CN102382873A - 一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法 - Google Patents

一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102382873A
CN102382873A CN201010272538XA CN201010272538A CN102382873A CN 102382873 A CN102382873 A CN 102382873A CN 201010272538X A CN201010272538X A CN 201010272538XA CN 201010272538 A CN201010272538 A CN 201010272538A CN 102382873 A CN102382873 A CN 102382873A
Authority
CN
China
Prior art keywords
frustule
phaeodactylum tricornutum
recombinant plasmid
conversion system
bombardment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201010272538XA
Other languages
English (en)
Inventor
朱葆华
陈常杰
潘克厚
刘冬梅
杨官品
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ocean University of China
Original Assignee
Ocean University of China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ocean University of China filed Critical Ocean University of China
Priority to CN201010272538XA priority Critical patent/CN102382873A/zh
Publication of CN102382873A publication Critical patent/CN102382873A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供一种三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，其特征在于包含如下步骤：(1)GFP基因重组质粒构建，提取重组质粒进行三角褐指藻转化；(2)基因枪转化；(3)荧光显微镜观察。本发明的优点在于：简单，快速，容易实现，经济适用。

Description

一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法
技术领域
本发明涉及一种微藻检测方法，尤其涉及一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法，属于微藻分子生物学技术领域。
技术背景
遗传转化体系的建立是实现外源基因在宿主中表达的基础，也是研究基因功能、进行基因表达调控最直接的平台。在藻类中，莱茵衣藻的转化体系已经相当成熟，是目前唯一建立细胞核、叶绿体和线粒体三套遗传转化的生物材料，许多内源基因的功能通过其转化体系得到直接验证。团藻、小球藻、盐藻等真核微藻也相继转化成功。海洋硅藻由于具有硅质的外壳，常规的转化方法难以奏效，直到1995年才有了转化成功的报道。
三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum Bohlin)是一种真核海洋单细胞硅藻，营养丰富，是多种养殖生物的优良饵料；能够大量合成并积累PUFAs，特别是EPA，其EPA含量可占总脂肪酸含量的30％以上，有望成为工业化生产EPA的原料。另外，三角褐指藻的遗传背景非常清楚，已经获得了其全基因组序列，为进行三角褐指藻遗传转化创造了有利条件，是研究PUFA生物合成及调控机理的理想材料。目前，三角褐指藻转化体系建立需要提取基因组DNA，通过PCR或Southern blotting的方法进行检测，这2种方法操作比较繁琐，不太容易掌握。本发明的目的在于找到一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法，也是对上述2种方法的有益补充。
发明内容
本发明的目的在于找到一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法，该检测方法通过对GFP基因重组质粒构建，基因枪转化，荧光显微镜观察来快速检测三角褐指藻遗传转化体系，也是PCR或Southern blotting方法的有益补充。
本发明的目的是这样来达到的，研制了一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法，该检测方法包含如下步骤：
(1)GFP基因重组质粒构建，提取重组质粒进行三角褐指藻转化；
(2)基因枪转化，将离心收获的藻细胞用新鲜培养基重新悬浮，取约5×107个藻细胞在轰击前1小时涂布于f/2直径约2-2.5cm的固体平板中央，取10μL微粒子弹(包被质粒DNA 1.0μg)于DNA载片中央，无菌风吹干；将平板置于基因枪第二层进行轰击；轰击的藻细胞置于光照下培养24小时后，将藻细胞用500μL新鲜培养基洗下重新涂布于含有100μg·mL-1博莱霉素(Zeocin)的固体培养基上至长出单藻落；
(3)荧光显微镜观察，挑取单藻落于含有100μg·mL-1博莱霉素的新鲜液体培养基中培养7天后用Nikon E50i荧光显微镜观察藻细胞，同一个视野分别在可见光和蓝光下拍照。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的重组质粒构建提取的重组质粒应为一条主带，且为超螺旋的。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的基因枪转化轰击压力为1500psi。
本发明的优点在于：简单，快速，容易实现，经济适用。
具体实施例
为能进一步说明三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法具体实施例如下；
实施例1：
(1)GFP基因重组质粒构建，提取重组质粒进行三角褐指藻转化；
(2)基因枪转化，将离心收获的藻细胞用新鲜培养基重新悬浮，取约5×107个藻细胞在轰击前1小时涂布于f/2直径约2-2.5cm的固体平板中央，取10μL微粒子弹(包被质粒DNA 1.0μg)于DNA载片中央，无菌风吹干；将平板置于基因枪第二层进行轰击；轰击的藻细胞置于光照下培养24-48小时后，将藻细胞用500μL新鲜培养基洗下重新涂布于含有100μg·mL-1博莱霉素(Zeocin)的固体培养基上至长出单藻落；
(3)荧光显微镜观察，挑取单藻落于含有100μg·mL-1博莱霉素的新鲜液体培养基中培养7天后用Nikon E50i荧光显微镜观察藻细胞，同一个视野分别在可见光和蓝光下拍照。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的重组质粒构建提取的重组质粒应为一条主带，且为超螺旋的。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的基因枪转化轰击压力为1500psi。
实施例2：
(1)GFP基因重组质粒构建，提取重组质粒进行三角褐指藻转化；
(2)基因枪转化，将离心收获的藻细胞用新鲜培养基重新悬浮，取约5×107个藻细胞在轰击前1小时涂布于f/2直径约2-2.5cm的固体平板中央，取10μL微粒子弹(包被质粒DNA 1.0μg)于DNA载片中央，无菌风吹干；将平板置于基因枪第二层进行轰击；轰击的藻细胞置于光照下培养36小时后，将藻细胞用500μL新鲜培养基洗下重新涂布于含有100μg·mL-1博莱霉素(Zeocin)的固体培养基上至长出单藻落；
(3)荧光显微镜观察，挑取单藻落于含有100μg·mL-1博莱霉素的新鲜液体培养基中培养7天后用Nikon E50i荧光显微镜观察藻细胞，同一个视野分别在可见光和蓝光下拍照。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的重组质粒构建提取的重组质粒应为一条主带，且为超螺旋的。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的基因枪转化轰击压力为1500psi。
实施例3：
(1)GFP基因重组质粒构建，提取重组质粒进行三角褐指藻转化；
(2)基因枪转化，将离心收获的藻细胞用新鲜培养基重新悬浮，取约5×107个藻细胞在轰击前1小时涂布于f/2直径约2-2.5cm的固体平板中央，取10μL微粒子弹(包被质粒DNA 1.0μg)于DNA载片中央，无菌风吹干；将平板置于基因枪第二层进行轰击；轰击的藻细胞置于光照下培养48小时后，将藻细胞用500μL新鲜培养基洗下重新涂布于含有100μg·mL-1博莱霉素(Zeocin)的固体培养基上至长出单藻落；
(3)荧光显微镜观察，挑取单藻落于含有100μg·mL-1博莱霉素的新鲜液体培养基中培养7天后用Nikon E50i荧光显微镜观察藻细胞，同一个视野分别在可见光和蓝光下拍照。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的重组质粒构建提取的重组质粒应为一条主带，且为超螺旋的。
所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，所述的基因枪转化轰击压力为1500psi。
本领域的普通技术人员都会理解，在本发明的保护范围内，对于上述实施例进行修改，添加和替换都是可能的，其都没有超出本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)GFP基因重组质粒构建，提取重组质粒进行三角褐指藻转化；
(2)基因枪转化，将离心收获的藻细胞用新鲜培养基重新悬浮，取约5×107个藻细胞在轰击前1小时涂布于f/2直径约2-2.5cm的固体平板中央，取10μL微粒子弹(包被质粒DNA 1.0μg)于DNA载片中央，无菌风吹干；将平板置于基因枪第二层进行轰击；轰击的藻细胞置于光照下培养24-48小时后，将藻细胞用500μL新鲜培养基洗下重新涂布于含有100μg·mL-1博莱霉素(Zeocin)的固体培养基上至长出单藻落；
(3)荧光显微镜观察，挑取单藻落于含有100μg·mL-1博莱霉素的新鲜液体培养基中培养7天后用Nikon E50i荧光显微镜观察藻细胞，同一个视野分别在可见光和蓝光下拍照。
2.根据权利要求1所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，其特征在于：所述的重组质粒构建提取的重组质粒应为一条主带，且为超螺旋的。
3.根据权利要求1所述的三角褐指藻遗传转化体系构建的检测方法，其特征在于：所述的基因枪转化轰击压力为1500psi。 
CN201010272538XA 2010-08-25 2010-08-25 一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法 Pending CN102382873A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010272538XA CN102382873A (zh) 2010-08-25 2010-08-25 一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010272538XA CN102382873A (zh) 2010-08-25 2010-08-25 一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102382873A true CN102382873A (zh) 2012-03-21

Family

ID=45822702

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201010272538XA Pending CN102382873A (zh) 2010-08-25 2010-08-25 一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102382873A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102827856A (zh) * 2012-09-06 2012-12-19 中国科学院水生生物研究所 一种用于改良硅藻产油遗传特征的方法
CN105624185A (zh) * 2016-03-10 2016-06-01 广东海洋大学 一种富油新绿藻的遗传转化方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1499957A (zh) * 2001-04-03 2004-05-26 Lvmh����Ⱦ������漯�� 褐指藻提取物促进皮肤细胞的蛋白酶体活性的用途
CN1710060A (zh) * 2004-06-18 2005-12-21 江苏省药用植物生物技术重点实验室 三角褐指藻的一种开放式培养方法及其专用培养基

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1499957A (zh) * 2001-04-03 2004-05-26 Lvmh����Ⱦ������漯�� 褐指藻提取物促进皮肤细胞的蛋白酶体活性的用途
CN1710060A (zh) * 2004-06-18 2005-12-21 江苏省药用植物生物技术重点实验室 三角褐指藻的一种开放式培养方法及其专用培养基

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIOUDMILA A ET AL: "TRANSFORMATION OF THE DIATOM PHAEODACTYLUM TRICORNUTUM(BACILLARIOPHYCEADE) WITH A VARIETY OF SELECTABLE MARKER AND REPORTER GENES", 《J.PHYCOL》, vol. 36, 31 December 2000 (2000-12-31), pages 379 - 386 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102827856A (zh) * 2012-09-06 2012-12-19 中国科学院水生生物研究所 一种用于改良硅藻产油遗传特征的方法
CN105624185A (zh) * 2016-03-10 2016-06-01 广东海洋大学 一种富油新绿藻的遗传转化方法
CN105624185B (zh) * 2016-03-10 2020-03-17 广东海洋大学 一种富油新绿藻的遗传转化方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Medipally et al. Microalgae as sustainable renewable energy feedstock for biofuel production
Mussgnug Genetic tools and techniques for Chlamydomonas reinhardtii
Vandamme et al. Flocculation as a low-cost method for harvesting microalgae for bulk biomass production
CN102036551A (zh) 藻培养物生产、收获和加工
Maheshwari et al. Agrobacterium-mediated stable genetic transformation of Populus angustifolia and Populus balsamifera
Seo et al. Enhanced pyruvate metabolism in plastids by overexpression of putative plastidial pyruvate transporter in Phaeodactylum tricornutum
Seo et al. Enhanced biomass production by Phaeodactylum tricornutum overexpressing phosphoenolpyruvate carboxylase
Jeon et al. Optimization of electroporation-based multiple pulses and further improvement of transformation efficiency using bacterial conditioned medium for Nannochloropsis salina
Muthukrishnan Bio‐engineering of microalgae: Challenges and future prospects toward industrial and environmental applications
Wang et al. Microalgae biofuels: illuminating the path to a sustainable future amidst challenges and opportunities
CN102382873A (zh) 一种三角褐指藻遗传转化体系构建的快速检测方法
US20100257639A1 (en) Methods and compositions for altering sugar beet or root crop storage tissue
WO2016104916A1 (ko) Bass2 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자를 포함하는 식물 종자의 크기 및 종자 내 저장 지방의 함량 증가용 조성물
Bt Md Nasir et al. Genetic improvement and challenges for cultivation of microalgae for biodiesel: a review
Leterme The oil production capacity of diatoms
Zhou et al. Expanding the molecular toolbox for Zygnematophyceae–transient genetic transformation of the desmid Micrasterias radians var. evoluta
Rodrigues Reis et al. The application of microbial consortia in a biorefinery context: Understanding the importance of artificial lichens
CN116024092A (zh) 一株高产蛋白质、遗传转化效率高的蛋白核小球藻良种资源及其应用
CN102690836A (zh) 转基因絮凝微藻的构建及其在微藻采收中的应用
CN103374061B (zh) 一种来源于羊草与抗盐相关的蛋白及其编码基因与应用
Geraldi et al. Application of genetic engineering for increasing biofuel yield from microalgae: A review
CN110656126A (zh) 一种水稻叶鞘原生质体高效转化基因模块和线路的方法
Rai et al. Third-Generation Biofuels from Microalgal Bioresource: Potential Strategy and Current Trends
US20240110196A1 (en) Use of multigene stacking method in synthesis of nervonic acid in brassica napus
EP2441828B1 (en) Algal bio-flocculation by inactivation of photoreceptors

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20120321