胶质瘤干细胞备用，取5周龄裸小鼠麻醉，切开头部皮肤，用骨钻在裸小鼠颅骨上钻孔，用小鼠立体定位仪将裸小鼠固定，用微量注射泵将细胞缓慢注入裸小鼠颅内，细胞量为1×10⁶，缓慢拔出针头，缝合伤口。

（2）免疫荧光法及Western blot观察X射线处理后胶质瘤干细胞Cathepsin L表达的变化： 

免疫荧光法处理步骤：取对数生长期胶质瘤干细胞，接种于6孔细胞培养板中，并给予6Gy X射线处理，另设空白对照组；培养中止后，吸取各组培养基；用-20 ℃预冷的甲醇固定10 min； PBS中洗涤3次，室温吹干；滴加Cathepsin L（1∶200稀释）一抗孵育，4 ℃过夜；PBS中洗涤3次，室温吹干；滴加FITC-DAR二抗避光孵育，室温，1h；PBS中洗涤3次，暗处晾干；滴加荧光封裱液封片；荧光显微镜下观察、摄片。

免疫印迹法处理步骤：取对数生长期胶质瘤干细胞，接种于6孔细胞培养板中，并给予6Gy X射线处理，另设空白对照组；经过药物以及X射线处理后12，24小时收集细胞，用细胞裂解液裂解细胞并提取总蛋白。BCA法测蛋白浓度后，取50μg蛋白样品进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。将电泳后的蛋白转移至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭1小时后加入1：1000 的抗Cathepsin L抗体孵育过夜。次日TBST洗膜后加入荧光二抗，室温摇晃1小时，TBST洗膜3次。摄片，分析结果。所用内参为β-actin。

结果参见图1，图1为X射线处理胶质瘤干细胞后用免疫荧光法观察Cathepsin L的表达情况。胶质瘤干细胞在经过X射线处理后培养一段时间，用抗Cathepsin L的抗体标记细胞并显色。用细胞荧光共聚焦显微镜观察拍摄。放大倍数×400。图2为Cathepsin L在胶质瘤干细胞中的表达定量检测。8Gy的X射线处理胶质瘤干细胞12，24小时之后用免疫印迹法来定量检测Cathepsin L的表达。（与对照组相比P<0.05）

由图1、2可知：细胞在经过X射线处理后，Cathepsin L表达量增多，大量聚集在细胞核内，X射线处理后诱发Cathepsin L明显的核转位。

（3）X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞克隆形成的抑制作用：取对数生长期的胶质瘤干细胞，接种接种于6孔细胞培养板中，每孔细胞为200个，设空白对照组，给药组，X射线组和给药X射线联合组，分为三部分，第一部分选用不同剂量的X射线处理（2，4，6Gy），第二部分选用不同的浓度的Z-FY-DMK处理（1.25，2.5，5，10μmol/L），X射线剂量为6Gy；第三部分Z-FY-DMK预处理选用不同时间点(X射线处理前，提前1，3，6，12小时加入Z-FY-DMK培养细胞)，X射线计量为6Gy；经过X射线处理后培养14天，用浓度为0.5%的结晶紫染色15分钟，对细胞集落计数，统计。

所得结果参见图3～6，图3～6为SU-2细胞克隆形成试验。X射线处理组：将细胞进行X射线辐照处理。Z-FY-DMK组：细胞用Z-FY-DMK处理。X射线加Z-FY-DMK处理组：细胞在X射线处理之提前12小时用Z-FY-DMK处理。图3为X射线处理SU-2细胞的细胞克隆形成曲线，X射线的剂量为2，4，6Gy。图4为Z-FY-DMK单独处理和X射线，Z-FY-DMK联合处理时SU-2细胞的细胞克隆形成曲线，Z-FY-DMK的剂量分别为1.25，2.5，5，10μmol/L。图5为X射线单独处理组和Z-FY-DMK预处理再联合辐照处理组，联合处理组的预处理时间点为1，3，6，12小时。图6为X射线单独处理，剂量为6Gy，Z-FY-DMK和X射线联合处理SU-2细胞以及X射线处理SU-2-450细胞的细胞克隆形成曲线X射线剂量为6Gy。本实验重复三次。

其中，SU-2-450细胞的制备方法为：采用具有以下序列的组织蛋白酶siRNA：

SEQ ID No.1：A5’-CACCGCGATGCACAACAGATTATACTTCAAGAGAGTATAATCTGTTGTGCATCGCTTTTTTG-3’；或者，

SEQ ID No.2：A5’-GATCCAAAAAAGCGATGCACAACAGATTATACTCTCTTGAAGTATAATCTGTTGTGCATCGC-3’；转染SU-2细胞再挑取单克隆细胞株，筛选出一株Cathesin L低表达的细胞株，命名为SU-2-450

由图3～6可知：随着时间的延长，集落形成数逐渐减少，联合处理（IR+Z-FY-DMK）组的细胞克隆形成率与单独加药组相比明显降低，在Cathepsin L低表达的SU-2-450细胞中有同样的结果。

（4）免疫组化法检测人脑胶质瘤内Cathepsin L的表达：将所需组织石蜡包埋后切片（5μm），将组织片置于烘箱，60℃，40分钟。二甲苯浸泡40分钟，再分别置于浓度为100%，95%，85%，75%的乙醇溶液；蒸馏水浸泡3次每次4分钟，再放入PBS 3次每次4分钟；将组织片浸泡入酸性修复液进行抗原修复，100℃水浴，20分钟，冷却后用PBS洗涤；滴加双氧水（4%）37℃，30分钟，PBS洗涤；血清封闭20分钟后滴加Cathepsin L（1∶200稀释）孵育一抗4 ℃过夜；PBS中洗涤，室温吹干；滴加ABC二抗孵育，37℃，1h；PBS中洗涤；滴加DAB染液，37℃，30分钟，PBS中洗涤；滴加苏木素染核，双蒸水洗涤；中性树胶封片，显微镜下观察、摄片。

所得结果参见图7，图7为Cathepsin L在组织中的表达。A图为正常人脑组织；B图为人脑胶质瘤组织；图片为使用抗Cathepsin L的抗体（稀释比例1：200）标记蛋白，用免疫组织化学方法染色。

由图7可知：正常人脑细胞几乎不表达Cathepsin L；而恶性脑胶质瘤细胞高表达Cathepsin L。

（5）单细胞凝胶电泳检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞DNA损伤修复：取对数生长期胶质瘤干细胞，接种于6孔细胞培养板中，并给予6Gy X射线处理，另设空白对照组；经过药物以及X射线处理后1，3小时收集细胞，胰酶消化，吹打成单细胞置4℃备用；提前将预热到50℃的110μL，l％正常熔点琼脂糖(用不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS配制)均匀铺在预热到50℃的干净磨砂载玻片上，4℃放置10分钟；对细胞进行计数，将细胞浓度调为每毫升1×10⁶个，吸取75μL，在37℃下与65μL 0.8％低熔点琼脂糖(用不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS配制)均匀混合，将其均匀铺在正常熔点凝胶上，4℃放置l0分钟；在37℃下，再在其上铺一层0.8%的低熔点琼脂糖，4℃放置l0分钟。将载玻片浸泡在新鲜配制的4℃预冷的细胞裂解液中1.5 小时；吸尽裂解液加入新鲜配制的4℃预冷的碱性电泳液解旋30分钟，然后将载玻片取出并置于盛有碱性电泳液的水平电泳槽中，4℃下电泳(25 V，300 mA)30分钟；中和(0．4 mol/L Tris-HC1，pH值为7.5)l5分钟后，用GelRed（稀释比例1：200）染色5分钟；荧光显微镜镜下观察，摄片。

所得结果参见图8，图8为单细胞凝胶电泳法检测SU-2细胞的核酸损伤。C：对照组；Z-FY-DMK组：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞；6Gy+Z-FY-DMK；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；图片为SU-2细胞经过不同的处理，在1和3小时收集SU-2细胞，用单细胞凝胶电泳法分析核酸损伤。

由图8可知：与对照组和相比，单独加药组细胞在处理3小时之后出现核酸拖尾，单独放射组和联合处理组的细胞在1小时后出现核酸拖尾，联合处理组核酸损伤最为严重。

（6）流式细胞仪检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞周期的变化：取对数生长期胶质瘤干细胞，接种于6孔细胞培养板中，并给予6Gy X射线处理，另设空白对照组；分别与24，48，72小时后收集细胞，用1×Buffer洗涤细胞一次（离心2000rpm，5分钟）加适量Buffer重悬细胞，调整细胞浓度约为1×10⁶/mL；细胞加9倍体积的70%乙醇，于-20℃固定至少12小时；离心收集细胞，用1×Buffer洗涤细胞，重悬于500μL Buffer中，加入RNA酶，终浓度0.25mg/ml，反应30分钟；加入5μL PI染液，轻轻混匀；室温避光放置30分钟；流式细胞仪检测。

所得结果参见图9，图9为流式细胞仪检测细胞周期。Con：对照组；Z-FY-DMK：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞；6Gy+Z-FY-DMK；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；实验重复三次，取平均值（mean）并计算方差（sd），*，与对照组相比p<0.05；**，与对照组相比p<0.01；##，与X射线单独处理组相比p<0.05；###，与X射线单独处理组相比p<0.01。

由图9可知：与阴性对照组相比，单独加药组细胞周期阻滞在G1期，单独放射组细胞周期阻滞在G2期，联合处理组G2期阻滞去除。

（7）Western-blot检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞对p-CHK1蛋白表达水平的变化：处理步骤同免疫印迹法，使用的抗体为抗p-CHK1抗体，稀释比例1：500。

所得结果参见图10，图10为SU-2细胞的p-CHK1蛋白的表达。Con：对照组；Z-FY-DMK：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞；6Gy+Z-FY-DMK；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；实验重复三次，取平均值（mean）并计算方差（sd），*，与对照组相比p<0.05；**，与对照组相比p<0.01。

由图10可知：与阴性对照组相比，单独处理组p-CHK1表达逐渐增高，而联合处理组p-CHK1表达降低且成时间依赖性。

（8） Western-blot检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞对cyclin B1蛋白表达水平的变化：处理步骤同免疫印迹法，使用的抗体为抗cyclin B1抗体，稀释比例1：500。

所得结果参见图11，图11为SU-2细胞的cyclin B1蛋白的表达。Con：对照组；Z-FY-DMK：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞；6Gy+Z-FY-DMK；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；实验重复三次，取平均值（mean）并计算方差（sd），*，与对照组相比p<0.05；**，与对照组相比p<0.01。

由图11可知：与阴性对照组相比，单独放射组cyclin B1表达降低，而联合处理组cyclin B1的表达升高且成时间依赖性。

（9）Western-blot检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞对p21蛋白表达水平的变化：处理步骤同免疫印迹法，使用的抗体为抗P21抗体，稀释比例1：500。

所得结果参见图12，图12为SU-2细胞的p21蛋白的表达。Con：对照组；Z-FY-DMK：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞；6Gy+Z-FY-DMK；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；实验重复三次，取平均值（mean）并计算方差（sd），*，与对照组相比p<0.05；**，与对照组相比p<0.01。

由图12可知：与阴性对照组相比，单独处理组p21表达增加，而联合处理组p21的表达降低且成时间依赖性。

（10）建立人脑胶质瘤干细胞体外培养体系。测量移植瘤的体积并做图。

图13为SU-2注射入裸鼠皮下，测量肿瘤体积。C：对照组；IR：每周X射线处理一次，持续两周；Z-FY-DMK：皮下注射Z-FY-DMK；Z-FY-DMK+IR:皮下注射Z-FY-DMK，每周X射线处理一次，持续两周。

由图13可知，与对照组和单独给药或者单独X射线处理组相比，Z-FY-DMK+IR组的肿瘤增长最慢，抑制率最高。

（11）将SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所述蛋白酶siRNA序列转染SU-2细胞再挑取单克隆细胞株，筛选出一株Cathesin L低表达的细胞株，命名为SU-2-450。

MDC染色法检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞自噬水平的变化：给药及X射线处理后收集细胞，细胞中加入MDC，置于37℃1小时，PBS洗涤，将细胞均匀涂抹于载玻片上，于荧光显微镜下摄片。

图14为MDC染色法检测SU-2细胞和SU-2-450细胞的自噬水平。Con：对照组；Z-FY-DMK：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞； Z-FY-DMK+IR；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；SU-2-450：所用细胞为SU-2-450；SU-2-450+IR：剂量为6Gy的X射线处理SU-2-450。

由图14可知：与阴性对照组相比，Z-FY-DMK+IR组和SU-2-450+IR组自噬小体增加，自噬水平增高。

（12）Western-blot检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞对Beclin 1蛋白表达水平的变化：处理步骤同免疫印迹法，使用的抗体为抗Beclin 1抗体，稀释比例1：500。

图15为SU-2细胞和SU-2-450细胞的Beclin 1蛋白的表达。Con：对照组；Z-FY-DMK：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞； Z-FY-DMK+IR；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；SU-2-450：所用细胞为SU-2-450；SU-2-450+IR：剂量为6Gy的X射线处理SU-2-450。实验重复三次，取平均值（mean）并计算方差（sd），*，与对照组相比p<0.05；**，与对照组相比p<0.01。

由图15可知：与阴性对照组相比，Z-FY-DMK+IR组和SU-2-450+IR组的Beclin 1蛋白表达量明显增加。

（13）电镜技术检测X射线和Z-FY-DMK对胶质瘤干细胞自噬水平的变化：给药及X射线处理后收集细胞，加入2.5%戊二醛固定细胞，送至上海医学院电镜室制备样本，并摄片。

图16为电镜技术检测SU-2细胞和SU-2-450细胞的自噬水平。Con：对照组；Z-FY-DMK：Z-FY-DMK处理细胞；6Gy：剂量为6Gy的X射线处理细胞； Z-FY-DMK+IR；细胞在X射线处理之前提前12小时用Z-FY-DM预处理；SU-2-450：所用细胞为SU-2-450；SU-2-450+IR：剂量为6Gy的X射线处理SU-2-450。

由图16可知：与阴性对照组相比，Z-FY-DMK处理SU-2细胞再辐照处理，自噬小体增加；SU-2-450细胞在X射线处理后，自噬小体也相应增加；Z-FY-DMK+IR组和SU-2-450+IR组的自噬水平增高。

核苷酸和/或氨基酸序列表

 

<110> 苏州大学

<120> 组织蛋白酶L抑制剂在制备放疗增敏药物中的应用

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

 

<210> 1

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工合成

 

<400> 1

caccgcgatg cacaacagat tatacttcaa gagagtataa tctgttgtgc atcgcttttt        60

tg                                                                       62

 

 

<210> 2

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工合成

 

<400> 2

gatccaaaaa agcgatgcac aacagattat actctcttga agtataatct gttgtgcatc        60

gc                                                                       62

Claims (3)

1.组织蛋白酶L抑制剂在制备放疗增敏药物中的应用。

2. 根据权利要求1所述组织蛋白酶L抑制剂在制备放疗增敏药物中的应用，其特征在于，所述组织蛋白酶L抑制剂选自：Z-苯丙氨酸-叔丁基酪氨酸-二氮甲酮或组织蛋白酶siRNA。

3. 根据权利要求2所述组织蛋白酶L抑制剂在制备放疗增敏药物中的应用，其特征在于，所述蛋白酶siRNA选自具有以下序列的siRNA：

SEQ ID No.1：A5’-CACCGCGATGCACAACAGATTATACTTCAAGAGAGTATA ATCTGTTGTGCATCGCTTTTTTG-3’；或者

SEQ ID No.2：A5’-GATCCAAAAAAGCGATGCACAACAGATTATACTCTCTTGA AGTATAATCTGTTGTGCATCGC-3’。

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