CN102343089B - 一种治疗乳癌的医药组成物 - Google Patents

一种治疗乳癌的医药组成物 Download PDF

Info

Publication number
CN102343089B
CN102343089B CN201110221199.7A CN201110221199A CN102343089B CN 102343089 B CN102343089 B CN 102343089B CN 201110221199 A CN201110221199 A CN 201110221199A CN 102343089 B CN102343089 B CN 102343089B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
jie
white element
region
white
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201110221199.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102343089A (zh
Inventor
张明熙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yongfu Biotechnology Co.,Ltd.
Original Assignee
张明熙
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 张明熙 filed Critical 张明熙
Publication of CN102343089A publication Critical patent/CN102343089A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102343089B publication Critical patent/CN102343089B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明是有关于一种利用抗介白素-19抗体治疗乳癌的医药组成物，其可单独使用、或与抗介白素-20抗体及/或抗介白素-20R1抗体合并使用。

Description

一种治疗乳癌的医药组成物
技术领域
本发明是关于一种抗介白素-19抗体治疗乳癌的用途。
背景技术
乳癌，如乳腺管癌(ductal carcimona)及小叶性乳癌(lobular carcinoma)系为女性最常见的癌症之一。其中，每八位女性中有一位女性会罹患乳癌。
治疗乳癌的方法包括化学疗法、放射疗法、及手术。早期乳癌的治疗效果良好，但晚期乳癌患者的5年存活率却低于50％。
因此，目前仍需发展一种新颖的乳癌治疗法，以期能于各期癌症中均可展现极高治疗效果。
发明内容
本发明发现对人类介白素-19(IL-19)具有专一性的单株抗体1BB1可有效抑制乳癌细胞增生及乳癌生长，并延长罹患乳癌老鼠的寿命。
因此，本发明的一实施态样提供一种以一有效剂量的抗介白素-19抗体治疗乳癌的医药组成物，其中抗介白素-19抗体可单独使用、或与抗介白素-20抗体或抗介白素-20R1抗体一同使用。于本发明中，“治疗”一词意指采用或投予包含一种或以上活性剂的组成物至主体，且该主体为一个患有乳癌、具乳癌病症、或具有罹患乳癌倾向的主体，以达到治疗、治愈、减轻、舒缓、改变、补救、改善、改进或影响癌症、癌症病症、或癌症倾向的目的。于本发明中，“有效剂量”一词意指投予个体所需的每种活性剂的剂量，不论是单独使用或与其它一种或以上的活性剂共同使用，以达到治疗的效果。有效剂量为本领域技术人员可依据投药方式、使用的赋形剂(excipient)及合并使用(co-usage)其它活性剂的不同而改变有效剂量的多寡。
本发明所使用的抗介白素-19抗体、抗介白素-20抗体、或抗介白素-20R1抗体可为能与介白素-19、介白素-20、或介白素-20R1的天然抗体(naturally-occurring antibody)(如：单株抗体)、其抗原结合片段(antigen-binding fragment)(如F(ab′)2、Fab、或Fv)、或基因工程抗体(genetically engineered antibody)(如：嵌合抗体(chimeric antibody)、人类化单株抗体(humanized antibody)、或单链抗体(single chain antibody))，其可与抗原结合且通过此抗体可阻断讯息传导路径。
抗介白素-19抗体可包含：(1)一包含抗体1BB1的VH中所有互补性决定区(complementarity-determining regions，CDR)的重链变异区(VH)(SEQ IDNO：2)；及(2)一包含抗体1BB1的VL中所有互补性决定区的轻链变异区(VL)(SEQ ID NO：6)。例如，抗介白素-19抗体包含与1BB1相同的VH及VL。
抗介白素-20抗体可包含：(1)一包含抗体7E的VH中所有互补性决定区的重链变异区(VH)(SEQ ID NO：12)；及(2)一包含抗体7E的VL中所有互补性决定区的轻链变异区(VL)(SEQ ID NO：16)。例如，抗介白素-20抗体包含与抗体7E相同的VH及VL。
当上述组成物含有两种抗体时(即，抗介白素-19抗体与抗介白素-20抗体或抗介白素-20R1抗体)，此两种抗体可形成一双专一性复合物(bi-specific complex)。例如，此两种抗体皆为Fab片段，而可形成双专一性抗体。
本发明亦提供：(1)一治疗乳癌的医药组成物，此组成物包含抗介白素-19抗体，且选择性的包含抗介白素-20抗体或抗介白素-20R1抗体；以及(2)此组成物于制造治疗乳癌药物的用途。
本发明的一个或多个实施例细节如以下所述，而其它本发明的特征或优点则以下列附图、多项实施例细节的描述、及申请专利范围加以详述。
附图说明
图1A为以抗介白素-19抗体1BB1抑制乳癌细胞MCF-7增生效果图，其中*代表与OBS控制组比较P＜0.05，#代表与以介白素-19治疗细胞组比较P＜0.05。
图1B为以抗介白素-19抗体1BB1抑制乳癌细胞4T1增生效果图，其中*代表与OBS控制组比较P＜0.05，#代表与以介白素-19治疗细胞组比较P＜0.05。
图2显示1BB1可增加带有乳癌的小鼠存活率的结果图。
图3显示以抗体1BB1抑制小鼠中乳癌细胞生长的结果图。
具体实施方式
本发明提供一种乳癌治疗的医药组成物，其提供抗介白素-19抗体至一所需治疗的主体(即，乳癌患者或具罹患乳癌风险的患者)，且抗介白素-19抗体可单独使用、或与抗介白素-20抗体或抗介白素-21R1抗体一同使用。于本发明中，“抗体”一词意指天然的免疫球蛋白(immunoglobulin)、其抗原结合片段、或本技术领域已知的基因工程抗体。
天然的抗介白素-19抗体、抗介白素-20抗体及抗介白素-21R1抗体的多株抗体或单株抗体，可使用介白素-19蛋白、介白素-20蛋白、介白素-20R1蛋白、或其片段作为一诱发抗原，以公知方法制备。此部分可参见Harlowand Lane，(1988)Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory，New York。此外，“单株抗体”一词意指同源性抗体群(homogeneous antibody population)，而“多株抗体”一词意指异源性抗体群(heterogeneous antibody population)。单株抗体及多株抗体并未限定抗体来源或其制备方法。
介白素-19及介白素-20均为本领域公知的生物激素，而介白素-20R1为介白素-20的受体。人类介白素-19、介白素-20及介白素-20R1可依照下述编号由基因数据库(GenBank)中取得。
人类介白素-19异构体(isoform)1：NP_715639(蛋白质)及NM_153758.1(基因)
人类介白素-19异构体2：NP_037503(蛋白质)及NM_013371.2(基因)
人类介白素-20：NP_061194(蛋白质)及NM_018724(基因)
人类介白素-20R1：NP_055247(蛋白质)及NM_014432.2(mRNA)
制备抗介白素-19抗体、抗介白素-20抗体、或抗介白素-20R1抗体的方法为：蛋白质或其胜肽片段与一如KLH的承载蛋白(carrier protein)结合，再与辅剂混合后，注射入宿主动物体内。其中，动物体内所产生的抗体，可再通入一蛋白质A管柱及/或亲合性管柱进行纯化。一般所使用的宿主通常包括兔子(rabbits)、老鼠(mice)、天竺鼠(guinea pigs)、及大白鼠(rats)。许多辅剂能依据不同宿主提升其免疫反应，包括Freund’s辅剂(完全与不完全)、如氢氧化铝的矿物胶、CpG、如溶血软磷脂(lysolecithin)的表面活性物质、复合多醇(pluronic polyols)、聚阴离子(polyanions)、胜肽(peptides)、油乳剂(oil emulsions)、血氰蛋白(keyhole limpet hemocyanin)与二硝基酚(dinitrophenol)。对人类有效的辅剂则包含卡介苗(Bacille Calmette-Guerin，BCG)及小棒杆菌(Corynebaterium parvum)。
多株抗体出现于免疫个体的血清，而单株抗体则能以标准融合瘤细胞(hybridoma)技术制备(参考Kohler et al.(1975)Nature 256，495；Kohler et al.(1976)Eur.J.Immunol.6，511；Kohler et al.(1976)Eur J Immunol 6，292；以及Hammerling et al.(1981)Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier，N.Y.)。特别是，单株抗体能通过使用连续细胞株于培养基中产生抗体的任何技术所制备，如Kohler等人于1975年在自然杂志256,495及美国专利第4,376,110号中发表的技术；也能通过使用人类B细胞融合瘤细胞技术所制备(Kosbor et al.(1983)Immunol Today 4，72；Cole et al.(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80，2026)；还可通过EBV-融合瘤细胞技术来制备(Coleet al.(1983)Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)。在此，上述抗体可为任何免疫球蛋白抗体，包括IgG、IgM、IgE、IgA、IgD，及其任一亚型。本发明中，该融合瘤细胞所产生的单株抗体能培养于活体或试管中。因单株抗体具有于活体内生产高效价(titer)的能力，故较佳使用单株抗体制备本发明所需的抗体。在获得对介白素-19或介白素-20具有专一性抗体后，即可由本领域中的公知实验，侦测抗体中和(neutralize)介白素-19或介白素-20的能力。
表现于基因改造动物的完整人类抗介白素-19抗体、抗介白素-20抗体、及抗介白素-20R1抗体亦为本发明特征之一，可参考：See，e.g.，Green et al.，Nature Genetics 7：13(1994)、及美国专利第5,545,806与5,569,825号。
天然抗体的抗原结合片段(如F(ab’)2、Fab、或Fv)能使用公知技术来制备。例如，可使用胃液素(pepsin)分解抗体分子而获得F(ab’)2片段，以及可由还原F(ab’)2片段双硫键获得Fab片段。
本发明所使用的抗介白素-19抗体、抗介白素-20抗体、抗介白素-20R1抗体可为基因工程抗体，如人类化单株抗体、嵌合抗体、单链抗体(scFv)或单一模块抗体(a domain antibody)(dAb；参考Ward，et.Al.，1989，Nature，341：544-546)。这类抗体基本上具有与其衍生的天然抗体相同的抗原结合残基/区域，故可保持与天然抗体相同的抗原专一性。
人类化单株抗体包含一人类免疫球蛋白(即，受予抗体(recipientantibody))，其中抗原结合区的蛋白区域/残基(region/residues)(即，互补性决定区，尤其是专一决定性的残基)系被非人类免疫球蛋白(即，赠予抗体(donor antibody))的抗原结合区的蛋白区域/残基所取代。在某些情况下，受予抗体的抗原结合片段中会有一个或多个残基被赠予抗体的片段取代，据此，人类抗体可能包含了受予抗体或赠予抗体的残基。这些所包含残基可进一步提升抗体效力且使抗体效力最佳化。通过本领域公知技术，如重组技术，可制作出人类化抗体。
嵌合抗体为一源自不同物种的不同抗体片段所获得的分子，如变异区(variable region)源自老鼠单株抗体，而保留区(constant region)源自人类免疫球蛋白。并且，可通过公知技术制备嵌合抗体，如参考：Morrison et al.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81，6851；Neuberger et al.(1984)Nature312，604；及Takeda et al.(1984)Nature 314：452所述。
单链抗体则可通过将VH的核酸序列与VL的核酸序列串连，并使用重组技术所制备。较佳为，单链抗体其可折迭的连结片段(flexible linker)包含于两变异区间。或者，可使用单链抗体的制备技术(美国专利第4,946,778及4,704,692号)建立病毒scFv基因库，且对介白素-19具有专一性的scFv克隆(clone)也能以公知技术从基因库中加以鉴定。最后，可再进一步确认正确的克隆其抑制介白素-19或介白素-20的活性。
于实施例中，本发明的抗介白素-19抗体来自单株抗体1BB1(参见Hsing et al.，Cytokine 44：221-228；2008)、其抗原结合片段、或其基因工程功能变异抗体。下列为此单株抗体的重链与轻链的胺基酸序列、以及其编码核酸序列：
重链胺基酸序列：
AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCG CKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVOFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK(SEQ ID NO：1)
斜体区域：单一肽链
粗体区域：变异链(SEQ ID NO：2)
粗体及底线区域：互补性决定区
正常字体区域：序列固定区域
底线区域：枢纽区(hinge region)
重链核酸序列：
GCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCA TATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGGATGTGCTCACCATTACTATGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAATGA(SEQ ID NO：3)
斜体区域：单一肽链编码序列
粗体区域：变异链编码序列(SEQ ID NO：4)
粗体及底线区域：互补性决定区编码序列
正常字体区域：序列固定区域编码序列
底线区域：枢纽区编码序列轻链胺基酸序列：
WTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ ID NO：5)
斜体区域：单一肽链
粗体区域：变异链(SEQ ID NO：6)
粗体及底线区域：互补性决定区
正常字体区域：序列固定区域
底线区域：连接区段(joining segment)
轻链核酸序列：
GCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTTAG(SEQ ID NO：7)
斜体区域：单一肽链编码序列
粗体区域：变异链编码序列(SEQ ID NO：8)
粗体及底线区域：互补性决定区编码序列
正常字体区域：序列固定区域编码序列
底线区域：连接区段编码序列
抗体1BB1可使用公知方式制备，即由如融合瘤细胞株制备(如Hsing etal.，Cytokine44：221-228；2008所述)、化学合成制备、或通过重组技术表现。
1BB1的功能性变异抗体，包含：VH，其与1BB1(SEQ ID NO：4)至少具有75％(80％、85％、90％、或95％)的一致性；及VL，其与1BB1(SEQ ID NO：6)至少具有75％(80％、85％、90％、或95％)的一致性。于本发明中，两胺基酸序列的“同源性百分比”(percent homology)可依照一已知的算法所决定，其中该算法可参考Karlin and Altschul，Proc，Natl.Acad.Sci.USA87：2264-2268，1990所述，并参考Karlin and Altschul，Proc，Natl.Acad.Sci.USA 5873-5877，1993所述的方法加以修饰。此算法便成为NBLAST及XBLAST两程序的演算基础(Altschul et al.，J.Mol.Biol.215：403-410，1990)。BLAST蛋白质搜寻由XBLAST程序在分数(score)为50及字符长度(wordlength)为3的设定条件下所执行，以获得多胜肽样本的同源胺基酸序列。使用在「Altschul et al.，Nucleic Acids Res.25：3389-3402，1997」中揭示的间隔BLAST(gapped BLAST)程序，以比较多条序列的间隔排比(gappedalignments)结果。当使用BLAST及间隔BLAST程序运算时，各程序(例如XBLAST及NBLAST)分别使用其预设参数，详细说明请参考www.ncbi.nih.gov。
1BB1(如，人类化抗体)的功能变异抗体，能由将突变导入1BB1的VH或VL的框架区(frame region，FR)内，以维持完整的互补性决定区(CDR)而获得，特别是导入区域中的专一性决定残基。已知互补性决定区(CDR)与抗体的专一性有关，因此框架区上的突变并不影响抗体的专一性。抗体的互补性决定区(CDR)及框架区(frame region)可由VH及VL胺基酸序列决定，可参考www.bioinf.org.uk/abs。于本发明中，抗体功能结合专一性可由公知技术分析，如酵素免疫分析法(ELISA)、或西方墨点法(western-blot)分析。
另一方面，1BB1的功能变异抗体为一种基因工程抗体，包含与1BB1相同的VH与VL。这类的变异抗体(如：嵌合抗体或单链抗体)可由上述方法制得。
能与抗介白素-19抗体一同使用以治疗乳癌的抗介白素-20抗体可为能中和介白素-20活性的单株抗体7E、或其功能变异区，且由融合瘤细胞株所生产的mAb7E寄存于美国菌种保存中心(American Type CultureCollection，10801University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209，U.S.A.)编号PTA-8687。请参见美国专利第7,435,800号及第20090048432号。此融合瘤细胞株将会在美国专利申请后自行无限制/条件地公开，并且将其保存于美国菌种保存中心(ATCC)，其保存期限自即日起的五年内，而在维持本专利有效性的前提下，其保存期限自寄存当日起算至少三十年。mAb7E的重链与轻链的胺基酸序列/cDNA序列如下：
mAb7E重链的核酸序列(SEQ ID NO：9)及胺基酸序列(SEQ ID NO：10)
atg tac ttg gga ctg aac tat gta ttc ata gtt ttt ctc tta aat
M  Y  L  G  L  N  Y  V  F  I  V  F  L  L  N    15
30
45
60
75
90
105
120
135
gcc aaa acg aca ccc cca tct gtc tat cca
A  K  T  T  P  P  S  V  Y  P                     150
ctg gcc cct gga tct gct gcc caa act aac tcc atg gtg acc ctg
 L     A     P    G     S    A    A     Q     T     N     S  M  V  T  L    165
gga tgc ctg gtc aag ggc tat ttc cct gag cca gtg aca gtg acc
 G     C     L    V     K    G    Y     F     P     E     P  V  T  V  T    180
tgg aac tct gga tcc ctg tcc agc ggt gtg cac acc ttc cca gct
 W     N     S    G     S    L    S     S     G     V     H  T  F  P  A    195
gtc ctg cag tct gac ctc tac act ctg agc agc tca gtg act gtc
 V     L     Q    S     D    L    Y     T     L     S     S  S  V  T  V    210
ccc tcc agc acc tgg ccc agc gag acc gtc acc tgc aac gtt gcc
 P     S     S    T     W    P    S     E     T     V     T  C  N  V  A    225
cac ccg gcc agc agc acc aag gtg gac aag aaa att gtg ccc agg
 H     P     A    S     S    T    K     V     D     K     K  I  V  P  R    240
gat tgt ggt tgt aag cct tgc ata tgt aca gtc cca gaa gta tca
 D     C     G    C     K    P    C     I     C     T     V  P  E  V  S    255
tct gtc ttc atc ttc ccc cca aag ccc aag gat gtg ctc acc an
 S     V     F    I     F    P    P     K     P     K     D  V  L  T  I    270
act ctg act cct aag gtc acg tgt gtt gtg gta gac atc agc aag
  T   L      T   P     K     V     T     C     V     V     V  D  I  S  K    285
gat gat ccc gag gtc cag ttc agc tgg ttt gta gat gat gtg gag
  D   D      P   E     V     Q     F     S     W     F    V   D  D  V  E    300
gtg cac aca gct cag acg caa ccc cgg gag gag cag ttc aac agc
  V   H      T   A     Q     T     Q     P     R     E     E  Q  F  N  S    315
act ttc cgc tca gtc agt gaa ctt ccc atc atg cac cag gac tgg
  T   F      R   S     V     S     E     L     P     I     M  H  Q  D  W    330
ctc aat ggc aag gag ttc aaa tgc agg gtc aac agt gca gct ttc
  L   N      G   K     E     F     K     C     R     V     N  S  A  A  F    345
cct gcc ccc atc gag aaa acc atc tcc aaa acc aaa ggc aga ccg
  P   A      P   I     E     K     T     I     S     K     T  K  G  R  P    360
aag gct cca cag gtg tac acc att cca cct ccc aag gag cag atg
  K   A      P   Q     V     Y     T     I     P     P     P  K  E  Q  M    375
gcc aag gat aaa gtc agt ctg acc tgc atg ata aca gac ttc ttc
  A   K      D   K     V     S     L     T     C     M     I  T  D  F  F    390
cct gaa gac att act gtg gag tgg cag tgg aat ggg cag cca gcg
  P   E      D   I     T     V     E     W     Q     W     N  G  Q  P  A    405
gag aac tac aag aac act cag ccc atc atg gac aca gat ggc tct
  E   N      Y   K     N     T     Q     P     I     M     D  T  D  G  S    420
tac ttc gtc tac agc aag ctc aat gtg cag aag agc aac tgg gag
  Y   F      V   Y     S     K     L     N     V     Q     K  S  N  W  E    435
gca gga aat act ttc acc tgc tct gtg tta cat gag ggc ctg cac
  A   G      N   T     F     T     C     S     V     L     H  E  G  L  H    450
aac cac cat act gag aag agc ctc tcc cac tct cct ggt aaa TGA
  N   H      H   T     E     K     S     L     S     H     S  P  G  K  -    464
粗体字区域表示mAb7E重链的VH(DNA序列SEQ ID NO：11；蛋白质序列SEQ ID NO：12)。
mAb7E轻链的核酸序列(SEQ ID NO：13)及胺基酸序列(SEQ ID NO：14)
atg atg agt cct gcc cag ttc ctg ttt ctg tta gtg ctc tgg att
 M  M  S  P  A  Q  F  L  F  L  L  V  L  W  I    15
cgg gaa acc aac ggt
 R    E     T    N    G30
45
60
75
90
105
120
gctgat
A  D  135
gct gca cca act gta tcc atc ttc cca cca tcc agt gag cag tta
 A     A    P    T     V     S     I    F     P     P   S    S  E  Q  L    150
aca tct gga ggt gcc tca gtc gtg tgc ttc ttg aac aac ttc tac
 T     S    G    G     A     S     V    V     C     F   L    N  N  F  Y    175
aag tgg aag att gat ggc agt gaa cga caa aat ggc gtc ctg aac
 P     K    D    I     N     V     K    W     K     I   D    G  S  E  R    180
agt tgg act gat cag ccc aaa gac atc aat gtc gac agc aaa gac
 Q     N    G    V     L     N     S    W     T     D   Q    D  S  K  D    195
agc acc tac agc atg agc agc acc ctc acg ttg acc aag gac gag
 S     T    Y    S     M     S     S    T     L     T   L    T  K  D  E    210
tat gaa cga cat aac agc tat acc tgt gag gcc act cac aag aca
 Y     E    R    H     N     S     Y    T     C     E   A    T  H  K  T    225
tca act tca ccc att gtc aag agc ttc aac agg aat gag tgt tag
S   T   S   P   I   V   K   S   F   N   R   N   E   C    -239
粗体字区域代表mAb7E轻链的VL(DNA序列SEQ ID NO：15；蛋白质序列SEQ ID NO：16)。
当使用两种抗体治疗乳癌时，此两种抗体可形成一双专一性复合物(即，双专一性抗体)，其包含两种抗原结合区段(即，两重链-轻链对)，其中的一对介白素-19具有专一性，另一则对介白素-20具有专一性。此外，双专一性抗体可使用公知方法制备。
当治疗乳癌时，本发明所述的任一抗介白素-19抗体可与一医药上可接受的载体混合，其中抗介白素-19抗体可单独使用、或与抗介白素-20抗体或抗介白素-20R1抗体一同使用，以形成一医药组成物。“可接受”意指载体须能与该组成物的活性成分兼容(较佳是能稳定活性成分)，且不可在治疗过程中危害个体。适宜的载体可包括微晶质纤维素(microcrystallinecellulose)、甘露糖醇(mannitol)、葡萄糖、脱脂奶粉、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylprrolidone)、及淀粉，或其组合。
上述的医疗组成物可经已知服药管道进行投药，如口服、肠胃外(parentally)、喷剂吸入、局部给予(topically)、直肠、鼻、口颊(buccally)、阴道或植入式药物储槽等传统途径完成投药，以治疗乳癌。其中，所称的经“肠胃外(parenteral)”投药一词可包括经皮下(subcutaneous)、皮内(intracutaneous)、静脉内(intravenous)、肌肉内(intramscular)、关节内(intraarticular)、动脉内(intraarterial)、滑液内(intrasynovial)、胸骨内(intrasternal)、脑脊髓膜内(intrathecal)、脑病灶内(intralesional)、及头盖骨内(intracarnial)的注射或注入方式。
制备含上述抗体的无菌注射型医疗组成物，例如无菌注射型水溶性或脂溶性悬浮液，其调配方法可利用相关技术领域中适宜使用的分散剂(dipersing agent)或润湿剂(wetting agent)(例如Tween 80)以及悬浮剂(suspending agent)。无菌注射型制剂亦可为以无毒性可肠胃外接受的稀释剂或溶剂所制成的无菌注射型溶液或悬浮液，其中，无毒性可肠胃外接受的稀释剂或溶剂的例子可为1，3-丁二醇(1，3-butanediol)。其它能运用的可接受医药载体及溶剂可包括甘露醇(mannitol)、水、林格式剂(Ringer’ssolution)、及等渗透压氯化钠溶液(isotonic sodium chloride solution)。此外，亦可使用无菌或不挥发性(fixed)油类等(例如合成的单或双酸甘油脂(mono-or diglyceride))，作为溶剂或悬浮用介质。若系考虑天然油类，其它如油酸(oleic acid)及其甘油脂衍生物，亦可以用于注射型制剂的制备，而这类脂肪酸制成的制剂其组成相似于天然的医药用可接受性油类，如橄榄油或蓖麻油(castor oil)，特别是此二油类的多氧乙基化(polyoxyethylated)型态。于此，可接受的油类溶液或悬浮液中亦可加入一长链的乙醇稀释剂或悬浮剂，又或加入羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose)或其相似的悬浮剂。至于制剂调配过程亦可添加常用的界面剂，如Tweens、Spans或其相似的乳化剂(emulsifying agent)，又或是普遍使用在药物生产上可接受性固体、液体或其它剂型的生物可利用强化剂(bioavailability enhancer)。
此外，上述的医药组成物尚可通过注射型药剂(inectable depot)的途径投予受试者，如投予一、三或六个月的注射型或生物可分解性质的材料及方法。
本发明所属领域技术人员在不需详述下即能通过上述说明实施本发明，以下实施例仅需以说明内容即能推断，不限于任何形式的揭示。所有本发明引用的出版物皆并入参考文献。
实施例1：抗介白素-19抗体1BB1抑制乳癌细胞增生
人类MCF-7及小鼠4T1乳癌细胞系在含有胎牛血清的培养基中培养16小时。接着，将2×105个MCF-7或4T1细胞种殖并培养于一含有2％FBS的培养基中24小时，其中此培养基含有PBS、人类介白素-19(用于MCF-7细胞，含量为200或400μg/mL)、小鼠介白素-19(用于4T1细胞，含量为200或400μg/mL)、抗体1BB1(8μg/mL)、或介白素-19及抗体1BB1的混合物(1∶10)。而后，将细胞置于一含有3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑氮溴化物(3-(4，5-Dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT)(1mg/ml；Sigma-Aldrich)中培养3小时。将二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)添加至培养机中，并在500nm下测量吸收值。在此，是以FBS(10％)(Sigma-Aldrich)作为正控制组。
如图1所示，人类介白素-19及小鼠介白素-10会分别诱导MCF-7细胞及4T1细胞增生，且呈现剂量依赖性。此外，抗介白素-19抗体1BB1则可成功抑制乳癌细胞增生。
实施例2：以抗体1BB1治疗乳癌
抗介白素-19抗体1BB1对于带有乳癌的小鼠存活效果研究如下所述。将小鼠乳癌细胞4T1于适当条件下培养、收集、并于PBS再悬浮，得到最终浓度为2×105/100μL。先将6周大雌鼠BALB/c给予戊巴比妥(pentobarbital)进行普通麻醉(以小鼠体重的50mg/kg比率给予)，再将4T1细胞(2×105/100μL)以注射器(29gauge，BD Ultra-Fine；Becton Dickinson)，直接注射于6周大雌鼠BALB/c的左心室(left ventricle)。将每只小鼠随机分为三组(n＝6/组)，每一组是以每周三次注射载体(PBS)、控制小鼠抗体(mIgG，10mg/kg)、或抗体1BB1(10mg/kg)。未注射有4T1细胞的小鼠是作为健康控制组。每天测量三组及健康控制组的存活率直到实验终了。
本实施例所得到的结果显示，以抗体1BB1处理的第三组小鼠存活率远高于分别以PBS或mIgG处理的第一组或第二组小数，如图2所示。
此外，亦观察抗体1BB1治疗乳癌肿瘤生长的效果。小鼠癌细胞4T1(2×106细胞)是注射于小鼠的乳腺脂肪护垫(mammary fat pads)，以使肿瘤生长。而后，通过皮下注射，将PBS(控制组)、抗体1BB1(15mg/kg)、或小鼠控制组抗体mIgG(15mg/kg)以每周三次注射至小鼠。于肿瘤细胞注射三十天后，牺牲小鼠且收集并测量肿瘤的重量。
如图3所示，以1BB1处理的小鼠其肿瘤重量远低于以PBS处理或以mIgG处理小鼠的肿瘤重量(P＜0.05)。
其它实施例
本说明书中揭示的所有特征可以任何组合方式合并，且本说明书中所揭示的特征可被相同、相当、或类似目的的另一种特征所取代。因此，除非有其它特别的叙述，否则所揭示的各个特征仅为一般的相当或类似特征的实例。
上述实施例仅为了方便说明而举例而已，本发明所主张的权利范围自应以申请的权利要求范围所述为准，而非仅限于上述实施例。

Claims (1)

1.一种抗-介白素19抗体在制备治疗乳癌药物中的应用，其特征在于，该抗-介白素19抗体为衍伸自单株抗体1BB1的人类化抗体、嵌合抗体或单链抗体。
CN201110221199.7A 2010-08-03 2011-08-03 一种治疗乳癌的医药组成物 Active CN102343089B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/849,377 US8377441B2 (en) 2010-08-03 2010-08-03 Treating breast cancer with anti-IL-19 antibody
US12/849,377 2010-08-03

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102343089A CN102343089A (zh) 2012-02-08
CN102343089B true CN102343089B (zh) 2015-02-11

Family

ID=45542409

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201110221199.7A Active CN102343089B (zh) 2010-08-03 2011-08-03 一种治疗乳癌的医药组成物

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8377441B2 (zh)
EP (1) EP2600896B1 (zh)
CN (1) CN102343089B (zh)
DK (1) DK2600896T3 (zh)
TW (1) TWI435731B (zh)
WO (1) WO2012018877A2 (zh)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2796064A1 (en) 2010-04-16 2011-10-20 National Cheng Kung University Treating disorders associated with il-20 receptor-mediated signaling pathway by blocking il-20 receptor activity
US8535674B2 (en) * 2010-06-15 2013-09-17 National Cheng Kung University Treating breast cancer and inhibiting cancer-associated bone loss with anti-IL-20 antibody
GB201510758D0 (en) 2015-06-18 2015-08-05 Ucb Biopharma Sprl Novel TNFa structure for use in therapy
US9982043B2 (en) 2016-06-03 2018-05-29 National Cheng Kung University Use of IL-20 antagonists for treating pancreatic cancer
GB201621907D0 (en) 2016-12-21 2017-02-01 Ucb Biopharma Sprl And Sanofi Antibody epitope
EP3740503A1 (en) * 2018-01-17 2020-11-25 Eli Lilly and Company Compounds and methods targeting interleukin-19
US20230140976A1 (en) * 2020-03-30 2023-05-11 Oregon Health & Science University Monoclonal antibodies for intracellular delivery of payloads
CN111647081B (zh) * 2020-04-28 2022-06-03 武汉百杰康生物科技有限公司 一种重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体、制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200418876A (en) * 2002-09-14 2004-10-01 Chi Mei Foundation Hospital Methods of modulating inflammation by administration of interleukin-19 and inhibitors of il-19 binding
US7435800B2 (en) * 2003-05-23 2008-10-14 Chi-Mei Medical Center Antibodies to interleukin-20 and method for inhibiting interleukin-20 induced cell proliferation

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO2005087812A1 (en) 2004-03-05 2005-09-22 Ludwig Institute For Cancer Research Multivalent antibody materials and methods for vegf/pdgf family of growth factors
US7611705B2 (en) 2007-06-15 2009-11-03 National Cheng Kung University Anti-IL-20 antibody and its use in treating IL-20 associated inflammatory diseases

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200418876A (en) * 2002-09-14 2004-10-01 Chi Mei Foundation Hospital Methods of modulating inflammation by administration of interleukin-19 and inhibitors of il-19 binding
US7435800B2 (en) * 2003-05-23 2008-10-14 Chi-Mei Medical Center Antibodies to interleukin-20 and method for inhibiting interleukin-20 induced cell proliferation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
The distribution of interleukin-19 in healthy and neoplastic tissue;Chung-Hsi Hsing et al.;《Cytokine》;20081231;第44卷;221–228 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2600896A2 (en) 2013-06-12
EP2600896B1 (en) 2016-04-20
DK2600896T3 (en) 2016-08-15
EP2600896A4 (en) 2014-03-19
WO2012018877A2 (en) 2012-02-09
TW201206474A (en) 2012-02-16
TWI435731B (zh) 2014-05-01
US8377441B2 (en) 2013-02-19
US20120034208A1 (en) 2012-02-09
WO2012018877A9 (en) 2012-05-31
CN102343089A (zh) 2012-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102343089B (zh) 一种治疗乳癌的医药组成物
TWI705827B (zh) 治療眼部疾病之方法
US11253591B2 (en) Combination of lenalidomide and polypeptide construct, and uses thereof
US20210246198A1 (en) Methods of increasing strength and functionality with gdf8 inhibitors
JP2020002174A (ja) 二重特異性ｈｉｖ−１中和抗体
ES2715177T3 (es) Tratamiento de infarto de miocardio usando antagonistas de tgf-beta
US8012478B2 (en) Use of anti-IL-20 antibody for treating stroke
KR20170065662A (ko) 항-il-7r 항체 조성물
JP2019521156A5 (zh)
TWI484975B (zh) 以抗介白素－２０抗體治療口腔癌之醫藥組成物
WO2018007592A1 (en) New dosage regimens for antibody drug conjugates based on anti-axl antibodies
CN101678102A (zh) 人il-18和抗cd20抗体癌症联合治疗
US8535674B2 (en) Treating breast cancer and inhibiting cancer-associated bone loss with anti-IL-20 antibody
KR20210039395A (ko) 마스킹된 항체의 약제학적 제형
KR20220012894A (ko) 전신 경화증의 치료 방법
CA3203788A1 (en) Combination immunotherapy of il-15 and cd40 agonist in cancer treatment
JPWO2020136101A5 (zh)
TW202114734A (zh) Il-17拮抗劑治療自身免疫疾病的方法
TW201206475A (en) Pharmaceutical composition for suprressing bone loss with anti-IL-19 antibody
WO2022195504A1 (en) Method of treating osteoarthritis pain with an anti ngf antibody
RU2023102788A (ru) Лечение гнойного гидраденита с использованием антагонистов il-17
CN109890425A (zh) 包含CFLIP SIRNA的用于治疗或致敏干扰素β抗性癌症疾病的组合物
NZ751584A (en) Antibodies to mica and micb proteins

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210323

Address after: Tainan City, Taiwan, China

Patentee after: Yongfu Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: Tainan City, Taiwan, China

Patentee before: Zhang Mingxi