CN102373161A - 一种降低海水中汞污染的细菌及其应用 - Google Patents
一种降低海水中汞污染的细菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102373161A CN102373161A CN2010102489090A CN201010248909A CN102373161A CN 102373161 A CN102373161 A CN 102373161A CN 2010102489090 A CN2010102489090 A CN 2010102489090A CN 201010248909 A CN201010248909 A CN 201010248909A CN 102373161 A CN102373161 A CN 102373161A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seawater
- bacterium
- mercury
- mercury pollution
- pollution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及利用环境微生物进行环境治理领域，具体地说是一种降低海水中汞污染的细菌及其应用。降低海水中汞污染的细菌为Pseudomonasputida SP1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏日期为2010年06月01日；编号为CGMCC No.3887。所述降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putida SP1可清除海水环境中的汞。本发明利用菌株SP1清除海水中汞污染具有效率高、营养要求低、操作简单及安全性高等优点，与现有的其他工艺相比，显著降低了海水汞污染治理的成本，提高了海水环境中汞污染治理的效率。
Description
技术领域
本发明涉及利用环境微生物进行环境治理领域，具体地说是一种降低海水中汞污染的细菌及其应用。
背景技术
汞污染是环境中危害最严重的重金属污染物之一。环境中各种形式的汞尤其是甲基汞，如不能及时清除，将会被人类通过食物链摄入，进入人脑和其他部位，导致口齿不清、手脚发抖和神经失常等机体损伤。由于汞污染物不断流向河口和海湾，并富集于沉积物中，因此极易引起海岸带环境的汞污染。
汞虽然对大多数生物具有危害性，但是仍存在能够在较高汞浓度(ppm级)环境中生长繁殖的细菌，这类细菌统称为抗汞细菌。抗汞细菌的筛选始于20世纪60年代，已经陆续得到了2000多株抗汞细菌，包括大肠杆菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属和葡萄球菌属等。抗汞细菌中普遍存在着由mer操纵子所介导的抗汞机制。mer操纵子一般是由merR、merT、merP、merA组成，还有其他非必需基因merB等。Hg(II)通过MerT和MerP构成的结合转运系统进入胞浆中，经MerA将Hg(II)还原为化学性质比较稳定的单质汞，最终通过扩散排出细菌体外，从而降低环境中的Hg(II)浓度。
抗汞细菌通过自身代谢进行汞污染的转化，降低环境中汞化合物的浓度，不会造成环境的二次污染。相关科研人员均认识到了抗汞细菌应用于生物修复的广阔前景。抗汞细菌的生物修复与传统的汞污染修复手段相比，具有高效、安全、费用少和操作简单等优点，因而促使研究人员不断筛选新的抗汞细菌，研究细菌的抗汞机制，并且探索抗汞细菌及抗汞基因应用于生物修复的可行性。德国Wagner-
教授的实验室早在20世纪90年代，就已形成了应用恶臭假单胞菌进行氯碱厂工业废水生物修复的技术雏形，并于2003年发明了多孔惰性载体材料与密闭环境相结合的生物反应器，利用汞在室温下呈现液态且不溶于水的特点，定量回收转化后所形成的单质汞，使大规模应用抗汞细菌清除环境中的汞污染成为可能。在所有抗汞细菌中，恶臭假单胞菌不仅能够转化环境中的汞化合物，而且可降解甲苯、萘和石油等多种有机试剂，加之菌株本身对环境无害，因而在环境污染治理与修复中具有广阔的应用前景。
从包括中国专利在内的有关资料检索表明，从海水环境中分离出抗汞恶臭假单胞菌，以及利用该菌清除海洋环境中的汞污染尚未见到相同或相似报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种降低海水中汞污染的细菌及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种降低海水中汞污染的细菌：降低海水中汞污染的细菌为Pseudomonas putida SP1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏日期为2010年06月01日；编号为CGMCC No.3887。
降低海水中汞污染的细菌的应用：所述降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putida SP1可清除海水环境中的汞。
将培养至对数生长期的降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putidaSP1，加入到汞污染的海水中，于28～30℃摇床中培养，摇床转速为180～200转/分钟，培养24小时，即可清除海水中汞。
所述培养至对数生长期的降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putidaSP1的培养过程：
1)Pseudomonas putida SP1培养：
将-80℃冰箱保存的SP1菌种接种至含有2216E培养基的试管中，于28～30℃摇床中培养，摇床转速为180～200转/分钟，培养过夜；
2)Pseudomonas putida SP1摇瓶发酵：
将上述SP1培养液按体积比为1％的接种量接种在300ml 2216E培养基中，于28～30℃摇床中培养，摇床转速为180～200转/分钟，震荡培养至对数期；培养结束后，13,000rpm离心5min收集菌体即为培养至对数生长期的降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putida SP1菌制剂。
所述2216E培养基质量百分比为：0.5％胰蛋白胨；0.1％酵母浸膏；0.001％磷酸铁；余量为陈海水。
与现有技术相比，本发明的积极效果是：
目前，以细菌代谢途径为中心环节的环境生物修复在重金属富集、有机污染物降解和石油降解中均有应用。本发明涉及利用来源于海洋环境的恶臭假单胞菌SP1高效、简单、安全地进行海水环境中汞污染的清除。考虑到细菌本身有可能带来的生物污染，我们对SP1从LD50和生物膜形成的角度证明了该菌在使用过程中具有较高的安全性，在环境修复中可以直接使用。该菌株能够快速地进行海洋环境中汞污染的清除，对海洋环境的汞污染清除率可达到90％左右。
附图说明
图1为本发明实施例Pseudomonas putida SP1菌生物膜形成状态图。
图2为本发明实施例Pseudomonas putida SP1菌清除海水中汞污染物的数据测定结果图。
具体实施方案
实施例1
对汞化合物具有较高抗性菌株的筛选及菌株的16S rRNA鉴定。
采集烟台海域的底泥，将其涂布在含有5ppm HgCl2的固体培养基中，于28～30℃培养箱中培养36小时，在平板上形成菌落的克隆即为对HgCl2具有抗性的菌落。配制不同浓度的HgCl2溶液，测得该菌对HgCl2抗性的MIC值为80ppm，属于对HgCl2具有较高抗性的细菌。将该菌命名为Pseudomonasputida(SP1)。提取该菌的基因组DNA，利用8F(AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)和1492R(GGTTACCTTGTTACG ACTT)PCR扩增其16S rRNA进行鉴定。PCR的条件为：94℃变性4min，94℃变性30s，57℃退火1min，72℃延伸1min，从第二步开始，30个循环。PCR产物由北京诺赛基因进行测序。
SP1 16S rRNA测序片段为：
TGCAGTCGAGCGGATGAGAAGAGCTTGCTCTTCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCATTAACCTAATACGTTAGTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCAAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGG
该699bp的核苷酸序列在NCBI数据库中的序列比对结果表明，SP1和假单胞菌属的JW60.1a，VS05_36及恶臭假单胞菌KT-q1-116，WXZ-19具有100％的同源性，因此该菌鉴定为恶臭假单胞菌。该基因的accession number为HM217131。降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putida SP1，为革兰氏阴性菌，直或微弯的杆菌，以单极毛或1～2根极生鞭毛运动；菌落为淡黄色，具有光滑的边缘。保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏日期为2010年06月01日；编号为CGMCC No.3887。
实施例2
PCR克隆与SP1抗汞有关的mer操纵子。
SP1具有主动抗汞的特性，说明体内存在与细菌抗汞相关的抗性基因，我们根据已经报道的与细菌抗汞相关基因mer操纵子的序列，设计引物进行SP1的mer操纵子基因的克隆。共设计了3对引物进行PCR。引物F1(TAAGACTGCTGCTGGTAGTGGGTG)/R2(GCGAGCCGCTTAGGGATTGTAT)，PCR的条件为：94℃预变性4min，94℃变性30s，55℃退火1min，72℃延伸3min，从第二步开始，30个循环。引物F2(TGCTGCCTCTGTTTGCTGGACT)/R3(GCCCGATACCGGACTCAAAGG)，PCR条件为：94℃预变性4min，94℃变性30s，57℃退火1min，72℃延伸3min，从第二步开始，30个循环。引物merCF1(CATATGGCAAATCCTCTCAATC)/R4(CCCGATGCACGCCCGGAATCTTCT)，PCR条件为：94℃预变性4min，94℃变性30s，45℃退火1min，72℃延伸2min；5个循环后，改为：94℃变性30s，50℃退火1min，72℃延伸2min。PCR产物由北京诺赛基因进行测序，最后将得到的序列进行拼接。
SP1的mer操纵子调控基因merR和mer操纵子基因(包括merT、merP、merC、merA和orfY)的序列：
merR的基因序列：
ATGAAAAACAATTTGGAAAGCCTGACCATTGGCGCTTTCGCCAAGGCGGCCGGGGTCAACGTGG
AAACCATCCGGTTCTATCAACGCAAGGCGCTGTTACCCGAACCGGACAAGCCCTACGGCAGCAT
TCGCCGTTACGGTGAGGCGGATGTCGCCCGGGTGAAATTCGTTAAATCCGCGCAACGGCTGGGC
TTTAGCCTCGATGAAGTGGCCGGGCTGTTGAGGCTGGATGACGGTGCTCACTGCGATGAAGCGC
GTGTGCTCGCCGAGCAGAAGCTTGGGGATGTGCGTGGCAAGCTCGCGGATCTGCGACGGATCGA
GTCAGTTTTGGAGCAACTGGTTCACGACTGTTGTGCGAGCCACGGGACTGTTTCCTGTCCGCTG
ATCGTTTCGCTGCATGGGGACAACTCGGGCGTTAACCGAGGATTTCCCGTTGCGTAA(441个碱基)
merT的基因序列：
ATGTCTGAACCATCAAACGGGCGCGCCCCTCTTGTCGCCGGGGGGCTTGCGGCGATTCTCGCCT
CGGCTTGCTGCCTGGGGCCGCTGGTTCTGATCGCCCTGGGATTCAGCGGGGCCTGGATCGGTAA
CCTGACCGTGCTGGAACCGTACCGCCCGCTCTTCATCGGCGCGGCACTGGTGGCGCTGTTCTTC
GCCTACCGGCGCATTTTCCGCCCCGCTCAAGCCTGCGCACCGGGCGAGGTCTGCGCCATCCCTC
AGGTACGTACCTCCTACAAGCTGCTGTACTGGCTGGTGGCGGCCTTGGTGCTGGTCGCGCTCGG
CTTCCCCTACATCCTTCCCTTGTTCTACTGA(351个碱基)
merP的基因序列：
ATGAGAAAACTGCTCGCATCCTTAGCCCTCGCCAGCCTGGTCGCCACACCCGTCTGGGCGGCCA
CGCAGACCGTCACCCTGGCGGTGCCGGGCATGACCTGCGCCGCCTGCCCGATTACGGTGAAGAC
GGCGTTGACCAAGGTCGATGGCGTGACCAAGGCTGAGGTGAGTTTCGAGAACCGCGAGGCCATC
GTCACCTTCGACGATACCAAGACCAATGCCCTGGCGCTGACTAAGGCGACCGAGGACGCTGGCT
ATCCGTCCAGCGTCAAGCAATAG(279个碱基)
merC的基因序列：
ATGGCAAATCCTCTCAATCTGTTCACGCGGATCGGTGACAAAGCCGGCTCCGTCGGCGTGCTGA
TTTCTGCCATAGGCTGCGCCATGTGCTTTCCCGCCCTTGCTAGTCTGGGGGCCGCGTTCGGTCT
GGGCTTTTTGAGCCAGTGGGAAGGCCTGTTCATCACCACGCTGCTGCCTCTGTTTGCTGGACTG
GCTCTGCTCGTCAATGCCCTCGGCTGGCTCAATCATCGGCAGTGGCGACGGACTGCGCTCGGCC
TGATCGGTCCTACCCTGGTACTGGCAGCGGTATTTTTTATGCGGGCTTATGGCTGGCGGAGCGG
TTGGCTGCTCTATATCGGCCTGGCCCTCATGTTTGGGGTGTCGATATGGGATCTCGTGTCGCCC
GCTCATCGCCGTTGTGGGCCGGATGCCTGTCCGACGCCGCCAAACCAGTGA(435个碱基)
merA的基因序列：
ATGACCGAACTGAAAATCATTGGTATGACCTGCGCCTCCTGTGTCGTGCATGTGAAAGAGGCCT
TGGAGAAGATTCCGGGCGTGCATCGGGCGGATGTTTCCTACGCCAGCGGGAAGGCCgAACTGAA
GGTCGACGAGGGCGCAAGCCGTGAGCAGATGCAGGCCGCTGTCGAGGCCCTGGGGTATCGAGCG
GCGTTCGAAGACGCCATGGTACAAGCCCGTCCTGGCCTGCTCGATAAGGCACGGGGTTGGTTGA
GCAGCACTGACGCCGGGAAAGAGGGCGACAAGCTCCACGTCGCGGTCATCGGCAGTGGTGGCGC
CGCCATGGCGGCCGCGCTCAAGGCGGTGGAAGGCGGTGCCCGCGTCACCCTGATCGAGCGCGGC
ATCATCGGCGGCACCTGCGTCAACGTGGGCTGCGTGCCCTCCAAGATCATGATTCGTGCCGCGC
ATGTGGCCCATCTGCGCCGCGAGAGCCCGTTCGACGCCGGGCTTTCCGCCATGACGCCGACCGT
CCTACGCGAACGTCTGCTCGCGCAGCAACAAGGCCGTGTCGCCGAACTGCGCCACGCCAAGTAC
GAAGGCATCCTGGAGAGCACGCCGGCGATCAGCGTGCTGCGCGGCACCGCCCGTTTCCAGGACG
GCCACACGCTCAGCGTGAAACTGGCCGAGGGTGGCGAGCACATCGTAGCCTTCGACCGCTGCCT
GGTCGCCACCGGCGCAAGCGCGGCCGTTCCACCGATTCCAGGACTGAAAGACACGCCGTACTGG
ACCTCAGACCAGGCACTGGCGAGCGATACAATCCCTAAGCGGCTCGCCGTGATCGGCGCCTCCG
TAGTGGCAGTGGAACTGGCGCAGGCCTTCGCCCGGCTGGGTAGCGAGGTCACGATCCTGGCACG
CAGTGCGATGTTCTTCCACGAAGACCCGGCCATCGGCGCGGCGGTGACGGAGGCCTTCCGTATG
GAGGGCATCGAAGTGCTGGAGCAAACGCAAGCCAGCCAGGTGTCCCACGCCAACGGCGAGTTCG
TACTGGCCACCAACCATGGTGAGTTACGTGCCGACCAACTGCTCGTCGCCACCGGCCGCACGCC
CAATACCCAGGGCCTGAACCTGGAAGCGGCCGACGTGCAGCTGGACGAGCGCGGCGGCATCCAG
ATCGACGAGCGCATGCGCACCAGCGCAGCGGATATCTATGCGGCCGGCGACTGCACCGACCAAC
CGCAGTTCGTCTACGTCGCGGCAGCGGCTGGCACCCGCGCGGCAATCAACATGACCGGCGGCGA
GGCCAAGCTCAATCTCGACGTCATGCCGGCCGTGGTGTTCACCGATCCGCAAGTGGCCACCGTC
GGCTACAGCGAAGCCGAAGCGCAGCACGCCGGGATCGAAACCGACAGCCGCACCTTGACCCTGG
ACAACGTGCCGCGCGCGTTGGCCAACTTCGACACGCGGGGTTTCATCAAGTTGGTTGCCGAAGC
GGGCTCCGGCCGACTGCTGGGAGTGCAGGCTGTGGCCCCGGAAGCAGGAGAACTGATCCAGACG
GCGGTACTCGCCATCCGCAACCGTATGACCGTGCAGGAATTGGCTGACCAGTTGTTCCCCTACC
TGACGATGGTCGAGGGACTGAAACTCGCCGCACAGACCTTTAACAAAGACGTCAAACAATTGTC
CTGCTGCGCAGGGTAA(1680个碱基)
orfY的基因序列：
ATGAGCAACACGGCAGACGATCTCGGTAGGTGCGACAGCCTACGCAAGACATGGCAGTTGGTCA
GCTTCTGGGGCCTGCCTGCCGTCGTGGCGACGATAGCGATTGTTCTGTCTAATCGACGCCCCGC
GTTGTTCCTGGCAGCAGGCGCCGCGCTGGCCGTGATGGGCGGCGCCTGCCTGGTCAACGCCACG
CGTTGTCGCCGCCTTCACTGCTACATAACGGGGCCTCACTTCCTGTTGCTCGCAGTTGGTGCGC
TATTGGCTTATGTGTTTGACCAAAACGGCGAGCATCTCTCCAGGTTGTGGCTGCTACTGGCTCT
GGGAGCTGCACCGTTGCTCATCTGGCTACCTGAGCGCCTAGCCGGAAGGAAATATCTGAGCGCC
CCAGTTTGCGGTGAAGGTCGGGAGTGTCGGCGATGA(420个碱基)
该核苷酸序列在NCBI数据库中的序列比对结果表明，来自于SP1的mer操纵子与Tn5041操纵子上mer操纵子的同源性达99％。该基因的accessionnumber为HM217134。降低海水中汞污染的细菌为Pseudomonas putida SP1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏日期为2010年06月01日；编号为CGMCC No.3887。
实施例3
SP1对其他重金属及抗生素的抗性。
为了测定SP1对其他重金属和抗生素的抗性，分别使用以下的重金属及抗生素进行测试：CdCl2、CoCl2、CrCl3、CuCl2、PbCl2、ZnSO4和氨苄青霉素(Ap)、卡那霉素(Kn)、氯霉素(Cm)、四环素(Tc)。将SP1在分别含有终浓度为0.1mM、0.5mM、1mM、5mM、10mM重金属和20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、100ug/ml、200ug/ml、300ug/ml、400ug/ml抗生素的2216E培养基中于28～30℃分别培养24小时以后，观察SP1的生长情况，以细菌能够明显生长的最大重金属和抗生素浓度作为重金属和抗生素对SP1的最小抑制浓度。结果见表1，SP1可以在含有较高浓度的重金属和抗生素的环境下生存，说明SP1适应环境的能力较强，能够在多种污染比较严重的海区生存，在环境修复中具有更广的应用。
表1：各种重金属对SP1的最小抑制浓度
| 重金属/抗生素 | 最小抑制浓度(μg/ml) |
| HgCl2 | 80 |
| CdCl2 | 183.36 |
| CoCl2 | 98.92 |
| CrCl3 | 1267.60 |
| CuCl2 | 268.96 |
| PbCl2 | 278.12 |
| ZnSO4 | 161.45 |
| Ap | 200 |
| Kn | 300 |
| Cm | 200 |
| Tc | 40 |
实施例4
SP1对重要海水水产养殖鱼类(大菱鲆和牙鲆)的致病性研究及SP1生物膜形成能力的测定：
在应用微生物进行环境修复的过程中，因为过量的微生物繁殖也会带来二次环境污染，所以我们需要对利用SP1进行海洋环境中汞污染的清除进行安全性评价。本工作主要从两个角度对SP1在环境修复过程中的应用进行安全性评价。
1)SP1对重要水产养殖鱼类大菱鲆和牙鲆的半致死剂量(LD50)。将健康的大菱鲆(牙鲆)分为6组。收集对数期的SP1重新悬浮于灭菌的PBS缓冲液(NaCl，8g/L；KCl，0.2g/L；Na2HPO4·12H2O，3.58g/L；KH2PO4，0.24g/L)中，分别将100μl含有0,5×107，1×108，5×108，1×109和5×109CFU的SP1通过腹腔注射进大菱鲆(牙鲆)的体内，连续观察14天。记录大菱鲆(牙鲆)的死亡条数，通过SPSS计算SP1对两种鱼类的LD50均为1.5×109，说明SP1在海水环境中的使用不会对海水养殖造成威胁，可安全应用于海水环境中汞污染的清除。
2)生物膜和细菌的致病性具有较高的联系，我们也探讨了SP1的生物膜形成随时间变化的情况，以此来反映SP1应用于环境中的安全性。我们以对大菱鲆(牙鲆)具有致病能力的另一种假单胞菌属的细菌TSS作为阳性对照，分别将SP1和TSS接种至96孔板中，接种浓度为1×106，于28～30℃培养箱中培养12小时和24小时；吸掉细菌，PBS冲洗4遍；加入Bouin’S固定液(苦味酸饱和水溶液，75ml；40％甲醛，25ml；冰醋酸，5m1；使用前配置)，室温放置1小时；吸出固定液，加PBS洗涤3遍后，室温晾干；加入结晶紫染色液(A液：结晶紫(crystal violet)，1g；95％酒精，20ml；B液：草酸铵，0.8g；蒸馏水，80ml；混合A、B液配成结晶紫染色液，静置48小时后使用)，室温放置20min；PBS洗涤4次，室温晾干；每孔加入200μl的乙醇溶解20分钟后，在570nm处测定吸光值。以TSS培养12小时后生成的生物膜作为100％，SP1的生物膜生成能力及随时间变化情况见附图1。结果表明，SP1形成生物膜的能力远小于TSS，并且形成的数量不会随时间的增加而增加。所以我们推测，SP1生物膜的形成能够满足其基本的细胞间交流、物质传输等过程，但是不会引起感染性疾病。
实施例5
SP1清除海水中的汞污染
将SP1菌制剂接种至汞污染的海水中(来自烟台排污口海域)，于28～30℃摇床中进行培养，180～200转/分钟旋转培养24小时。收集培养后的上清和菌体。菌体采用等体积的缓冲液B液裂解1小时，13,000rpm离心10分钟。裂解液和上清等体积混合后，采用原子荧光检测其中含有的汞化合物浓度(参见图2)，该数值的2倍即为汞污染海水经过SP1处理以后剩余的汞浓度，即剩余的汞离子为上清中的汞离子和细胞内吸附的汞离子之和，可分别测定，2者相加即为剩余的汞离子。把裂解液和上清等体积先混合，体积扩大了1倍，上清中和细胞内部剩余的汞离子的浓度均变为原来的1/2，乘以2即为是海水中剩余的汞离子浓度，其中以没有加入SP1的海水放置在同样的环境条件中震荡培养24小时，测定得到的汞浓度为海水中原有的汞浓度，即附图中的(海水
汞)。可见，海水中的汞污染经SP1处理后，剩余的汞浓度仅占海水中原有汞浓度的11％，SP1对海水中汞的清除效率可高达到90％。
以海水中含有的汞浓度为C，加入SP1后海水环境的汞浓度为S，通过公式1计算菌SP1对海水中汞化合物的清除效率。
公式1：
序列表
Claims (5)
1.一种降低海水中汞污染的细菌，其特征在于，降低海水中汞污染的细菌为Pseudomonas putida SP1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏日期为2010年06月01日；编号为CGMCC No.3887。
2.一种按权利要求1所述的降低海水中汞污染的细菌的应用，其特征在于：所述降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putida SP1可清除海水环境中的汞。
3.按权利要求2所述的降低海水中汞污染的细菌的应用，其特征在于：将培养至对数生长期的降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putida SP1，加入到汞污染的海水中，于28～30℃摇床中培养，摇床转速为180～200转/分钟，培养24小时，即可清除海水中汞。
4.按权利要求3所述的降低海水中汞污染的细菌的应用，其特征在于：所述培养至对数生长期的降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putidaSP1的培养过程：
1)Pseudomonas putida SP1培养：
将-80℃冰箱保存的SP1菌种接种至含有2216E培养基的试管中，于28～30℃摇床中培养，摇床转速为180～200转/分钟，培养过夜；
2)Pseudomonas putida SP1摇瓶发酵：
将上述SP1培养液按体积比为1％的接种量接种在300ml 2216E培养基中，于28～30℃摇床中培养，摇床转速为180～200转/分钟，震荡培养至对数期；培养结束后，13,000rpm离心5min收集菌体即为培养至对数生长期的降低海水中汞污染的细菌Pseudomonas putida SP1菌制剂。
5.按权利要求3所述的降低海水中汞污染的细菌的应用，其特征在于：所述2216E培养基质量百分比为：0.5％胰蛋白胨；0.1％酵母浸膏；0.001％磷酸铁；余量为陈海水。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010248909 CN102373161B (zh) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | 一种降低海水中汞污染的细菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010248909 CN102373161B (zh) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | 一种降低海水中汞污染的细菌及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102373161A true CN102373161A (zh) | 2012-03-14 |
| CN102373161B CN102373161B (zh) | 2013-08-07 |
Family
ID=45792393
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201010248909 Active CN102373161B (zh) | 2010-08-06 | 2010-08-06 | 一种降低海水中汞污染的细菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102373161B (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104876370A (zh) * | 2015-06-21 | 2015-09-02 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN104876371A (zh) * | 2015-06-22 | 2015-09-02 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105502686A (zh) * | 2016-01-08 | 2016-04-20 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 一种利用大肠杆菌处理水中汞的方法 |
| CN105923785A (zh) * | 2016-05-11 | 2016-09-07 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 利用大肠杆菌在好氧和厌氧条件下净化污水中汞和硒的方法 |
| CN106698672A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-05-24 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种开放海域沉积物污染的修复方法 |
| CN106754473A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-05-31 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种沙福芽孢杆菌及在修复开放海域污染物中的应用 |
| CN107828676A (zh) * | 2017-10-09 | 2018-03-23 | 浙江省海洋水产研究所 | 一种汞污染海水的生物处理方法 |
| CN112093976A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-12-18 | 杭州电子科技大学 | 一种电镀废水的生化处理方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI623499B (zh) * | 2014-01-15 | 2018-05-11 | 國立中山大學 | 汞污染生物整治用製劑及其使用方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1563342A (zh) * | 2004-02-10 | 2005-01-12 | 凌亮 | 用于处理高难度废水的微生物制剂及其制备方法 |
| CN1683518A (zh) * | 2005-01-06 | 2005-10-19 | 福建医科大学 | 高耐汞恶臭假单孢菌株chy－7及其在治理汞污染中的应用 |
| CN1891642A (zh) * | 2005-07-01 | 2007-01-10 | 中国辐射防护研究院 | 利用洋葱假单胞菌处理含汞及二价金属离子污水的方法 |
-
2010
- 2010-08-06 CN CN 201010248909 patent/CN102373161B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1563342A (zh) * | 2004-02-10 | 2005-01-12 | 凌亮 | 用于处理高难度废水的微生物制剂及其制备方法 |
| CN1683518A (zh) * | 2005-01-06 | 2005-10-19 | 福建医科大学 | 高耐汞恶臭假单孢菌株chy－7及其在治理汞污染中的应用 |
| CN1891642A (zh) * | 2005-07-01 | 2007-01-10 | 中国辐射防护研究院 | 利用洋葱假单胞菌处理含汞及二价金属离子污水的方法 |
Cited By (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106082484A (zh) * | 2015-06-21 | 2016-11-09 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105858974B (zh) * | 2015-06-21 | 2019-04-16 | 南京汉尔斯生物科技有限公司 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105858975B (zh) * | 2015-06-21 | 2018-11-30 | 湖南科臣环境科技有限公司 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106082487B (zh) * | 2015-06-21 | 2018-10-23 | 徐州方博环保设备有限公司 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106082528B (zh) * | 2015-06-21 | 2018-10-09 | 泰州市金鹰精密铸造有限公司 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106082485B (zh) * | 2015-06-21 | 2018-10-09 | 泰州市金鹰精密铸造有限公司 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106082484B (zh) * | 2015-06-21 | 2018-09-21 | 浙江富胜达科技有限公司 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN104876370B (zh) * | 2015-06-21 | 2017-02-08 | 顾博钧 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105858975A (zh) * | 2015-06-21 | 2016-08-17 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105858974A (zh) * | 2015-06-21 | 2016-08-17 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN104876370A (zh) * | 2015-06-21 | 2015-09-02 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106082528A (zh) * | 2015-06-21 | 2016-11-09 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106082485A (zh) * | 2015-06-21 | 2016-11-09 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106082487A (zh) * | 2015-06-21 | 2016-11-09 | 朱小明 | 一种处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105923916A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-09-07 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105836981A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-08-10 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105923837A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-09-07 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105923837B (zh) * | 2015-06-22 | 2019-06-11 | 江苏中林环工生态环境科技有限公司 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105923912A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-09-07 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105923914A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-09-07 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN104876371B (zh) * | 2015-06-22 | 2017-01-04 | 刘昱宁 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105836982A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-08-10 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105836980B (zh) * | 2015-06-22 | 2019-05-10 | 河北百汇广联科技服务有限公司 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105923912B (zh) * | 2015-06-22 | 2019-05-07 | 深圳合民生物科技有限公司 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106045197B (zh) * | 2015-06-22 | 2019-05-03 | 广州弗赛生物科技有限公司 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN104876371A (zh) * | 2015-06-22 | 2015-09-02 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105836982B (zh) * | 2015-06-22 | 2018-10-30 | 宁夏锐盛明杰知识产权咨询有限公司 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN106045197A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-10-26 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105836980A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-08-10 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105836983A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-08-10 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105836933A (zh) * | 2015-06-22 | 2016-08-10 | 朱小明 | 处理污水中农药残留和重金属汞的方法 |
| CN105502686A (zh) * | 2016-01-08 | 2016-04-20 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 一种利用大肠杆菌处理水中汞的方法 |
| CN105502686B (zh) * | 2016-01-08 | 2018-01-05 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 一种利用大肠杆菌处理水中汞的方法 |
| CN105923785B (zh) * | 2016-05-11 | 2018-01-05 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 利用大肠杆菌在好氧和厌氧条件下净化污水中汞和硒的方法 |
| CN105923785A (zh) * | 2016-05-11 | 2016-09-07 | 中国科学院新疆生态与地理研究所 | 利用大肠杆菌在好氧和厌氧条件下净化污水中汞和硒的方法 |
| CN106754473A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-05-31 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种沙福芽孢杆菌及在修复开放海域污染物中的应用 |
| CN106698672A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-05-24 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种开放海域沉积物污染的修复方法 |
| CN106698672B (zh) * | 2016-11-24 | 2020-06-09 | 中国科学院烟台海岸带研究所 | 一种开放海域沉积物污染的修复方法 |
| CN107828676A (zh) * | 2017-10-09 | 2018-03-23 | 浙江省海洋水产研究所 | 一种汞污染海水的生物处理方法 |
| CN112093976A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-12-18 | 杭州电子科技大学 | 一种电镀废水的生化处理方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102373161B (zh) | 2013-08-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102373161B (zh) | 一种降低海水中汞污染的细菌及其应用 | |
| Ma et al. | Nitrogen removal by two strains of aerobic denitrification actinomycetes: Denitrification capacity, carbon source metabolic ability, and raw water treatment | |
| De-Bashan et al. | Chlorella sorokiniana UTEX 2805, a heat and intense, sunlight-tolerant microalga with potential for removing ammonium from wastewater | |
| Ruiz-Güereca et al. | Growth and phosphorus removal by Synechococcus elongatus co-immobilized in alginate beads with Azospirillum brasilense | |
| CN111733113B (zh) | 一种cod降解菌种及其应用 | |
| CN106635867B (zh) | 嗜盐芽孢杆菌及其应用 | |
| CN102586160B (zh) | 嗜麦芽寡养单胞菌ds4 | |
| CN103103153B (zh) | 一株具有脱氮除磷效果的厌氧反硝化聚磷菌及其应用 | |
| CN102250783B (zh) | 一种氨氧化菌富集培养的方法 | |
| CN103114062A (zh) | 一株具有脱氮除磷双重能力的反硝化聚磷菌及其应用 | |
| Ma et al. | Cooperation triggers nitrogen removal and algal inhibition by actinomycetes during landscape water treatment: performance and metabolic activity | |
| CN102776140B (zh) | 一株耐冷假单胞菌Den-05及其筛选方法和应用 | |
| Curtis | Bacterial pathogen removal in wastewater treatment plants | |
| CN103045499A (zh) | 产酸克雷伯氏菌mow-02-05及其筛选方法和应用 | |
| CN101348772B (zh) | 水生丛毛单胞菌属菌株及其在废水生物脱氮中的应用 | |
| CN102583780A (zh) | 嗜麦芽寡养单胞菌ds4在降解皂素废水有机污染物中的应用 | |
| CN115491312A (zh) | 一种好氧反硝化菌-小球藻菌藻生物膜的制备方法及应用 | |
| Saleem et al. | Isolation, identification and seasonal distribution of bacteria in Dal Lake, Kashmir | |
| CN105154349B (zh) | 一种异养硝化耐盐菌及其应用 | |
| CN103896469A (zh) | 一种有机污泥降解消减剂的制备方法 | |
| JP5374750B2 (ja) | 難培養性微生物の培養方法 | |
| CN108102943A (zh) | 一种高效脱氮微生物及其应用 | |
| CN104152367B (zh) | 一株异养硝化细菌菌株 | |
| CN109280631A (zh) | 一株磺胺二甲基嘧啶降解菌s-2及其应用 | |
| CN107217016A (zh) | 一株具有抑制水稻纹枯病的内生芽孢杆菌菌株zy122及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |