CN102316869A - 治疗癌症的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗或预防受治者身体组织中的过增生疾病的方法，所述方法包括下述步骤：a)给需要治疗或预防的受治者施用治疗有效量的药剂，所述药剂诱导身体组织的过增生细胞中的DNA的双链断裂；b)在步骤a)之前、与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述身体组织的过增生细胞过热，从而在所述细胞中诱导BRCA2的降解、抑制和/或失活。

Description

治疗癌症的方法

技术领域

本发明涉及治疗或预防过增生(hyperproliferative)疾病的方法。具体地，本发明涉及用于治疗癌症的化合物和组合物。本发明还涉及用于抑制细胞中同源重组(HR，Homologous Recombination)的方法，杀死细胞的方法，和将已知的抗癌药用于新的治疗应用，尤其涉及用于联合抗癌疗法的药物的生产方法。

背景技术

许多目前使用的抗癌策略是基于通过电离辐射或间接地通过化学药剂诱导的DNA双链断裂(DSB，DNA Double-Strand Break)的细胞毒性。但是，有效的DSB修复机理保护细胞免于受到DSB的遗传毒性效应，降低了治疗的有效性。哺乳动物细胞中有2个主要的DSB修复途径：同源重组(HR)和非同源末端连接(NHEJ，Non-Homologous End Joining)。HR利用完整的同源DNA序列一通常是复制后染色质中的姐妹染色单体一来准确地修补DNA断裂。主要的HR因子包括DNA链交换蛋白RAD51和重组媒质BRCA2、XRCC3和RAD54。NHEJ在整个细胞周期中起作用，且不需要DNA模板。核心NHEJ功能由Ku70/80异质二聚体、DNA-PKCS、DNA LigIV和XRCC4来执行。抑制DSB修复过程增强了诱导的DSB的细胞毒素效应。用于破坏DNA DSB修复途径的方法迅速在抗癌疗法中变得重要。但是，抑制DSB修复途径对正常细胞具有负面效应，所述正常细胞需要克服在代谢活动过程中出现的DSB。因此，需要针对癌细胞的特异性治疗方法。

过热(也称作热疗法或温热疗法)是一种癌症治疗方法，其中将受影响的身体组织暴露于高温(高达45℃或46℃)。研究已经显示，高温可以破坏和杀死癌细胞，通常对未加热的周围正常组织具有极小的损伤。通过杀死癌细胞和破坏细胞内的蛋白和结构，过热可以减小肿瘤体积。另外，已知过热会使癌细胞对其它形式的癌症治疗更敏感，例如放射疗法和化学疗法，并使癌细胞对某些抗癌药敏感。该治疗有益于许多类型的癌症的治疗，包括：肉瘤，黑素瘤，以及头和颈、脑、肺、食道、乳腺、膀胱、直肠、肝、阑尾、子宫颈和腹膜衬(peritoneal lining)(间皮瘤)。对有些热消散特征比正常组织差的的恶性细胞群，推测是由于异常低的血液循环，受到优先的过热治疗。结果，甚至在对两类细胞同时加热时，这样的恶性细胞群的温度经常升高至远高于周围的健康细胞的值。该特征使对具有与正常细胞相当的温度敏感性的恶性肿瘤进行过热治疗成为可能，且也允许采用较短的过热治疗时间，来对热敏感组织中的恶性肿瘤进行治疗。有些恶性赘生物具有相对狭窄的过热处理温度范围。通常认为，在约41.5℃的温度以下，不会对这些恶性肿瘤产生热破坏，甚至可能刺激肿瘤生长。相反，在超过约43-45℃范围的温度，当延长暴露持续时间时，即使正常细胞也会产生热破坏。但是，如果人体的大的或关键的部件被加热到43-45℃的范围内或以上，即使暴露相对较短的持续时间，也可能产生严重的永久性损伤或死亡。因此，需要能够校准过热的治疗剂量，这正是本发明所要实现的目的。

过热是增强各种抗癌疗法的有效性的最古老的临床使用的药剂之一，但是它的确切作用模式仍然不明。因此，在许多实例中过热的最佳治疗条件是未知的。在此背景下，仍然需要以过热为其中一种治疗手段的改进的癌症治疗方法。

发明内容

发明人现在已经发现，通过使哺乳动物细胞处于弱过热(温度升高至约41.0-43.0℃)，可以抑制这些细胞中的HR。通过观察发明人已经发现，在哺乳动物细胞中，过热会导致BRCA2的水平降低。迄今尚未报道过热对BRCA2和/或HR的影响。

已知BRCA2参与DSB的重组修复，且已知该基因中的突变与遗传性乳腺癌的风险的增加有关。另外已知，PARP(聚(ADP-核糖)聚合酶)抑制剂(导致DNA中DSB的诱导的物质)可以有效地杀死这样的BRCA2缺陷型乳腺癌细胞，这是由于其有缺陷的DSB的修复。因此，PARP抑制剂被指示为用于治疗BRCA2缺陷型乳腺癌的药物。因而，尽管本领域非常确定BRCA2和PARP之间的关系，但是先前并未解决与过热的相互作用。

发明人已经发现，过热诱导了哺乳动物细胞中BRCA2的降解或抑制。基于此，预测(且实际上发现)哺乳动物细胞的过热可以用于抑制BRCA2介导的DSB的修复。这使得PARP抑制剂在非BRCA2/BRCA1缺陷型肿瘤类型，即在缺少HR修复缺陷的细胞中，的抗癌治疗中的延伸应用成为可能，因为过热可以使这样的细胞成为HR缺陷型。

本发明提供了治疗癌症的方法，所述方法包括，当同时通过过热诱导BRCA2的降解或抑制和肿瘤细胞中HR的抑制时，给需要这种治疗的受治者施用诱导DNA的DSB的药剂。该方法的优点在于，它可以优化目前可利用的治疗，尤其是关于DSB诱导的过热治疗组分的监测和优化。例如，预见到，由于本发明的结果，可以降低电离辐射治疗的给药剂量。更重要的是，在DSB诱导的药物治疗中，与BRCA2水平的监测相结合的过热可有助于使细胞维持在它们的最敏感状态。

发明人发现，通过同时施用热激蛋白(HSP，Heat Shock Protein)抑制剂，尤其是HSP-90抑制剂，可以显著增强上述结合疗法的效能。已经发现，该具体的实施方案导致杀死多达98％的体外的BRCA2-健全型(proficient)细胞。相比之下，单独的PARP-1抑制剂杀死了40％的细胞，过热和PARP-1抑制剂的结合杀死了76％的细胞。因此，在优选的实施例中，本发明的方法另外包括给所述受治者施用HSP抑制剂的步骤。作为实例，考虑了与过热和PARP-1抑制剂应用相结合的HSP-90抑制剂17-DMAG的应用。因此，PARP-1抑制剂、过热和HSP抑制剂的应用构成了本发明的优选的实施例。

过热细胞致敏机理的发现使得提供几种新的且具有创造性的细胞致死方法成为可能。它们在抗癌治疗中具有重要的实用性。所述细胞致死方法是非常适合的局部细胞致死方法，这表示仅把身体的一部分，优选恶性赘生物或肿瘤，以使效应被限制在肿瘤体积上。

在一个广泛的方面，本发明提供了一种抑制细胞中的HR的方法，所述方法包括，通过过热诱导所述细胞中的BRCA2的降解或抑制。该方法因而使得受到过热的细胞达到使所述细胞中的BRCA2有效地被抑制、降解或失活的水平。在所述细胞中导致的HR不足使细胞对DSB诱导剂产生敏感性。

在另一个方面，本发明提供了一种杀死细胞的方法，优选地杀死需要治疗或预防的受治者的过增生组织细胞群体的方法，所述方法包括给所述受治者施用治疗有效(DSB诱导)量的DSB诱导剂的步骤，所述诱导剂优选地选自诱导已知会被BRCA2辅助的DSB修复途径修复的DSB的药剂，由此诱导所述细胞的DNA中的DSB，所述方法还包括通过过热，诱导所述细胞中HR抑制的步骤。所述步骤可以以任意顺序彼此相继进行，但是在某些实施例中，优选同时进行。

在另一个方面，本发明提供了PARP抑制剂用于制备药物的应用，所述药物用于根据下述治疗方法杀死受治者体内的细胞或肿瘤，或阻止细胞或肿瘤的生长，所述治疗方案包括：(a)给受治者体内的细胞或肿瘤施用治疗有效量的包含PARP抑制剂的药物，(b)在步骤(a)之前、同时或之后，通过过热，诱导受治者体内的所述细胞或肿瘤的HR的抑制。优选地，所述受治者是人。正如指出的，在本发明的方面中要杀死的细胞可以是正常组织细胞，但是优选过增生细胞，例如癌细胞。

在另一个方面，本发明提供了一种杀死细胞的方法，所述方法包括：通过使所述细胞过热抑制所述细胞中的HR，直到BRCA2介导的DNA修复被抑制，并将所述细胞暴露于DSB诱导剂。

在本发明方面的一个优选的实施例中，杀死细胞或肿瘤的方法还包括：将所述细胞暴露于HSP抑制剂，优选HSP-90抑制剂，更优选17-DMAG。

上述杀死细胞的方法优选为治疗癌症的方法的一部分，因此，所述细胞优选为恶性肿瘤细胞。

在本发明的方面中，所述DSB诱导剂优选为PARP抑制剂。合适的PARP抑制剂包括PARP-1和PARP-2抑制剂，包括但不限于：

5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)；

3-甲基-5-AIQ(IC50＝0.23μM)；

3-氨基苯甲酰胺(3-ABA)(EC50＝200[μM)；

5-碘-6-氨基-1，2-苯并吡喃酮(INH2BP)；

3，4-二氢-5[4-(1-哌啶基)丁氧基]-1(2H)-异喹啉(DPQ)(IC50＝40nM)；

1，5-二羟基异喹啉(IQD)(IC50＝390nM)；

(aza)氮杂-5[H]-菲啶-6-酮(氮杂-PHE)；

4-氨基-1，8-萘二甲酰亚胺(4-ANI)(IC50＝180nM)；

8-羟基-2-甲基喹唑啉-4-酮(NU1025)(IC50＝0.40μM)；

N-(6-氧代-5，6-二氢菲啶-2-基)-N，N-二甲基乙酰胺(PJ-34)(EC50＝20nM)；

茚并-异喹啉酮(INO-1001)(Inotek)；

5-氯-2-[3-(4-苯基-3，6-二氢-1(2H)-吡啶基)丙基]-4(3H)-喹唑啉酮(FR247304)；

1-哌嗪乙酰胺，4-[1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-脱氧-β-D-呋喃核糖醛(ribofuranuron)]-N-(2，3-二氢-1H-异吲哚-4-基)-1-酮(EB-47)(IC50＝45nM)；

噻吩并[2，3-c]异喹啉-5-酮(TIQ-A)(IC50＝450nM)；

2-二甲氨基氨甲基-4H-噻吩并[2，3-c]异喹啉-5-酮(DAM-TIQ-A)；

4-羟基喹唑啉；

烟酰胺；

米诺环素(在无细胞试验中，对重组PARP-1的竞争抑制Ki＝13.8nM)；

2-甲基-3，5，7，8-四氢噻喃并[4，3-d]嘧啶-4-酮(DR2313)(PARP-1和PARP-2的IC50分别是200nM和240nM)；

3-(4-氯苯基)喹喔啉-5-羧胺(PARP-2和PARP-1的IC50分别是7nM和33nM)；

苯甲酰胺；

N-(6-氧代-5，6-二氢菲啶-2-基)-2-(N，N-二甲氨基)乙酰胺(PJ34)(Inotek公司)

AG014699(CAS No：459868-92-9)和/或AG14361(辉瑞制药(Pfizer))

2-[(R)-2-甲基吡咯烷-2-基]-1H-苯并咪唑-4-羧胺(ABT-888)(Abbott(雅培公司))

4-[3-(4-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟苄基]-2H-酞嗪-1-酮(奥拉派力伯(Olaparib)；AZD2281；KU-0059436)(阿斯特拉捷利康(AstraZeneca))

BSI-401(CAS No：142404-10-2)和BSI-201(4-碘-3-硝基苯甲酰胺；CASNo：160003-66-7；癌生物治疗(2009年1月(Cancer Biol Ther.2009Jan)；8(1)：2-3)(Bipar)

CEP-8983(WO 01/85686)或它的药物前体(CEP-9722)(Cephalon)

GPI-21016(WO 99/11645)、GPI 16346和GPI 18180、GPI 6150、GPI 18078；GPI 6000(MGI制药公司(MGI Pharma))

2-氨基噻唑类似物(尤其是W.-T.Zhang等，药物化学杂志(J.Med.Chem)，2009，52(3)，第718-725页中的化合物4-6和10)

喹啉-8-羧胺，诸如2-和3-取代的喹啉-8-羧胺，包括2-甲基喹啉-8-羧胺(尤其是如在Lord等，药物化学杂志(J.Med.Chem)，2009，52(3)，第868-877页中所公开的)

2-(1-丙基哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-4-羧胺(A-620223)(雅培(Abbott))。

氨基乙基吡咯并二氢异喹啉酮(尤其是如在Brana等，生物有机化学与医药化学(Bioorg.Medicin.Chem.Lett)，2009Vol.19(15)，4042-4045中所公开的)

咪唑并喹啉酮、咪唑并吡啶和异喹啉二酮衍生物(如在Eltze等，分子药理学(Mol Pharmacol)2008vol.74，61587-1598中所公开的，尤其是2-[4-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-哌啶-1-基]-4，5-二氢-咪唑并[4，5，1-i，j]喹啉-6-酮(BYK49187)、2-(4-吡啶-2-基-苯基)-4，5-二氢-咪唑并[4，5，1-i，j]喹啉-6-酮(BYK236864)、6-氯-8-羟基-2，3-二甲基-咪唑并-[1，2-α]-吡啶(BYK20370)和4-(1-甲基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-4H-异喹啉-1，3-二酮(BYK204165))

E7016(以前称作GPI21016)(卫材(Eisai))

2-[甲氧羰基(4-甲氧苯基)甲硫基]-1H-苯并咪唑-4-羧酸酰胺(KR-33889)

4-甲酰胺基苯并咪唑-2-基吡咯啉和-四氢吡啶氧氮衍生物

N-[3-(4-氧代-3，4-二氢-酞嗪-1-基)苯基]-4-(吗啉-4-基)丁酰胺甲磺酸酯一水合物(ONO)

菲啶酮

4-碘-3-硝基苯甲酰胺

2-(4-羟苯基)-1H-苯并咪唑-4-羧胺

2-芳基-1H-苯并咪唑-4-羧胺，诸如2-苯基苯并咪唑4-羧胺(WO/09524379)

酞嗪-1(2H)-酮

3-取代4-苄基-2H-酞嗪-1-酮及衍生物(尤其是如在Menear等，药物化学杂志(J.Med.Chem)，2008，51(20)，第6581-6591页和Cockcroft等，生物有机化学与医药化学(Bioorg.Medicin.Chem.Lett.)2006 Vol.16(4)，1040-1044中所公开的)

上述物质、及其类似物和衍生物和药学上可接受的盐的组合，可选地与替莫唑胺组合。

许多上述PARP抑制剂，例如可从德国达姆施达特(Darmstadt)的默克集团有限公司(Merck KGaA)的附属公司，即EMD化学品公司(EMD ChemicalsInc)的品牌Calbiochem获得。

在本发明的方面中，以治疗有效量使用PARP抑制剂，该治疗有效量即诱导所述细胞的基因组中的DSB的剂量，当所述细胞受到与过热结合的、或与过热和HSP抑制剂结合的所述抑制剂时，该剂量的PARP抑制剂是细胞毒素，但对其它细胞不必然是细胞毒素，且当HR未被抑制时，不必然是细胞毒素。对于各种PARP抑制剂，剂量存在差异，因为有些抑制剂比其它抑制剂药效强(正如如它们各自的IC50值所证实的)。另外，PARP抑制剂的治疗有效量因受治者而异，取决于受治者的年龄、他们的整体健康状况、待治疗的病症的严重性和给药模式。因此，不可能指定精确的治疗有效量，但是，本领域技术人员通过常规试验和实验能够确定治疗有效量。合适的范围将在下文中描述。

在本发明的方面中，通过过热诱导所述细胞中HR的抑制的步骤包括：使细胞或肿瘤的温度升高到约41.0-43.0℃的温度。本发明的一个方面是，使该高温维持至少一段时间，以在所述细胞中产生BRCA2的抑制、失活或降解或BRCA2介导的DSB修复的抑制。通常，使过热维持5-200min，这取决于施加的精确温度和治疗的细胞或组织的类型。非常合适地，使温度维持41℃约75min。所述过热可以合适地在41-42.5℃，最优选地在41-41.5℃的温度进行。

附图说明

图1表明弱(＜43℃)过热会辐射敏化(radiosensitize)HR-健全型(HR-proficient)细胞，但不是HR缺陷型(HR-deficient)细胞，并且抑制HR修复。a，在37℃(空心符号)或41℃(实心符号)下培养75min、并随后用指定剂量的γ-射线辐照的野生型(正方形)、Rad54^-/-(圆形)和DNA-PKcs^-/-((三角形)小鼠ES细胞的克隆效率。b，在37℃(空心符号)或42.5℃(实心符号)下培养75min、并用指定剂量的γ-射线辐照的用针对萤光素酶(正方形)或XRCC3(圆形)的siRNA转染的HeLa细胞的克隆效率。插图显示了用针对XRCC3的siRNA转染的HeLa细胞中的XRCC3蛋白水平的衰减。通过针对XRCC3的抗体的免疫印迹，分析细胞溶解产物。通过探测ORC2，验证相同的试样加荷。c，在小鼠ES细胞中的HR介导的基因打靶的效率。在存在或不存在100nM 17-DMAG情况下，将细胞在37℃或41℃培养7h。在细胞进入该培养阶段2h时，用hRad54GFP-puro注入(knock-in)靶向构成物来转染细胞。然后在含有嘌呤霉素的培养基中，选择含有整合的构成物的细胞，并通过FACS进行分析。在单个代表性实验中得到的FACS剖面图(左图)显示了GFP阳性细胞的百分比，所述GFP阳性细胞在指定条件下培养后，将靶向构成物整合进mRad54位点中。条形图(右图)显示了从3个独立实验得到的GFP-阳性细胞的相对平均百分比。误差条(bar)表示平均值的标准误差。

图2表明弱过热会干扰HR蛋白的功能和稳定性。a，在37℃或41℃下的预培养细胞中，修复蛋白在DSB位点处的积累的显影。在37℃或41℃培养U2OS细胞60min，然后用靠着细胞放置的放射源发出的α粒子进行辐照，产生DSB的线性阵列，在37℃培养15min，并固定。对细胞染色，DNA(蓝色)、γH2AX或MDC1(红色)，将它们用作通过α粒子和任一种下述蛋白诱导的DSB的标记：MRE11、RPA34、BRCA2或RAD51(绿色)。比例尺-5μm。b，在37℃或41℃培养的细胞中，修复蛋白在DSB位点处的积累量。如果它们含有至少与γH2AX或MDC1IRIF共定位的指定修复蛋白的3个IRIF，则将在(a)中处理和制备的细胞评价为阳性。图代表了阳性细胞的平均百分比。误差条代表从2个独立实验得到的百分比范围。每个实验评价至少50个含有由α粒子诱导的损伤的细胞。c，通过弱过热和/或蛋白酶体抑制剂处理的细胞的免疫印迹。在存在或不存在10μM MG132情况下，将HeLa细胞在37℃或42.5℃培养75min。接着，溶解细胞，并使用针对RAD51(上图)或BRCA2(下图)的抗体，通过免疫印迹分析溶解产物。通过探测GRB2或ORC2，验证相同的试样加荷。d，在从宫颈癌活体检视分离的细胞中DSB位点的RAD51的积累的显影，所述细胞在37℃或41℃预培养60min，然后用位于细胞上方的放射源发出的α粒子进行辐照，在37℃或41℃培养30min，并固定。对细胞染色，DNA(蓝色)、γH2AX(红色)和RAD51(绿色)。比例尺-5μm。

图3表明弱过热会使缺少PARP-1功能性的细胞敏感化。a，b，在不存在(空心符号)或存在(实心符号)100μM NU1025情况下，在41℃中培养指定时间段的U2OS(a)或R1(b)细胞的克隆效率。图表示了平均克隆效率，针对NU1025的毒性进行了校正。误差条代表来自3个独立实验的平均值标准误差。c，受到弱过热的具有降低的PARP-1蛋白水平的细胞的克隆效率。用针对萤光素酶(圆形)或PARP-1(siRNA#1-三角形，siRNA#2-正方形)的siRNA转染HeLa细胞，并在42.5℃培养指定的时间段。误差线代表在单个实验中的平均值的标准误差。图3是3个独立实验的代表。插图显示了siRNA诱导的PARP-1蛋白水平降低的效率。通过使用针对PARP-1的抗体的免疫印迹分析细胞溶解物。通过探测ORC2，验证相同的试样加荷。

图4表明HSP90的抑制增强了过热-诱导的BRCA2的降解和过热-处理的细胞对PARP-1抑制剂和对电离辐射的敏感性。a，受到弱过热和/或HSP90抑制剂的细胞的免疫印迹。已经在存在或不存在100nM 17-DMAG情况下，将BLM细胞在37℃或42.5℃培养60min。接着，溶解细胞，并通过针对BRCA2的抗体的免疫印迹分析溶解产物。通过探测ORC2，验证相同的试样加荷。b，在存在或不存在100μM NU1025和/或100nM 17-DMAG情况下，在41℃培养指定的时间段的R1细胞的克隆效率。误差条代表在2个独立实验中得到的克隆效率的范围。c，在存在或不存在100nM 17-DMAG情况下，在42.5℃或37℃培养75min、随后用指定剂量的γ-射线辐照的HeLa细胞的克隆效率。误差条代表来自3个独立实验的平均值的标准误差。

图5表明弱过热会干扰HR。a，弱过热对自发的和丝裂霉素C-诱导的姐妹染色单体互换的频率的影响。RKO(左图)或SW-1573(右图)细胞在有BrdU存在下，培养2个细胞周期，然后在存在或不存在丝裂霉素C情况下在37℃或41℃培养60min，并处理以得到中期染色体涂片。图中显示了每个评价中期的姐妹染色单体互换(SCE)的平均数。误差条指示从3个独立实验得到的平均值的标准误差。b，弱过热对RAD54-GFP在DSB位点处的积累的影响。在37℃或41℃对注入了表达RAD54-GFP的ES细胞的小鼠培养75min，然后用γ-射线(8Gy，左列)或α-粒子(右列)辐照，并在辐照后固定30min。然后使用共焦显微镜使细胞直接成像(左列)，或对γH2AX和DNA染色并使用宽视野荧光显微镜成像(右列)。比例尺-5μm。c，在37℃或41℃预培养的活细胞中，在通过UVA激光微辐照诱导的DNA损伤的位点处，GFP-RAD51和EGFP-KU80的积累量。在37℃或41℃培养表达GFP-RAD51的V79细胞(左图)和表达EGFP-KU80的XR-V15B细胞(右图)60min，然后将预限定的细胞核区域暴露于UVA光，并成像指定的时间段。图表示了在暴露区域中的荧光的平均增加量为时间的函数。误差线代表在至少10个测量结果的平均值附近的标准差。

图6表明弱过热诱导了BRCA2的降解。a，受到弱过热处理的细胞的免疫印迹。已经将BLM细胞在37℃或42.5℃培养60min。接着，在37℃培养细胞指定的时间段，并溶解。通过使用针对BRCA2的抗体的免疫印迹分析溶解产物(上图)。通过探测ORC2，验证相同的试样加荷(下图)。b，受到弱过热处理的皮肤细胞的免疫印迹。在42.5℃或37℃培养新近分离的人皮肤片段75min，并溶解。通过使用针对BRCA2的抗体的免疫印迹分析溶解产物(上图)。在转移后通过考马斯染色验证相同的试样加荷(下图)。

具体实施方式

定义

在本说明书的上下文中，本文使用的术语“过热”表示一种治疗类型，在这种治疗类型的方法中将身体组织暴露于高温(通常45-46℃)，以破坏和杀死(癌)细胞，或使癌细胞对电离辐射和某些抗癌药的作用更加敏感。“弱过热”是指包含将组织暴露于热源，所述热源导致组织的温度在约41.0-45.0℃之间。一般而言，过热仅包含局部治疗，其中将热施加于小的区域或部位，诸如肿瘤，使用探针引入所述组织仅把能量递送给特定的靶向组织，而基本上不影响周围的非靶向组织。但是，在本发明的方面中，也可以施加区域的(大面积组织，诸如体腔、器官或肢体)或整个身体的过热。使用插入到待治疗的组织中的温度计，可以监测治疗区域的温度。成像技术，诸如计算机断层扫描，可以用于确保探针被适当地放置。为了加热组织，可以使用辐射(例如电磁能辐射)、微波、射频、超声和其它加热组织的方法。可以使用专用仪器来提供过热，例如在美国专利5,412,182中，在金属针管内产生涡流，美国专利6,904,323中使用传递RF能的天线，以及WO 02/45790中使用微波天线。通常，所述装置包含用作微波天线的针状探针。微波从所述探针发射出，以升高癌变的身体组织的温度。一种典型的装置包括探针，所述探针具有针状末梢的尖端，所述尖端尖锐到足以刺穿和插入皮肤、组织和癌变聚簇，诸如肿瘤。对于最有效的治疗，大致穿过待治疗的肿瘤的中心植入探针。但是，也可以把探针放在肿瘤附近，以便可以同时治疗许多癌变的聚块。将用作微波发射器的探针连接到微波发生器上。微波发生器可以可调节的频率，例如1.5GHz，连续地或间歇地产生微波。微波的频率通常是在1-5GHz的范围内。可以选择最佳的工作频率，以实现微波辐射渗入探针周围的组织，从而足够加热特定尺寸的肿瘤。微波发生器可通过市售获得，例如来自日本东京的松下寿电子工业株式会社(Matsushita Electric Industries，Ltd)。可以修改发生器，从而产生足以实现本发明目的所在的更低的功率输出水平。通常，微波发生器会产生15-100瓦的功率，其通过探针发射进入周围的组织，加热该组织。

也可以使用外部途径、腔内或肠腔内方法或间质技术来提供局部过热。外部途径用于治疗在皮肤中或刚好在皮肤下面的肿瘤。将外部施药器放置在适当区域周围或附近，并将能量集中在肿瘤上，以升高它的温度。腔内或肠腔内方法可以用于治疗在体腔内或附近，诸如食管或直肠的肿瘤。将探针放在体腔内，并插入肿瘤中，以直接递送能量和直接加热该区域。在上面详细描述的间质技术用于治疗在体内深处的肿瘤，诸如脑肿瘤。该技术允许将肿瘤加热至比外部治疗技术更高的温度。在麻醉下，将探针或针插入肿瘤中。成像技术，例如超声波，可以用于确保探针被放置在肿瘤内适当位置上。

在本说明书的上下文中，“与过增生细胞分裂有关的病症”指的是特征在于或另外包括相对于正常(健康)参考速率的增强的细胞分裂速率。与过增生细胞分裂相关的病症包括，但不限于：骨髓增生综合征诸如朗格汉斯细胞组织细胞增多症、肥大细胞增多症、混合的骨髓增生和骨髓发育不良症、真皮增生症诸如银屑病、非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病。与过增生细胞分裂有关的病症也包括癌症，良性或恶性的，包括造血恶性癌症。

术语“过增生(hyperproliferation)”和“过增生的(hyperproliferating)”涉及细胞类型的异常生长，其可以是癌性的或良性的。通常，过增生的细胞表现出比该类细胞的正常细胞所表现出的细胞分裂速率高至少约10％的细胞分裂速率。

在本说明书的上下文中，术语“治疗”和“处理”表示任意和所有应用，以补救病症或疾病或其症状、预防病症或疾病或其症状、或无论使用任何方式防止或阻碍或逆转病症或疾病或其它不希望的症状的发展。

在本说明书的上下文中，术语“治疗有效量”在它的含义内包括足以提供希望的治疗效果的活性剂或治疗。精确量随受治者不同而异，取决于受治者的年龄、他们的整体健康、待治疗的病症的严重性和给药模式。因此，不可能指定精确的“治疗有效量”，但是，本领域技术人员通过常规试验和实验能够确定“治疗有效量”。治疗有效量优选地对正常的非肿瘤细胞基本上是非致死的。在BRCA2受到抑制的条件下，治疗有效量具有细胞毒素效应，并就靶向细胞而言代表细胞毒素量。

在本说明书的上下文中，术语“细胞毒素量”被定义为指，一旦细胞毒素药剂或组合药剂到达细胞，则对靶向细胞是有毒的，即基本上致死的细胞毒素药剂的量。通常，通过对细胞生活力的统计上显著的降低来指示毒性。在本发明的上下文中，DSB诱导剂，诸如PARP-1抑制剂的‘细胞毒素量’可以包括对于正常细胞而言无毒的剂量，然而所述剂量仍然会杀死由于过热造成对这些抑制剂更敏感的细胞。因此，诱导过增生细胞的DNA的双链断裂的药剂的细胞毒素量指的是本文关注的在联合抗癌疗法中的治疗有效量。因此，DSB诱导剂的细胞毒素量是对如本文所述的通过过热造成对所述药剂的敏感性的细胞有毒的所述药剂的剂量。

术语“化学治疗剂”表示可以用于治疗癌症或其它以细胞过度增生为特征的病症的化合物。

在本说明书的上下文中，“药学上可接受的盐”包括、但不限于由如下物质形成的物质：醋酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、苯磺酸、柠檬酸、肉桂酸、乙磺酸、富马酸、谷氨酸、戊二酸、葡萄糖酸、盐酸、氢溴酸、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、萘酸、羟萘甲酸、萘磺酸、萘二磺酸、萘丙烯酸、油酸、草酸、草酰乙酸、磷酸、丙酮酸、对甲苯磺酸、酒石酸、三氟醋酸、三苯乙酸、丙三羧酸、水杨酸、硫酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸和琥珀酸。

优选的实施方案

发明人已经发现，弱(41-42.5℃)过热会通过诱导BRCA2的降解和/或失活来抑制DSB修复的HR途径，且通过Hsp90的抑制可以显著增强该效应。有HR缺陷的哺乳动物肿瘤细胞对PARP1的抑制是敏感的。现在已经证实，甚至当所述细胞不是BRCA1或BRCA2缺陷型时，过热也会赋予肿瘤细胞对PARP抑制敏感的完整的HR途径，这使得新的治疗策略的设计成为可能，包括HR缺陷的局部诱导。

在一个方面，本发明涉及一种抑制细胞中的HR的方法，所述方法包括，通过过热诱导所述细胞中BRCA2的降解、失活和/或抑制。

根据本发明的抑制HR的方法包括：使细胞过热至BRCA2基本上完全降解、抑制或失活的程度，或至少达到细胞中的BRCA2的水平基本上降低的程度。在治疗的实施应用中，选择过热的确切温度，以便找到在通过所述靶向细胞中BRCA2的降解、抑制或失活实现的HR抑制的水平，和热治疗导致的对非靶向细胞的损害之间折中的最佳方案。实际上，优选地，将抑制HR的治疗实施中的温度选择为与处理大约1分钟至4小时，优选15-180min时，仍能导致靶向细胞中的治疗上有效的HR抑制的最低温度相一致。在BRCA2被降解、抑制或灭活至BRCA2介导的DSB的修复被抑制或阻止的水平使得PARP1杀死细胞时，根据本发明当赋予靶向细胞对PARP1的敏感时达到了治疗上有效的HR的抑制。这允许过热温度和持续时间的优化，该优化使得对非靶向组织的损害最小化，而使HR介导的DNA修复的削弱最大化。

可以通过测量关注的细胞中的BRCA2蛋白水平(即细胞中的BRCA2蛋白含量)，例如通过使用抗-BRCA2抗体的免疫印迹，或通过免疫化学分析BRCA2在DSB位置处的积累来确定BRCA2的降解、抑制或失活的水平。如在下面的实施例中所述。免疫印迹通常包括SDS-PAGE凝胶电泳以分离细胞蛋白并将蛋白转移至胞膜。免疫化学通常包括：对具有所关注的蛋白质抗体的受辐照的细胞染色和显微镜分析。

本发明的抑制细胞中的HR的方法，包括通过过热诱导所述细胞中的BRCA2的降解或抑制，原则上可以应用于任何细胞或组织。所述方法通常包括下述步骤：如上所述确定在要抑制HR的靶向细胞或组织中的过热的最佳持续时间和温度。对于不同的肿瘤类型，这可以通过经验性测试实现，以便确定治疗的最佳持续时间。通过下述步骤，确定最佳治疗持续时间：在固定的温度，例如41℃，使待抑制HR的靶向细胞或组织受到过热，并在固定的时间间隔确定这些细胞或组织中的BRCA2水平，以便确定从治疗开始至达到所述靶向细胞或组织中的BRCA2的降解、抑制或失活，或达到所述细胞中BRCA2蛋白水平至少有显著降低。本发明的方法于是包括下述步骤：在41℃使待抑制HR的靶向细胞或组织受到过热，持续至少在此确定的时间段，优选地不是过长的时间。

BRCA2的降解、抑制或失活或BRCA2水平的降低要达到抑制或阻止DSB修复的水平。对于具体细胞或肿瘤类型，在检验治疗中先于或平行于实际治疗来确定该水平是合适的，其中在同时施用DSB诱导剂或者以剂量依赖(dose-dependent)的方式测试对细胞或肿瘤过热效应的情况下，以不同的强度施用过热，并且其中细胞或肿瘤的杀死表明所述细胞或肿瘤被赋予对DSB诱导剂(例如PARP1)的敏感性。本文使用的术语“DSB诱导剂”包括关于DSB诱导的治疗方法，诸如电离辐射，或其它DSB诱导的治疗，但是优选地涉及化学治疗，最优选PARP抑制剂。

在另一个方面，本发明提供了治疗或预防受治者的身体组织中的过增生疾病的方法，所述方法包括下述步骤：

a)给需要治疗或预防的受治者施用(局部地或全身)治疗有效量的药剂，所述药剂诱导所述身体组织的过增生细胞中的DNA的DSB；以及

b)在步骤a)之前、与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述身体组织的过增生细胞过热，以降解、抑制、灭活或降低所述细胞中的BRCA2水平。

在这样的方法中，过热用于阻断所述身体组织的过增生细胞中的HR。因此，优选地，所述细胞中的BRCA2的降解、抑制或失活基本上是完全的，或至少所述细胞中的BRCA2蛋白水平降低至HR被阻止的程度，或赋予细胞对PARP1的敏感性，使得当所述细胞被暴露于PARP1时，所述PARP1是细胞毒素。

在本发明的方面中，所述细胞可以是任何的哺乳动物组织细胞。优选地，所述细胞不缺乏乳腺癌易感性蛋白BRCA2。实际上，在本发明方面的某些优选实施例中，放弃了具有BRCA2遗传缺陷的乳腺癌细胞。但是，在其它优选的实施例中，过增生细胞包含任何癌细胞，优选实体瘤细胞。所述癌可以选自下述癌组成的群组，所述群组包括但不限于：胃肠肿瘤、肝和胆道癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、血癌、肺癌、皮肤癌(例如黑素瘤)、乳腺癌、非黑素瘤皮肤癌(例如基底细胞癌和鳞状细胞癌)、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、头颈癌、膀胱癌、肉瘤和骨肉瘤、卡波西肉瘤、AIDS-相关的卡波西肉瘤和肾癌。

在本发明的方面中，诱导过增生细胞的DNA中的DSB的药剂优选化学药剂，可选地包括电离辐射。最优选地，所述药剂是PARP抑制剂。合适的PARP抑制剂包括PARP-1和PARP-2抑制剂。其实例包括，但不限于：5-氨基异喹啉酮；3-甲基-5-氨基异喹啉酮；3-氨基苯甲酰胺；5-碘-6-氨基-1，2-苯并吡喃酮；3，4-二氢-5[4-(1-哌啶基)丁氧基]-1(2H)-异喹啉；1，5-二羟基异喹啉；-氮杂-5[H]-菲啶-6-酮；6(5H)-菲啶酮；4-氨基-1，8-萘二甲酰亚胺；8-羟基-2-甲基喹唑啉-4-酮；N-(6-氧代-5，6-二氢菲啶-2-基)-N N-二甲基乙酰胺；茚并-异喹啉酮；5-氯-2-[3-(4-苯基-3，6-二氢-1(2H)-吡啶基)丙基]-4(3H)-喹唑酮；1-哌嗪乙酰胺，4-[1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-脱氧-β-D-呋喃核糖醛(ribofuranuron)]-N-(2，3-二氢-1H-异吲哚-4-基)-1-酮；噻吩并[2，3-c]异喹啉-5-酮；2-二甲氨基甲基-4H-噻吩并[2，3-c]异喹啉-5-酮；4-羟基喹唑啉；烟酰胺；米诺环素；2-甲基-3，5，7，8-四氢噻喃并[4，3-d]嘧啶-4-酮；3-(4-氯苯基)喹喔啉-5-羧胺；苯甲酰胺；N-(6-氧代-5，6-二氢菲啶-2-基)-2-(N，N--二甲氨基)乙酰胺；AG014699；AG14361；2-[(R)-2-甲基吡咯烷-2-基]-1H-苯并咪唑-4-羧胺；4-[3-(4-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟苄基]-2H-酞嗪-1-酮；BSI-401；BSI-201；CEP-8983；CEP-9722；GPI-21016；GPI 16346；GPI18180；GPI 6150；GPI 18078；GPI 6000；2-氨基噻唑类似物；喹啉-8-羧胺；2-和3-取代的喹啉-8-羧胺；2-甲基喹啉-8-羧胺；2-(1-丙基哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-4-羧胺；氨基乙基吡咯并二氢异喹啉酮；咪唑并喹啉酮及其衍生物；咪唑并吡啶及其衍生物；异喹啉二酮及其衍生物；2-[4-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-哌啶-1-基]-4，5-二氢-咪唑并[4，5，1-i，j]喹啉-6-酮；2-(4-吡啶-2-基-苯基)-4，5-二氢-咪唑并[4，5，1-i，j]喹啉-6-酮；6-氯-8-羟基-2，3-二甲基-咪唑并-[1，2-α]-吡啶；4-(1-甲基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-4H-异喹啉-1，3-二酮；E7016；2-[甲氧基羰基(4-甲氧基苯基)甲硫基]-1H-苯并咪唑-4-羧酸酰胺；4-甲酰胺基苯并咪唑-2-基吡咯啉；四氢化吡啶氮氧衍生物；N-[3-(4-氧代-3，4-二氢-酞嗪-1-基)苯基]-4-(吗啉-4-基)丁酰胺甲磺酸盐一水合物；菲啶酮；4-碘-3-硝基苯甲酰胺；2-(4-羟苯基)-1H-苯并咪唑-4-羧胺；2-芳基-1H-苯并咪唑-4-羧胺；2-苯基苯并咪唑4-羧胺；酞嗪-1(2H)-酮；3-取代的4-苄基-2H-酞嗪-1-酮以及衍生物；上述物质的组合、类似物和衍生物及其药学上可接受的盐。也可以使用PARP-1和/或PARP-2抑制剂的组合以及它们的任意药学上可接受的盐作为DSB诱导剂。

PARP抑制剂适宜局部施用，但是也可以全身施用(即遍及全身)。在任何形式中，适宜以包含PARP抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物的形式提供PARP抑制剂。

任选的HSP抑制剂也适宜局部施用，但是也可以全身施用(即遍及全身)。在任何形式中，以包含HSP抑制剂和药学上可接受的载体的药物组合物的形式适宜地提供HSP抑制剂。

在下述组合物中，当使用术语“活性剂”时，是指PARP抑制剂和/或HSP抑制剂。

药物组合物包括适合口服、肠胃外(包括皮下、皮内、肌肉内、静脉内和关节内)、吸入(包括使用计量剂量加压的喷雾器、雾化器或吹药器)、直肠和局部(包括真皮、颊、舌下和眼内)施药。

所述组合物可以方便地以单位剂量形式存在，且可以通过药学领域众所周知的方法中的任一种来制备。所有方法包括下述步骤：使一种或多种活性剂与包含一种或多种助剂的载体相结合。一般而言，通过均匀且紧密地使一种或多种活性剂与液体载体或精细分割的固体载体，或者与这两类载体一起结合，然后，在必要时，将产品塑形成需要的组合物。

通常，预期活性剂的治疗有效剂量是在下述范围内：约0.0001mg至约1000mg每千克体重每24小时；约0.001mg至约750mg每千克体重每24小时；约0.01mg至约500mg每千克体重每24小时；约0.1mg至约500mg每千克体重每24小时；约0.1mg至约250mg每千克体重每24小时，或约1.0mg至约250mg每千克体重每24小时。更典型地，预期有效剂量是在下述范围内：约1.0mg至约200mg每千克体重每24小时；约1.0mg至约100mg每千克体重每24小时；约1.0mg至约50mg每千克体重每24小时；约1.0mg至约25mg每千克体重每24小时；约5.0mg至约50mg每千克体重每24小时；约5.0mg至约20mg每千克体重每24小时，或约5.0mg至约15mg每千克体重每24小时。

或者，活性剂的治疗有效剂量可以高达约500mg/m²。通常，预期活性剂的有效剂量是在下述范围内：约25mg/m²至约500mg/m²、约25mg/m²至约350mg/m²、约25mg/m²至约300mg/m²、约25mg/m²至约250mg/m²、约50mg/m²至约250mg/m²或约75mg/m²至约150mg/m²。

适合经颊(舌下)施用的组合物包括：锭剂，包含在调味基质中的活性剂，所述调味基质通常是蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶；软锭剂，包含在惰性基质中的活性剂，所述惰性基质例如白明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯树胶。

适合口服施用的组合物可以制备成离散单元，诸如白明胶或HPMC胶囊、扁囊剂或片剂，每种包含预定量的的活性剂，该活性剂作为粉末、颗粒，及作为在水性液体或非水性液体中的溶液或悬浊液，或作为水包油型液体乳胶或油包水型液体乳胶。所述活性剂也可以制备成糊剂。

当将活性剂配制成胶囊时，可以与一种或多种药学上可接受的载体一起配制化合物，所述载体例如淀粉、乳糖、微晶纤维素、二氧化硅和/或环状低聚糖诸如环糊精。合适的环糊精包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、2-羟乙基-β-环糊精、2-羟丙基-环糊精、3-羟丙基-β-环糊精和三甲基-β-环糊精。所述环糊精可以是羟丙基-β-环糊精。合适的环糊精衍生物包括

即在美国专利号5,134,127中描述的环糊精的磺丁基醚衍生物及其类似物。

可以任选地与一种或多种助剂一起通过压制或模塑制备片剂。可以如下方式制备压制的片剂：通过在合适的机器中压制自由流动形式的活性剂，诸如粉末或颗粒，其任选地与粘合剂、润滑剂(例如硬脂酸镁或硬脂酸钙)、惰性稀释剂或表面活性/分散剂相混合。可以如下方式制备模塑的片剂：在合适的机器中模塑用惰性液体稀释剂润湿的粉末化的活性剂的混合物。所述片剂可以任选地被包围，例如采用肠溶衣，且可以配制成提供活性剂在其中的缓慢释放或控制释放。

用于肠胃外施用的组合物包括水性的和非水性的无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与目标受体的血液等渗的溶质，且其可以包含悬浮剂和增稠剂。肠胃外组合物可以包含环状低聚糖，诸如羟丙基-β-环糊精。所述组合物可以存在于单剂(unit-dose)或多剂(multi-dose)容器中，例如密封的安瓿和管形瓶，且可以储存在只需要在即将使用前加入无菌液体载体的冷冻干燥(冻干)条件下，例如盐水或注射用水。

适合经皮给药的组合物可以制成离散状贴剂，所述贴剂适合与受体表皮在延长的时间段内保持紧密接触。这样的贴剂适宜地包含作为任选的缓冲水溶液的活性剂，例如，对于活性剂来说浓度0.1M-0.2M的水溶液。

适合经皮给药的组合物也可以通过离子电渗疗法来递送，且通常采取任选的活性剂的缓冲水溶液的形式。合适的组合可以包含柠檬酸盐或Bis/Tris缓冲剂(pH 6)或乙醇/水，且含有0.1M至0.2M的活性剂。

可以将用于通过吸入局部递送至肺的喷雾组合物配制成，例如水溶液或悬浊液，或配制成使用适当的液化推进剂从加压包，诸如计量剂量吸入器，递送的气雾剂、混悬液或溶液。合适的推进剂包括碳氟化合物或含有氢的氯氟碳化合物或其混合物，尤其是氢氟烷烃，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、尤其是1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，2，2，3，3，3-七氟-正丙烷或其混合物。二氧化碳或其它合适的气体也可以用作推进剂。气雾剂组合物可以不含有赋形剂，或可以任选地含有本领域众所周知的额外的组合物赋形剂，诸如表面活性剂(例如油酸或卵磷脂)和助溶剂，例如乙醇。加压的组合物通常保留在罐(例如铝罐)中，所述罐用阀(例如计量阀)关闭，并与设有接口管的促动器融为一体。

用于吸入给药的药物理想地具有受控的颗粒尺寸。最佳的用于吸入到支气管系统的颗粒尺寸通常是1-10μm、优选2-5μm。具有超过20μm的尺寸的颗粒通常太大，在吸入时难以到达小的气管。当赋形剂是乳糖时，通常是粉碎的乳糖，其中不超过85％的乳糖颗粒具有60-90μm的MMD，且不少于15％的乳糖颗粒具有小于15μm的MMD。

用于直肠给药的组合物可以制成栓剂，含有诸如可可脂或聚乙二醇等的载体，或诸如灌肠剂的载体，其中所述载体是等渗液体诸如盐水。组合物的其它组分可以包括：环状低聚糖，例如，上述的环糊精，诸如羟丙基-β-环糊精，一种或多种表面活性剂、缓冲盐或调节pH值的酸或碱、等渗性调节剂和/或抗氧化剂。

适合局部施用于皮肤的组合物优选地采用软膏剂、乳膏剂、洗剂、糊剂、凝胶、喷雾剂、气雾剂或油的形式。可以使用的载体包括凡士林(Vasoline)、羊毛脂、聚乙二醇、醇类和其中两种或更多种的组合。所述活性剂通常以0.1％至20％w/w或0.5％至5％w/w的浓度存在。这样的组合物的实例包括皮肤乳膏剂。

所述组合物也可以以脂质体的形式施用或递送给靶向细胞。脂质体通常来自磷脂或其它脂质物质，且由分散在水性介质中的单层或多层水合结晶物形成。可以用于施用或递送活性剂的脂质体的具体实例包括合成的胆固醇、1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、3-N-[(-甲氧基聚(乙二醇)2000)氨甲酰基]-1，2-二肉豆蔻基氧基(dimyrestyloxy)-丙胺(PEG-cDMA)和1，2-二-o-十八烯基-3-(N，N-二甲基)氨基丙烷(DODMA)。

所述组合物也可以以微粒的形式施用。由聚交酯(PLA)、聚交酯-共-乙交酯(PLGA)和己内酯形成的可生物降解的微粒已经广泛地用作增加血浆半衰期的药物载体，并由此延长效能(R.Kumar，M.，2000，药物科学杂志(J PharmPharmaceut Sci)3(2)234-258)。

所述组合物可以掺入控释基质，所述基质由醋酸-异丁酸蔗糖酯(SAIB)和有机溶剂或有机溶剂混合物组成。可以将聚合物添加剂加入介质中，作为释放调节剂，以进一步增加粘度和减慢释放速率。可以将活性剂加入SAIB递送介质中，以形成SAIB溶液或悬浮液组合物。当皮下注射制剂时，溶剂从基质扩散，使SAIB-药物或SAIB-药物-聚合物混合物形成原位储药处(depot)。

在本发明的方面中，过热处理细胞或组织的步骤可以包括：使细胞或组织的温度升高到大于40℃和46℃的任意温度。在优选的实施例中，使用弱过热(＜43℃)。合适的温度包括41.0、41.1、41.2、41.3、41.4、41.5、41.6、41.7、41.8、41.9、42.0、42.1、42.2、42.3、42.4、42.5、42.6、42.7、42.8和42.9℃。所述温度可以在治疗期间恒定，或可以动态地施加，例如脉冲式。最优选的范围包括41℃至42℃之间。

在本发明的方面中，所述方法可以另外包括：给需要治疗或预防的受治者施用治疗有效量的HSP抑制剂。发现HSP抑制剂也使细胞对DSB诱导剂敏感。HSP抑制剂可以是任意的HSP抑制剂，包括但不限于N-甲酸基-3，4-亚甲二氧基-苯亚甲基-丁内酰胺、3，4-亚甲二氧基-亚苄基-g-丁内酰胺、格尔德霉素及其衍生物、17-(烯丙基氨基)-17-脱甲氧基格尔德霉素(17-AAG)、17-二甲氨基乙氨基-17-脱甲氧基-格尔德霉素(17-DMAG)、17-烯丙基氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素氢醌氢氯化物、根赤壳菌素、pochonin、radester、8-芳基硫烷基腺嘌呤衍生物、3，4-二芳基吡唑间苯二酚衍生物、shepherdin及其衍生物、瑞他霉素(retaspimycin)氢氯化物、(-)-表没食子儿茶素没食子酸盐(Epigallocatechin-3-gallate)、4，5-二芳基异噁唑衍生物。非常优选的HSP抑制剂是HSP90抑制剂。使用17-DMAG已经得到非常好的结果。以治疗有效量使用HSP抑制剂。该量为约0.0001mg至约1000mg每千克所述受治者体重每24小时。

在另一个方面，本发明提供了一种杀死细胞的方法。本发明的方法具有下述优点，即不仅在于PARP抑制剂可以杀死BRCA2或BRCA1缺陷型癌细胞，而且实际上通过包含本文所述的过热的方法，可以将任意细胞转化成BRCA2-缺陷型细胞。一旦成为BRCA2缺陷型，就可以使用合适的PARP抑制剂很容易地杀死所述细胞。因此，杀死细胞的广泛方法包括下述步骤：(a)与过热相组合，给细胞施用对所述细胞为细胞毒素的剂量的PARP抑制剂。该剂量本质上是通常用于杀死BRCA2缺陷型乳腺癌细胞的剂量，但很大一部分取决于使用的PARP抑制剂和要杀死的细胞类型。合适的剂量为约0.0001mg至约1000mg每千克所述受治者体重每24小时。可以使用体外测试来确定适用于具体细胞类型的最佳剂量。IC50值会提供适当的起始点。通过例行试验，本领域技术人员可以优化对细胞为细胞毒素的PARP抑制剂的剂量，所述细胞已经通过本文所述的过热被赋予对PARP抑制剂的敏感性。因此，杀死细胞的广泛方法另外包括下述步骤：(b)使细胞过热，从而在所述细胞中诱导BRCA2的降解、抑制和/或失活。

原则上，可以在将细胞暴露于PARP抑制剂之前、同时或之后，进行过热治疗。优选地，在本发明的方面中，实现了过热并且在给受治者施用PARP抑制剂之前，或将细胞暴露于PARP抑制剂之前，赋予所述细胞对PARP抑制剂的敏感性。但是，参考施用药物的时机，本领域技术人员能够确定提供过热的最佳时刻，从而对药物提供适当的活性窗口。

本发明的方法优选地包括这样的步骤，其中确定靶向细胞或肿瘤中的BRCA2的水平或活性。

在最后一个方面，本发明提供了一种PARP抑制剂或其药学上可接受的盐用于生产药物，所述药物用于根据下述治疗方案杀死受试者体内的细胞或阻止肿瘤生长，所述治疗方案包括：(a)给受治者体内的细胞或肿瘤施用治疗有效量的包括PARP抑制剂的药物，在过热之前、与过热同时或在过热之后，所述抑制剂对细胞是细胞毒素，和(b)在步骤(a)之前、与步骤(a)同时或在步骤(a)之后，通过过热在所述细胞或肿瘤中诱导BRCA2的降解、抑制和/或失活。该方面的优选实施例与关于上面的其它方面所述的内容相同。

在癌症的治疗中，通过联合治疗方案，可以获得治疗优点。这样，根据本发明的治疗方法可以与其它疗法联合使用，诸如放射疗法、化学疗法、手术或其它形式的医学干预。合适的化学疗法和其它抗癌药剂的非限制性实例包括：紫杉醇、氟尿嘧啶、顺铂、奥沙利铂、α-干扰素、长春新碱、长春碱、血管抑制素(angioinhibin)、阿霉素、博莱霉素、丝裂霉素C、苯妥帝尔、光神霉素、TNP-470、戊聚糖多硫酸盐(Pentosan polysulfate)、他莫昔芬、LM-609、CM-101和SU-101。

活性剂和化疗剂或其它抗癌剂的共同施用可以是同时的或按次序的。可以按如下方式实现同时施用：使活性剂处于与化疗剂或其它抗癌剂同一单位剂量中，或活性剂和化疗剂或其它抗癌剂可以存在于在同时或在相近的时间施用的单独的和分离的单位剂量中。根据需要，相继施用可以是任意次序。

在本说明书中提及的所有出版物都通过引用并入本文。在本说明书中对任意先前公开(或由它衍生出的信息)或已知的任何物质的引文，不是且不应当视作对本文内容的承认或接纳或任何形式的暗示，即该先前的出版物(或由它衍生出的信息)或已知物质构成本发明所属领域的普通一般知识的一部分。

现在将参考下面的具体实施例，进一步详细描述本发明，所述实施例不应当解释为以任何方式限制本发明的保护范围。

实施例

实施例1.哺乳动物细胞中BRCA2介导的双链断裂修复的抑制

细胞培养。

在包覆明胶的平皿上，在达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)和布法罗大鼠肝条件培养基为1∶1混合物中培养胚胎干(ES)细胞，该混合物中添加了10％FBS(Hyclone)、0.1mM非必需氨基酸(Biowhittaker)、50mMβ-巯基乙醇(Sigma)和500U/ml白血病抑制因子。在添加了10％(v/v)FCS和链霉素/青霉素的下述培养基中培养其它细胞：DMEM和Ham’s F10的1∶1混合物(HeLa)、DMEM(人黑素瘤[BLM]、骨肉瘤[U2OS]、宫颈癌细胞)，L-15(人肺鳞癌[SW-1573])，Eagle氏MEM(小鼠骨肉瘤[MOS]、大鼠横纹肌肉瘤[R1])。将细胞保持在37℃含有5％(HeLa、BLM)、10％(U2OS、宫颈癌细胞)、2％(R1)或0％(SW-1573)CO₂的气氛下。具有宫颈癌的患者表达书面知情同意，以在研究过程中在全身麻醉下提供新鲜的活组织样本，并使用肿瘤样本用于该研究。该研究得到AMC的医学伦理委员会的批准(MEC#03/137)。使用解剖刀切碎活组织样本，然后在DMEM中的Liberase Blendzyme酶混合液(Roche)中在37℃培养60min，并涂布于在新鲜培养基中的玻璃盖玻片上。所有培养都是在含有适当CO₂浓度的气氛下，在热水浴中，或在放入设定至需要温度的培养箱中的装水的池子中进行的。

抗体。

将下述抗体用于蛋白印迹法：兔(#PC146)和小鼠(#OP95)抗-BRCA2(Calbiochem)、兔抗-hRAD51(37)、兔抗-XRCC3(ab6494，Abcam)、兔抗-hORC2(#559266)和小鼠抗-hGRB2(#610112)(BD Pharmingen)、小鼠抗-hPARP-1(C2-10，亚历克西斯生物化学公司(Alexis Biochemicals))和有关的辣根过氧化物-标记的第二抗体(杰克逊免疫研究公司(Jackson Immunoresearch))。将下述抗体用于免疫荧光检验法：小鼠-抗hBRCA2(Ab-1，卡尔生物化学公司(Calbiochem))、小鼠-抗hRPA34(Ab-2，癌基因)、小鼠抗-hγH2AX(05-636，微孔(Milipore))、兔抗-hMDC1(A300-051A，Bethyl实验室(Laboratories))、兔抗-hRAD51(37)、兔抗-hMRE11(38)、山羊抗-小鼠-Cy3(115-165-166)和山羊抗-兔-FITC(111-095-144)(杰克逊免疫研究公司(JacksonImmunoresearch))。

抑制剂。

在指定的终浓度使用下述抑制剂：17-DMAG、100nM(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich))，NU1025、100μM(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich))、MG-132，10μM(卡尔生物化学公司(Calbiochem))。

组织/细胞溶解和免疫印迹。

在SDS样品缓冲液(2％SDS，10％甘油，60mM Tris-HCl pH 6.8)中，溶解细胞。在添加了蛋白酶抑制剂(罗氏公司(Roche))的SDS样品缓冲液中，溶解皮肤组织，并在冰上，在组织研磨器II(Tissue Lyser II)(Qiagen)中，使用5mm不锈钢熔珠(Qiagen)，在30Hz搅匀2x3min。离心后，给上清液添加Benzonuclease(默克公司(Merck))，在室温下培养10min，并在95℃培养5min。通过Lowry蛋白试验，测定蛋白浓度，给提取物添加0.5％β-巯基乙醇和0.02％溴酚蓝。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离后，将蛋白转移至硝酸纤维素膜，并用相关的抗体探测。对于BRCA2的免疫印迹，使用3-8％三羟甲基氨基甲烷醋酸盐(Tris-acetate)凝胶系统。将BRCA2转移到PVDF膜上。

siRNA处理。

根据生产商的说明书，使用脂质体(Lipofectamine)2000(英杰公司(Invitrogen))，进行siRNA双链体的转染。在转染后48h，将200pmol siRNA每60-mm培养皿转染的细胞用于克隆效率试验或免疫印迹。siRNA的有义序列是GAAAGUGUGUUCAACUAAUUU(#1)和GCAACAACUGGAACAGAUU(#2)(针对Parp-1)、GGACCUGAAUCCCAGAAUUUU(针对XRCC3)和CGUACGCGGAAUACUUCGAdTdT(针对萤光素酶)。

克隆性试验。

在包含NU1025或辐照的实验中，将细胞胰蛋白酶化，计数，并以适当浓度涂布到60或35mm器皿中。在4-6h附着阶段以后，如果需要，辐照细胞，在存在或不存在指示的抑制剂情况下，在各种不同的时间段采用不同的温度培养。然后培养细胞7-14天，固定，染色，并计数超过50个细胞的菌落。在接种之前24h，将NU 1025加给细胞，并在整个实验期间保持存在。在包含NU1025和17-DMAG的组合的实验中，首先按照指示处理细胞，随后使细胞胰蛋白酶化，计数，并以各种不同的浓度涂布。在高温培养之前1h，将17-DMAG加给细胞，并在高温培养之后30-60min，将17-DMAG去除。

基因靶向效率试验。

以前已经描述了基因靶向试验(12)(41)。从转染之前1h至转染后1h或5h，在高温下培养细胞。在过热处理之前3h，加入17-DMAG，并在之后1h去除17-DMAG。

辐照。

除非另有说明，在高温培养后，通过来自铯放射源(137Cs，0.70Gy/min)的γ-射线，或用之前所述的α粒子(15)，直接辐照细胞。按以下方式用α粒子辐照来自宫颈癌活组织样本的细胞：即通过将带有细胞的盖玻片倒转放在1.8μm厚的聚酯膜上，并从下面穿过所述膜辐照。

激光微辐照和时滞显微术。

在玻璃盖玻片上培养细胞24h，然后将培养基更换为CO₂非依赖性培养基，在41C或37℃培养细胞1h，随后放在配有热载物台的莱卡(Leica)SP2共焦显微镜下。然后在预先确定的细胞核区域，用带有Innova II氩激光器(相干(Coherent))的365nm线微辐照细胞。接着，将细胞在需要的时间段成像。对于每种测试条件，分析至少10个细胞。

图像获取和处理。

除非另有说明，使用具有制冷CCD照相机(Apogee)的DMRA荧光显微镜(莱卡(Leica))获取免疫荧光染色的细胞的3-D图像，使用惠更斯(Huygens)软件(SVI)去卷积，并使用Photoshop(Adobe系统)处理。宽视野图像代表各个3-D图像的最大强度投影，而使用共焦显微镜获取的图像和影片代表一个共焦切片。通过使用ImageJ测量选择的区域中的GFP信号的平均强度，分析GFP-RAD51和EGFP-KU80在暴露于UVA光的区域处的积累。

实验方案和结果。

为了确定弱过热在哺乳动物DSB修复途径中的靶标，我们测量了在41℃培养75min的野生型、DNA-PKCS-/-和Rad54-/-小鼠胚胎干(ES)细胞的辐射敏化作用。我们选择该温度有2个原因。首先，更高的温度(＞43℃)可能影响更宽的代谢活动范围，并从而阻碍结果的明确分析。其次，低于43℃的温度在临床实践中是确切的。令人感兴趣的是，我们观察到，过热会敏化野生型和DNA-PKCS-/-，而不敏化Rad54-/-细胞(图1A)。过热不能进一步辐射敏化HR缺陷型ES细胞，这不限于RAD54断裂或小鼠ES细胞(作为HeLa细胞)，其中使用siRNA下调(down-regulate)HR因子XRCC3，也会耐受过热的辐射敏化作用(图1B)。这些结果提示，通过靶向HR，弱过热会使细胞对电离辐射敏感化。为了直接测量弱过热对HR的影响，我们测定了ES细胞中的HR介导的基因靶向的效率。与来自上述实验的结果相一致，弱过热显著降低了HR介导的基因靶向的效率(图1C)。弱过热也降低了姐妹染色单体交换的频率(图5A)，所述交换在很大程度上由HR介导。

大多数重要的与DSB修复相关的蛋白积累在辐射-诱导的DSB位点，以形成IRIF。该积累对于修复机制的适当的功能而言是至关重要的，且由DSB修复蛋白干扰的IRIF的形成与修复缺陷和基因组的不稳定性有关。为了精确找出由过热造成的HR途径中的缺陷，我们检查了由在U2OS细胞中α-粒子诱导的DSB处的一定范围内的DSB修复因子引起的IRIF的形成，所述U2OS细胞在辐照之前在37℃或41℃培养了60min(图2A、2B和图5)。在HR的早期，在包含MRE11/RAD50/NBS1、CtIP和BRCA1复合物的反应中，DSB的末端被切除，产生单链DNA延伸(stretch)，随后被RPA包被。无论是否已经在41℃预培养细胞，MRE11、BRCA1和RPA都有效地积累在DSB位点，表明DSB末端切除不受过热的影响。在HR的后续步骤中，在BRCA2的辅助下，RAD51重组酶形成单链DNA上的核蛋白丝。尽管在受控细胞中辐照后15min可以检测到RAD51和BRCA2 IRIF，但是在41℃预培养会完全消除两种蛋白在DSB位点处的积累(图2A和2B)。类似地，过热会阻止在HeLa、SW-1573和RKO细胞中α-粒子诱导的DSB处的RAD51 IRIF的形成(数据未显示)以及在小鼠ES细胞中α-粒子和X-射线诱导的DSB处的RAD54-GFP IRIF的形成(图5B)。此外，在41℃预培养在激光-诱导的DNA损伤处会消除V79细胞中GFP-RAD51的积累，但是不会消除XR-V15B细胞中EGFP-KU80的积累(图5C)。这些结果提示，过热会抑制RAD51核蛋白丝的形成，该形成是HR的一个关键步骤。DNA末端的切除，导致RAD51所需要的单链DNA/RPA丝似乎是完整的，这暗示过热会诱导RAD51自身或BRCA2的缺陷，这对于RAD51在适当DNA底物上的装载和RAD51在IRIF中的积累很重要。

为了确认弱过热如何影响这两种蛋白，我们通过免疫印迹分析了细胞提取物。在高温预培养HeLa细胞对RAD51的水平没有可检测的影响，但是它确实导致BRCA2水平的显著降低(图2C)。在BLM细胞中也观察到了该后一种效应(图6A)。这种降低可以通过蛋白酶体介导的降解解释，因为当存在蛋白酶体抑制剂MG132情况下将细胞暴露于41℃时，我们没有检测到BRCA2水平的降低(图2C)。重要的是，过热诱导的对HR蛋白的影响不限于培养的细胞。还可在来自新鲜肿瘤活体组织样本和来自正常人皮肤的细胞中观察。在来自宫颈癌的活体组织样本中，弱过热会消除RAD51在α-粒子诱导的DSB上的积累(图2D)。另外，在来自在41℃培养的皮肤活体组织样本的一部分的细胞中，通过免疫印迹检测到降低的BRCA2水平(图6B)。这些结果总结起来暗示，弱过热可能通过蛋白酶体系统导致BRCA2的失活和降解，导致在人细胞、组织和肿瘤中HR机能失常。

HR缺陷型细胞系和肿瘤，尤其是那些BRCA2缺陷型，对PARP-1抑制剂非常敏感。因此，我们假定，在HR健全型的细胞中弱过热对HR的抑制会增加PARP-1抑制剂的细胞毒性。如预期的，我们观察到与仅受到过热处理的细胞相比，在存在PARP-1抑制剂NU1025情况下在41℃培养的人U2OS(图3A)和大鼠R1(图3B)细胞的克隆存活率减少。该效应与热处理的持续时间成比例，并与单独的采用过热或NU1025处理这些细胞的敏感性相关联(数据未显示)。NU1025没有减少过热处理的SW-1573或MOS细胞的存活率，所述SW-1573或MOS细胞也对单独的过热或NU1025不敏感(数据未显示)。相应地，已经报道了在HR缺陷型细胞中由许多PARP-1抑制剂诱导的细胞毒性的巨大差异。为了明确地证实，降低的PARP-1活性会使细胞对过热敏感，我们分析了过热对HeLa细胞的细胞毒素效应，在所述HeLa细胞中，通过siRNA下调了PARP-1。在高温培养导致这些细胞的存活率减少，这与用U2OS和R1系得到的结果相一致(图3C)。

已经发现，与不存在17-DMAG下加热或用17-DMAG在37℃培养的那些细胞相比，在存在17-DMAG过热处理的细胞中，BRCA2蛋白水平(图4A)和HR介导的基因靶向的效率(图1C)进一步降低。这些结果表明，在不存在Hsp90的保护活性情况下，BRCA2在暴露于弱过热的细胞中非常易于降解。结果，Hsp90的抑制也会增强过热处理的细胞中PARP-1抑制的细胞毒素效应。实际上，当存在NU1025和17-DMAG情况下处理时，在41℃培养的大鼠R1细胞的克隆存活率急剧降低(图4B)。此外，我们的结果提示，通过抑制HR，17-DMAG和过热的组合会使细胞对电离辐射暴露敏感。正如预料的，在存在17-DMAG情况下施加的弱过热使HeLa细胞对辐射的敏感性与单独的辐射相比增加了7-10倍(fold)并且与单独的过热处理相比增加了3-4倍(图4C)。

这里提供的结果表明，通过诱导BRCA2(一种关键的HR因子)的降解，将临床上有关的弱过热靶向HR。我们不能排除，更高的温度或延长的处理可能影响DSB修复途径的其它组分。这可以解释揭示下述内容的报道：即热可以辐射敏化具有NHEJ缺陷或两种修复途径缺陷的细胞。我们证实，通过抑制Hsp90，可以显著增强过热对HR的损害。重要的是，我们的结果暗示，热暴露可以用于(局部地)引导BRCA2缺陷，并由此使HR健全型的肿瘤细胞对PARP-1抑制剂非常敏感。因为我们的方案不是基于遗传缺陷，不可能施加选择压力，而选择压力可能导致抗性的发展。另外，我们证实了与Hsp90抑制组合的过热能有效地使细胞对电离辐射敏感。这些结果提供了治疗方法的发展的合理基础，所述治疗方法利用(局部)了与PARP-1抑制剂、电离辐射或其它DSB诱导的化学治疗药剂相组合的HR缺陷的诱导。

实施例2.过热、AZD2281(PARP-1抑制剂)和17-DMAG(HSP90抑制剂)的组合的体内肿瘤负荷的减小

通过使用同系的横纹肌肉瘤大鼠模型(Van Bree等，国际热疗学报(Int JHyperthermia)1999)进行实验，将组织培养结果扩展至体内情形。

将3x 10⁶横纹肌肉瘤细胞量经皮下注射入成熟WAG/Rij大鼠的两个胁腹。在3周内，动物形成1500mm³的肿瘤，这时候，手术取出肿瘤，切成1mm³的碎片，将单个碎片植入成年大鼠的一条或两条后腿中。将动物分组(参见下面)。3周后，植入的肿瘤达到～200mm³。这时候，如下面指出的，动物接受不同的治疗，持续4周，间隔3天：

组1：假过热处理(HT)(n＝4，2个肿瘤每动物)

组2：仅HT(在设定42℃的水浴中培养90min，n＝4，肿瘤在两条后腿中)

组3：仅PARP-1抑制剂AZD2281(n＝4，肿瘤在两条后腿中)

组4：仅HSP-90抑制剂17DMAG(n＝4，肿瘤在两条后腿中)

组5：17DMAG+AZD2281(n＝4，肿瘤在两条后腿中)

组6：HT+AZD2281(n＝12，1个肿瘤在1条后腿中)

组7：HT+17DMAG(n＝12，1个肿瘤在1条后腿中)

组8：HT+17DMAG+AZD2281(n＝12，1个肿瘤在1条后腿中)

将AZD2281(50mg/kg)溶解在10％DMSO/9％HPBCD-PBS中，并口服施用。

将17-DMAG(10mg/kg)溶解在生理盐水中，并腹膜内(I.P)施用。

在过热处理或假过热处理之前24h和1h(根据需要)，施用抑制剂或溶剂(根据上面的组具体说明的需要)。

使用测径器，监测肿瘤体积的变化。将肿瘤体积标准化为在第一次治疗当天测得的体积。

实施例3.过热、AZD2281和/或PJ-34(PARP-1抑制剂)和17-DMAG(HSP90抑制剂)的组合的体内肿瘤负荷的减小

通过使用B16BL6黑素瘤肿瘤模型(Hart I.R.美国病理学杂志(Am JPathol)1979.97(3)：587-600；Ten Hagen T.L.和Eggermont A.M.国际热疗学报(IntJ Hyperthermia)2008.24(3)：291-9)进行实验，将组织培养结果扩展至体内情形。肿瘤作为异种移植物在裸鼠的胁腹中生长。在两侧给动物皮下注射10⁶B16BL6细胞。在3周内，动物形成大约300mm³的肿瘤，足以产生用于皮下植入小鼠后腿中的约5x 10⁶细胞的肿瘤切片的移植的肿瘤组织。3周后，该方法导致～75％的肿瘤存活(tumor-take)，肿瘤体积为～200mm³。

然后用介质、AZD2281和/或PJ-34(PARP-1抑制剂)和17-DMAG(HSP抑制剂)的不同组合，腹膜内注射携带肿瘤的动物组。对于PJ-34初始剂量是1、5、10mg/kg，对于AZD2281是50、100mg/kg，以及对于17-DMAG是5和10mg/kg。然后通过浸没在足够温度的水浴中，将肿瘤暴露于过热，以使肿瘤温度达到41℃。在施加过热的过程中，冷却小鼠，以维持体温等于或低于41℃。使用热电偶监测直肠体温。该治疗每周进行一次或重复2次，持续2周。使用游标卡尺(vernier caliper)，每周测量2次肿瘤体积，所述肿瘤体积根据公式V＝π*x*y*z/6，以3个最大的尺寸计算。将肿瘤体积标准化为在第一次治疗当天测得的体积。

Claims (15)

1.一种治疗或预防受治者的身体组织中的过增生疾病的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：

a)给需要治疗或预防的受治者施用治疗有效量的药剂，该药剂诱导所述身体组织的过增生细胞中的DNA的双链断裂；以及

b)在步骤a)之前、与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述身体组织的过增生细胞过热，由此在所述细胞中诱导BRCA2的降解、抑制和/或失活。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞中BRCA2的降解、抑制和/或失活基本上是完全的，或所述细胞中BRCA2的降解、抑制和/或失活至少达到使所述细胞被赋予对DSB诱导剂的敏感性，优选对PARP1的敏感性。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述过增生疾病是癌症，优选为实体瘤。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述双链断裂诱导剂是PARP抑制剂。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PARP抑制剂选自由下列物质组成的群组：5-氨基异喹啉酮；3-甲基-5-氨基异喹啉酮；3-氨基苯甲酰胺；5-碘-6-氨基-1，2-苯并吡喃酮；3，4-二氢-5[4-(1-哌啶基)丁氧基]-1(2H)-异喹啉；1，5-二羟基异喹啉；-氮杂-5[H]-菲啶-6-酮；6(5H)-菲啶酮；4-氨基-1，8-萘二甲酰亚胺；8-羟基-2-甲基喹唑啉-4-酮；N-(6-氧代-5，6-二氢菲啶-2-基)-N，N-二甲基乙酰胺；茚并-异喹啉酮；5-氯-2-[3-(4-苯基-3，6-二氢-1(2H)-吡啶基)丙基]-4(3H)-喹唑酮；1-哌嗪乙酰胺，4-[1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-脱氧-β-D-呋喃核糖醛]-N-(2，3-二氢-1H-异吲哚-4-基)-1-酮；噻吩并[2，3-c]异喹啉-5-酮；2-二甲氨基甲基-4H-噻吩并[2，3-c]异喹啉-5-酮；4-羟基喹唑啉；烟酰胺；米诺环素；2-甲基-3，5，7，8-四氢噻喃并[4，3-d]嘧啶-4-酮；3-(4-氯苯基)喹喔啉-5-羧胺；苯甲酰胺；N-(6-氧代-5，6-二氢菲啶-2-基)-2-(N，N-二甲氨基)乙酰胺；AG014699；AG14361；2-[(R)-2-甲基吡咯烷-2-基]-1H-苯并咪唑-4-羧胺；4-[3-(4-环丙烷羰基哌嗪-1-羰基)-4-氟苄基]-2H-酞嗪-1-酮；BSI-401；BSI-201；CEP-8983；CEP-9722；GPI-21016；GPI 16346；GPI 18180；GPI 6150；GPI 18078；GPI 6000；2-氨基噻唑类似物；喹啉-8-羧胺；2-和3-取代的喹啉-8-羧胺；2-甲基喹啉-8-羧胺；2-(1-丙基哌啶-4-基)-1H-苯并咪唑-4-羧胺；氨基乙基吡咯并二氢异喹啉酮；咪唑并喹啉酮及其衍生物；咪唑并吡啶及其衍生物；异喹啉二酮及其衍生物；2-[4-(5-甲基-1H-咪唑-4-基)-哌啶-1-基]-4，5-二氢-咪唑并[4，5，1-i，j]喹啉-6-酮；2-(4-吡啶-2-基-苯基)-4，5-二氢-咪唑并[4，5，1-i，j]喹啉-6-酮；6-氯-8-羟基-2，3-二甲基-咪唑并-[1，2-α]-吡啶；4-(1-甲基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-4H-异喹啉-1，3-二酮；E7016；2-[甲氧基羰基(4-甲氧基苯基)甲硫基]-1H-苯并咪唑-4-羧酸酰胺；4-甲酰胺基苯并咪唑-2-基吡咯啉；四氢吡啶氮氧衍生物；N-[3-(4-氧代-3，4-二氢-酞嗪-1-基)苯基]-4-(吗啉-4-基)丁酰胺甲磺酸盐一水合物；菲啶酮；4-碘-3-硝基苯甲酰胺；2-(4-羟苯基)-1H-苯并咪唑-4-羧胺；2-芳基-1H-苯并咪唑-4-羧胺；2-苯基苯并咪唑4-羧胺；酞嗪-1(2H)-酮；3-取代的4-苄基-2H-酞嗪-1-酮以及衍生物；上述物质的组合、类似物和衍生物及药学上可接受的盐。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，过热处理的温度为41.0-45.0℃。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞毒素量为约0.0001mg至约1000mg每千克所述受治者体重每24小时。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：给所述受治者施用治疗有效量的热休克蛋白抑制剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述热休克蛋白抑制剂是HSP 90抑制剂，优选17-DMAG。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述治疗有效量为约0.0001mg至约1000mg每千克所述受治者体重每24小时。

11.一种杀死细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：(a)给所述细胞施用细胞毒素量的PARP抑制剂，(b)在步骤(a)之前、与步骤(a)同时或在步骤(a)之后，使所述细胞过热，从而灭活所述细胞中的HR。

12.一种抑制细胞中的同源重组的方法，其特征在于，所述方法包括：通过过热，诱导所述细胞中BRCA2的降解、抑制和/或失活。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述细胞中BRCA2的降解、抑制和/或失活基本上是完全的，或所述细胞中BRCA2的降解、抑制和/或失活至少达到使所述细胞被赋予对PARP1或其它DSB诱导剂的敏感性。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：使所述细胞暴露于治疗有效量的HSP90抑制剂。

15.一种PARP抑制剂或其药学上可接受的盐用于生产药物，所述药物用于根据下述治疗方案杀死受治者体内的细胞或阻止肿瘤生长，所述治疗方案包括：(a)给受治者体内的细胞或肿瘤施用治疗有效量的包含所述PARP抑制剂的药物，(b)在步骤(a)之前、与步骤(a)同时或在步骤(a)之后，通过过热，在所述细胞或肿瘤中诱导同源重组的降解、抑制和/或失活，任选地与治疗有效量的HSP90抑制剂的施用相组合。

Images