CN102317424A - 用于处理源自人/动物的移植用组织的清洗组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于去除源自人/动物的移植用组织中的细胞组分的清洗组合物。更具体地，本发明涉及一种用于处理源自人/动物的移植用组织的清洗组合物，其包括作为第一溶蛋白组分的聚氧乙二醇C14-C20烷基醚、作为第一溶脂组分的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作为第二溶蛋白组分的C10-C16烷基糖苷和作为第二溶脂组分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。

Description

用于处理源自人/动物的移植用组织的清洗组合物
技术领域
本发明涉及一种用于去除源自人/动物的移植用组织中的细胞组分的清洗组合物。更具体地，本发明涉及一种用于处理源自人/动物的移植用组织的清洗组合物，其包括作为第一溶蛋白组分(proteinsolubilizing component)的聚氧乙二醇C14-C20烷基醚、作为第一溶脂组分(lipid solubilizing component)的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作为第二溶蛋白组分的C10-C16烷基糖苷和作为第二溶脂组分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
背景技术
由于外伤、感染、肿瘤、退化性疾病、先天性疾病等引起的身体组织一部分受到损坏时，作为一种治疗方法，可进行自体移植。自体移植与同种异体移植相比具有各种优点，但也有如下的一些问题：需要更长的手术时间(30分钟至1小时)，并且在获取自体移植组织和缝合时需要麻醉；在提供组织的区域可能发生疼痛、流血和并发症如感染；可用移植组织的限制；以及组织形状的不规则度。目前，随着医学技术的发展，在许多领域，如骨科、神经外科、整形外科、普通外科、胸外科等对组织移植材料的需求正在不断增加。因此，同种异体移植和异种移植正逐渐代替自体组织移植。
在同种异体组织移植和异种组织移植中，会出现两个固有的问题。一个是传染性疾病或癌症可通过移植材料从供体传播给受体的可能性。另一个是在受体中可由外源蛋白或脂肪细胞引起免疫排斥反应的可能性。
关于传染性疾病的传播，已有致病细菌、真菌、病毒和癌症细胞通过组织移植从供体传播给受体的报道。更具体地，关于受体在同种异体移植后发生细菌感染，在美国已报道：1953年发生过1例，1981年发生过1例，1988年发生过3例，2002年死亡1例，1988至2002年在运动医学中发生过14例，2006年发生过2例。此外，据美国CDC(疾病预防和控制中心)报道，在同种异体移植后，1954年有1例发生乙肝；1992年有1例、1995年有2例、2005年有4例发生丙肝；1988年有1例、1992年有3例发生获得性免疫缺陷综合症(AIDS)；1996年白色念珠菌感染；1974、1981、1987和1991年同种异体移植角膜或硬膜后发生疯牛病(BSE)。如果是同种异体移植，通过严格挑选供体；医学史、社会学史、性史检查；体检、医学记录和供体血清的检查等显著降低了供体的传染。然而，传染性疾病仍然可以传播，因为在常规的供体血清试验中，如果试验是在病毒感染和抗体产生之间的时期即“窗口期”进行，或者病毒是一种新型病毒如严重急性呼吸系统综合症(SARA)冠状病毒或禽流感病毒，就无法检测到病毒。因此，在使用新鲜同种异体移植组织或异种移植组织治疗人类身体的情况下，移植用组织的消毒步骤是必不可少的，这样可预防传染或癌症的传播。
除传染性疾病的传播外，同种异体移植或异种移植后的免疫排斥反应也是有问题的。在组织移植后，在移植的材料中存在的各种细胞组和其它留在骨骼中的材料如胶原、基质、蛋白多糖、连接蛋白、无机矿物质等也参与了免疫排斥反应。它们存在于细胞如骨骼细胞、软骨细胞、纤维细胞、血管细胞、脂肪细胞、神经细胞、干细胞等的膜糖蛋白表面。这些在骨骼中参与免疫排斥反应的细胞中，白细胞、髓细胞、脂肪细胞是不需要改变骨骼的结构和性质就可被去除。这些细胞组与免疫排斥反应有密切关系。因此，为了增加同种异体移植或异种移植后在受体体内的移植率，并且使免疫排斥反应最小化，这些细胞组必须尽可能多地从骨骼中去除。
移植用的组织最初可通过洗涤进行消毒。所述组织可通过物理处理洗涤，例如简单清洗、离心、巴氏消毒或声波等，或通过使用各种溶剂化学处理洗涤，如乙醇、甲醇、氯仿、碘乙酸、过乙酸-乙醇、次氯酸钠、乙二胺、甘油、过氧化氢等。然而，每个方法的功效还未被充分研究和报道。常规的化学处理方法仅使用一种化学药物。目前，已有研究表明使用各种化学药物的组合提高了功效。
当仅使用一种化学药物时，仅洗去一种脂类或蛋白质，或者仅失活感染组织中存在的部分细菌或病毒。因此，通过人们需要恰当地组合洗涤液组分而增加洗涤功效的方法，以通过破坏各种细胞如骨髓细胞、红细胞和白细胞的细胞膜来失活细菌和病毒。
因此，对用于化学处理而使移植的组织引起的细菌、朊病毒感染和已知的直接参与免疫排斥反应的骨髓细胞、白细胞、脂肪细胞等最小化的清洗溶液的需求不断增加。如果使用这种清洗溶液，在同种异体移植或异种移植中，通过使用该溶液处理的组织可降低移植物的感染并改善移植率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种处理移植用组织的新型清洗组合物，其与常规化学处理移植用组织的方法中所使用的清洗组合物相比，在去除细菌或病毒以及去除作为抗原的骨髓细胞、白细胞和脂肪细胞方面更加有效，因此，降低了移植物的免疫排斥反应，并且使生物力学特性或生物学特性的改变最小化。
为实现上述目的，本发明提供一种用于处理移植用组织的清洗组合物，其包括作为第一溶蛋白组分的聚氧乙二醇C14-C20烷基醚、作为第一溶脂组分的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作为第二溶蛋白组分的C10-C16烷基糖苷和作为第二溶脂组分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
附图说明
图1所示为实施例和比较例中的粗脂类提取结果。
图2所示为实施例和比较例中的粗蛋白提取结果。
具体实施方式
以下对本发明进行详细描述。
在本发明的清洗组合物中，如果具有碳原子数低于14或高于20的烷基部分的聚氧乙二醇烷基醚被用作第一溶蛋白组分，那么清洗效果，尤其是去除目标组织中的粗脂类的效果可能会降低。在本发明的清洗组合物中，第一溶蛋白组分优选为聚氧乙二醇C15-C18烷基醚，更优选为聚氧乙二醇十六烷基(即C16烷基)醚，如Brij 58(商标)。
在本发明的清洗组合物中，第一溶脂组分为C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇，优选为C7-C8烷基苯酚聚氧乙基醇，更优选为C8烷基苯酚聚氧乙基醇，如Triton X-100(商标)。
在本发明的清洗组合物中，第二溶蛋白组分为C10-C16烷基糖苷，优选为C11-C14烷基糖苷，更优选为C12烷基糖苷，如正十二烷基-β-D-麦芽糖苷。
在本发明的清洗组合物中，第二溶脂组分为C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇，优选为C9-C10烷基苯氧基聚乙氧基乙醇，更优选为C9烷基苯氧基聚乙氧基乙醇，如Triton N-101(商标)。
根据本发明，用于处理移植用组织的清洗组合物包括作为第一溶蛋白组分的聚氧乙二醇C14-C20烷基醚、作为第一溶脂组分的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作为第二溶蛋白组分的C10-C16烷基糖苷和作为第二溶脂组分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。在上述的组合物中，第一溶蛋白组分∶第一溶脂组分∶第二溶蛋白组分∶第二溶脂组分的重量比优选为1∶0.05～1.5∶0.2～2∶0.05～1.5，更优选为1∶0.2～1.0∶0.5～1.5∶0.2～1.0，更优选为1∶0.4～0.8∶0.8～1.2∶0.4～0.8。如果第一溶蛋白组分∶第一溶脂组分∶第二溶蛋白组分∶第二溶脂组分的含量比超出了上述的范围，清洗效果就会降低。本发明的清洗组合物最优选包含重量比为1.75∶1∶1.75∶1的C16烷基醚、C8烷基苯酚聚氧乙基醇、C12烷基糖苷和C9烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
作为一种处理移植用组织的清洗组合物进行使用，本发明的清洗组合物可进行稀释，如用水稀释，优选用去离子水或蒸馏水。在稀释比例上没有限定。例如，本发明的清洗组合物可稀释10倍至1000倍，但不限于此。
本发明的清洗组合物或含有该清洗组合物的清洗溶液可进一步包括一种或多种杀菌或抗病毒组分，如乙醇、磷酸三正丁酯(TNBP)、脂肪酸酯如硬脂酸聚烃氧(40)酯(商标)等，以增加细菌或病毒的失活功效。乙醇对一些革兰氏阳性菌(结核分枝杆菌、衣原体等)和一些革兰氏阴性菌(耶氏小肠结肠炎杆菌)具有杀菌效果。已知TNBP和脂肪酸酯具有抗病毒功效。这些额外的杀菌或抗病毒组分含量没有特别限定。如果必要的话，它们可在实现本发明目的的范围内适当地进行添加。
根据本发明，可获得与常规化学处理移植用组织的清洗组合物相比，在去除细菌或病毒以及去除作为抗原的骨髓细胞、白细胞和脂肪细胞方面更加有效的处理移植用组织的新型清洗组合物，从而降低移植物的免疫排斥反应，并且使生物力学特性或生物学特性的改变最小化。
接下来，以下述实施例详细阐释本发明。然而，须理解本发明的保护范围不限于这些实施例。
实施例
用蒸馏水将0.35g聚氧乙二醇十六烷基醚(商标：Brij 58)、0.2g4-聚氧乙烯辛烷基苯酚醚(商标：Triton X-100)、0.35g正十二烷基-β-D-麦芽糖苷和0.2g壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(商标：TritonN-101)混合(重量比为1.75∶1∶1.75∶1)制备100mL清洗组合物(10×浓度)。
将10g TNBP(1wt％)和5g硬脂酸聚烃氧(40)酯(0.5wt％)加入到1mL制备的清洗组合物中，再用乙醇溶液稀释获得1000ml乙醇终浓度为10％的处理移植用组织的清洗液。
比较例1～3
作为处理移植用组织的清洗液，制备蒸馏水(比较例1)、生理盐水(比较例2)和溶液A(比较例3)。溶液A根据US 5,977,034的实施例中公开的方法进行制备：将聚乙烯(23)十二醚(商标：Brij 35)、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(商标：Tergitol NP-40)和壬基苯基聚乙二醇醚(商标：Nonoxynol-9)以重量比3.3∶1∶1进行混合。
实验例1
使用猪肱骨(160g)作为实验材料。在相同的条件下(溶液温度：40℃，终体积：4L，50psi)，每个清洗液一式十份进行实验。实验方案如下：
(1)使用刮骨刀和手术刀去除猪肱骨的软组织和软骨。
(2)切割肱骨使得包括肱骨邻近部分的这部分重量是相同的。
(3)将导液口(tapping port)插入到肱骨的骨髓腔中，并将插入口周围用封口膜封住。
(4)在20L的玻璃瓶中制备清洗液。
(5)在导热性很好的容器内将清洗液加热至40℃。
(6)准备反应器。
(7)将加热到40℃的清洗液注入到反应器和清洗瓶中。
(8)将与肱骨骨髓腔相连的导液口通过软管连接到泵的输入口。
(9)肱骨骨髓腔与软管相连，泵的输出软管连接到反应器上。
(10)在50psi的压强下运行泵。
(11)运行泵15分钟，然后停止。
(12)将肱骨从反应器中取出
(13)断开导液口与软管的连接。
(14)泵的输入和输出软管插入到反应器中，再运行泵。
(15)2～3分钟后，输入软管从反应器中移除。
(16)软管中剩下的所有溶液都输入到反应器中。
(17)将反应器中的溶液转移到另一个容器中。
(18)用清洗液清洗反应器表面的提取物，将生成的溶液加入到从反应器中回收的溶液中。
(19)将溶液在40℃的恒温水浴锅中加热以维持反应提取物的脂类的均匀浓度。
(20)加热20～30分钟后，将溶解的反应提取物等分到样品瓶中。
(21)振荡样品瓶进行混合后，从样品瓶中取出分析样品。
(22)将样品瓶和分析样品储存于冰箱中。
通过酸水解法分析冰箱中储存的样品的粗脂类。粗脂类提取物的分析结果如表1所示，并以图表形式示于图1(提取结果为10个样品的平均值)。
表1
  测试项目   实施例   比较例1   比较例2   比较例3
  粗脂类(g/4L)   13.840   1.160   1.067   1.314
从表1中可以看出，实施例提取的粗脂类的量是作为阴性对照的比较例1(蒸馏水)的11.93倍，是作为阴性对照的比较例2(生理盐水)的12.97倍。此外，实施例提取的粗脂类的量是比较例3(溶液A)的10.53倍。
实验例2
使用BCA试剂盒分析冰箱中储存的样品的粗蛋白。粗蛋白提取物的分析结果如表2所示，并以图表形式示于图2(提取结果为10个样品的平均值)。
表2
  测试项目   实施例   比较例1   比较例2   比较例3
  粗蛋白(g/4L)   3.332   1.3   1.451   1.890
从表2中可以看出，实施例提取的粗蛋白的量是作为阴性对照的比较例1(蒸馏水)的2.56倍，是作为阴性对照的比较例2(生理盐水)的2.30倍。此外，实施例提取的粗蛋白的量是比较例3(溶液A)的1.76倍。
从上述的结果中可知，本发明的清洗液与常规的溶液A相比，具有优异的去除细菌、病毒等能力，通过接触组成组分而溶解可潜在地被新的病毒(SARS、禽流感等)感染或在病毒感染检测不到的“窗口期”被感染的细胞如骨髓细胞、白细胞、红细胞和血小板的细胞膜中的蛋白质和脂类得以实现。
因此，当本发明的清洗液用于处理移植用的组织时，由于其优异的粗蛋白和粗脂类提取效果，可将脂类引起的移植组织免疫反应最小化。此外，通过去除骨骼中的细胞尽可能地使免疫排斥反应最小化。

Claims (8)

1.一种用于处理移植用组织的清洗组合物，其包括作为第一溶蛋白组分的聚氧乙二醇C14-C20烷基醚、作为第一溶脂组分的C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇、作为第二溶蛋白组分的C10-C16烷基糖苷和作为第二溶脂组分的C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
2.根据权利要求1所述的清洗组合物，其中所述的第一溶蛋白组分为聚氧乙二醇C16烷基醚。
3.根据权利要求1所述的清洗组合物，其中所述的第一溶脂组分为C8烷基苯酚聚氧乙基醇。
4.根据权利要求1所述的清洗组合物，其中所述的第二溶蛋白组分为C12烷基糖苷。
5.根据权利要求1所述的清洗组合物，其中所述的第二溶脂组分为C9烷基苯氧基聚乙氧基乙醇。
6.根据权利要求1所述的清洗组合物，其中C14-C20烷基醚∶C6-C8烷基苯酚聚氧乙基醇∶C10-C16烷基糖苷∶C9-C12烷基苯氧基聚乙氧基乙醇的重量比为1∶0.05～1.5∶0.2～2∶0.05～1.5。
7.根据权利要求1所述的清洗组合物，其还包括杀菌或抗病毒组分。
8.根据权利要求7所述的清洗组合物，其中所述的杀菌或抗病毒组分为乙醇或脂肪酸酯。
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