CN102384903A - 一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供、一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，其特征在于包含如下步骤：(1)低温保存小球藻的解冻方法；(2)光能转化效率(Fv/Fm)的测定；(3)小球藻的Fv/Fm与存活率之间对应关系的确定；(4)准确测定出低温保存小球藻的存活率。本发明的优点在于：简单、快速、准确，为其他微藻的低温保存存活率测定提供借鉴，经济适用。
Description
技术领域
本发明涉及一种球藻低温保存存活率的测定方法，尤其涉及一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，属于饵料微藻藻低温保存技术领域。
技术背景
微藻饵料在多数水产动物的苗种生产中是必不可少的，更由于其独具的营养全能性，在水体中的分散性和保型性，迄今仍是任何人工饵料无法替代的。在水产动物育苗生产实践中，微藻饵料一般是以鲜藻液投喂的，因此，培养微藻的数量和供饵时间都应和育苗需要密切配合。但是，在育苗期间，由于生物污染和温度等环境条件的限制，微藻的培养往往不能按计划实现，常常满足不了苗种生产的需求，造成饵料供求脱节，直接影响育苗过程，甚至导致育苗失败，给水产养殖业造成极大的损失。所以说，优质微藻饵料的及时供应是水产养殖业发展的关键环节之一。
如何解决饵料供求之间的矛盾，这已是摆在水产养殖育苗生产者和科研工作者面前的一个非常重要而紧迫的研究方向和课题。因此，在适宜条件下大量培养微藻，浓缩后科学地保存，将从根本上解决因饵料培养不稳定对水产经济动物育苗生产的影响。
微藻低温保存过程中，存活率是衡量微藻保存效果的一个重要指标，目前主要的方法有再培养法、荧光染色法，这些方法操作繁琐，实验误差较大，找到一种简单、快速、准确的微藻低温保存存活率的测定方法将对微藻的低温保存做出重要贡献。
发明内容
本发明的目的在于找到一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，为其他微藻的低温保存存活率测定提供借鉴。
本发明的目的是这样来达到的，研制了一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，该检测方法包含如下步骤：
(1)低温保存小球藻的解冻方法：取出低温保存的小球藻，迅速置于37℃恒温水浴中，轻轻振荡，直到最后一个冰晶溶化后取出，将藻细胞全部接种于新鲜的50毫升f/2培养液中，在温度25±1℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24小时；
(2)光能转化效率(Fv/Fm)的测定：用新鲜的f/2培养液将藻细胞稀释40-50倍，在黑暗条件下放置15分钟，用Water-PAM水样叶绿素荧光仪(Walz，Effectnich，Germany)测定Fv/Fm；
(3)小球藻的Fv/Fm与存活率之间对应关系的确定：测定已知存活率小球藻的Fv/Fm，绘制标准曲线找到小球藻的Fv/Fm与存活率之间的对应关系；
(4)准确测定出低温保存小球藻的存活率：结合上述步骤(2)和(3)可以求出保存小球藻的存活率。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻的温度在-80±2℃，保存时间在1-12个月。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后在温度25±1℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24-48小时再测定其Fv/Fm，其存活率在73.1-86.2％。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后一在温度25±1℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24-48小时，其Fv/Fm光能转化效率为0.598-0.681。
本发明的优点在于：简单、快速、准确，为其他微藻的低温保存存活率测定提供借鉴，经济适用。
具体实施例
为能进一步说明该低温保存小球藻的检测方法具体实施例如下；
实施例1：
(1)低温保存小球藻的解冻方法：取出低温保存的小球藻，迅速置于37℃恒温水浴中，轻轻振荡，直到最后一个冰晶溶化后取出，将藻细胞全部接种于新鲜的50毫升f/2培养液中，在温度24℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24小时；
(2)光能转化效率(Fv/Fm)的测定：用新鲜的f/2培养液将藻细胞稀释40倍，在黑暗条件下放置15分钟，用Water-PAM水样叶绿素荧光仪(Walz，Effectnich，Germany)测定Fv/Fm；
(3)小球藻的Fv/Fm与存活率之间对应关系的确定：测定已知存活率小球藻的Fv/Fm，绘制标准曲线找到小球藻的Fv/Fm与存活率之间的对应关系；
(4)准确测定出低温保存小球藻的存活率：结合上述步骤(2)和(3)可以求出保存小球藻的存活率。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻的温度在-80℃，保存时间在2个月。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后在温度24℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24小时再测定其Fv/Fm，其存活率在86.2％。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后一在温度24℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24小时，其Fv/Fm光能转化效率为0.681。
实施例2：
(1)低温保存小球藻的解冻方法：取出低温保存的小球藻，迅速置于37℃恒温水浴中，轻轻振荡，直到最后一个冰晶溶化后取出，将藻细胞全部接种于新鲜的50毫升f/2培养液中，在温度25℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24小时；
(2)光能转化效率(Fv/Fm)的测定：用新鲜的f/2培养液将藻细胞稀释45倍，在黑暗条件下放置15分钟，用Water-PAM水样叶绿素荧光仪(Walz，Effectnich，Germany)测定Fv/Fm；
(3)小球藻的Fv/Fm与存活率之间对应关系的确定：测定已知存活率小球藻的Fv/Fm，绘制标准曲线找到小球藻的Fv/Fm与存活率之间的对应关系；
(4)准确测定出低温保存小球藻的存活率：结合上述步骤(2)和(3)可以求出保存小球藻的存活率。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻的温度在-80±2℃，保存时间在6个月。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后在温度25℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养36小时再测定其Fv/Fm，其存活率在80.8％。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后一在温度25℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养36小时，其Fv/Fm光能转化效率为0.605。
实施例3：
(1)低温保存小球藻的解冻方法：取出低温保存的小球藻，迅速置于37℃恒温水浴中，轻轻振荡，直到最后一个冰晶溶化后取出，将藻细胞全部接种于新鲜的50毫升f/2培养液中，在温度26℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24小时；
(2)光能转化效率(Fv/Fm)的测定：用新鲜的f/2培养液将藻细胞稀释650倍，在黑暗条件下放置15分钟，用Water-PAM水样叶绿素荧光仪(Walz，Effectnich，Germany)测定Fv/Fm；
(3)小球藻的Fv/Fm与存活率之间对应关系的确定：测定已知存活率小球藻的Fv/Fm，绘制标准曲线找到小球藻的Fv/Fm与存活率之间的对应关系；
(4)准确测定出低温保存小球藻的存活率：结合上述步骤(2)和(3)可以求出保存小球藻的存活率。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻的温度在-80±2℃，保存时间在12个月。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后在温度26℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养648小时再测定其Fv/Fm，其存活率在73.16％。
所述小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后一在温度26℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养648小时，其Fv/Fm光能转化效率为0.5986。
本领域的普通技术人员都会理解，在本发明的保护范围内，对于上述实施例进行修改，添加和替换都是可能的，其都没有超出本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)低温保存小球藻的解冻方法：取出低温保存的小球藻，迅速置于37℃恒温水浴中，轻轻振荡，直到最后一个冰晶溶化后取出，将藻细胞全部接种于新鲜的50毫升f/2培养液中，在温度25±1℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24小时；
(2)光能转化效率(Fv/Fm)的测定：用新鲜的f/2培养液将藻细胞稀释40-50倍，在黑暗条件下放置15分钟，用Water-PAM水样叶绿素荧光仪(Walz，Effectnich，Germany)测定Fv/Fm；
(3)小球藻的Fc/Fm与存活率之间对应关系的确定：测定已知存活率小球藻的Fv/Fm，绘制标准曲线找到小球藻的Fv/Fm与存活率之间的对应关系；
(4)准确测定出低温保存小球藻的存活率：结合上述步骤(2)和(3)可以求出保存小球藻的存活率。
2.根据权利要求1所述一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻的温度在-80±2℃，保存时间在1-12个月。
3.根据权利要求1所述一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后在温度25±1℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24-48小时再测定其Fv/Fm，其存活率在73.1-86.2％。
4.根据权利要求1所述一种简单、快速、准确的小球藻低温保存存活率的测定方法，所述的低温保存小球藻解冻后一在温度25±1℃，光照强度50μmol m-2s-1，光照周期12∶12条件下培养24-48小时，其Fv/Fm光能转化效率为0.598-0.681。
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| CN105779293A (zh) * | 2016-05-18 | 2016-07-20 | 中国计量大学 | 一种小球藻的保存方法 |
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| CN102103084A (zh) * | 2009-12-18 | 2011-06-22 | 烟台海岸带可持续发展研究所 | 一种基于叶绿素分析藻类分类和鉴别的仪器和方法 |
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